Набор реагентов АмплиСенс® HHV8-скрин/монитор-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
III!
5 S m »
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
________________ВТ. Акимкин
« ^ 20 Д/ г.
р 1
jfii
i*is
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® НН\/8-скрин/монитор-РЬ
АмплиСенс’
mJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр. 6
тел, (495) 974 9642, e-mail: amptisens@pcr.ru
IV D
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
НАЗНАЧЕНИЕ............................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.................................................................................................. 4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ........................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ......................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...............................................................10
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...............................................................................12
СВЕДЕНИЯ ОБ ^П'ИЛИЗАЦИИ.................................................................................13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.........................................14
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 18
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК..........................22
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА...............................................................................24
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................26
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ..............................................26
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN)...................................................28
СОСТАВ.................................................................................................................. 28
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...............28
A. Подготовка проб для амплификации.............................................................28
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».....30
B. Анализ и интерпретация результатов............................................................31
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L).............................................................36
СОСТАВ...................................................................................................................36
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...............36
A. Подготовка проб для амплификации.............................................................36
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....37
B. Анализ и интерпретация результатов............................................................39
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ..................44
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ..............................................44
СИМВОЛЫ. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ....................................46
стр. 2 из 46
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
ВГЧ-8 - вирус герпеса человека 8
ВКО Glob - эндогенный внутренний контрольный образец (участок Р-
глобинового гена человека)
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
К1. К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
удг - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
а - cycle threshold (пороговый цикл)
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® /-//-/\/8-скрин/монитор-Р1
предназначен для количественного определения ДНК вируса
герпеса человека 8 {Human gammaherpesvirus 8, ВГЧ-8, HHV8) в
биологическом материале (плазма венозной крови, цельная
венозная кровь, мазки со слизистой оболочки ротоглотки, слюна,
биологические (плевральная, асцитическая) жидкости, тканевой
(биопсийный, операционный, аутопсийный) материал, тканевой
(биопсийный, операционный, аутопсийный) материал в
парафиновых блоках) методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК,
экстрагированные из исследуемого материала.
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике. Ограничения по применению медицинского
изделия в различных популяционных и демографических
группах отсутствуют.
стр. 3 из 46
--- стр. 5 ---
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, комплементарные
участкам амплифицируемых ДНК-мишеней, что позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с системой
детекции в режиме «реального времени».
Количественное определение ДНК ВГЧ-8 основывается на
существовании линейной зависимости между логарифмом
исходной концентрации ДНК-мишени в исследуемом образце и
циклом начала экспоненциального увеличения
флуоресцентного сигнала (пороговый цикл, Cycle threshold, Ct).
Для проведения количественного теста амплификацию ДНК из
исследуемых образцов проводят одновременно с ДНК-
калибраторами - образцами с известной концентрацией ДНК-
мишени. ДНК-калибраторы и положительный контроль
аттестованы по методике Изготовителя. По результатам
амплификации ДНК-калибраторов строится калибровочная
прямая, по которой происходит определение концентрации ДНК-
мишени в исследуемых образцах.
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводится амплификация трех ДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по следующим каналам
флуоресцентной детекции (см. табл. 1):
Таблица 1
Канал для
флуо|$офора FAM JOE ROX
ДНК-мишень
ДНК участка
р-глобинового гена
(ВКО Glob)
ДНК ВГЧ-8 ДНКВКО-FL
Область
амплификации р-глобиновый ген ген минорного
капсидного белка
искусственная
нуклеотидная
последовательность
стр. 5 из 46
--- стр. 6 ---
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1; «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN
Форма 2; «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1 и 2 предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в
количественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций
амплификации, включая контроли.
Форма 2 рассчитана на проведение 96 реакций амплификации,
включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Диапазон измерения и предел обнаружения
Таблица 2
Вид биологи-'
ческого
материала
Транс
портная
среда
Комплект
для
экстракции
р ш т к
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Плазма
венозной
крови
—
«РИБО-
преп» 100
«МАГНО-
сорб» 200
Цельная
венозная
кровь
—
«РИБО-
преп» 100
«МАГНО-
сорб» 200
Мазки со
слизистой
оболочки
ротоглотки
«Транспорт
ная среда
для
хранения и
транспорти
ровки
респиратор
ных мазков»
«РИБО-
преп» 100
«МАГНО-
сорб» 200
Слюна — «РИБО-
преп» 100
Биологические
(плевральная,
асцитическая)
жидкости
— «РИБО-
преп» 100
Комплект ДЛЯ
детекции
Предел
обнару
жения,
к о п и й /1 м л
Диапазон
1б^в0рения
копий/мл
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-100FN.
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
300 500-1x10^
стр. 6 ИЗ 46
--- стр. 7 ---
Вид биологи
ческого
материала
Транс
портная
среда
Комплект
для
экстракции
РНЮЙНК
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Тканевой
(биопсийный,
операционный,
аутопсийный)
материал
«Транспорт
ная среда с
муколитиком
(ГСМ)»
«РИБО-
преп» 100
Тканевой
(биопсийный,
операционный,
аутопсийный)
материал в
парафиновых
блоках
— «РИБО-
преп» 100
Комплект для
детекции
Предел
обнару
жения,
копиЙ/мл
Диапазон
А9М6|ШМия
копий/мл
.1
Данные значения характеристик достигаются при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участок ДНК ВГЧ-8
(клинический образец, содержащий ДНК ВГЧ-8 в концентрации не
менее Ю'* копий/мл, специфичность подтверждена методом
прямого секвенирования нуклеотидных последовательностей).
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при
исследовании ДНК/РНК следующих микроорганизмов/штаммов, а
также геномной ДНК человека;
- Штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture
Collection, США); Acinetobacter baumannii (АТСС® 19606™),
Enterococcus faecalis (АТСС® 29212™), Escherichia coli
(АТСС® 25922™), Haemophilus influenzae (ATCC® 33930™),
Klebsiella pneumoniae (ATCC® 27736™), Listeria gray! (ATCC®
25401™), Listeria innocua (ATCC® 33090™), Listeria
monocytogenes (ATCC® 7644™), Moraxella catarrhalis (ATCC®
25240™), Pseudomonas aeruginosa (ATCC® 15442™),
Staphylococcus aureus (ATCC® 29213™), Staphylococcus
aureus (MRSA) (ATCC® 43300™), Staphylococcus epidermidis
(ATCC® 12228™), Staphylococcus haemolyticus (ATCC®
29970™), Staphylococcus saprophyticus (ATCC® 49907™),
Streptococcus agalactiae (ATCC® 12386™), Streptococcus
pyogenes (ATCC® 19615™) в концентрации не более 1x10® и
не менее 1x1 O'* копий/мл;
стр. 7 из 46
--- стр. 8 ---
'i
Клинические изоляты панели штаммов и изолятов,
находящейся в распоряжении ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора: Candida albicans, Candida glabrata,
Candida parapsilosis,
alphaherpesvirus 1 (вирус
alphaherpesvirus 2 (вирус
alphaherpesvirus 3 (вирус
betaherpesvirus 5 (вирус
Enterovirus spp.,
герпеса человека 1),
человека 2),
человека 3),
человека 5),
Human
Human
Human
Human
Human
герпеса
герпеса
герпеса
betaherpesvirus 6A/B (вирус герпеса человека 6А/В), Human
betaherpesvirus 1 (вирус герпеса человека 7), Human
gammaherpesvirus 4 (вирус герпеса человека 4), Human
gammaherpesvirus 8 (вирус герпеса человека 8), Human
polyomavirus 1, Human poiyomavirus 2, Mycobacterium
tuberculosis, Pneumocystis jirovecii. Primate erythroparvovirus 1,
Streptococcus pneumoniae. Toxoplasma gondii в концентрации
не более 1x10^ и не менее IxlO'* копий/мл;
- ДНК человека в концентрации 0,2 мг/мл.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Воспроизводимость и повторяемость исследования
Воспроизводимость и повторяемость исследования
определены путем тестирования положительных модельных
образцов. Положительные образцы представляли собой
разведения стандартного образца предприятия, содержащего
ДНК ВГЧ-8, до конечных концентраций 1x10'* и 1x10® копий/мл
(см. табл. 3, 4).
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах, на разных
сериях набора реагентов.
стр. 8 из 46
--- стр. 9 ---
Таблица 3
Воспроизводимость
АмплиСенс^;
НН\/8-скрин/
монитор-FL
: Комплект
для
экстракции
Выяв
ляемый
патоген
значение
концент
рации,
копий/мл ^
Коли
чество
повто
ров
Среднее
значение
измерения
концентра-
й ш Л й
Стандарт
ное
отклонение
(SD)
Коэффи
циент
вариации
(CV),%
Форма 1
«РИБО-
преп» ВГЧ-8 6.0 30 5.8 0,15 2.6
4.0 30 3,9 0,18 4,6
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-8 6.0 30 5.9 0,12 2.1
4,0 30 3,9 0,13 3.3
Форма 2
«РИБО-
преп» ВГЧ-8 6,0 30 6.0 0,29 4,9
4,0 30 4.1 0,30 7.5
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-8 6,0 30 6.2 0,34 5.5
4.0 30 4.1 0,32 8.0
I '
Таблица 4
П овторяемость
АмплиСенс**
HHV8-скрин/
монитор-FL ;
Комплект
для
экстракции
Выяв
ляемый
патоген
Ожидаемое
значение
концент- !
рации,
копий/мл
Коли
чество
повто
ров
Среднее
значение
измерения
концентра-'
ЦИЙ, 1д
Стандарт- '
ное
отклонение
(SD)
Коэффи
циент
^вариации
(CV), %
Форма 1
«РИБО-
преп» ВГЧ-8 6.0 10 5.8 0,07 1.1
4,0 10 3.9 0,09 2.3
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-8 6.0 10 5.8 0,03 0,6
4.0 10 3.9 0,07 1.8
Форма 2
«РИБО-
преп» ВГЧ-8 6.0 10 6.0 0,18 3.0
4.0 10 4,1 0,13 3,0
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-8 6.0 10 6,2 0,23 3.7
4.0 10 4.1 0,19 4.8
П равильность
Правильность определена путем тестирования
положительных модельных образцов. Положительные образцы
представляли
предприятия,
собой разведения стандартного образца
содержащего ДНК ВГЧ-8, до конечных
концентраций IxlO'^ и 1х10®копий/мл (см. табл. 5).
стр. 9 из 46
--- стр. 10 ---
Таблица 5
П равильность
АмплиСенс**
Ш\/8-скрин/
монитор-FL
Комплект
для
экстрак
ции
Выявляе
мый
патоген
Коли
чество
повторов
Ожидаемое
значение
концентра
ции, 1д
Среднее
значение
измерения
концентрации,
1я
Системати
ческая
погрешность
(В), %
Форма 1
«РЙБО-
преп» ВГЧ-8
30 6.0 5.8 -3.3
30 4.0 3.9 -2.5
«МАГНО-
сорб»
30 6.0 5.9 -1,7
30 4.0 3.9 -2.5
Форма 2
«РИБО-
преп» ВГЧ-8
30 6.0 6.0 0.0
30 4,0 4.0 0.0
«МАГНО-
сорб»
30 6.0 6.1 1.7
30 4.0 4.0 0.0
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы образцы биологического
материала пациентов с подтвержденным диагнозом по
Международной классификации болезней 10-го пересмотра
(МКБ-10): «С46 Саркома Капоши» и «D47.7 Болезнь
Кастлемана», модельные образцы биологического материала с
добавлением стандартного образца предприятия, содержащего
ДНК ВГЧ-8, до концентраций IxIO'^-lxlO® копий/мл, а также
биологический материал условно-здоровых доноров крови и
пациентов с соматической патологией при отсутствии
клинических проявлений острого инфекционного заболевания.
В качестве референтного метода использовалась система
QX100 для проведения капельной цифровой ПЦР (QX100 droplet
digital PCR) (Bio-Rad Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз,
Инк.»), США, РУ № ФСЗ 2012/13278).
Результаты представлены в табл. 6 и 7.
стр. 10 ИЗ 46
--- стр. 11 ---
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® HHV8 -c k p h h/ m o h h t o p-FL в сравнении с
референтны м методом
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс® HHV8-
скрин/монитор-FL
Результаты' прйменения
а г о ш ю ш
положительных отрицательных
Плазма
венозной
крови
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Цельная
венозная
кровь
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Мазки со
слизистой
оболочки
ротоглотки
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Слюна
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Биологические
(плевральная,
асцитическая)
жидкости
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Тканевой
(биопсийный,
операционный,
аутопсийный)
материал
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
Тканевой
(биопсийный,
операционный,
аутопсийный)
материал в
парафиновых
блоках
Всего
исследовано
400 образцов
положительных 200 0
отрицательных 0 200
СТр. 11 ИЗ 46
--- стр. 12 ---
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® WHV8 -c k p h h/ m o h h t o p-FL
Вид исследуемого материала
Диагностическая
чувствительность’'
(с доверительной
eUpOBfKOCTbK) 95 %)
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Плазма венозной крови 100 (98.2- 100)% 100 (98,2- 100)%
Цельная венозная кровь 100 (98,2- 100)% 100 (98,2- 100)%
Мазки со слизистой оболочки
ротоглотки 100 (98,2- 100)% 100 (98,2- 100)%
Слюна 100 (98,2- 100)% 100 (98,2- 100)%
Биологические (плевральная,
асцетическая) жидкости 100 (98.2- 100)% 100 (98,2- 100)%
Тканевой (биопсийный,
операционный, аутопсийный)
материал
100 (98,2- 100) % 100 (98,2- 100)%
Тканевой (биопсийный,
операционный, аутопсийный)
материал в парафиновых блоках
100 (98,2- 100)% 100 (98,2- 100)%
I
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования биологического
материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с
соблюдением СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические
требования по профилактике инфекционных болезней», СанПиН
2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к
содержанию территорий городских и сельских поселений, к
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям,
эксплуатации производственных, общественных помещений,
организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий» и МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом,
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового применения
для проведения ПЦР-исследования указанного количества проб
(см. раздел «Формы комплектации»).
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
^Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 12 из 46
--- стр. 13 ---
II
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75 %.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы. Все операции проводятся только в
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и
слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании по назначению и соблюдении
вышеперечисленных мер предосторожности набор реагентов
безопасен.
При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и
хранения риски взрыва и возгорания отсутствуют.
Сведения о безопасности набора реагентов доступны по
запросу.
стр. 13 ИЗ 46
--- стр. 17 ---
I
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой
(например. Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные) или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по
8 шт. с прозрачными крышками (например, QIAGEN GmbH
(«Киаген ГмбХ»), Германия, или аналогичные) - при
использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
плоской крышкой (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) или пробирки для ПЦР к
Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками
(например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия,
или аналогичные)-при использовании прибора роторного
типа.
29.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема с фильтром до 100 и до 1000 мкл (например, Axygen,
Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
30. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл (например,
Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
31. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) (например,
«БАВ-ПЦР-«Ламинар-С.», ЗАО «Ламинарные системы»,
Россия, или аналогичный).
32. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
33. Автоматические дозаторы переменного объема (например,
ООО «Биохит», Россия, или аналогичные).
34. Программируемый амплификатор с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»
(например, Rotor-Gene О (QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»),
Германия), CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc. («Био-Рад
Лабораториз, Инк.»), США), «ДТпрайм» (ООО «НПО ДНК-
Технология»), Россия и другие, рекомендованные
Изготовителем).
35. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 °С.
36.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки.
37. Емкость для сброса наконечников.
стр. 17 ИЗ 46
--- стр. 18 ---
!
аутопсийный)
аутопсийный)
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- плазма венозной крови,
- цельная венозная кровь,
- мазки со слизистой оболочки ротоглотки,
- слюна,
- биологические (плевральная, асцитическая) жидкости,
- тканевой (биопсийный, операционный,
материал,
- тканевой (биопсийный, операционный,
материал в парафиновых блоках.
Плазма венозной крови
Для получения образцов плазмы венозной крови взятие крови
следует производить натощак или через 3 часа после приема
пищи одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в пробирку с
ЭДТА (специальная вакуумная система типа Vacuette
(сиреневые крышки - 6% ЭДТА)). После взятия крови пробирку
следует плавно несколько раз перевернуть вверх дном, чтобы
кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом.
В течение 6 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму
и перенести в новую пробирку. Для этого центрифугируют
пробирки с цельной венозной кровью при 0,6 тыс g (3 тыс
об/мин) в течение 10 минут при комнатной температуре (от 18
до 25 °С). Полученную плазму отбирают в количестве не менее
1 мл отдельными наконечниками с фильтром в стерильные
пробирки объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов плазмы венозной крови до
проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 5 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - до 3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Цельная венозная кровь
Взятие крови следует производить натощак или через 3 часа
после приема пищи одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в
пробирку с ЭДТА (специальная вакуумная система типа Vacuette
(сиреневые крышки - 6 % ЭДТА)). После взятия крови пробирку
стр. 18 ИЗ 46
--- стр. 19 ---
I!
4
следует плавно несколько раз перевернуть вверх дном, чтобы
кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом
(в ПРОТИВНОМ случае кровь свернется и экстракция ДНК станет
невозможной!). После плавного перемешивания пробирку
поместить в штатив.
Допускается хранение образцов цельной венозной крови до
проведения предварительной подготовки;
- при температуре от 18 до 25 °С - не более 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 суток с момента
взятия биологического материала.
Недопустимо замораживание образцов цельной венозной крови!
Мазки со слизистой оболочки ротоглотки
Взятие мазка проводят при помощи сухого стерильного зонда
с тампоном вращательными движениями с поверхности небных
дужек и задней стенки ротоглотки.
После взятия мазка рабочую часть зонда помещают в
стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной
среды для хранения и транспортировки респираторных мазков.
Аккуратно обламывают полистирольную палочку на расстоянии
не более 0,5 см от рабочей части и оставляют рабочую часть
зонда с биологическим материалом в пробирке. Пробирку с
раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Допускается хранение образцов мазков со слизистой
оболочки ротоглотки до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от 18 до 25 °С - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Слюна
Перед получением слюны следует провести полоскание
полости рта водой. Слюну забирать в стерильные сухие
пробирки объемом 2,0 мл или в пластиковые стерильные
контейнеры объемом 50-60 мл в количестве не менее 0,5 мл.
Допускается хранение образцов исследуемого материала до
проведения ПЦР-исследования;
стр. 19 ИЗ 46
--- стр. 20 ---
при температуре от 18 до 25 °С - в течение 6 часов;
при температуре от 2 до 8 °С - в течение 24 часов;
при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Плевральная жидкость
Плевральная пункция (плевроцентез или торакоцентез)
проводится с помощью специального инструмента, иглы или
пластикового катетера, который прокалывает грудную стенку и
позволяет вывести жидкость. Взятие плевральной жидкости в
количестве не менее 0,5 мл проводят в одноразовые
стерильные пластиковые пробирки объемом не менее 2 мл или
контейнеры.
Допускается хранение плевральной жидкости до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 24 часов;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Асцитическая жидкость
Лапароцентез проводится при помощи прокалывания
брюшной стенки специальным инструментом, представляющим
собой металлическую трубку и вставленную в нее трехгранную
иглу. После прокола иглу извлекают и выводят жидкость. Взятие
асцитической жидкости в количестве не менее 1,0 мл проводят
в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом не
менее 2 мл или контейнеры.
Допускается хранение асцитической жидкости до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 24 часов;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - до 3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
стр, 20 из 46
--- стр. 21 ---
i;
Тканевой (биопсийный. операционный, аутопсийный)
материал
Материал забирают из зоны предполагаемого
местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной
ткани или из пограничного с поврежденным местом участка.
Образцы ткани диаметром не более 5 мм помещают в
одноразовые стерильные пробирки объемом 2 мл с
добавлением 500 мкл «Транспортной среды с муколитиком
(ТОМ)». Пробирку плотно закрывают.
Образцы ткани диаметром более 5 мм помещают в
одноразовые пластиковые контейнеры с широким горлом
объемом не менее 50 мл.
Допускается хранение тканевого (биопсийного,
операционного, аутопсийного) материала до проведения
предварительной подготовки:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 24 часов;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Тканевой (биопсийный, операционный, аутопсийный) материал
в парафиновых блоках отбирается, транспортируется и
хранится для проведения молекулярно-биологических
исследований согласно Приказу М3 РФ №179н от 24.03.2016 г.
«О правилах проведения патолого-анатомических
исследований».
ВНИМАНИЕ! Недопустимо использование кислого формалина
для фиксации тканевого материала.
Отбор образцов проводится двумя способами:
1. Парафиновые блоки нарезать на микротоме для
парафиновых срезов, используя отдельный одноразовый
нож для каждого типа биологического материала. Образцы
(4-5 срезов общим размером 2-3 мм^ без учета объема
парафина) при помощи пинцета перенести в стерильную
одноразовую пробирку объемом 2,0 мл с винтовой
горловиной с крышкой, снабженной уплотняющей кольцевой
прокладкой и петлей, необходимой для прикрепления
крышки.
стр. 21 из 46
--- стр. 22 ---
I
4;
2. Из парафинового блока с помощью стерильного
одноразового скальпеля или скарификатора извлечь
фрагменты ткани размером 2-3 мм^ (без учета объема
парафина). Образцы перенести в стерильную одноразовую
пробирку объемом 2,0 мл с винтовой горловиной с крышкой,
снабженной уплотняющей кольцевой прокладкой и петлей,
необходимой для прикрепления крышки.
Допускается хранение тканевого (биопсийного,
операционного, аутопсийного) материала в парафиновых
блоках до проведения предварительной подготовки при
температуре от 18 до 25 °С - длительно, не допуская плавления
парафиновых блоков.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ
ДНК
Образцы плазмы венозной крови, мазки со слизистой
оболочки РОТОГЛОТКИ, образцы слюны, плевральной и
асцитической жидкостей не требуют предварительной
подготовки.
Образцы цельной венозной крови, тканевого (биопсийного,
операционного, аутопсийного) материала и тканевого
(биопсийного, операционного, аутопсийного) материала в
парафиновых блоках требуют предварительной подготовки.
Цельная венозная кровь
Отобрать 250 мкл цельной венозной крови в одноразовую
пробирку объемом 1,5 мл. Добавить 1мл «Гемолитика».
Аккуратно перемешать содержимое пробирки на вортексе и
оставить на 10-15 мин при комнатной температуре (от 18 до
25 °С), периодически перемешивая на вортексе.
Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 4 тыс g
(8 тыс об/мин) в течение 3 мин. Надосадочную жидкость
отобрать с помощью вакуумного отсасывателя, оставив 100 мкл
осадка. После отмывки осадок клеток должен быть белым,
допускается наличие только небольшого налета розоватого
цвета над осадком (остатки разрушенных эритроцитов). При
необходимости можно повторить отмывку «Гемолитиком».
Полученный осадок должен быть немедленно лизирован (в
случае экстракции комплектом «РИБО-преп» добавить 300 мкл
раствора для лизиса и в последующем экстрагировать ДНК в
стр. 22 из 46
--- стр. 23 ---
I
(I
соответствии c инструкцией к комплекту реагентов «РИБО-
преп», не добавляя раствор для лизиса повторно).
Допускается хранение предварительно обработанных с
помощью раствора для лизиса образцов цельной венозной
крови до проведения экстракции при температуре от минус 24
до минус 16 °С - в течение года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Тканевой (биопсийный, операционный, аутопсийный)
материал
Тканевой материал (биопсийный, операционный,
аутопсийный) диаметром менее 5 мм, помещенный в пробирки
объемом 2 мл с «Транспортной средой с муколитиком (ТСМ)»,
не требует предварительной подготовки.
Тканевой материал (биопсийный, операционный,
аутопсийный) диаметром от 5 до 10 мм поместить в стерильную
фарфоровую ступу и измельчить пестиком. В полученный
гомогенат добавить 1 мл «Транспортной среды с муколитиком
(ТСМ)» и тщательно перемешать пестиком. Для экстракции ДНК
используют 100 мкл полученной суспензии.
Допускается хранение предварительно обработанных
образцов до проведения экстракции:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Тканевой (биопсийный. операционный. аутопсийный)
материал в парафиновых блоках
Отобранные образцы тканевого (биопсийного, операционного,
аутопсийного) материала в парафиновых блоках необходимо
депарафинизировать с помощью реагентов, предназначенных
для этой цели, например, о-ксилола, а затем провести серию
отмывок с понижающейся концентрацией раствора этилового
спирта (аналогично стандартной гистологической проводке). В
случае использования коммерческих растворов для
депарафинизации действовать согласно инструкции по
применению. Для экстракции ДНК берут 100 мкл образца без
фрагментов стромальной ткани.
стр. 23 из 46
--- стр. 24 ---
л
Допускается хранение предварительно обработанных
образцов до проведения экстракции:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Непригодными для исследования являются:
- образцы цельной венозной крови и плазмы венозной крови,
взятые в пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта;
- образцы цельной венозной крови, содержащие кровяной
сгусток или подвергшиеся заморозке;
- образцы тканевого материала в парафиновых блоках,
фиксация которого была проведена с использованием
кислого формалина.
Для контроля эффективности экстракции ДНК и реакции
амплификации в наборе реагентов предусмотрено
использование внутреннего контрольного образца (BKO-FL),
который добавляется в каждый биологический образец на этапе
экстракции нуклеиновых кислот. По окончании реакции
амплификации наличие сигнала, свидетельствующего о
накоплении фрагментов ДНК BKO-FL, говорит о достаточной
эффективности экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии
ингибиторов ПЦР.
Потенциально интерферирую щ ие вещ ества
Для оценки потенциальной интерференции были выбраны
эндогенные и/или экзогенные вещества, которые могут
присутствовать в биологическом материале, используемом для
исследования (см. табл. 8).
Были протестированы образцы без добавления и с
добавлением потенциально интерферирующих веществ.
Концентрация каждого потенциально интерферирующего
вещества указана в табл. 8. Все образцы исследуемого
материала содержали стандартный образец предприятия с
концентрацией ДНК ВГЧ-8 1x10^ копий/мл.
стр. 24 из 46
--- стр. 34 ---
1
ФОРМА 1
«
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Конт
роль
Контролируемый
этап ПЦР-
йссиедбВ^ния
Результаты амплификации по каналу для
Ф луорофора
FAM JOE ROX
ПК Экстракция ДНК
определено
значение Ct
меньше
граничного
опоеделено
значение Cf меньше
граничного: значение
концентрации
укладывается в
диапазон
опоеделено
значение Ct
меньше
граничного
ОК Экстракция ДНК значение Ct
отсутствует
значение Ct
отсутствует
опоеделено
значение Ct
меньше
граничного
К- ПЦР значение Ct
отсутствует
значение Ct
отсутствует
значение Ct
отсутствует
К1 ПЦР
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
К2 ПЦР
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
опоеделено
значение C tи
расчетная
концентрация
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct и диапазон концентрации
ПКО HHV8 указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение
порогового цикла {Cf} по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 12) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить ПЦР-исследование,
начиная с этапа экстракции ДНК, для всех образцов.
2. Рассчитанная концентрация ПКО HHV8 не укладывается в
диапазон, указанный во вкладыше, необходимо повторить
ПЦР-исследование, начиная с этапа экстракции ДНК, для
всех образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE определены
значения порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
стр. 34 из 46
--- стр. 35 ---
ФОРМА 1
е
Щ
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК, начиная с этапа
экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора ROX значение порогового цикла
(СО отсутствует или определено больше граничного. Это
означает, что ОК не выполнил функцию отрицательного
контроля экстракции. Требуется повторное ПЦР-исследование
всех образцов, начиная с этапа экстракции ДНК.
4. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК.
5. Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значения
порогового цикла (Cf) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 12). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. Коэффициент корреляции R^ при построении калибровочной
прямой менее 0,98. Необходимо проверить правильность
заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 35 из 46
--- стр. 36 ---
ФОРМА 2
ФОРМА 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участка ДНК ВГЧ-8 с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» -
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь HHV8-Lyo Порошок белого цвета —
96 пробирок
объемом 0,2 мл
К1 HHVS Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
K2HHV8 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.5 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0.5 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 2 пробирки
ПКО HHVB Прозрачная бесцветная
жидкость 0.1 1 пробирка
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов использую тся одноразовы е
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, вклю чая объем
пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью HH\/8-Lyo
для амплификации ДНК исследуемых и контрольных
образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых и
контрольных образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с
помощью комплектов реагентов для проведения экстракции
методом магнитной сепарации, необходимо избегать попадания
сорбента в реакционную смесь.
стр. 36 из 46
--- стр. 42 ---
ФОРМА 2
Таблица 16
Результаты для контролей различных этапов
ПЦР-исследования
Конт
роль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Результаты амплификации по каналу для флуорофора
РАМ JOE ROX
ПК Экстракция ДНК
определено
значение Ct
меньше
граничного
определено значение Ct
меньше граничного;
значение концентрации
укладывается в
диапазон
определено
значение Cf
меньше
граничного
ОК Экстракция ДНК значение Ct
отсутствует значение Cf отсутствует
определено
значение Cf
меньше
граничного
К- ПЦР значение Ct
отсутствует значение С? отсутствует значение Cf
отсутствует
К1 ПЦР
определено
значение C tи
расчетная
концентрация
определено
значение Ct и расчетная
концентрация
определено
значение Cf и
расчетная
концентрация
К2 ПЦР
определено
значение C tи
расчетная
концентрация
определено
значение Cf и расчетная
концентрация
определено
значение Cf и
расчетная
концентрация
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct и диапазон концентрации
ПКО HHV8 указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение
порогового цикла (Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 16) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить ПЦР-исследование,
начиная с этапа экстракции ДНК, для всех образцов.
2. Рассчитанная концентрация ПКО HHV8 не укладывается в
диапазон, указанный во вкладыше, необходимо повторить
ПЦР-исследование, начиная с этапа экстракции ДНК, для
всех образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE определены
значения порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на
стр. 42 из 46
--- стр. 43 ---
каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора ROX значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
отрицательного контроля экстракции. Требуется
повторное ПЦР-исследование всех образцов, начиная с
этапа экстракции ДНК.
4. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК.
5. Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значения
порогового цикла {Ct) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 16). Необходимо повторить
. амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. Коэффициент корреляции R^ при построении калибровочной
прямой менее 0,98. Необходимо проверить правильность
заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА 2 _________________________________________________________________________
стр. 43 из 46
--- стр. 44 ---
%
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100
FN хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С,
кроме ПЦР-буфера-Н и ПЦР-смеси-FL HHV8. ПЦР-буфер-Н,
ПЦР-смесь-FL HHV8 хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL HHV8
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С.
ПЦР-смесь HHV8-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в
защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 44 из 46
--- стр. 45 ---
t
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru®.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
’ Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru.
стр. 45 из 46
--- стр. 46 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
А Осторожно!
| l o t Код партии V
Содержимого достаточно
для проведения п тестов
IVD Медицинское изделие для
диагностики in vitro Использовать до
VER Дата изменения □а
Обратитесь к инструкции
по применению
Предел температуры Не допускать воздействия
солнечного света
ш1 Изготовитель d ] Дата изготовления
стр. 46 из 46