Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией "SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F" ФОРМА 1 и ФОРМА 2 по ТУ 21.10.60-002-83076696-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
''Аллель
УТВЕРЖДАЮ
КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в
режиме реального времени с обратной транскрипцией «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА I и
ФОРМА 2 по ТУ 21.20.23-002-83076696-2020.
Вариант исполнения:
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 2
Производитель:
Общество с ограниченной ответственностью
«Аллель Центр Инновационных Биотехнологий»
(Редакция 2)
--- стр. 2 ---
^........ ^
^ /Аллель
Центр Инновационных
Биотехнологий
КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Набор реагенто» аая »ыя»лениа РНК корова»ируса SARS*CoV>2 методон по-тамератиой иеоной реакинн в режние реального вренеаа е обратной транскрваиаей
«SARS^oV-2 RNA-DETECnON-lFV ФОРМА 1 м ФОРМА I по ТУ 21^0ОЭ^2-«ЗЙ76б9б-2в20
Обшшш и|МУТ»РИСТЖЮ1 Ш »ййрл РСТГОГГРР
|ДМ ва1Шеномнис
крошенное ианмеиоаанне
ряапт нсполяети
Т1ДОЖ ЯЫ Й нонер
довна арансниа
игностические характеристнкк
[ годвостн набора реагентоа
шавои обнаруженна
нфольные о^ашы
«1се врема проаеденна аналитв
ема 1даояеления амалиаа
IwH биологического иагериала дла аиалнта (РНК)
1ичестао опреаелеииН
тааность кониоиентов набора peareinoa к
о (1ли»аании1
ЕПлуатациониаа ликунентацна
Паиачеине
Набор реагентов дла вьиаяе|ша РНК коронввируса SARS-CoV-2 методом полимервлюй ценной реакции а режиме реального времени е обратной транскрипцией «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
метадийныЯ тестна осноае полимеразной цепной реакции а режиме реального врсмеик с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР*РВ), прелнатначеиный дла качествениого определенна нуклеиноаых кислот (РНК) вируса SARS-Co)
саогичоских пробах пациента, таких как мазки из h o c o i-ло тки, ротоглотки (горла), а также смешанные образцы, полученные из наткоа из носоглотки и ротоглотки от лиц с подозрением на инфекцию COVID-19. Использован»
paarairtOB «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА I и ФОРМА 2 рекоммшуетса лла in vitro диагностики и нровеления знидемиологичееких исслелоаатй.
Оушинональнос 1изначенис: Прямой метод зтиологмческой ливгностнкн.
Набор реагентов дла выавленна РНК хороиавируса SARS-CoV-2 >аетодоы ооднааеразкой цеашон реакшш в реаоше реального
BpesaeHBCo6pnBo8TpBHCKpHmiHefl«SARS-CoV-2 RNA-OETECTION-IFa ФОРМА I в ФОРМА 2 по ТУ 21^0.23-002-83076696-
2020
Набор рсагсшоа «SARS-CoV-2 RNA-DETECTTON-IF»
Набор рсагептоа «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 2
ALRT-6
12месаиев при соблюдении режима хранения
ХранениеHPHTCM1ICPITVPIIOMреасиые *2...*8°С
Качественный
Днагностичеехда чувствительность - 1(Ю % (99,98 % - 100 % с ловсрнтслыюй всроатноетью 95S)
Диагностичоскал специфичность -100 % (99,98 % • 100 V» с доверительной всроатноетью 93%)
Предел обнаруженна - IOOO копий нуклеиновой кнелоты (РНК) KopoHiaHpycaSARS-CoV-2 на 1 ил образца
Инклюзианость не мснсс 99%
Внутренний контроль вьшеле1шл РНК и реакции обратной транскришшн;
Положнте;|ьиый контроль к мишени гона N;
Отрицательный контрольный образец ПЦР-РЭ
Не более 76 ыинут* (без учета времени экстракции РНК)
Одностадийный
Юыкл
Набор [>ассчнтан на 96 определений, включал контролн
Гогов к применению. Компоненты набора реагентиа нс требуют липолнителыюго разведения.
Ж»1лкне комноненть] набора ревгеитоа, расфасованные в пробирки с зааинчиваюнсейся крышкой: шиншет на 96 лунок или
стрнплироваикые пробирки 12x8 лукок и пленха для закленаания планшета, аложенные в картонную коробку с ложементом.
Краткая инструкция по применению. Полни Н1гструкция лоступна ita сайте производителя.
I программы амплификации дла прибора Real-time CFX96 Touch (BIO-RAD)
Прнкцмн метола
Обнаружсцис анруи SARS-CoV-2 с помощью набора peansiiroe «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» достнгвегел зв счет экстракции нузшенноаых кислот (РНК) ю клнннческкх образцов верхних лыхпеяыиих дутей
|ующсй мультиплексной ПЦР в режиме реального времени, совмещенной с обретиой трвнскрнлцией (ОТ-ПЦР-РВ), с иелользоваинем ПЦР амллифнхаторов с детекцией флуоресцеитного сигнала на квзших FAM и НЕ)
впационно-флуоресцентная летекцна позволяет проаол»ггь регистрацию продуктов амплификации в npotiecce прокожленна реакции («а режиме реального времени»). Специфической мишенью а реакции ПЦР-РВ является ген I
|вчный для вируса SARS-CoV-2.
Флуореецеитиая летеитя специфических мишеней проводится в реакцноином растворе. Олигоиуклеотидный зонд, несущий флуоресцетиую метзту, специфически гибрядизуется е двтекшруемым участком к ДНК. 8 ко;
1)юпего иарашквати цепи ДНК ферментом ДНК-полимераюй, происходит рвзрушепне зонда и высвобождение флуоресцентной метки в раствсф, что делвет возможным еб регистрацию па флуорссцетггоом детекторе,
оопкием епециально подобранных настроек аьтлнфикатора, анаянзнрующи программа ватоматически рассчитывает циклы пересечения крнвьта яакоплеиля фпуоресцеитного ентзила с пороговой линией - пороговый цикл (Q
п Ct обрапю пролориионалыю ко1тензрвпни к ДНК в образце.
Кроме мишени к 1чну вируса, набор реаге»ггов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» содержит набор праймероа и зонд, предвазначенный для об1ируження мкшекн внутреннего котроля зкстракции (ВКОчпа2). Этот контроз
щни представляет собой фрагмент РНК в белковой оболочке, пе человеческого происхождения. Внутренний контроль BKO-ms2 аобавлвется ко всем клиническим о^звзцвм для хоптроля проведения этапов экстракция нуклеина вь
(РНК), обратной транскрипции, а также ниги(»тровшои реакции. В еости наб(^ реагентов твкасе иодит тложктсльиый контроль к luuueim N (ПКО-В), который поэволает пользователю <и|еннтъ, насколько успешно прошл
№ оиалхэа. и отрицатеяышй контрольный образец ПЦР-РВ (К-).
Авалазируемые образз|Ы
Для iipoieneiiua исследования с нспользованткм набора реагентоа «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» допустимо нснользование образиов/бмолагичесютх проб пашмнтв, таких как мазки и з носоглотки, ротоглотки (горла),
житвпмыс образны, полученные из мазков из иоеоглотеи и ротоглотки.
Количество ревгевтов, асобхоанмое дла проведеааа всследоваааа
На олву реакцию ОТ-ПЦР расходуется IS мкл Днлюевп (D1L).
Волну реакцию ОТ-ПЦР необходимо добавлять Юмкл образца (выделенной из образцов паонентов РНК).
'Пвдгетввка вдалнзаруемьп «бразнов дла всследованад
Сбор н кравение клаикчееках образцов
Взяпк. хранение н транстюртнровакне аиаянзнрусных образцов осупкетклять согласно МУ 1.}. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амтьтифнкацня нуклеиновых кислот при работе с матсриало!
ашим микроорганизмы I-IV трупп пкгогенностк» и «Временным методическим рекомендациям по лабораторной диазтюстнке itoBoro короиинруса 2019 (2019-nCoV) методоы полимеразной цепной реакции (ПЦР):
апшымн Главным госуаарствешплм врачом Российской Федерации.
1 Дла взятия, хранения и транспортнроекн образцов до проведения исследования, рекомендуется в кячестяе тряиспорпюй среды нспользояеть егернлытый фтпнологнческнй раствор или спепиаяизнрованные транстюрть
среаы с коиссрвв1Гтом, совместимые С исследованиями методом ПЦР. я также зонды (теипюны). Рекомсмдусмые изделия: «Зокл нсдинннскнй одноразовый стерильный 1Ю ТУ 32.50.13-002-28731857-2020». РУ №РЗ
2021/13989 ОТ26. II .2021г., Систеквтранспортни со средой длв вирусов по ТУ 32.50.50-027-I7547866-2020. РУ №Р3112020/9961 от 02.04.2020r.
2 Для взятия, хранения н транспортнрояви образцов используйте контейнеры с маркировкой «DNaxe/RNtte free».
3 После язятм. образцы необходимо хранить в холодилышке ори темаервтур|юм режиме ■»2...»8*С ятсче 1и<с короткого периода (не более 72 часов), при тсшзсрвтуре -20*С - не более 4 месяцев; ирнтемпературе нзсжс
20°С • 1 течение более дл1гтельиого аременя (во 36 месяцев);
Не рекомендуется заморяжияише'отияаиие образцов более одиого раза перед прояедезшем тсстирояышя.U.
Состав набора реягя|гтов
Состш* набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 2
UtCSOMfll« КОМПОЙ«ВТ« ш
bpt petrerreft
Объем а наборе
реагентов (ва 96
тостов), мкл
(«л-м, ют Опвсаяне
hmi(Dn.) 1б00(15ывдна 1 ПЦР
реакцию)
1 Прозрачни бесиветни или бяели(»роза»ого цяст»
жидкость » пробирке 2,0 мл с синей крышкой
/цветовой маокноовхой
утроший контрольный
уакц выделеинл и обраттюа
BKiwiiiuiH (8KO-mj2i
1150(10 мя.зна|
реакшио выде-зензи
РНК)
1 Прозрачни бесцветни жидкость в пробирке 2.0 из
с оранжевой крышкой/цветовой маркировкой
яавнтельный контроль к
виия гша N (ПКО-В)
290(|0мклна I образец
ПКО-В)
1 Прозрачни бесиветни жидкость в пробирке 0,5 ыз
с квасной КОЬШ1Хой/|МИТпопй ышттшплшмпЛ
риспеяьиый контрольный
■мППР-РВ (Х-)
1150(10мкл на 1 ПЦР
оеактоо)
1 11розрачви бесттветни жидсость вттробирке 2,0 ui
с пвозовчной кпыттткой/бевой naifnaoB ыммгмпоио
яфиюеяремнмя смесы
мете'пршшнровыошх
вЬфвахди прокденмя
'41ЦР-РВ реакцик на 96
Madhl avHOK (МЕМ)
1 Сухи смесь белого или полулро^чиого цвета на
ДПС пробирок, герметично заклеенных нлеихой
пчаская пленка для
f ивы [ЩР
■шет/етоипоа
2 Отттхческм luwHxft для заклеикшия ПЦР плялшеп
стрнпоя
гтрушм 1Ю Ефнмеыеиию
'
1 Кратки ннструхши по щжменекню набора
реагентов SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F
ФОРМА 2
--- стр. 3 ---
Набор ревгенгов aSARS-CoV.2 RNA-DETECTION-IF» рассчитан на 96 определений, включав коитролвниео^аэ 1ш. ФОРМА 2 подаодктяла мроведенти ис следа ван ий е нсполиованиен ручных мегодиа, а также адаптиром
быв открытых полуитоматическнх н автоыатнческих ствнинй длв дотнрованна жидкостей.
Необходимое дополиггсльное оборудованкс, не входящее в еостав набора реагентов
Приборы:
ГЩР-бокс с УФ-панпой;
Ашшификатор нухленноаых кислот термоциклическнй алашиетиого пша с детекцией сигнала (по каналам FAM/GREEN, IIEX/JOE/R 6C/YoUow/Cy}) о режиме реального ареыеин:
Настольнал центрифуга на 12000 об/мин (дяа этапа аыделеннв РНК):
Центрифуга типа «Вортекс» на 1S00 — ЗОООоб/мни;
Цотаторы переменного обмма со сменными наконечниками, лоэволающне отбирать объемы жидкости 0,5*10 кхл: 5*50 нхл; 20*200 мкл;
Хилоднлышк медншшский, 1шддержнааю1инй темтюратуриый рсаиш от ■ь2...ч-8°С;
Расхош1ЫС материалы:
Эдкорамаыс наконечники с фильтром (аэрозольным барьером) на 0,5-10 мкл; 5-50 мкл; 20-200 мкл;
Здпоразоаые иолипропнленоаые пробирки вместимостью 1,5мл или 2,0 мл длапрнготсаленна амшшфнкаиио|шой смеси,
Здноразоаие средства зашиты - мелииннскал шапочка олнорозовал, медицинская запипнеа маска (класс N95 нлиРРРЗ), рабочая форма, медншшскаа зашитнаа форма одноразовая, одноразовые латекеши перчатки, заццгпше очш
Набор реагеитев длв аыделеннв РНК:
Набор реагетпоа дла аыделення РНК из клиинчеекях образцов. Набор peareirroa «SARS-CoV-2 RNA-DETECnON-IF* соамеетны е большняством наборов длв экстрвкцни РНК или совместной зкетракцин ДНК/РНК на оеиоз
методов осаждета н сорбшт на силикагеле или мапштных частицах, обеспечивающих выделение целостной РНК без примесей, ингибирующих равшию «Лргпюй транскрипиии я НЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).
toHMUurl Набор реагомтой *.МЛ5-СоР-2 RNA-DBTECTION-IF» не совместим с экспресс-методиками оыАеяения РНК.
Предупреждеквя и рсконенлацни при работа < набором реагентов
Рекомеидацнн при работе е нвборои рсягеятов
1рнненжть набор реагеигаа строго гю назначению, соглкио ав 1шой инструкции;
1рв улалетш пробирок, содержащих продукты ПЦР, недопустимо их открывание и раэбрызгивапие содержимого, поскольку зтр может привести к контвьпт4101и продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудованиа и реагентоа;
1се1'да использовать aauumiue перчатки, профессиональную одеведу, эаиштшпе очки и т. л. При работе с обратцамн и peaj-oimiHU ям нроасдониа исщюдоминй следить за тем. чтобы реагенты не ношж на ковсу, а глаза, н
ызистыс. При контакте с ними немедленно промьпв большим количеством воды. Необходимо тщательно ныть руки после работы с обрашанн и рсагскгами;
1р« переносе клинического материала из пробирок, флаконов в новые использовать только отдельные одноразовые стфильпые наконечниан с азрозольнынн барьерами;
оюльзоаать расходяьм материалы (пластиковые пробирки и наконечники) только с маркировкой «DNaie, RNase-free»;
Мотвращатв аозможную коитамннаиию реагентов, следуа стандартным процедурам акшочаа, использование средств индивидуальной защиты и разобщение зон обработш образцов, зкетракцин нуклеииовых кислот и зон:
кганоаки ПЦР-РВ;
хпожитсльный контроль к мишени N (ПКО-В) ьюжст вызвать контамннвпию, если с ним обращаться неосторожно. (ЖО-В реаомсндуегся хранить отдельно от всех других реагентов и образцов;
е используйте набор реагектов. если униовка повревшека или пробирка с реактивом протекает (имеется риск ко 1ггамикаиин или снижены пронзаолзггельности. что может привести а не((равш 1ьной оценке результатов);
смешивать разные серии реагентов;
Е использовать набор реагентоа газ истечении срока годностн:
кяе работы обрабатывать поасрхиости 0,5*/< гипохлоритом натрия (отбелнаателем), раэбааленныи дсноннэированной или листиллированиой водой.
Утвлкзацня отходов
Серин (партии, LOT) наборов pearetreot с истекшим сроком годности |срнменению не Еюдлежзт.
^^ЬУничтоженне и утилизацию наборов реагешов следует проводить в соответствии с СанПнН 2,1.3664-21 аСаннприо-знндемно:югкческие требованнл в содержанию территорий городских и сельских поселений, ■ вовиьи
, питьевой воде и питьевому водосмабженню, атмосферному воздуху, почвам, витым помешепиам. зкеплуатвини пронзаоаственньи, обшестаеякьи помещений, оргаинзвции в проасюиио саиитчзно-противоэпидешческн:
^Щяктнческнх) ыеропрнлтнй» и МУ-287-113 «Методические укаэа 1шв по дезннфекини, предстерилнэвиио|ПЮй очистке и стернлнзашш изделий медицинского шаиаченнв»:
• Жидкие компоненты (реагенты, реактивы) уничтовевют разведением водой 1;!00, сливом раствора а канализацию и вывозом остатка упааоюх как пронзаодствеинуй или бытовой мусор;
I • Отходы биоматериала (инфицироаышые и потенциально ш|фиинроаанные отходы) из хлинихо-лиагностчесхих лабораторий, работающих с мнкрооргаиизмааш М групп EiarortMiiocTM. обракш материала оосде
uruToaut (выделение РНК) и отходы после проаедснив амплификации откосвтса к классу Б (эшцкмнчсски опасные отходы);
' Отходы клжсса Б поалевевт обязстельному обезэяряжнинию/обеэвреживанкю. Выбор метода обезэараживання/обсзврсжнвания определаетея возыовпостяыя организации, осупюствяякзще1 иедициксхую дектсльность. ■
■пса при разработке схемы обрашеинх с медицинскими отходами.
Цровсдение исследоваиня
Выделение (зкстракиид) РНК
7 Экстракция РНК из клинического матершиа проводится еворого (I) а соответствии с инструкцией производителя наборе реагентов Лоя экстракции РНК.
апнтов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-lF» ФОРМА 2 совместим с большинством наборов для жстракции РКК или совместной зкетракции Д11К/РПК иаосноае методов освжденив и сорбции tu сжзнжагеле юш магнитны»
L • том числе с нспо:1ьзоаа1Еиен автоматических ствпинй дох выделеши нуклеиновых кислот, обесцечнааюших выделение целосшой РНК без ирнмесеи. иигибцрукиинх р*—i—»' обрвпюй траискришиш и ПЦР в решьнон
10Т-ПЦР-РВ).
н! Набор 11вагентпв kSARS-CoV-2 RNA-DETECnON-lF» ФОРМА 2 не совмести.и с экспресс-методиками выделения РНК.
Экстрахцня РНК из клинического материала проводится ciporo (!) в присутствии внутреннего контрольного обратив (ВКО).
ВКО (входит а состав набора реагентоа «SARS-CoV-2 RNA-DETECTlON-IFa ФОРМА 2)-внутренний коятрояьзкстракпня РНК яз клнзптчесхях образцов. ВКО представляет собой искусственную РНК а белковой оболочке
пкошролем, гарактируюшин, чтозтапы выделеинв РНК из клинических образцов и реакция обрвлюй транскрипции прошли успешно. ВКОдобавдается к каждому оброцу на ттвое accrpumoi и проходит через всю процедур)
if РНК, в еоатветствии с инструкцией проитао.ттвля набора реагентов.
В Каждую поствнивку клинических образцов на этапе зкетракцин должны быть включены отрнш1Тслы<ый (ОКО) и полижятеяьный (ПКО-В) коптролн этвлв выделения РНК;
ОКО (ие предоставляется а составе набора peaieiiioa ФОРМА 2, нрнготоаление см. ниже) - отрицательный котрольный образец выделения РНК. ОКО еостош из воды, свободной от иуклевз или травспортной среды,
вчеяной для взятия обраэпов. ОКО в качестве образца должен проходить через всю проце/^у выделения РНК. в соотвегстани с киструкцней пронзаозятеля набора реагешов для выде-теяяя РНК.
ПКО-В (ахшпп в состав набора реагентоа «SARS-CoV-2 RNA-DBTECTION-IР» ФОРМА 2)
тельный контрольный образец к мишени гена N. ПКО-В представляет собой искусственную РНК а беяковой оболочке, несущую фрагмент гена N вируса SARS-CoV-2. ПКО-В в качестве образца должен проходить через всю
РУ зыделеяия РНК, а соответспрги с икструкпией пронзаодителя набора реагентоа для вылаления РНК
Приготовление о^эцов для этагЕВ аьисления РНК
7 Перед использованием пробирки < ВКО. ПКО-В (иодят в состав ФОРМА 2) мгобтобино лсрг.иешоль на вертексе в Я1еченме мгаолыои секунд затем сбросить каяли враяисосронмьси ценя^ифуеироввнием
Пробирки с ВКО ПКО-В дояжим храниться строго при телтературномрежиме • 2... *t*C. Недоп}хмнмо эаиораживание ВКО и ПКО-В.
готовить о^азцы для этапа аыделення РНК а соответствие с таблицей Ntl;
ка внесением клинических образцов, в каждую (!) пробирку с лизирующим распором добавить: 10 мкл раствора ВКО;
сготоалсинс ОКО. ОКО нс предоспалхепа а состаас набора реагентоа ФОРМА 2:
В пробирку, с лизирующим распором и ВКО добааип:
V М1СЯ воды, свободной от нуиказ (нш транспортной среды, нредназначенной дда азатна образцов), где V - объем клиничеехого образца, рекомендуемый прошводитедем набора для выделения РНК
Промаркировать пробирку ОКО. Пробирка ОКО должна проходил асе стадии аылсленкя РНК в качестве клинического образца.
готоаленне ПКО-В. Пробирка с распором ПКО-В входит а соспв ФОРМА 2:
В пробирку, с лизирующим распором и ВКО лобавнл:
10 мкл раствора ПКО-В (входит в состав ФОРМА 2);
V MK.1 воды, свободной от нукясаз (или транспортной среды, прелиазиаче 1В1Ю Й для взятна образцов), где V - объем клинического образца, рекомендуемый лроизаодктелем набора для аыхаенмя РНК.
■ирхнроаал пробирку ПКО-В. Пробирка ПКО-В должна проходил асе ствдни аыделенна РНК в хвчеспе хлинического образца.
*!| . Пол1'ото1ка образцов д/ia проведения зкстрахшн РНК.
top реагент не содержит хоипокентав и мегериало* животного к (или) человеческого ттроисховеденив
Состав Коммежтарв!
V мкл аизнрузшдего раствора V (объем лизирующего раствора) вноснтса а соответспни с исзюяьзуемым пабором для выделения РНК.
10 шит ВКО Пробирка с ВКО входит а соспв набора ревгаитоа
V мкл ddHjO V (объем ddH]0) соответспусг объему клинического образца, рекомендуемому прокзаоднтелем набора для выделения РНК.
4
V мкл лизирующего раствора V (объем дюирующего раствора) мюснтся я соопетспин с используемым набором для выделения РНК.
10 мел ВКО Пробирав с ВКО входит а соетвв набора реагентов
10 мкл ПКО-В Пробирка с ПКО-В входит в состаа набора реагентов
V мкл ddHjO V (объем ddHiO) соопетспует объему клинического о 6раз1», рекомендуемому произмлзггелем набора для выделеиих РНК.
вчаекне образцы
V мкл люкруюшего раствора V (объем лизирующего раствора) виосится в соопетспин с используемым набором для выделения РНК
10 мкл ВКО Пробирас ВКО аходкта сости наборе реагентоа
V мкл кянннчесхоги образеца V (объем кашичсского образца) апосмтса а соответстяш с исаользуе>аыи набором дня выделеши РНК
it Хранил вьшелешЕые образы РНК а соопстспин с рекомендациаин лроизаодителя набора реагентов ли аыделення РНК. Не рекомендуется проводил более одного цикля заморяживанна-отпнаання образцов и
экстрагированной РНК.
! Перед проведением тестирования не перемешивайте образцм РНК на вортексе, так как это может привести а фрагмеипцни РНК и повышению риска получение ложноотрипательных результатов исследования,
быгетввав квнпонентов ФОРМЫ 2 к проведению исслсдоввнва.
:>КМ этапа зкетракцин РНК их клинических образцов, следует этап полготоаки реашнояной смеси для проведения соямешетюй реакций обратзюй транскрипции и ШЦ* в реальном аремекн (ОТ-ПЦР-РВ).
кс юмпоиекты набора реагентов готовы к приготовлению реакционных смесей и не требуют допазнительногоразвелення. Перед ислользоаанием все компоненты реакционной смеси необходимо встряхнул на вортексе и
аьзи кратеосрочныи цсшрифугированием.
!.1. КомпонсЕгты набора реагетов, необходимые дпх постановки ОТ-ПЦР-РВ:
адаа амплификации лнофилизнронниах (МЕМ);
■ею (D1L);
■взсяьиый кошрольный образец Ш(Р-РВ (К-).
U. Образцы, необходимые Д.ТХ постановки ОТ-ПЦР-РВ:
■ячееже образны (РНК), tiooie этапа выделения РНК;
■шпльный контрольный образец (ОКО) этапа выделения РНК, после этапа аылелснкя РНК;
вактсльныи контроль к мишени гена N (IIKO-B), после этапа выделения РНК.
--- стр. 4 ---
Првгопшкии* рсжциоиив* см«ен дла провмания реакпнн ОТ-ПЦР-РВ.
II 3.1. Пробирки с WMiioiieirniMM набора pcartirroi (DiKient, ПКО-В, К-) перемешать на topreacc, сбросить киши крапсосрочним иешрнфугироаааиеы
ажлой поааноакн ОТ-1ЩР-РВ необхолино включение трех контрольных реаший:
ОКО - отрнцислышй контроль ттвна аыдслених РПК;
ПКО-В • положительный ко1проль к мишени гена N;
К-офниателы 1ый хон [роль паш ГТЦР-РВ.
11.3.2. Планшет МЕМ солержкт полностью готоаую смесь длл аыплифнкаш 1и.
Приготовить необходимое количество стрнпов МЕМ н) расчета одна пробирка на одш) исследуемый обрами РИК и три пробирки дда контрольных обрашов (ОКО. К-, ПКО-В). Обремц схемы внсссшм образцов
планшет (дла 21 обратна) представлен на рисунке 1а. длв анесенна обратцоа встрилпироваиные пробирки (дла S образцов) предстилен на рисунке 16.
П.3.3.
2 3 4 S 6 7
ОКО Образец )М Образец М14
к- (ddH>0) ОбреэеиМт? ОбразецЗЫб
пко-е Образец №8 Образец Ха1б
Образец К«1 Образец М(« Образец Nil7
Образец 3U Образец ЗЙ10 Образец М18
ОбрезецШ Образец МИ ОбразецМ19
Образец Х>4 Образец Ml 2 Образец М20
Образец Nei Образец Ni 13 Образец М21
5 б 8
0 К- (66Н]0) ПКО-В Образец №1 Образец М2 Образец М3 Образец Х|4 Образец MS
13 4. Вкаялуд мнимнюобнаку k.'ih лутду планшета внести 15 им Hwnoeim IDIL. входит в состав ФОРМА 21
13.S. Внесенме исследуемых обратцоа
Обвазеи Обьен (нкл) Опнгвна*
UKU 10 Коиззюлъный обвазеи ОКО. после зтапа вмаелвинв РНК
ПКО-В 10 КошрольныВ обвазеи ПКО-В (ген №. после чтапа вьикленвв РНК
К- 10 ddH20. вхоант в состав набооа всагектоа
РНК
боазецМ) 10 Клинические образцы (налосадочнав жидкость соитаетстауюиюго
клинического oemual. поошелшие этап амлеленил РНК
■и/ ПКО-В содержит uctnxcmoeuHym кДНК. несущую фрагмент гена N. Неосторожное обращение с ПКО-В .можсл! <ы1мть контаминацию. При еиесеныи ПКО-В соблюдайте стандартные .меры но предотерацени
ипжш контанинаиии обращое. Храните ПКО-В отдельно от есех других реагентое и обрагцое.
36 После анесеннв образцов заклейте прозрачной пленкой ПЦР планшет или стрипы. Убедитесь, что асе лунки шютио npwieiator к пленке. Кратко центрифугируйте (в течение 3-S секунд) пробирки или ПНР 1шаншет н
цеитрнфуге перед носганоакой я амплификатор.
Ировадение ОТ-1ЩР-РВ
41. Перенести пробирки или планшет в амплификатор планшетиого типа с детекцией результатов «а режиме реального времени» н провести амплификацию по следующей лрограмые:
Тенаемгтм Ввеиа Кванчветае шакява
55*С 10 мин
94*С 3 мин
94*С 10 сек 558*С 20 сек
94*С Юсех 4058*С 20 сек (детеканв сигнала ле каналам FAM. НЕХ1
le'Перед юпускам програчмы амплификации убедшпесь. что для всех испольгуеных пробирок или лунок планшета заданы еерные каналы детеюрш сигнала FAM/GJI£EN. HEXW}E/R6G/Ydlo<WCy3.
краем 3iuie приераммы ($3*0) проходит рсахииа обратной трш 1скрщишн (ОТ), в холе которой lu ыатрнцс РНК пронсходкт синтез комплементарной ДНК (кДНК). Далее ироходлреакшш ПЦР в реальном BpeucuH (ПЦР-РВ) ■
4J циклов, пронсхошгг амплифихацна специфического участка кДНК вируса SARS-CoV-2 н мишени внутреннего хоктродьного образца ВК04за2, с одновременное фяуоресиеитжй) детеазтней (фодугтов.
Обсчет и интериретацва результатов
продуктов амплификацни «в режиме реального времени» осущесплаетса прибором автомвтнческя а каждом цикле амплификации. На осиокаики этих данных программное обеспечение амплнфикатора строит кркеьи
■на флуоресцеткого сигнала по каждому из заданных каналов. После охончакна амплификацни программное обеспечение прибора рассчитает циклы пересеченна кривых нахоплеииа флуоресцектного сигнала с автоиатическт
:аной пороговой лкиней (Cl). В случае неправильного автоивтичвекого виетавяенна пороговой пинии, рекомеидуетсв аылоянить это дейстане аручяую Пороговав лтпв должна нвходитъса в диапазоне, где фяуоресцектньк
оложите.чьньа образцов параллельны друг другу (ишапа ф-туоресценцин должна отобраитьса в момент вналюа в логарифмическом формате). Отсутствие значених длв образца (значеяз 1е N/A) омачает, что пересеченна кривой
флуоресцеитиого сигнала е пороговой .чинней не иаступило.
Л FAM/GRCEN HEX/JOE/R6G/YaUo*/Cy3
пл 1'сц N (специфичный див SAKS-CoV-2) Внутренний контрольный образец (мишень ВКО)
Интерпретвмв ретультатва.
I И|п«|>пр«тащ»а результатов нсследоавнив проводите» а coataeiuanH с таблкпей ЗЙЗ:
О FAM (геи
N)
Cl HEX (нлтепь
ma2)
Результат
[О
. ♦(СеЗТ) Pbbbhhk В В В Ш Д Ж T f ЛВ. гевткнввквмк жтеттетитет
♦(СиЗТ) Пвебв коитвмнвппааш. Твебчстса оовтоо погтвнпвга norm- imHaaTNi ш т 1п»гтвмнна1ппниых мсв. Нсобшагмо лпагавмть оостаиовку с чтала выаглжнв РНК
1_____ ■ (Cl>37) PcMoaiB м пвошлв. Навузвея тгвп выаеяемхв РНК квн возмпвшл наличие нигибитлоон в обввзие. Твсбустсв шювести повтооиое вывелавне баомвтсмила
Н|0)
. . Рвакинв ввоила тежвш—■ асвгтамваааив вт«зтс|»тгг
♦ (С|<37) -^4 Проба коитамниироавпа. Возможш коитвьсинаинл коьспонектоа наб(ф1 режгеитоа. Необходимо поггорить постановку с зтапа лркготоалсииа рсахинонньп смесей.♦ 4СК371
УМ
♦(СТ<37) ♦(Cl<37) Ревгаиа пвошлв усоешло
.(Ci>57) *(Ct<37) Ревкина нсшюшяа. Твсбустсв певестамовка с зтаиаОТ-Н11Н-РН. Убелнтссь. vni а 1>еахин01шую смесь внесены пвввкды1ыесоолн>шенив всея компонентов иабовввеагентов.
.(Cl>37) •(Cl>37) РсАкшм не просшо. Требустси перестакоеке с этапа эегтракцнн РНК Убедитесь, чтд а рсашнонную смеса анесемы прааиламыс СФмтюоети асех хомпонентоа набора
матггоа.
♦(0£37) */- Облалтжелв РЕК SAl(5-CeV.2
ты
.(СЗ>37) ♦ (CIS37) Нс обвалуквяв РЕК SARS-CaV.2
•(Ct>J7) •(Cl>37) Реаккив не прошла. Нврушен этап выделенив РНК или возновшо нвпнчне нигибкторов в образце- Требустса провостн повторное вь|делеине или взлзм бноиатсрнвзв
(вапюднаетсв послелоавтельноУ
Еажтрыь качества вроаеденва нсследованай
Cl РАМ Cl HEX
(галРО (илшеяь ВКО)
+ (Cl<37)
R.O) -
1 -(С1<37) 4(Cl<J7)
ршьи образцы отрлцаттльлыс •(Cl>37) ♦(Cl<37)
цмыс образцы цоложитсльные -(Cl<37) + /•
«аав1 крав гнав н трвнеаертнревка
«швнв арвмявв.
Набор peereirroa «SARS'CoV>2 RNA-DETECTION-IF» должен хрантьса при температурном режз^мс »2...+8*С а зашицкином от света месте, в течение всего срока годности. Срок годности набора рсагсктов — 12
иескцев.
Срок хрвиениа реагекта МЕМ после удалезша гернетзезвруюшей пленки составлвет 24 часа.
1 Набор реагеятоа е истекшим сроком годности ттрямеиенню не тюдвежит. Срок гщиоети н услоеяв хреиеннв аскритых реагентое соответствуют сроку годности н усповалы храяеяил, уваипиым нв утиквтках д.чв
невскрытых pcaraiTOB.
1^аввертирееаеве
II Допускаетсл тршкпортирокка набор* реагентов при температуре -'2^8 *С. Не замораживать.
2 Изделил. транспортированные е нарушением температурного режнзаа, нрнмененню нс юдлежвт.
маачн раклвмвяай
на слсцн^ческне н физические свойства наб|фа реагентов квлрквлвть в адрес предлрилтил-нзтотоаитеял Общество с ограниченной ответственностью
Центр Иннонииюнных Биотелкологнй» (ООО «Лллйь»), I234S8, РФ, г. Москва, ул. Тварловского, дом 8,1юмешение V, ком кт 8 Тел. *T(49S)780-92-96, Ixbiaallel.iech.
--- стр. 7 ---
/Аллель
bteten^ionM УТВЕРЖДАЮ
КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в
режиме реального времени с обратной транскрипцией «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2 по ТУ 21.20.23-002-83076696-2020.
Вариант исполнения:
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECT10N-1F» ФОРМА 1
Производитель:
Общество с 01'раниченной ответственностью
«Аллель Центр Инновационных Биотехнологий»
(Редакция 2)
--- стр. 8 ---
Аллель
Центр Инновационных
Биотехнологий
КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
шм ианмс110М1ше
tDUUtniioe К1Имемо«Ш)1с
wxifT ис1те>лн«ни«
ш10Ж1[иЯ номер
01 годности набора
RMT01
»«и« хранениа
Набор раагеитов для выавлеиня РНК коронявирусв SARS-CoV-2 метолом полмиератной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипивей
«SARS-CoV.2 RNA-OETECTION-JF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 по ТУ 21.20.23-(Ю2-«307бб9б-2020
Общап юрагтевнепнеа набора BoareirroB
I обнаруже
тюстичесхие
ршсрнсткки
прольные образны
шее арена мроведенна
ипа
taa проасденк)! анализа
аеи биологического
1тряала дда анализа (РЮО
пчестао определений
tS IKiiKocTv комаонентов
реагентов к
'лиоашию
апуатаииоипаа
|уцентациа
icpoipaMMbi ам[шифнкаини даа прибора Rcel-iime CFX96 Touch (BIO-RAD)
Натначецие
йбор peaieiiTOB ши аыавлепна РНКкоропааируса SARS-CuV-2 ногодом полимеразиий ueiuiufl рсакинн в режиме реального apcMCiw с обратной транскрипцией kSARS^ oV-2 RNA-DETECnON-lFa ФОРМА 1 и ФОРМА 2 —эт
шшнный тест на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ), лредназкаченкый л и качественного определенна нухденноаьа кислот (РНК) вируса SARS-CoV-2
1ческик пробах пацнеета, таких как мазки из носоглотки, ротоглотки (горла), а также смешанные образцы, полученные ИЗ ыазков яз носоглотки н ротоглотки от пни с подозремаен на ипфезоиио COVID-19. Использование набор
iru «SARS-CoV-2 RNA-DETECTTION-IF» ФОРМА I и ФОРМА2 рскомсндуотса дла in vhro днагностики и проведенназлндекиологичесхкх исследований.
Зуккциональкое назначение: Прамой метод зтиологической диагностики.
Набор реагентов ши вьивлепия РНК коронавируса SARS-CoV-2 метолом поз 1имеразцоЙ цешюй реакции в режиме
реального времени о обратной TpaucKpHmuieH«SARS-CoV-2RNA-DETECT10N-lF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 по ТУ
21.20.23-002-83076696-2020
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DElbCI'lON-lF»
Нвбор реагентов .(SARS-CoV-2 RNA-0ETECT1ON-IF» ФОРМА 1
AL-RT-6
12 мсевцев мри соблюдении режима хранения
Храмеиие при температурном режиме ■г2...->-8°С
Качестяе1тый
Лнагмоетнчесхи чувствительность -100% (99,98 % - 100% с доверительной вероятностью 93%)
Лнагиостическаа специфичность - 100% (99.98 % -100 % с доверительной вероатностью 95%)
Предел обнаруженив -1000 копий нуклеиновой кислоты (РНК) коронавируса SARS-CoV-2 на I мл о^еца
Инклюзнвность не менее 99% _________________________
Внутренний контроль выделенил РНК н реакции обратной транскрипцнн.
Положительный контроль к мишени гена N;
Отрицательный контрольный образец ПЦР-РВ_______________________
Не более 76 минут* (без учета времени зкстракции РНК)
Одностадийный
Набор рассчитви ив 96 определений, включав коитролн
Готов к прнмененшо. Компоненты набора реагентов не требуют дцццш 1итсз1ьно1Ч] разведеккя.
Жидкие компоненты iu 6opa peareirroa, расфасованные в пробирки с завипчкваюшейсл крышкой: шшпиет lu 96 лунок или
стрилпированные пробирки 12x8 лунок и пленка дла заклеивания лланшетв, вложенные а картонную коробку с
ложеме1гтом. ________________
Краткая инструкциа но нрнменснию. Полнаа инсгрукцня доступна на сайте нронзволитсла.
Принцип метода
Обиаруженне вируса SARS-CoV-2 с помощью набора peareirroi uSARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF* счет зкстракции нувленноаых кислот (РНК) п клинических образное верхних дыхательных путей с последующе
пикксяой ПЦР1 режиме реального времени, совыепкнной с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ), с использованием ПЦР амплификаторов с детекцией флуоресцеигоого сигнала на каналах FAM и HEX. Гябрилизашюннс
кдагтпш детекция позволлет проводить pemcrpairara продуктов амплификации в процессе прохождения реавцня («ев режиме реального времен!»). Слеаифнческой мишенью в реакции ТП1Р-РВ квлаетсв гея N, спецяфичвыб дл
SARS-CoV-2.
Флуоресце1тив детекция специфических мишепей проводится в реакционном растворе. Олигонукдеотидиый зонд, несущий флуоресцекгаую метку, специфически гн 6рнд|вуетс< е детеструемун участком к ДНК. В ход
giotuero парвщивапка цели ДНК ферментом Д11К-полимеразой, происходит разрушение зонда и высаобождшше флуоресцентной метки в рветвор, что делает возможный еб регистрацию на флуоресцеитиоы детекторе. i
ювапием специалыю моаобраццых настроек ам1шификатора, анализнруюшал программа автоматически рассчитывает ци|щы пересеченна кривых цахопленна флуоресоеитяого ситалв с пороговой лиюкй - порогмый цикл (Cl
le Ct обратно [фопорииопвльмо ко1ще1гтрацни к ДШ в образце.
Кроме мишени к гену вируса, набор реажнтоа «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-lFocoiiepaurr набор праймеров и зонд, оредназначеиный д и обнарувсеннл мишени вкутренкего контрола зкетрвкини (ВКО-шв2). Этот нипрш
шии мредстилает соб<зйфрагме1ст РНК в белковой оболочке, не человеческого ироисхождениа. Внутренний коитро-зь ВКО-пи2добав.заетсаховсем клиническим образцам д и контрой цроведешизталов экстракции ауклеявовы
(Р11К), обратной транскрипции, а также ингибированна реакции. В состав набора реагентов также входит положительный контроль к мишенн N (ПКО-ВХ который позволяет пользоавтелю оценить, насколько успешно прошл
|гы анализ!, к отрицательный контрольный образец ШДР-РВ (К-).
Анализируемые образцы
Ди проведепиа нсследованиа с использоввцием набора реагезгтов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» допустимо использование образцов/биологических проб пациента, таких как мазки аз носоглотки, ротоглотки (гори),
снешапиыс образцы, лолуче1Шые из мазков из носоглотки и ротоглотки.
Количест во peai eiiioo, необходимое дли ироведения нсследованиа
[одну реакцию ОТ-ПЦР расходустса 14 икл Maalcrmlx (ММ) и 1 мкл Enzyme mix (EM).
шму реакцию ОТ-ПЦР необходимо добавлать 10 мкл образца (выделенной из образцов пациентов РНК).
Иолютовка анализируемых образцов для исследования
Сбор и хранение клянкчоскнх образцов
Взатне, хранение и транспортирование вналиэируеиых образцов осушествлать согласно МУ 1.3. 2569-09 «Оргвинзацна работы лабораторий, иссюльзуюиии методы амплификации нуклвиноаых кислот при работе с материало!
ашнм микроорганизмы I-1V групп 1|атигеш10сти» и «Временным мегодическнм рскомепдашим по лабораторной днагпостике нового коронавируса 2019 (2019-nCoV) методом 1юлинервзной цепной реакции (1ЩР):
ленными Главным госулартпенным врачом Российской Федерации.
Длв взятия, хранение и трвнепортироаки образцов до проведение нсследованиа, рекомендуется в ка>1естве транспиртной среды нслольэоввтьстерильный физиологический раствор или специализированные транспорта,
среды с комсерваитом. совместимые с исследованиями методом ПЦР, а также зонды (тампоны). Рекомендуемые надели: «Зонд медицинский ошюраэовый стернлышй по ТУ 32.50.13-002-28731857-2020», РУ №РЗ
2021/13989 от 26,11,2021г„ Снетеив транспорттиа со средой дла вирусов по ТУ 32.50.50-027-17547866-2020, РУ Хз РЗН 2020/9961 от02.04.2020г,
Д;и взятти, храаенна и трансцоргироахи образцов используйте ко 1ггейнеры с маркировкой «DNaac/RNaae Dec».
После B3XTU, образцы необходимо хранить в холодильнике при температурном режиме Ч ’2,..+8 °С в течение короткого периола (не более 72 часов), при температуре -20°С • не более 4 месяцев: при температуре пиа«
20’С - в течение более шштелыюго времени (до 36 месяцев):
Пс рскомсндустсвзвмцраживаннс/оттаивакие образцов более одного раза перед проведением тветнровакна.
Состав набора peti'CHioB
iwcionuM компоиепта а
k p t peai'CRTOB
Объем в наборе
peaivHTOB (на
96 тесто»), икл
КоЛ'БОе
Ш Т . Описание
Umnix (ММ) 15(»(14нкд на
I ПНР оеакиию)
Прозрвчни асидкость бледно-розового цвета в пробирке 2,0 мл с синей крышкой
Л|ветовой маокноовхой
нули mix (ЕМ) 105 (1 мкл нв 1
П11Р оеакиию)
Прозрвчни бесцветная жидкость в пробирке 0,5 мл с желтый крышкоЯ'цветовой
ивокноовкой
|)тренний коктрольный образец
Клення н обратной
шспкшшм (ВК01
1150 (Юмкл ИЯ
1 реакцию
■ылелвпиа РНК)
Прозрвчни бесцветная жидкость в пробирке 2,0 мл с оранжевой
крышкой/цветовой маркировкой
•саательный ко1гтроль к
вена гема N ШКО-В)
290 (10 мкл на I
обоахи ПКО-В)
I (розрачки бесцветивя жидкость в пробирке 0,5 мл с красной крЫШКОЙ/цветовой
малкнповкой
раштеаьный контрольный
teeiillllF-PB ГК-1
1150(10 мкл на
1 ПИР оеакмню)
Прозрвчни бесцветки жидхоеть в пробирке 2,0 мл с прозрачной крышкон/белой
цветовой маокноовкой
ано1ет'стркппнроваммые
•бирки лля мроаслемия ОТ-
V-8B реакции IU 96
ю012а1 луиоа
Планшет/пробирки для прыведемия реакции ОТ-ПЦР-РВ
шчесшпаанка 2 Отгтически пленка д и заклеивали ПЦР планшета/стршюв
KipynM по |фкмеиеш1ю 1
Кратки инструкци по прнмекешпо набора реагентов SARS-CoV-2 RNA-
DETECTtON-l F ФОРМА 1
3 реагентов не содерапгт кокпонситов и материа.тоа аппотпого и (или) человеческого происхождения
--- стр. 9 ---
Hi6op peireiin>»<(SARS-CoV-2RNA-DifrtCTION-IFe рксчтан на 96 оиределвний, акточая контрольные обрашы. ФОРМА 1 uojtxojurrjvu проаеления исследоааннй с нсполыоваинеи ручных нетоонк, а также uuimpotai
бых открытых аолуавюиатичесанх и аатоыатмчесхнх станцнЯ длх дотнрованна аоишостей.
Пеобхошмое лооолнатслыме оборуаоваине, ие аходашее а состжа набора реагентоа
Првборы:
ПЦР-бокс с УФ-ланпой;
Амплнфшаттф нуклснноаых кислот термошилнчсскнн oaatuuenioro типа с детеаиией скгиала (по каналам FAM/GREEN, HEX'JOE/R6G/YelIow/Cy3) а режиме реального ареиеин;
Кастояьнаа пентрнфуга на 12000 об>'мин (дла этапа выделенна РНК);
Цеитрнфуп пша «Вортексм на IS00 — 3000 об/мин;
Лоааторы переменного объема со сменными наконечниками, оазаа-иющие отбирать объемы ашдхости 0,3-10 мкл; S-S0 мкл; 20-200 нка;
Холодилышк меаниннскнй, подаерашааюшнй температурный реаош от+2...-fS*C;
Расюдньи материалы:
Одноразовые наконечники с фильтром (аэромлькым бфьером) на 0,3-10 ыкл; 5-30 мхя. 20-200 мхл;
Одноразовые полипропиленовые оробнркн амеслшостыо 1,3ыл нли 2.0 мл дла прнготоаленна аматификационпой сыесн;
Одноразовые среостаа защиты • медишшскал ишючка одиоразоваа, иеднцннскаа зашилша маска (класс N93 нлн FFP3), рабочаа форма, медяциискаа зашитмаа форма одноразоаи. одноразовые латексные перчатки, защитиьи
Набор реагентоа дла вьиааеннв РНК:
Набор реагентов дла выделенна РНК из клинических о^фазцоа. Набор реагентоа «SARS-COV-2 RNA-DBTfiCTION-IF совместим с большинством наборов дла зкстрашни РНК или совместной зкстракщшДНК/РНК наоснов!
методов осажаенна и сорбции на снлнхагвяв нлн магнитных часттщах, обеспечнвахханх аылелеШ1е целостной РНК без примесей, ингибирующих реакпию обратной транскрипцин и ПЦР а реалыюм вреыеяи (ОТ-ПЦР-РВ).
Внимвии*! 1Ьборреаггппо4 •SARS-COt'-I HNA-DETECTION-IF не совместим с мспресс-методиыми еыдевети РНК.
Предупреаиения н реконеядацин при работа с набором реагситов
Реконендацнв при работе с набором реагентов
Прнмснкть набор peaieiiroa строго по иазмаченню, согласно данной нвструпши;
При улалекнн пробирок, солсржашнх продукты ПЦР, недопустимо их открывание и разбрьпгиаанис содератиого, поскольку это момкт привести к контамннашн продуктами ПЦР яаборат^юй зоны, оборудован» i
реагситов;
Всегда использожать защитные перчатки, профессиональную одехеду, защитные очки и т. а. При работе с образцами н реагентами дле проаеденик ясследаааннй следить за тем, чтобы реагенты ие попали на кожу, а rnuiB, ш
слизистые. При контакте с ними немеале1пю проыьпъ большим холлчеством воды. Необходимо тштелыю ныть руки после работы с образцами и реагентами;
При переносе клинического материала из пробирок, флаконов а новые использовать только отдельные одноразовые стернлыше наколечтшкн с а:^юзольвымм л«рь.угун:
Использовать расхолтьк зитеркалы (пластзпоаые пробирки м наконечники) толькос маркировкой «DNase, RNase-fice»;
Предотцгашать возножнуто коитаммнанню реагентов, следуа стандартным тфооезурам аключах, кснользоааине средств ннднаидуальиой зашиты и разобщение зон обработки образцов, зкстракинн нуклеиновых кислот и зонь
постановки ПЦР-РВ;
Полохеитепьный контроль к миюстси N (ПКО-В) может вызвать контаминацию, если с ним обрашатьса нсостороапю. ПКО-В рекомендуетса хранить отдельно от всех других реагентов и образцов.
Не мстюльзуйтс набор реагентоа. если уамкоака |юарежаена шш оробира с реактивом протекает (нмсстса риск конпминаинн или С1шжеииа произаодктелыюстн. что может привести к ненринлыюй оцешее результатов).
Не смешивать разные серин реагентоа;
Не яснользоаать набор p careiT T o a тю истечении срока годности;
После работы обрабатывать поаерхиостм O.S^i гипохлоритом натрна (отбепнвателем), разбавленным деионизированной нлн листиллкровакной водой.
>'т>Л11аова отходов
Серии (партии, LOT) наборов реагентоа с истекшим сроком годности применению не подлежат.
пшчтаженис и уттинзацию наборов реагентов следует ороаоднть в соотасгсгвии с СанПиН 2.1.66M-2I «Саннтарно-зпндемиолотическне требоааниа к содержанию территорий городских н сельских поселений, к аодныз
L. питьевой роде к питьевому аодоснабжеиню, атыосфернону воздуху, почвам, хенлым помещешин. зкеплуатации проюаолствеиных, обшестаенных помещений, оршшзаиик н проведению саншврио-протнаозтшдемнческш
■шичсскнх) иеронрштий» и МУ-2Й7-| 1} «Методичеехме ухазанм по двэинфскции. предетерилизацнонной очистке и стернлнзацмн изделий медицинского назначеник»;
Жидкие компоненты (реагенты, рсектнаы) уничтожают разведением водой 1:100, сливом раствора в канализацию н вывозом остатка упаковок как производственный или бытовой мусор;
Отходы бноматерналв (ннфшифоааипые и потенциально инфниироааниыс отходы) из кашщко-диагностзгчесхих лабораторий, работающих с мнкроорганнзмвни 1-4 групп uaiorcwiocTii, образцы материала посл<
1TOTOBKH (аыделеяяе PHIQ и отходи после проаедеинк амплнфнкацнн етиосктса х классу Б (эпидемически опасные отходы);
Отходы класса Б подлеащт обазательному обстзаражнааншо/обезарежиаанию. Выбор метода обеззц|аживания/обезврежиаани 1 опредеяаетса аозможноспмя органюацви, осушествлаюшей неттицинскую леетеяьность, >
а при ра^ботке схемы обрашепиа с медиштскинн озходамн.
Ороаеденне асслеаоааваа
}ипелеиве (зклракша) РНК
н.' Экстракция РНК из клинического материагв яроаодится сягрегв (!) « соотяетствии с uMcm/iyiaiuai лргшмо^шнета набора реагентоа Оля зкетраюрш РНК
кагеитоа «SARS-COV-2 RNA-DETbCTION-lF» ФОРМА I соамеспш с большинством наборов дла экстракции РНК млн соамесгаои зкетратишн ДШС/РИК на основе мстодоа осатдеинт и сорбции ш снлнкагедс нлн ыагштгьи
, ь том числе с использованием аатоматнчсскнх ствипнй дла аыделениа нукленноаых кислот, обеспечиааюшнх выделение целостзюн РНК бо примесей, ингибирующих реашю обратной траискритши и ПЦР в рсальноь
ИОТ-ПЦР-РЭ).
и/ Набор реагентов eSARS-COP-J KNA-DETECTJON-IFt ФОРМА I не соамееишм с 31«нресс-меяюдшаи1и выделения РНК.
1. Экстракция РНК КЗ клинического материала проаодитса строго (!)■ присутствии внутренкего коктрольного образца (ВКО),
• ВКО (входит а состав набора реагентов «SARS-COV-2 RNA-DETECmON-l F» ФОРМА 1)-анутреяинй котпро-ть экстракции РНК из хлтппескнх образцов. ВКО предствжлает собой искусственную РНК в белкоао!
оболочке. Он служит контролем, гарантирующим, что этапы аылеленм РНК из клшшческ» образцов н реакпяа обратной транскрипикн проишн успешно. ВКО добаалаетса к каждому образцу па этапе экстракции >
проходит через ксю процедуру аыделепме РНК. а соответствии с ннструетгней лроиэаоднтела набора реагентоа.
2. В кахшую постановку кгшнических образцов на этапе экстракции должны быть включены отрнцательный (ОКО) и иаюжнтельний (ПКО-В) котпрогш этапа аыделекш РНК;
я ОКО (не предостаалзетсх в составе набора реагентов uSAKS-COV-2 RNA-DUTECT(ON-lF» ФОРМА 1.прнготоалсмнссы. ниже)-отрицательный коитрольпый образец выделен» РНК. ОКО состоит из воды, свободно!
от ггуклеаз или тракспортпой среды, предкаэпачегтой дла взят» обраэпоа. ОКО а качестве образца доласеп проходить через всю процедуру выделен» РНК, а соответствии с инструкцией проюаоднтела наборг
реагентоа дла аьшеленш РНК.
• ПКО.В(входитасостаанаборарсагенто8«8ЛК5-СО\'-21и^А-ОЕТ1:СПОК.|р» ФОРМА 1)
ттожительпый хошрольный образец к нншегш гена N. ПКО-В представлает собой искусственную РНК в белковой оболочке, несущую фрашегп гена N вируса SARS-COV-2. ПКО -8 а качестве о^таэца доджем проходить черт
вею процедуру выделен» РНК, а соответствии с инструкцией пронзводитела набора реагентов для аыделеггия РНК.
I} Приготовление образцов для этапа вылелешгя РНК
и.' Перед исполизованием пробирки с ВКО и ПКО~В /входят в состав ФОРМА I) необходича перемешать на вортексе в течение нескольких секунд, затем сбросить капли з^аткосрочньш ценпцзифугироваиием.
м! Пробирки с ВКО и ПКО-В дилжны храниться строго при темперитурним режиме г2... ^В’С. Недопустимо заморажившше ВКО и ПКО-В.
яготоаить образцы для этапа выделен» РНК а соответствие с таблицей №1;
рсл внесением хлинггчесхнх образцов, в каждую (!) пробирку с лизирующим раствором добавить: 10 иг<л раствора ВКО;
^В'тотов.тениеОКО. ОКО нс предоставляется в составе ФОРМА 1:
Q пробирку с лизирующим раствором и ВКО добавить;
V мкл аоды, свободной от нукяеаз (или транспортной среды, прелиатначенкой лги) взят» образцов), где V - объем клинического образца, рекомендуемый нроизволителем набора для выделен» РНК.
Промаркировать пробирку ОКО. Пробирка ОКО должна проходить всо сталии выделения РНК а качестве клнтгческого образги.
хготоалепие ПКО-В. Пробирка с раствором ПКО-3 входит а состав ФОРМА 1:
В ггробирку с лизирующим раствором и ВКО добавгтть;
I о мкл раствора ПКО-В (ахоант а состав ФОРМА I);
V мкл волы, свободной от нухлеаэ (или транспортной среды, прелназкаченной длл взчгня образцов), где V - объем клинического образца, рекомендуемый производителем набора л » аылеленш РНК.
«роаать пробирку ПКО-В. Пробирка ПКО-В должна лроходнтъ асе сталии аыделен» РНК а качестве клинического образца.
Nil Полгитаака образцов для провеления эхетрахцин РНК
Состав Коиметггарнй
ю
V мкл лизирующего раствора V (объем лизирующего раствора) вггосится в соответствии с используемым ггабором дла аыделен» РНК.
10 мхл ВКО Пробирка с ВКО входит а состав набора реагентов
V ыкл ddKiO V (объем ddHjO) соответствует объему клинического образца, рекомендуемому нрогпаоднтелем набора для выделен» РНК.
Еб-В
V мкл лизирующего раствора V (объем гптзирующего раствора) вносится а состаетстаии с нспольтуемым набором д 11я выгюпения РНК.
10 мкл ВКО Пробирка с ВКО входит в состав набора реагегстоа
10 мкл ПКО-В Пробирка с ПКО-В входит а состав набора реагешов
V икд ddHrO V (объем ddHjO) соотастотвуст объему гшшнческого образца, рекомендуемому прокзвогштелем набора для выделен» РНК.
вняческие обрашы
V мкл лизирующего раствора V (объем лизкрующего раствора) вносится в соответхпвни с используемым набором для выделен» РНК
10 мкл ВКО Пробирка с ВКО входит в состав набора реагентоа
V мкл клинического образеца V (объем клшшческого образца) вкосится в соотвстствин с используемым набором для яызслснм РНК
IХранить выделенттые образы РНК в соеггвеплаин с рекомвщациями проюводнгел» набора реагентов лги вьщелеяня РНК. Не ретюменлуетса проводить более одного цикла эамораживаига-оттаивания обраяюв и iitcipanrpoaaHrrofl РНК.
IS Перед приведением тсотнровагшя не перемешивайте образцы РНК на вортексе, так какого может пршссти хфрагниггтвиин РНК и ловышениго риска получен» ложноотрицательных результатов исследован».
Полтотовка кимпонеитоа ФОРМА I к проведеииго нсследоааяиа.
После этапа экстракции РНК из клинических обркщоа следует этап подготовки реакционной смеси для проведения совмегиенной реакций обратной транскрипции и П1(Р а реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).
Вес компоненты набора реагентов готовы к приготовлению реакционных смесей и ие требуют дополнитеггьного разведения. Перед нспольэоааннем все компоненты реакционной смеси необходимо встряхнуть на вортексе и
тилли краткосрочным цеггсрифугироааиием.
121 Комггоменты ггабора pcarcirroa, необходимые для постановки ОТ-П11Р-РВ:
1ЛТП П1Х (ММ);
В]тгк 1ЛГХ (ЕМ);
|р||щтелы1ый контрольный образец ПЦР-РВ (К-).
121 Образцы, необходимые для ггостаноаки ОТ-ПЦР-РВ:
■ашеские образцы (РНК), после этапа выделения РНК;
|рви1тельный контрольный образец (ОКО) этапа выделен» РНК, после этапа выделен» РНК;
кпктельньгй контроль к мишени гена N (ПКО-В). после этапа выделен» РНК.
3
--- стр. 10 ---
Праг*тм4«шм рм кпю ивой <мкя яяй арокыспяа рмкпая ОТ-ПЦР-РВ.
< j.l. Пробирка с КОМЛОИС1Л1МИ Hi6opt рекгектоя (Master mix. Eozyroe mix. TIKO-B. K-) исрсмсиипь ш аортексс. сброопь капли кратхосролным иеитрифупфоаанием.
Ш Г'ПЦР'РВ необходимо »к.-|ючсине tpex контрольных реашкй:
Я контроль ш ла аьикяеиик Р1 (К;
гый контроль к мишени гена N;
•втроль пала ПЦР*РВ.
гь я иронаркяровать оморамаую полнироииденоаую пробирку типа «Эпоендорф» аисстнмостью 1.S ыд или 2.0 мл дда прнготовасши аатлификаиноиион смеси.
В1цупяштма»1 шимм
Реагент
Майепшх
Едхуите пик
aeaieHTu Masiennix. Enrvme mix a следующей пкопорими <иа I п«ак 11и.оУ
Объем, шел
14
т! /’елаит^уется яриготогипи. ашиифшсаииошпео смесь Ла образца*, где
lecmto кзшпчесяш образца*:
тшз1раж*пш образца ((ЖО. ПКО-В. К-). аюдзззцие к зюззедую посзззааопеу ОТ-Ш^-РВ:
\дояо*иымещчлм реакция, дяя учета аозможной неточноепш дозираеания.
.13 Приготоаять мнхропробнркн объемом 0.2 ня иля использовать ПЦР планшет или стрнппнроаанные пробирки, акямибиние а ФОРМУ I. ю расиста одна пробирка на оамн исследуемый обраки РНК и три пробирки дд
контрольных образно! (ОКО. К-, ПКО-В). Обратен схемы анесенна обратноа а планшет (цла 21 обратна) представлен нарнсунке 1а, дла анесеннл обрашоа а стриппнроаанные пробирки (дна S о^азцоа) предстаапея в
рисунке 16.
1 2 ) 4 S б 7
око Образен Мб Обрааец2*14
к- (МНЮ) Обрвзен 2*7 Образец 2*15
IIXO-B Образец 2*8 Обрвзсц2*16
ОбрахиМ! Образец 2*9 Обрвзен 2*17
ОбрвэецШ Образец 2*10 0^«зец2*18
Образец >Ф} Образец 2*11 Образен 2*19
Образец 2*4 Образец 2* 12 Образец №20
Образец 1*5 Образец 2*11 06p«teu 2621
1 2 J 4 S 6 7 8
1 K-(ddH,0) ПКО-В Образец 2*1 Образец 2*2 Образец 2*3 Образец 2*4 Образец 2*5
В каждую ыико01|робн1>1гу или лунку планн1ета анесгн 15 мкя поиготоаленной амплифтгиимином смеси (и 10 3 2 I
Внесение исследуемых образцов
Мазеп Объем (мкл) Опнсаяве
ОКО 10 Контоольный обпазец ОКО. после этапа выделении РНК
1КО-В 10 Контрольный образец ПКО-В (ген N). после этапа аыделенма РНК
Ш
10 ddH’O. входят в состав набора
■ РНК
iujeu Х:1 10 Клинические образцы (иаяосадочная жндкосп соотаетствуюшего
клинического образна!, протелшие этап аыделения РНК
иг.' IIKO-B содерзкит искусстееиную кДНК, несущую фрагмент гена N. Неосторожное обращение с ПКО-В молсет еылать жонташназрио. При аксссши ПКО-В еобязодайпе стандарзтые меры но яредоззираще.
тной жоняш-ш/нации образное. Храните ПКО-В отдельно от всех других реагентов и образцов.
J.6. После внесеких образцов заклейте проэраиной пленкой ПЦР планшет кик стрины. Убедитесь, что асе лунки шютно прилегают к пленке. Крлко центрнфупфуйте (в течение )•$ секунд) пробирки или ПЦР планшет н
центрифуге перед постановкой в амплифихатор.
Провспенне ОТ-ПЦР-РВ
*.1 Перенести пробирки или планшет в амплифихатор планшетного тина с детекцией результатов «в реагине реального времезтаи провести вмплификаш<юпос. 1едуюшейарогра>ше:
Тсипепаткра Время Квлвчествв nobioB
55«С 10 мин 1
94*С 1 мин 1
94‘С Юсах 55R"C 20 сек
94»С 10 сек 4058*С 20 сек (летеккяя сигнала по каналам FAM, HEX)
*е' Перед запуежимярогра.1 1ЦЫ амзизификации убедитесь, нззю для всех испояьз}'емьи пробирок или лунож планше1яа заданы верные каналы demeKiiuu сшнала FAM/GREEN, HEXOOE/R6G/Yrllow/Qf3.
■ервом зтапе программы (35*С) проход|гг реакиихобраткойтранскрттции (ОТ), а ходе которой на матрице РНК происходит синтез комплементарной ДНК (кЛНК) Д*лее проходит реакцик ПЦР а реальном времеин (ПЦР-РВ)
<3 циклов, цроиеходит вмнлнфнкаииа специфического участка кДНК вируса SAR5-CoV-2 и мншен» внутреннего контрольного о^мзца ВКО-т^, с одновременной флуоресиснтяой детекцией 1фодуктов.
Обсчет и нктерпретания результатов
п лролутггов аиплификапни кв реапгме реального времени» осушествляетсх прибором автоматически а каацтом цикле амплификации. На осяоааним зтих данных программное обеспечение амплифякатора строит кривы
хна флуоресцекпюго сигнала по каждому из заданных каналов. После окончания амплификации программное обеспечение прибора рассчитает циклы перссеченкя кривых накопленкя флуоресиеяттюго сигнала с автоыаткческ
хиной пороговой линией (СО В случае нспраанлыюга автоматического выставленнх пороговой линии, рекомендуется выполнить это дейстане вручную. Пороговая .тиння должна находиться а диапазоне, где флуореецеипш
положительньк обранюа параллельны друг другу (шкала флуоресценции лолжтеа отображаться в момент апаляза в логарифмическом формата). Отсутствие зяачеякя для образна (значеяне №А)оз 1ичает. чгопересечекня криво
»кя ф;|уоресиентмого сигнала с морогояой линией не наступило.
FAM/CREEN HEX/JOE/R6G/Vcn««/Cy)
Ген N (спсцнфмчный ,шя SARS-C!oV-2) Внутренний контрольный образец (мишень ВКО)
Интерпретання результатов.
I I. Интерпретация результатов нсследоваяна провояитса в соответствии с таблицей №}:
IIIL3. KlfTClMi
CrFAM CtHEX
(■ашясаь ша2)
Результат
+ (037) Pcannia прешла venopno. кентамяааппа етегтетвует
ЖО + (037) V+ Проба кпягамииитювана. Тоебустга ппатлп погтанпаки после гшинктна аптнхонтамннаинонных мер. Необходямо ПОВТОРИТЬ постановку с этанв выделенив РНК.
-(Ct>37) Реакння не прошла. Нарушен зтап вылешнли РНК или воэьюжнп наличие ингибиторов а образце. Тоебуетса провести повторное выделение бноывтернала
. Реакпая opohlxi уедешяо. К01ггамвяааяя отсутстат
WH.O) *(0£ЗТ) -1* Проба коитаминировши. Воэмоаша KOinaxuuiauKi компонентов набора реагектоа. Необходимо повторить постановку с этапа ирнпловлеина реакционных смесей.-1* + (Ct<37)
+ (037) + (037) Реакпая провпа успепне
(04 .( 0 >1Л + (0371 Peinma не nnniniu. Тосбугт''* npnm-niHniiir> г-щпч ПТ-miP.PR Убгпятлгь. ЧТО а ОГапгипннУЮСМССЬ внесены поааНЛЫШС COOTUOUKUMU вссх компонентов иабооа осагснтоа.
.(0 1 7 ) .«Л>17) Реаитна не ипспща. Требуеег» neiieiчипап г этапа эке 1"»ч|ии РНК Убепнтесь что | рсакшсого 1УЮ смесь вяасевы пваякдьные соотношення всех компонентов набора рсагягтоа.
OJCMUC + (Ct<37) + 2- Обиаружгаа РНК SARS.CeV<3
-«Л>17> + (Cl<371 Нс обяапухсяа РНК SARS.CoV.2
-(а>17) -(Ci>37) Реакши не прошла. Нарушен этап выделения РНК нли возхюжно ньтичие вигнбиторов а обреше. Трсбуетса провести повторное выдедеинс шш азатне бноматернала (вьшоливегса
последовательно!.
Контроль качества проаеденяв нсс-тедованяй
С* РАМ ClUEX
(ген N) (иашеяь ВКО)
0 - + (Ct<37)
(МНЮ) -
U + (С1<3?1 + {0<37)
пгаугмые абталы вткннатеяыьм (СОЗ?) ___________________ + COS37)
схеятсмыс образны иедоипггельяые - (С1<37| + /.
Услоана хранения в транспортировки
Усяовня хравенна.
Ill I Набор реагеитоа «SARS-COV.2 RNA-OBTECTION-IF» датжен храикгься при температурном режиме + 2...+8“С а защигценном от света месте а течение всего срока годности. Срок годности набора реагентов — 1
иссацеа.
11.1.2. Набор реагеягоа с истакпшм сроком годности лримененяю не подлежит. Срок голноетн и условна хравеяия вскрытых реагентов соответствуют сроку годности и условиям хранения, указанным на этикетках для
невскрытых реатгтоа.
Травслортяровавне
112.1. Лолускаетса транслортироака набора реагентов при температуре +2...+8 °С. Не замораживать.
11X2. Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению нс подлежат.
Порядок подачи рекламаинй
кшиацнн на специфические и физические свойства набора реагентов направлять в адрес предприятия-изготовителя: Общество с ограничеккой отэетственностью
«лпгльПетр Инновационных Биотехнологий» (ООО «Аллель»!, 123458, РФ, г. Москва, ул. Твардовского, дои 8, помещение V, комната 8,Тел. т7<4951780.92-96.lab@aUel.lech.
--- стр. 14 ---
/ А л л е л ь
Центр Инноввционныж
Биотехнологий
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
НАБОР РЕАГБНТШ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК КОРОНАВИРУСА SARS-COV-2 МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ
ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ С ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИЕЙ
«SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2
ПО ТУ 21.20.23-002-83076696-2020
Instruction for use
НОМЕР ПО КАТАЛОГУ QT] AL-RT-6
ТУ 21.20.23-002-83076696-2020
Для 96 исследований
ф
Для in w?T(9 диагностики
ООО «Аллель»
123458, г. Москва, ул. Твардовского,
Дом 8, помещение V, комната 8
Тел.: -Н7 (495) 780-92-96
e-mail; lab@allel.tech
Страница 2 из 24
--- стр. 15 ---
/ А л л е л ь
UcHip Инновационных
Биотехнологий
СОДЕРЖАНИЕ
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА
1 И ФОРМА 2........................................................................................................................................................4
2. НАЗНАЧЕНИЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 24
3. ПРИНЦИП МЕТОДА....................................................................................................................................5
4. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И
ФОРМА 2...............................................................................................................................................................6
5. ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПОЛЬЗОВАТЕЛИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 И ФОРМА 2..........................................................................................................................................6
6. ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2
RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2.................................................................................................7
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ...................................................................................................................7
8. ПОДГОТОВ1СА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................7
9. СОСТАВ* НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2.......9
10. НЕОБХОДИМОЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩЕЕ В СОСТАВ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2...............................................10
11. ТРЕБОВАНИЯ К УПАКОВКЕ И МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2..........................................................................................................11
12. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-COV-2 RNA-DETECTION-
1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2.................................................................................................................................12
13. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ (ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ) ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «SARS-
COV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 И ФОРМА 2....................................................................................14
14. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ «SARS-COV-2 RNA-
DETECT10N-IF» ФОРМА 1 И ФОРМА 2.........................................................................................................14
15. УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ.........................................................................................................................15
16. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................................................16
17. ОБСЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ....................................................................................18
18. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ...................................................................................21
19. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ................................................................................................................22
20. ПОРЯДОК ПОДАЧИ РЕКЛАМАЦИЙ.......................................................................................................22
21. СПИСОК ОБОЗНАЧЕНИЙ.........................................................................................................................23
22. СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ..........................................................................................................23
23. СТАНДАРТЫ СООТВЕТСТВИЯ.............................................................................................................24
Страница 3 из 24
--- стр. 16 ---
'||||111111*^'^Л/7в/71>
UCHip Инновационных
Биогехнопогий
О
1. Общая характеристика набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2
Полное наименование
Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-
2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени с обратной транскрипцией «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 по ТУ 21.20.23-002-
83076696-2020
Сокращенные наименования
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»;
«SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА I и ФОРМА 2;
ФОРМА 1. ФОРМА 2
Каталожный номер AL-RT-6
Срок годности набора 12 месяцев при соблюдении режима хранения
Условия хранения Хранение при температурном режиме +2...+8®С
Диапазон обнаружения Качественный
Диагностические характеристики
Диагностическая чувствительность - 100 % (99,98 % - 100 % с
доверительной вероятностью 95%)
Диагностическая специфичность - 100 % (99,98 % - 100 % с
доверительной вероятностью 95%)
Предел обнаружения - 1000 копий нуклеиновой кислоты (РНК)
коронавируса SARS-CoV-2 на 1 мл образца
Инклюзивность не менее 99%
Тип анализируемого образца
Нуклеиновые кислоты (РНК) из клинических образцов верхних
дыхательных путей (мазки из носоглотки, ротоглотки (горла), а
также смешанные образцы, полученные из мазков из
носоглотки и ротоглотки)
Контрольные образцы
Внутренний контроль выделения РНК и реакции обратной
транскрипции;
Положительный контроль к мишени гена N;
Отрицательный контрольный образец ПЦР-РВ
Общее время проведения анализа Не более 76 минут* (без учета времени экстракции РНК)
Схема проведения анализа Одностадийный
Объем биологического материала для
анализа (РНК) 10 мкл
Количество определений Набор реагентов рассчитан на 96 определений, включая
контроли
Готовность компонентов набора
реагентов к использованию
Готов к применению. Компоненты набора реагентов не требуют
дополнительного разведения.
Упаковка (ФОРМА 1)
Жидкие компоненты набора, расфасованные в пробирки с
завинчивающейся крышкой; планшет на 96 лунок или
стриппированные пробирки 12*8 лунок и пленка для
заклеивания планшета, вложенные в картонную коробку с
ложементом.
Упаковка (ФОРМА 2)
Жидкие компоненты набора, расфасованные в пробирки с
завинчивающейся крышкой; лиофилизированный компонент в
планшете на 96 лунок или в стриппированных пробирках 12*8
лунок и пленка для заклеивания планшета, вложенные в
картонную коробку с ложементом.
Эксплуатационная документация
Краткая инструкция по применению ФОРМА 1 или ФОРМА 2.
Инструкция по применению « Набор реагентов для выявления
РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией
«SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2,
доступна на сайте производителя.
Сведения о производителе ООО «Аллель», 123458, г. Москва, ул. Твардовского, Дом 8,
помещение V, комната 8
♦время программы амплификации для прибора Real-time CFX96 Touch (BIO-RAD)
2. Назначение Набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2 - это одностадийный тест на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ), предназначенный для качественного определения
Страница 4 из 24
--- стр. 17 ---
К,„„;1'|Г4ллель
Цен1р Инновецноимь»
Биотехнологий
I
II
нуклеиновых кислот (РНК) вируса SARS-CoV-2 в биологических пробах пациента, таких как мазки из
носоглотки, ротоглотки (горла), а также смешанные образцы, полученные из мазков из носоглотки и
ротоглотки от лиц с подозрением на инфекцию COVID-19. Использование набора реагентов «SARS-CoV-2
RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 рекомендуется для in vitro диагностики и проведения
эпидемиологических исследований.
Функциональное назначение: Прямой метод этиологической диагностики.
РНК SARS-CoV-2 обычно обнаруживается в респираторных образцах во время острой фазы инфекции.
Положительные результаты указывают на присутствие РНК SARS-CoV-2. Для определения статуса
инфицирования необходима корреляция с клинической картиной пациента и другой диагностической
информацией. Положительные результаты не исключают бактериальную инфекцию или сопутствующую
инфекцию другими вирусами. Обнаруженный агент может не быть точной причиной заболевания.
Отрицательные результаты не исключают заражения SARS-CoV-2 и не должны использоваться в качестве
единственной основы для постановки диагноза и принятия решений по ведению пациентов. Интерпретация
результатов должна проводиться в совокупности с другими лабораторными показателями и диагностической
информацией.
2.1. Актуальность проблемы
Широкое распространение новой коронавирусной инфекции COVID-19, вызываемой вирусом SARS-
CoV-2, поставило перед медицинским сообществом сложные задачи, связанные с быстрой и достоверной
диагностикой и эффективным лечением пациентов. Коронавирусы - это покрытые оболочкой РНК-вирусы,
семейства Coronaviridae (коронавирусы), относящиеся к вирусам зоонозного происхождения. Они вызывают
респираторные заболевания с симптомами различной степени тяжести, начиная с легкой простуды до более
тяжелых форм, таких как тяжелый острый респираторный синдром (SARS), ближневосточный
респираторный синдром (MERS) и Коронавирусная инфекция 2019 (COVID-19). Другие известные
коронавирусы, инфицирующие человека, включают 229Е, NL63, ОС43 и HKUI. Последние распространены
повсеместно, а инфекция обычно вызывает симптомы простуды или гриппа.
2.2. Методы диагностики новой коронавирусной инфекции COVID-19
В настоящее время во всем мире принимаются меры по предупреждению распространения инфекции
COV1D-19. Для этих целей выполняется выявление лиц как имеющих симптомы заболевания, так и
бессимптомных пациентов с помощью лабораторных методов диагностики.
Первоначально факт инфицирования SARS-CoV-2 может быть подтвержден выявлением РНК возбудителя в
биологических пробах пациента, таких как мазки из носоглотки, ротоглотки (горла), смешанные образцы,
полученные из мазков из носоглотки и ротоглотки, носовые или носоглоточные аспираты, образцы
бронхоальвеолярного лаважа, а также промывные воды бронхов и мокроты. РНК SARS-CoV-2 может быть
выявлена с первых дней после заражения и является достаточно чувствительным исследованием.
Преимущественно применяют тест-системы формата ПЦР-РВ (ПЦР в реальном времени) и LAMP (петлевая
изотермальная амплификация).
Методы на основе ПЦР являются методами прямого выявления РНК вируса SARS-CoV-2 в
клинических образцах, поэтому их можно отнести к наиболее чувствительным и достоверным исследованиям
для диагностики инфекции. Однако ограничением методов диагностики на основе ПЦР является то, что
персистенция вируса в тканях наблюдается короткое время. По результатам исследований, до 90% тестов на
вирусную РНК SARS-CoV-2 в мазках из носоглотки становятся отрицательными спустя 8-10 дней от
появления симптомов, и, таким образом, ПЦР тест-системы могут давать ложноотрицательные результаты в
более поздний период после заражения.
Серологические методы исследования на основе диагностики специфических антител
(иммуноглобулинов) к вирусу SARS-CoV-2 являются методами непрямой диагностики Коронавирусной
инфекции. Методы определения сывороточных антител включают ИФА, хемилюминесцентный
иммуноанализ, иммунохроматографию с коллоидным золотом и т.д. Специфические антитела IgG
появляются в крови пациентов с SARS-CoV-2 уже через 12-14 дней после появления симптомов и могут быть
обнаружены длительное время, при этом титр специфических антител IgG в фазе выздоровления примерно в
4 раза вьпие, чем в острой фазе. Серологические методы исследования могут быть использованы как
дополнительные при диагностике Коронавирусной инфекции.
3. Принцип метода
Обнаружение вируса SARS-CoV-2 с помощью набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2 достигается за счет экстракции нуклеиновых кислот (РНК) из клинических образцов
верхних дыхательных путей с последующей мультиплексной ПЦР в режиме реального времени, совмещенной
с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ), с использованием ПЦР амплификаторов с детекцией
флуоресцентного сигнала на каналах FAM и HEX. Гибридизационно-флуоресцентная детекция позволяет
проводить регистрацию продуктов амплификации в процессе прохождения реакции («в режиме реального
Страница 5 из 24
--- стр. 18 ---
С /А л л е л ь
UCNip Инновацйоннка
Биотехнологий
времени»). Специфической мишенью в реакции ПЦР-РВ является ген N, специфичный для вируса SARS-CoV-
2.
Флуоресцентная детекция специфических мишеней проводится в реакционном растворе.
Олигонуклеотидный зонд, несущий флуоресцентную метку, специфически гибридизуется с детектируемым
участком кДНК. В ходе последующего наращивания цепи ДНК ферментом ДНК-полимеразой, происходит
разрушение зонда и высвобождение флуоресцентной метки в раствор, что делает возможным её регистрацию
на флуоресцентном дете1аоре. С использованием специально подобранных настроек амплификатора,
анализирующая программа автоматически рассчитывает циклы пересечения кривых накопления
флуоресцентного сигнала с пороговой линией - пороговый цикл (Ct). Значение Ct обратно пропорционально
концентрации кДНК в образце.
Кроме мишени к гену вируса, набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2 содержит набор праймеров и зонд, предназначенный для обнаружения мишени внутреннего
контроля экстракции (BKO-ms2). Этот контроль экстракции представляет собой фрагмент РНК в белковой
оболочке, не человеческого происхождения. Внутренний контроль BKO-ms2 добавляется ко всем
клиническим образцам для контроля проведения этапов экстракции нуклеиновых кислот (РНК), обратной
транскрипции, а также ингибирования реакции. В состав набора реагентов также входит положительный
контроль к мишени N (ПКО-В), который позволяет пользователю оценить, насколько успешно прошли все
этапы анализа, и отрицательный контрольный образец ПЦР-РВ (К-).
3.1. Ограничения метода
3.1.1. Ложноотрицательные результаты могут возникнуть вследствие:
• Неправильного сбора образцов;
• Разрушения вирусной РНК во время транспортировки или хранения образцов;
• Наличия ингибиторов ОТ-ПЦР-РВ в образце;
• Мутации вируса SARS-CoV-2 на участке гибридизации праймеров (не известные или не
учтенные на 18 июня 2021 года);
• Несоблюдения инструкций по применению набора реагентов;
• Несоблюдения условий хранения набора реагентов;
• Воздействия вакцин, химиотерапевтических препаратов, иммунодепрессантов или других
веществ, кроме описанных в п. 12.4, не оценивалось при разработке набора.
3.1.2.
I
3.1.3.
4.
Ложноположительные результаты могут возникнуть вследствие:
Перекрестного загрязнения образцов в случае нарушения технологии пробоподготовки;
Перекрестного загрязнения между образцами пациентов в случае нарушения технологии
проведения исследования;
Загрязнения проб и реагентов положительным контролем (ПКО>В), в случае нарушения
технологии работы с набором реагентов.
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 не совместим с
экспресс-методиками выделения РНК.
Область применения набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 предназначен для
использования в клинической лабораторной диагностике. Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-
1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 используется для качественного выявления нуклеиновых кислот (РНК)
коронавируса SARS-CoV-2 у всех лиц без ограничения пола и возраста с симптомами ОРВИ или без. Набор
реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 предназначен исключительно для
профессионального использования. Только для диагностики in vitro. Для медицинских организаций
независимо от организационно-правовой формы.
5. Потенциальные пользователи Набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECT10N-1F» ФОРМА
1 и ФОРМА 2
Для выполнения анализа с использованием данного набора реагентов необходимо участие
специалистов не моложе 18 лет с высшим или средним медицинским, биологическим или иным образованием,
не имеющих медицинских противопоказаний к вакцинации, лечению специфическими препаратами и к
работе в средствах индивидуальной зашиты. Сотрудники должны иметь соответствующую
профессиональную подготовку в области молекулярно-биологических методов и методов безопасной работы
с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-IV групп патогенности.
Страница б из 24
--- стр. 19 ---
С /А л л е л ь
Центр Иниомциоинки!
Биотехнопогий
6. Показания и противопоказания к применению Набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
Показания к применению. Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА
2 используется для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 у лиц с симптомами ОРВИ и/или
контактировавшими с заболевшим COVID-19, а также у лиц без признаков ОРВИ в очагах инфекции и/или в
условиях распространения инфекции, с целью раннего выявления коронавируса SARS>CoV>2 для
предотвращения дальнейшего распространения инфекции. Противопоказаний и побочных эффектов при
работе с набором «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 не выявлено. Набор реагентов
«SARS“CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 предназначен только для однократного
применения по назначению.
7. Анализируемые образцы
Для проведения исследования с использованием Набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-
1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 допустимо использование образцов/биологических проб пациента, таких как
мазки из носоглотки, ротоглотки (горла) а также смешанные образцы, полученные из мазков из носоглотки и
ротоглотки.
8. Подготовка анализируемых образцов для исследования
8.1. Сбор и хранение клинических образцов
Взятие, хранение и транспортирование анализируемых образцов осуществлять согласно МУ 1.3. 2569-
09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе
с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности» и «Временным методическим
рекомендациям по лабораторной диагностике нового коронавируса 2019 (2019-nCoV) методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР)», утвержденными Главным государственным врачом Российской Федерации.
8.1.1. Рекомендации по взятию мазков из полости носа. Отделяемое из полости носа следует забирать
сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе. Тампон ввести легким движением по
наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в
нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное движение и удалить вдоль
наружной стенки носа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) поместить
в стерильную одноразовую пробирку объёмом 2 мл с транспортной средой. Тщательно сполоснуть тампон в
транспортной среде и отрезать верхнюю часть зонда. Пробирку с ватным тампоном плотно закрыть крыщкой,
не допуская зазора между крыщкой и пробиркой, и промаркировать.
8.1.2. Рекомендации по взятию мазков из ротоглотки. Материал из зева (задней стенки ротоглотки)
рекомендуется брать натощак или через 2 часа после приема пищи, сухими стерильными ватными тампонами
на пластиковой основе. Корень языка придавить щпателем и вращательными движениями забрать материал
со стенок зева, слегка нажимая на них тампоном. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с
ватным тампоном) поместить в стерильную одноразовую пробирку на 2 мл с транспортной средой. Тщательно
сполоснуть тампон в транспортной среде и отрезать верхнюю часть зонда. Пробирку с ватным тампоном
плотно закрыть крышкой, не допуская зазора между крышкой и пробиркой, и промаркировать.
8.1.3. Реко.мендацин по получению смешанных образцов, полученных из мазков из носоглотки и
ротоглотки. Отдельными ватными тампонами взять мазки из носоглотки и ротоглотки. Рабочую часть обоих
зондов с ватным тампоном поместить в одну пробирку для увеличения вирусной нагрузки. Тщательно
сполоснуть тампоны в транспортной среде, отрезать верхнюю часть зондов. Пробирку с ватными тампонами
плотно закрыть крышкой, не допуская зазора между крышкой и пробиркой, и промаркировать.
8.1.4. Для взятия, хранения и транспортировки образцов до проведения исследования, рекомендуется в
качестве транспортной среды использовать стерильный физиологический раствор или специализированные
транспортные среды с консервантом, совместимые с исследованиями методом ПЦР, а также зонды (тампоны).
Рекомендуемые изделия: «Зонд медицинский одноразовый стерильный по ТУ 32.50.13-002-28731857-2020»,
РУ №РЗН 2021/13989 от 26.11.2021г., Система транспортная со средой для вирусов по ТУ 32.50.50-027-
17547866-2020, РУ № РЗН 2020/9961 от 02.04.2020г.
8.1.5. Для взятия, хранения и транспортировки образцов используйте контейнеры с маркировкой
«DNase/RNase free».
8.1.6. После взятия образцы необходимо хранить в холодильнике при температурном режиме +2...+8 *С в
течение короткого периода (не более 72 часов), при температуре -20’С - не более 4 месяцев; при температуре
ниже -20®С - в течение более длительного времени (до 36 месяцев);
Страница 7 из 24
--- стр. 20 ---
[.УАллель
Ц«н1р Инноа«ционнва
Биотехнологий
8.1.7. Не рекомендуется замораживание/отгаивание образцов более одного раза перед проведением
тестирования.
8.2. Выделение РНК из клинических образцов
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 совместим с
большинством наборов для экстракции РНК или совместной экстракции ДНК/РНК на основе методов
осаждения и сорбции на силикагеле или магнитных частицах, обеспечивающих выделение целостной РНК
без примесей, ингибирующих реакцию обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).
Выделение РНК выполняется в соответствии с инструкцией производителя набора реагентов для выделения
РНК.
8.2.1. Экстракция РНК из клинического материала проводится строго (!) в присутствии внутреннего
контрольного образца (BKO-ms2).
• BKO-ms2 (входит в состав набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА
1 и ФОРМА 2) - внутренний контроль экстракции РНК из клинических образцов. BKO-ms2 состоит из
фрагмента РНК в белковой оболочке. Он служит контролем, гарантирующим, что этапы выделения РНК из
клинических образцов и реакция обратной транскрипции прошли успешно. BKO-ms2 добавляется к каждому
образцу на этапе экстракции и проходит через всю процедуру выделения РНК, в соответствии с инструкцией
производителя набора реагентов.
8.2.2. В каждую постановку клинических образцов на этапе экстракции должны быть включены
отрицательный (ОКО) и положительный (ПКО-В) контрольные образцы этапа выделения РНК:
• ОКО (не предоставляется в составе набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2) - отрицательный контрольный образец выделения РНК. ОКО состоит из воды,
свободной от нуклеаз, или транспортной среды, предназначенной для взятия образцов. ОКО в качестве
образца должен проходить через всю процедуру вьщеления РНК, в соответствии с инструкцией
производителя набора реагентов для выделения РНК;
• ПКО-В (предоставляется в составе набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2) - положительный контрольный образец к мишени гена N вируса SARS-CoV-2. ПКО-
В представляет собой искусственную РНК в белковой оболочке, несущую фрагмент гена N вируса SARS-
CoV-2. ПКО-В в качестве образца должен проходить через всю процедуру выделения РНК, в соответствии с
инструкцией производителя набора реагентов для выделения РНК.
Внимание! Внутренний контроль BKO-ms2 и положительный контроль ПКО-В должны храниться строго
при температурном режиме +2...+5®С. Недопустимо замораживание BKO-ms2 и ПКО-В.
8.2.3. Приготовление контрольных образцов этапа выделения РНК
Перед приготовлением образцов к выделению РНК пробирку с BKO-ms2 (входит в состав набора реагентов
«SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ^ЮРМА 2) следует перемешать на вортексе в течение
нескольких секунд, затем сбросить капли краткосрочным центрифугированием.
Условные обозначения:
V - объем клинического образца, рекомендуемый производителем набора реагентов для выделения РНК;
Среда - транспортная среда, предназначенная для хранения образцов, или вода, свободная от нуклеаз.
Перед внесением клинических образцов в каждую пробирку с лизирующим раствором, включая пробирки для
ОКО и ПКО-В, следует добавить:
10 мкл раствора ВКО.
Приготовление ОКО.
В пробирку, соответствующую образцу ОКО, добавить:
V мкл среды.
Промаркировать пробирку ОКО. Пробирка ОКО должна проходить все стадии выделения РНК, которые
проходят клинические образцы;
Приготовление ПКО-В.
В пробирку, соответствующую образцу ПКО-В, добавить:
10 мкл раствора ПКО-В (входит в состав набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1
и ФОРМА 2);
V мкл среды.
Промаркировать пробирку ПКО-В. Пробирка ПКО-В должна проходить все стадии выделения РНК, которые
проходят клинические образцы.
8.2.4. Хранить выделенные образы РНК в соответствии с рекомендациями производителя набора реагентов
Страница 8 из 24
--- стр. 21 ---
(^УАллель
Центр Ииномционныя
биотехнологий
для выделения РЫК. Не рекомендуется проводить более одного цикла замораживания-оттаивания образцов и
экстрагированной РЬЖ.
8.2.5. Перед проведением тестирования не рекомендуется перемешивать образцы РНК на вортексе, так как
это может привести к фрагментации РНК и повышению риска получения ложноотрицательных результатов
исследования.
9.
9.1.
Состав* набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
Состав набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1
Наименование компонента в
наборе реагентов
Объем в наборе
реагентов (на 96
тестов), мкл
Кол-во,
шт.
Описание
Mastermix (ММ) 1500 (14 мкл на 1
ПЦР реакцию)
1 Прозрачная жидкость бледно-розового
цвета в пробирке 2,0 мл с синей крышкой
/цветовой маркировкой
Enzyme mix (ЕМ) 105 (1мкл на 1 ПЦР
реакцию)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 0,5 мл с желтой
крышкой/цветовой маркировкой
Внутренний контрольный образец
выделения и обратной
транскрипции (ВКО-т$2),
концентрация: 150 000 копий
геном-эквивалентов в 1 мл
1150 (10 мкл на 1
реакцию выделения
РНК)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 2,0 мл с оранжевой
крышкой/цветовой маркировкой
Положительный контроль к
мишени гена N (ПКО-В),
концентрация; 150 000 копий
геном-эквивалентов в 1 мл
290 (10 мкл на 1
образец ПКО-В)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 0,5 мл с красной
крышкой/цветовой маркировкой
Отрицательный контрольный
образец ПЦР-РВ (К-)
1150 (10 мкл на 1
ПЦР реакцию)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 2,0 мл с прозрачной
крьшпсой/белой цветовой маркировкой
Планшет/стриппированные
пробирки для проведения ОТ-ПЦР-
РВ реакции на 96 лунок/12х8 лунок
1 Планшет / пробирки для проведения
реакции ОТ-ПЦР-РВ
Оптическая пленка для
заклеивания ПЦР планшет/стрипов
- 2 Оптическая пленка для заклеивания ПЦР
планшета / стрипов
Краткая инструкция по
применению
1 Краткая инструкция по применению набора
реагентов SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-
1F ФОРМА 1
9.2. Состав набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 2
Наименование компонента в
наборе реагентов
Объем в наборе
реагентов (на 96
тестов), мкл
Кол-во,
шт.
Описание
Diluent (DIL) 1600 (15 мкл на 1
ПЦР реакцию)
1 Прозрачная бесцветная или бледно-розового
цвета жидкость в пробирке 2,0 мл с синей
крышкой /цветовой маркировкой
Внутренний контрольный образец
выделения и обратной
транскрипции (BKO-ms2),
концентрация: 150 000 копий
геном-эквивалентов в 1 мл
1150 (10 мкл на 1
реакхшю выделения
РНК)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 2,0 мл с оранжевой
крышкой/цветовой маркировкой
Положительный контроль к
мишени гена N (ПКО-В),
концентрация; 150 000 копий
геном-эквивалентов в 1 мл
290 (10 мкл на 1
образец ПКО-В)
1 Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 0,5 мл с красной
крышкой/цветовой маркировкой
Отрицательный контрольный
образец ПЦР-РВ (К-)
1150 (10 мкл на 1
ПЦР реакцию)
I Прозрачная бесцветная жидкость в
пробирке 2,0 мл с прозрачной
крышкой/белой цветовой маркировкой
Лиофилизированная смесь в
планшете/стриппированных
пробирках для проведения ОТ-
ГЩР-РВ реакции на 96 лунок/12х8
лунок (МЕМ)
1 Сухая смесь белого или полупрозрачного
цвета на дне пробирок, герметично
заклеенных пленкой
Оптическая пленка для
заклеивания ПЦР планшет/стрипов
- 2 Оптическая пленка для заклеивания ПЦР
планшета/ стрипов
Страница 9 из 24
--- стр. 22 ---
^ /А л л ел ь
Центр ИННОМЦИОННЫ)!
Биотехнологий
Краткая инструкция по - 1 Краткая инструкция по применению набора
применению реагентов SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-
IF ФОРМА 1
I
* Набор реагентов не содержит компонентов и материалов животного и (или) человеческого происхождения
Метрологическая прослеживаемость компонентов «BKO-ms2» и «ПКО-В» определена в соответствии
ГОСТ ISO 17511-2011.
Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА I и ФОРМА 2 рассчитан на 96
определений, включая контрольные образцы. Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА
1 и ФОРМА 2 подходит для проведения исследований с использованием ручных методик, а также
адаптирован для открытых полуавтоматических и автоматических станций для дозирования жидкостей.
9.3. В состав набора реагентов входит:
ФОРМА!
• Enzyme mix - смесь ферментов обратной транскриптазы MMLV и Taq полимеразы.
Использование Enzyme mix позволяет совместить реакцию обратной транскригщии (получение кДНК) и
мультиплексную ГЩР в реальном времени в одной пробирке и проводить процесс в одну стадию;
• Mastermix - смесь праймеров и зондов в буферном растворе. Система праймеров и зондов
предназначена для определения целевой последовательности (мишени) коронавируса SARS-CoV-2 (гена N) и
специфической последовательности для BKO-ms2 - внутреннего контроля вьшеления РНК и реакции
обратной транскрипции;
ФОРМА 2
• МЕМ - лиофилизированная смесь для амплификации, включающая в себя смесь ферментов
обратной транскриптазы MMLV и Taq полимеразы, а также смесь праймеров и зондов в буферном растворе.
Использование МЕМ позволяет совместить реакцию обратной транскрипции (получение кДНК) и
мультиплексную ПЦР в реальном времени в одной пробирке и проводить процесс в одну стадию. Система
праймеров и зондов предназначена для определения целевой последовательности (мишени) коронавируса
SARS-CoV-2 (гена N) и специфической последовательности для BKO-ms2 - внутреннего контроля выделения
РНК и реакции обратной транскрипции;
• D1L - дилюент, включает в себя состав для растворения лиофилизованной формы МЕМ.
Использование дилюента позволяет привести лиофилизированную смесь МЕМ в готовую для работы форму.
«SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
• BKO-ms2 - Внутренний контрольный образец представляет собой РНК в белковой оболочке,
который проходит все стадии анализа вместе с клиническими образцами, и служит для контроля проведения
этапа выделения РНК, прохождения реакций ОТ-ПЦР и ПЦР-РВ. Использование внутреннего контрольного
образца BKO-ms2 позволяет снизить вероятность получения ложноотрицательных результатов исследования.
• ПКО-В - Положительный контрольный образец для мишени гена N коронавируса SARS-
CoV-2. Положительный контрольный образец ПКО-В представляет собой искусственную РНК в белковой
оболочке, несущую фрагмент гена N коронавируса SARS-CoV-2. ПКО-В служит для контроля успешного
проведения этапа выделения РНК, прохождения реакций ОТ-ПЦР и ПЦР-РВ.
• К- - Отрицательный контрольный образец ПЦР-РВ (деионизованная вода) - используется в
качестве отрицательного контроля (К-) на этапе постановки амплификации ПЦР-РВ. К- позволяет снизить
вероятность получения ложноположительных результатов исследования.
Канал детекции FAM/GREEN HEX/JOE/R6G/YeUow/Cy3
Мишень Ген N Мишень BKO-Ms2
Специфичность
мишени
Специфичен к SARS-CoV-2 Внутренний контрольный образец
• Мишень в гене N высоко специфична для коронавируса SARS-CoV-2;
• Мишень BKO-ms2 является внутренним контролем этапа выделения РНК из каждого
клинического образца. Внутренний контроль нужен для определения наличия в клиническом образце РНК,
для контроля проведения ОТ-ПЦР, а также для определения отсутствия ингибирования реакции ОТ-ПЦР.
10. Необходимое дополнительное оборудование, не входящее в состав набора реагентов «SARS-
CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
10.1. Приборы:
ПЦР-бокс с УФ-лампой;
Страница 10 из 24
--- стр. 23 ---
С /А ллель
Lt»Hip Инновациоинъа
Биотехнологий
О
• Амплификатор* нуклеиновых кислот термоциклический с детекцией сигнала (по каналам
FAM, HEX) в режиме реального времени («Амплификатор детектирующий "ДТпрайм" по ТУ 9443-004-
96301278-2010 в следующих модификациях: 4М1, 4МЗ, 4М6, 5М1, 5МЗ, 5М6, 6М1, 6МЗ, 6М6, 4X1, 5X1,
6X1», производитель ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № ФСР 2011/10229;
• Термоциклер* для амплификации нуклеиновых кислот 1000, с принадлежностями
исполнения: С1000, S1000, С1000 Touch» (CFX96 Touch qPCR System), производитель ООО "Био-Рад
Лаборатории", США, РУ № ФСЗ 2008/03399);
• Настольная центрифуга на 12000 об/мин (для этапа выделения РНК);
• Центрифуга типа «Вортекс» на 1500 — 3000 об/мин;
• Дозаторы переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы
жидкости 0,5-10 мкл; 5-50 мкл; 20-200 мкл;
• Холодильник медицинский, поддерживающий температурный режим +2...+8®С;
Примечание:
*Валидировано в ходе клинических испытаний.
10.2. Расходные материалы:
• Одноразовые наконечники с фильтром (аэрозольным барьером) объёмами 0,5-10 мкл; 5-50
мкл; 20-200 мкл;
• Одноразовые полипропиленовые пробирки вместимостью 1,5 мл или 2,0 мл для
приготовления амплификационной смеси;
• Одноразовые средства защиты - медицинская шапочка одноразовая, медицинская защитная
маска (класс N95 или FFP3), рабочая форма, медицинская защитная форма одноразовая, одноразовые
латексные перчатки, защитные очки.
10.3. Набор реагентов для выделения РНК:
ФОРМА 2 совместима с наборами для экстракции РНК или совместной экстракции ДНК/РНК на
основе методов осаждения и сорбции на силикагеле или магнитных частицах, обеспечивающих выделение
целостной РНК без примесей, ингибирующих реакцию обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени
(ОТ-ПЦР-РВ):
• Комплект реагентов* для выделения РНК/ДНК из клинического материала "РИБО-преп" по ТУ
9398-071 -о 1897593-2008, РУ № ФСР 2008/03147,
• Комплект реагентов* для выделения нуклеиновых кислот (ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС) по
ТУ 9398-035-46482062-2009, РУ № ФСР 2010/08867,
• Набор реагентов* для экстракции РНК из биологического материала "МагноПрайм ФАСТ-Р" по
ТУ 21.20.23-088-09286667-2020, РУ № РЗН 2020/12971.
• Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала «НК-сорбент
для диагностики in vitro, вариант исполнения I. НК-сорбент «Base», РУ № РЗН 2019/9331, производитель ООО
НПФ «Литех»;
• Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала МагноПрайм
ФАСТ-Р, РУ № РЗН 2020/12971, ООО "НекстБио".
Примечание:
*Валидировано в ходе клинических испытаний.
Внимание! Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 не совместим с
экспресс-методиками выделения РНК.
11. Требования к упаковке и маркировке набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2
11.1. Упаковка
• ФОРМА 1 - жидкие компоненты набора реагентов, расфасованные в пробирки с
завинчивающейся крышкой вместимостью 2 мл и 0,5 мл, планшет на 96 лунок или стриппированные
пробирки 12*8 лунок, оптическая пленка для заклеивания планшета;
• ФОРМА 2 - жидкие компоненты набора реагентов, расфасованные в пробирки с
завинчивающейся крышкой вместимостью 2 мл и 0,5 мл, лиофилизированный компонент в планшете на 96
лунок или стриппированных пробирках 12*8 лунок, оптическая пленка для заклеивания планшета;
• Компоненты набора реагентов и инструкция по применению упакованы в картонную коробку
с вкладышем (ложементом) из картона;
• Внешняя и внутренняя упаковка набора реагентов должна быть целостной, без деформаций.
При переворачивании пробирок с завинчивающейся крьпшсой не должно наблюдаться протечек.
Страница 11 из 24
--- стр. 24 ---
г .А/А ллель
Цемтр Инномционных
Биотехнологий
11.2. Маркировка
• Графическое оформление пробирок с реагентами или коробки соответствует ГОСТ Р 51088-
2013 и ГОСТ Р ИС018113-2-2015;
• На каждую пробирку с компонентом набора реагентов, планшет или стриппированные
пробирки с лиофилизированным компонентом (для Формы 2) наклеена черно-белая или многоцветная
самоклеящаяся этикетка, с указанием: сокращенного наименования предприятия-изготовителя, сокращенного
наименования набора реагентов, сокращенного наименования реагента, объема реагента (для жидких
реагентов), номера серии (партии, LOT) набора реагентов, срока годности (годен до) и условий хранения,
предупредительной надписи: «Только для диагностики in vitro»;
• На пробирках с Mastermix (ММ), Enzyme mix (ЕМ), Diluent (DIL), внутренним контрольным
образцом выделения и обратной транскрипции (BKO-ms2), положительным контрольным образцом ОТ-ПЦР-
РВ (ПКО-В), отрицательным контрольным образцом ПЦР-РВ (К-) указано торговое наименование набора
реагентов;
• На каждом наборе реагентов (коробке) или на этикетке, наклеенной на каждый набор
(коробку), нанесена маркировка с указанием в соответствии с ГОСТ Р 51088-2013; наименования
предприятия-изготовителя, юридического адреса, телефона, адреса электронной почты, ссылки на сайт
производителя в виде QR-кода, полного и со1фашенного наименования набора реагентов, состава набора
реагентов (наименование компонентов, количество, объем), каталожный номер набора реагентов, количества
определений, на которое рассчитан набор реагентов (включая контрольные образцы), номера серии (партии,
LOT) набора реагентов, срока годности (годен до) и условий хранения, предупредительных надписей «Только
для диагностики «in vitro», «Обратитесь к инструкции по применению», «Осторожно! Обратитесь к
инструкции по применению», «Верх», ссылки на скачивание полной версии инструкции к набору, на сайте
производителя в виде QR-кода, регистрационного номера, номера технических условий.
12. Аналитические характеристики набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2
12.1. Аналитическая чувствительность: предел обнаружения (LOD)
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения) набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 составляет 1000 копий нуклеиновой кислоты (РНК) коронавируса
SARS-CoV-2 на 1 мл образца.
Аналитическая чувствительность (LOD) была установлена, как самая низкая концентрация РНК SARS-
CoV-2 (копий генома/мл) в образце, которые можно обнаружить с помощью набора реагентов «SARS-CoV-2
RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 как минимум в 95% случаев.
Аналитическая чувствительность набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2 была определена с использованием серийных разведений вирусной геномной РНК (Twist
Bioscience, Cat. № 102019), добавленных к отрицательным клиническим мазкам из носоглотки. Определение
производилось тестированием по четырем концентрациям (5000, 2500, 1000, 500 копий генома SARS-CoV-
2/мл) с пятью повторами на каждую концентрацию.
Для двух самых низких концентраций со 100%-ной частотой обнаружения (2500 копий и 1000 копий
генома SARS-CoV-2/мл) было проведено дополнительное подтверждение, тестированием трех образцов в
двадцати повторах, наряду с более низкой концентрацией, чтобы продемонстрировать процент совпадений
ниже 95%.
Самая низкая концентрация со 95% -ной частотой детектирования (1000 копий генома SARS-CoV-2/мл)
была определена как предел обнаружения (LoD) для набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2.
12.2. Аналитическая специфичность: Инклюзнвность
Аналитическая специфичность определяется олигонуклеотидными затравками (праймерами),
подобранными к высококонсервативному участку генома вируса SARS-CoV-2 - гену N, а также специфичным
флуоресцентным олигонуклеотидньпи зондом для гибридизации с комплементарньп^и участками
специфичных ампликонов (специфических продуктов амплификации).
Оценка специфичности праймеров и зонда для мишени гена N проводилась in silico по 14989 полных
нуклеотидных последовательностей, кодирующих нуклеокапсидный белок коронавируса SARS-CoV-2,
присутствующих в GenBank по состоянию на июнь 2021 года (taxid: 2697049,
httPs://www.ncbi.nlm.nih.£ov/sars-cov-2^. Учитывались данные секвенирования геномов вируса SARS-CoV-2,
отобранного у пациентов в странах: Китай, Индия, Россия, Франция, Германия, США, Мексика, Австралия,
Бразилия, Великобритания и др., в том числе включая т.н. «бразильский», «британский», «индийский» и
«южноафриканский» штаммы. Результат выравнивания праймеров и зонда на указанные последовательности
геномов вируса SARS-CoV-2 продемонстрировал 99,5% гомологию и отсутствие известных частых мутаций
на участках гибридизации праймеров для всех штаммов SARS-CoV-2.
Страница 12 из 24
--- стр. 25 ---
..''Аллель
Центр Инновационных
Биотехнологий
12.3. Аналитическая специфичность: Перекрестная реактивность
Аналитическая специфичность набора реагентов - это способность выявлять только РНК указанных
вирусов (SARS-CoV-2), вне зависимости от присутствия в анализируемом образце НК других возбудителей.
• Перекрестная реактивность с другими коронавирусами
Были протестированы супернатанты клеточных культур, содержащие коронавирусы человека
(HCoV) -229Е, -NL63, -ОС43 и -HKU1, а также MERS-CoV и SARS-CoV. Концентрация РНК вируса во всех
образцах определялась с помощью ОТ-ПЦР-РВ и стандартов РНК, разработанных для определения
абсолютной вирусной нагрузки и составляла 10^-10^копий/мл.
• Тестирование клинических образцов с ранее диагностированными патогенами.
Отсутствие перекрестной реактивности было доказано при исследовании клинических образцов с
ранее диагностированными патогенами:
Отсутствие перекрестной реактивности было доказано при исследовании клинических образцов с
ранее диагностированными патогенами: Influenza А virus (H3N2), Influenza А virus (H5N1), Influenza В virus,
Respiratory syncytial virus (A/B), Parainfluenza 1 virus, Parainfluenza 2 virus, Parainfluenza 4A, Parainfluenza 4B,
Bordetella pertussis. Human metapneumovirus. Adenovirus, Human Bocavirus, Legionella spp. Mycoplasma spp,
CMV.
В тестируемых образцах не наблюдалось перекрестной реактивности набора реагентов «SARS-CoV-2
RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 с выбранными патогенами и геномной ДНК человека.
12.3.1. Перекрестная реактивность: анализ in silico.
Был проведен in silico анализ возможных перекрестных реакций со всеми организмами,
перечисленными в п.12.3, с помощью BLAST-анализа праймеров набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 против индивидуальных геномных последовательностей из базы
данных GenBank. BLAST-анализ не показал гомологии с праймерами и зондом «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 для организмов, перечисленных в п.12.3.
Результаты анализа in silico позволяют утверждать, что «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и
ФОРМА 2 разработан для специфичного обнаружения РНК SARS-CoV-2, без ожидаемой перекрестной
реактивности с геномной ДНК человека и другими патогенами дыхательных путей, которые могут быть
причиной ложноположительных результатов тестирования.
12.4. Аналитическая специфичность: Интерферирующие вещества.
Причиной сомнительных (неопределённых) результатов исследований с использованием набора
реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 может быть наличие ингибиторов
ПЦР в образце биологического материала. Признаком ингибирования ПЦР является одновременное
отсутствие или поздние циклы выхода (Ct>37) флуоресцентного сигнала амплификации внутреннего
контрольного образца BKO-ms2 и специфического продукта для вируса SARS-CoV-2. К ингибиторам ПЦР,
источником которых может являться клинический образец, отнесены следующие вещества: гемоглобин
(присутствующий в образце РНК в результате неполного удаления в ходе выделения РНК из образца
биоматериала, содержащего примесь крови), а также химические вещества экзогенного происхождения,
которые могут присутствовать в клинических образцах верхних дыхательных путей.
По окончании реакции амплификации наличие сигнала (канал HEX), свидетельствующего о
накоплении продукта внутреннего контроля BKO-ms2 (Ct<37), говорит о достаточной эффективности
экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии ингибиторов ОТ-ПЦР-РВ в образцах.
Было проведено исследование распространенных субстанций (как экзогенных, так и эндогенных
веществ), которые могут присутствовать в респираторных образцах, и могут повлиять на работу набора
реагентов. Каждое потенциальное интерферирующее вещество (см. таблицу №1) было оценено при
наивысшей медицинской релевантной концентрации (наихудший случай) в присутствии эталонного
материала SARS-CoV-2 (вирусной геномной РНК Twist Bioscience, Cat. X» 102019), добавленного к
отрицательным клиническим мазкам из носоглотки, с конечной концентрацией 1000 копий/мл.
Подготовленные образцы с каждым потенциальным интерферирующим веществом экстрагировали для
получения вирусной РНК и проводили исследования с использованием набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2.
Таблица Xsl. Исследование интерферирующих веществ
Интерферирующее вещество Описание/активное
вещество
Концентрация Результат
анализа
Гемоглобин Кровь человека 2% (v/v) Не влияет
Противоотечный назальный
спрей/капли
Oxymetazoline 15% (v/v) Не влияет
Кортикостероиды/ мазь для носа Dexamethasone 375 мкг/мл Не влияет
Антивирусные препараты Zanamivir 5 мг/мл Не влияет
Страница 13 из 24
--- стр. 26 ---
'Аллель
Центр Ииномциониых
Биотехнопогмй
Антибиотик / мазь для носа Mupirocin 0.02% (w/v) Не влияет
Муцин Слюна человека 5% Не влияет
Исследование интерферирующих веществ показало, что распространенные эндогенные и экзогенные
интерференты в указанных количествах не влияют на работу набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2.
13. Функциональные (диагностические) характеристики набора реагентов «SARS-CoV*2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2
Для оценки диагностических характеристик набора реагентов было проведено исследование 411
ретроспективных деидентифицированных клинических образцов (мазки из носоглотки, ротоглотки (горла), а
также смещанные образцы, полученные из мазков из носоглотки и ротоглотки), из которых 193
положительных по наличию РНК SARS-CoV-2 и 218 отрицательных.
Все образцы были слепыми и рандомизированными. Результаты тестирования приведены в таблице
Х«2.
Таблица №2. Исследование диагностической чувствительности и специфичности.
Вид исследуемого материала Сравнительный анализ
Образцы верхних дыхательных путей
(мазки из ротоглотки, носоглотки или
смешанные образцы, полученные из
мазков из ротоглотки и носоглотки)
Положительный Отрицательный
SARS-CoV-2
RNA-
DETECTION-1F
Положительный 193 0
Отрицательный 0 218
Диагностическая чувствительность 193/193 (ДИ 95%) - 100% (99,98%-100,0%)
Диагностическая специфичность 218/218 (ДИ 95%) - 100% (99,98%-! 00,0%)
Диагностические характеристики набора реагентов были оценены как 100% (ДИ 95%: 99,98%-100,00%)
диагностическая чувствительность и 100% (ДИ 95%: 99,98%-100,00%) диагностическая специфичность для
образцов верхних дыхательных путей. Не наблюдалось ложноположительных и ложноотрицательных
результатов при проведении ОТ-ПЦР-РВ с использованием набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-
DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2.
14. Предупреждения и рекомендации при работе с набором «SARS-CoV-2 RNA-DETECT10N-1F»
ФОРМА 1 и ФОРМА 2
14.1. Рекомендации при работе с набором
• Применять набор реагентов строго по назначению, согласно данной инструкции;
• При удалении пробирок, содержащих продукты ПЦР, недопустимо их открывание и
разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР ла^раторной
зоны, оборудования и реагентов;
• Всегда использовать защитные перчатки, профессиональную одежду, защитные очки и т. д.
При работе с образцами и реагентами для проведения исследований следить за тем, чтобы реагенты не попали
на кожу, в глаза, на слизистые. При контакте с ними немедленно промыть большим количеством воды.
Необходимо тщательно мыть руки после работы с образцами и реагентами;
• При переносе клинического материала из пробирок, флаконов в новые использовать только
отдельные одноразовые стерильные наконечники с аэрозольными барьерами;
• Использовать расходные материалы (пластиковые пробирки и наконечники) только с
маркировкой «DNase-, RNase-free»;
• Предотвращать возможную контаминацию реагентов, следуя стандартным процедурам,
включая использование средств индивидуальной запщты и разобщение зон обработки образцов, экстракции
нуклеиновых кислот и зоны постановки ПЦР-РВ;
• Положительный контроль к мишени гена N (ПКО-В) может вызвать контаминацию, если с
ним обращаться неосторожно. ПКО-В рекомендуется хранить отдельно от всех других реагентов и образцов;
• Не использовать набор реагентов, если упаковка повреждена или пробирка с реактивом
протекает (имеется риск контаминации или снижения производительности, что может привести к
неправильной оценке результатов);
• Не смешивать разные серии реагентов;
• Не использовать набор реагентов по истечении срока годности;
Страница 14 из 24
--- стр. 27 ---
С У Л л л в л ь
UMip Инновационных
бйотехнопогий
• Не использовать реагенты других производителей;
• После работы обрабатывать поверхности 0,5% гипохлоритом натрия (отбеливателем),
разбавленным деионизированной или дистиллированной водой.
14.2. Требования безопасности
Лаборатории, выполняющие исследования по определению РНК к коронавирусу SARS-CoV-2, обязаны
обеспечить безопасность работы в соответствии с требованиями законодательства в сфере санитарно-
эпидемиологического благополучия. Работа с исследуемыми образцами, при необходимости, должна
проводиться с соблюдением требований МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
групп патогенности», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию
территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий», МР 3.1.0169-20 «Лабораторная диагностика COV1D-19», BMP «Профилактика, диагностика и
лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
• рассматривать исходные исследуемые образцы биологического материала как инфекционно
опасные;
• инактивировать исходные исследуемые образцы биологического материала, при необходимости, в
соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 "Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий";
• Необходимо одновременно обеспечить соблюдение персоналом правил биологической безопасности
и требований к организации и проведению данных работ с целью предотвращения контаминации
положительным контролем ПКО-В исследуемых проб, помещений и оборудования;
• При работе с набором реагентов соблюдать требования Правил проведения лабораторных
исследований, утверждённых Приказом Минздрава России от 18.05.2021 N 464н «Об утверждении Правил
проведения лабораторных исследований» и ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования
безопасности»;
• Потенциальный риск применения набора реагентов по Номенклатурной классификации
медицинских изделий, утвержденной Приказом Минздрава Российской Федерации № 4н от 6 июня 2012 года
(в редакции Приказа Минздрава России от 25.09.2014 N 557н) - класс 3;
• Все использованные материалы, инструменты и оборудование, рабочее место
дезинфицировать в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3686-21 и МУ-287-113;
• Утилизация набора реагентов с истекшим сроком годности и отработанных препаратов
должна соответствовать требованиям СанПиН 2.1.3684-21.
14.3. Требования охраны окружающей среды
• Набор реагентов не содержит веществ и материалов, требующих обеспечения специальных
мер безопасности, и не представляет опасности для людей в течение всего срока годности;
• Набор реагентов не требует специальных мер безопасности при воздействии таких
предсказуемых факторов, как внешние электромагнитные поля, электростатические разряды, излучение
(электромагнитное, ионизирующее, иное), атмосферное давление и его перепады, влажность и температура
воздуха;
• Набор реагентов не требует специальных мер безопасности относительно риска
электромагнитных помех, поскольку в состав набора реагентов не входят и в результате применения не
появляются какие-либо источники излучения;
• Все компоненты набора реагентов нетоксичны для человека в используемых концентрациях.
Реагенты, входящие в состав набора реагентов, безопасны для окружающей среды, не содержат цианид и азид
натрия, а также другие вредные вещества;
• Набор реагентов не содержит: лекарственных средств для медицинского применения,
материалов животного и (или) человеческого происхождения, материалов, которые являются
канцерогенными, мутагенными или токсртчны м и , возможное выделение или вымывание которых приводит к
сенсибилизации, аллергической реакции или отрицательно влияет на репродуктивную функцию.
15. Утилизация отходов
Серии (партии, LOT) наборов реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат.
Уничтожение и утилизацию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.3684-
21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений,
Страница 15 из 24
--- стр. 33 ---
....'^Аллель
UcHip Инномционных
бмотехнопогий
один раз ДЛЯ каждой партии извлеченных образцов РНК. Для ОКО должно регистрироваться отсутствие
сигнала флуоресценции на канале детекции FAM и детектироваться положительный сигнал по каналу HEX
(см. п. 17.1.2; рис.2в);
• В случае детекции положительного сигнала флуоресценции для образца ОКО (см. п. 17.1.2)
по каналу детекции РАМ необходимо повторить всю постановку для клинических образцов с этапа
экстракции РНК, предварительно приняв меры по антиконтаминации;
• Отрицательный контроль этапа амплификации ПЦР-РВ (К-) необходим для контроля
контаминации образцов на этапе сборки реакционной смеси, а также контаминации реагентов для постановки
ОТ-ПЦР-РВ. К- состоит из деионизованной воды, свободной от нуклеаз, добавленной в качестве образца в
реакционную смесь. Отрицате;1ьный контроль следует ставить один раз для каждой партии экстрагированных
образцов РНК. Для К- должно регистрироваться отсутствие сигнала флуоресценции на обоих каналах
детекции, РАМ и HEX (См. п. 17.1.2; рис.2а);
• В случае детекции положительных сигналов флуоресценции для образца К- (см. п. 17.1.2),
необходимо повторить всю постановку для клинических образцов с этапа сборки реакционной смеси и
постановки ОТ-ПЦР-РВ, предварительно приняв меры по антиконтаминации;
• Положительный контроль к мишени гена N (ПКО-В) - положительный контроль этапов
вьщеления, обратной транскрипции и амплификации ПЦР-РВ. ПКО-В представляет собой искусственную
РНК в белковой оболочке, несущую фрагмент гена N-белка вируса SARS-CoV-2. ПКО-В в качестве образца
должен проходить через всю процедуру выделения РНК, в соответствии с инструкцией производителя набора
реагентов для выделения РНК. Для ПКО-В должен регистрироваться положительный сигнал флуоресценции
на каналах детекции РАМ и HEX (см. п. 17.1.2; рис. 26);
• Отсутствие положительных сигналов по одному или обоим каналам детекции для ПКО-В (см.
п. 17.1.2) говорит о неудовлетворительном прохождении этапа выделения РНК, обратной транскрипции или
амплификации ПЦР-РВ, что может быть связано с нарушениями в процессе приготовления реакционной
смеси или нарушением режима хранения реагентов. В зависимости от результатов, полученных для других
контрольных образцов, необходимо повторить всю постановку для клинических образцов с этапа выделения
РНК, приготовления реакционных смесей или постановки ОТ-ПЦР-РВ;
• Внутренний контроль (BKO-ms2) - необходим для контроля эффективности этапа выделения
РНК и прохождения реакции ОТ-ПЦР-РВ. Он служит контролем, гарантирующим, что в каждом образце
присутствует выделенная РНК, процесс ОТ-ПЦР прошел успешно и в образцах отсутствуют ингибиторы
ПЦР. Внутренний контроль должен давать положительный результат для мишени по каналу HEX (см. п.
17.1.2; рис.2в, 2г.) в каждом клиническом образце и отрицательном контрольном образце выделения ОКО.
• Отсутствие положительного сигнала по каналу HEX, при отсутствии сигнала по каналу РАМ,
для клинических образцов (см. п. 17.1.2), говорит об неудовлетворительном прохождении этапа выделения
РНК, реакции ОТ-ПЦР, и возможном наличии ингибиторов в образце. Необходимо повторить исследование
для образцов с этапа экстракции РНК или взятия биоматериала (выполняется последовательно).
Сводная таблица контроля качества при успешной постановке образцов
CtFAM Ct HEX
(ген N) (мишень BKO-ms2)
ОКО - + (Ct<37)
к- (ddHiO) - -
ПКО-В + (Ct<37) + (Ct<37)
Исследуемые образцы отрицательные - (Ct>37) + (Ct<37)
Исследуемые образцы положительные + (Ct<37) + /-
18. Условия хранения и транспортировки
18.1. Условия хранения.
18.1.1. Набор реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1P» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 должен храниться при
температурном режиме +2...+8®С в защищенном от света месте в течение всего срока годности. Срок
годности набора реагентов — 12 месяцев.
18.1.2. Срок хранения реагента МЕМ из набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 2
после удаления герметизирующей пленки составляет 24 часа.
18.1Л. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Срок годности и условия
Страница 21 из 24
--- стр. 34 ---
С,||<Йллель
Центр Инмоымионных
Биотеютологий
$
Хранения вскрытых реагентов соответствуют сроку годности и условиям хранения, указанным на этикетках
для невскрытых реагентов.
18.2. Транспортирование
18.2.1. Набор реагентов «SARS-CoV-2RNA-DETECTION-lF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 транспортируют всеми
видами транспорта (в закрытых железнодорожных вагонах, в отапливаемых герметичных отсеках самолетов
и автомобильным транспортом) по правилам перевозок грузов соответствующих транспортных ведомств.
Условия транспортирования набора реагентов и его комплектов должны соответствовать условиям хранения!
18.2.2. Допускается транспортировка набора реагентов при температурном режиме +2...+8 ®С.
18.2Д. Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не подлежат.
19. Гарантии производителя
Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных характеристик набора
реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение
установленного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения.
Срок годности набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-1F» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 составляет 12
месяцев с даты изготовления набора реагентов. Требования к транспортировке, хранению и применению
набора реагентов «SARS-CoV-2 RNA-DETECTION-IF» ФОРМА 1 и ФОРМА 2 указаны в п.18 настоящей
инструкции.
20. Порядок подачи рекламаций
Рекламации на специфические и физические свойства набора реагентов направлять в адрес
предприятия-изготовителя: Общество с ограниченной ответственностью «Аллель Центр Инновационных
Биотехнологий» (ООО «Аллель»), 123458, РФ, г. Москва, ул. Твардовского, дом 8, помещение V, комната 8
Тел. +7(495)780-92-96, lab@allel.tech.
0
Страница 22 из 24
--- стр. 35 ---
щ УАллель
Цен1рИнноиционных
Биотехнологий
21. Список обозначений
I
Символ
0 )
мм
ЕМ
ВКО-т$2
ПКО-В
К-
ПЛАНШЕТ
DIL
МЕМ
IVD
LOT
V
X
□ а
А
п
22. Сокращения и обозначения
Значение символа
Телефон
Mastermix • смесь праймеров и зондов в буферном
растворе^ М V • W
Enzyme mix - смесь ферментов обратной
транскриптазы MMLV и Taq полимеразы
D l/’r » ___О ................................« ___________________________BKO-ms2 - внутренний контроль экстрающи РНК
из клинических образцов
ПКО-В - положительный контрольный образец к
мишени гена N вируса SARS-CoV-2
Отрицательный контрольный образец ПЦР-РВ
Планшет/стриппированные пробирки для
проведения ОТ-ПЦР-РВ реакции
Дилюент - состав для растворения
лиофилизованной формы МЕМ
МЕМ - лиофилизированная смесь для
амплификации
Медицинское изделие для диагностики in vitro
Код партии
Использовать до
Содержимого достаточно для проведения п тестов
Предел температуры
Номер по каталогу
Обратитесь к инструкции по применению
Осторожно! Обратитесь к инструкции по
применению
Верх
SARS-CoV - Severe acute respiratory syndrome coronavirus
(коронавирус вызывающий острый респираторный синдром)
SARS-CoV-2
- Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2
(коронавирус вызывающий острый респираторный синдром 2),
эквивалентные названия COVID-19 virus, 2019-nCoV, Wuhan seafood
market pneiunonia virus
COVID-19 - COrona Virus Disease 2019, коронавирусное заболевание 2019
in vitro - эксперименты с биологическим веществом (клетками или тканями) вне живого
организма
nCoV - novel coronavirus, новый коронавирус
MERS - Ближневосточный респираторный синдром
Страница 23 из 24
--- стр. 36 ---
....... у
лУ А/ А л л е л ь
Центр Ит юещ монных
биогежнопогнй
i
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени
пко-в - положительный контрольный образец выделения
ОТ-ПЦР-РВ - обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
от • обратная транскрипция
ОРВИ - острые респираторные вирусные инфекции
око - отрицательный контрольный образец
ИВ - интерферирующие вещества
НК - нуклеиновые кислоты
РНК - рибонуклеиновая кислота
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
1дак - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота
ВКО - внутренний контрольный образец
к- - отрицательный контрольный образец
i
23. Стандарты соответствия
-ГОСТ Р 51088-2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-
системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей
документации»;
-ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 «Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая
изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального
применения;
-ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 «Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая
изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования;
-ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020 Изделия медицинские. Символы, применяемые при маркировании медицинских
изделий, на этикетках и в сопроводительной документации. Часть 1, Основные требования»
-ГОСТ Р ИСО 23640-2015 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов
для диагностики in vitro».
-ГОСТ Р 51352-2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний»;
-ГОСТ Р ЕН 13612-2010 «Оценка функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in
vitro».
Страница 24 из 24
--- стр. 37 ---