Набор реагентов для выявления РНК вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (ГенНил-РЭФ) по ТУ 9398-024-01898109-2011 в составе (см. приложение на 1 листе): — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора от 20 г. № «УТВЕРЖДАЮ» ИПЧИ «Микроб» оспотребнадзора Кутырев В.В. 20 г. ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК ВИРУСА ЗАПАДНОГО НИЛА МЕТОДОМ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ (ГЕННИЛ-РЭФ) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для выявления РНК вируеа Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (ГенНил - РЭФ)», далее по тексту - набор реагентов «ГенНил - РЭФ», предназначен для выявления РНК вируса Западного Нила в биологическом и клиническом материале. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип действия. Выявление РНК вируса Западного Нила осуществляют на основании амплификации фрагмента кДНК вируса размером 106 п.н., комплементарного участку генома, кодирующему белок NS5. 2.2. Состав набора: Реактив Описание Объем (мл) Количество 1 2 3 4 ПЦР-смесь-1 (1 этап) прозрачная бесцветная жидкость, содержащая праймеры, дНТФ и натрия азид 0,25 1 пробирка ПЦР-смесь-1 (2 этап) прозрачная бесцветная жидкость, содержащая праймеры, дНТФ и натрия азид 0,4 1 пробирка ПЦР-смесь-2 прозрачная фиолетовая жидкость, содержащая Трис-НС1, аммония сульфат, магния хлорид, Tween-20, глицерин, бромфеноловый синий натриевая соль 0,75 2 пробирки Taq ДНК- полимераза прозрачная бесцветная жидкость, представляющая собой фермент с активностью 5 ед/мкл 0,02 1 пробирка ТЕ-буфер прозрачная бесцветная жидкость, содержащая трис-НС1, Ыаг-ЭДТА 1,0 3 пробирки --- стр. 2 --- 1 2 3 4ПКО ВЗН-гес — ------------------призрачная оесцветная жидкость, содержащая генно-инженерную конструкцию, несущую фрагмент ДНК, гомологичный участку нуклеотидной последовательности РНК вируса Западного Нила 0,08 1 пробирка Минеральное масло бесцветная вязкая жидкость, представляющая собой минеральное масло легкое белое, парафиновое 8,0 1 флакон Праймер ОТ прозрачная бесцветная жидкость, содержащая водный раствор специфического праймера для реакции обратной тоанскпипнии 0,15 1 пробирка Набор реагентов «ГенНил — РЭФ» пассчитян чя so Внимание! В состав «ГенНил - РЭФ» не входит набор реагентов для обратной транскрипции. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность. Набор реагентов «ГенНил - РЭФ» должен выявлять РНК вируса Западного Нила в биологическом и клиническом материале и не должен давать положительных результатов с гетерологичными вируеами. 3.2. Чувствительность. Набор реагентов «ГенНил - РЭФ» должен выявлять РНК вируеа Западного Нила в количестве не менее 1x10^ ГЭ/мл. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Использование набора реагентов «ГенНил - РЭФ» с истекшим сроком годности недопустимо. 4.2. Работу проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.1285 - 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», МУ 1.3.2569 -09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ*: т I Наименование Амплификатор Ламинарный бокс биологической безопасности класс II Основные характеристики или обозначения документации, производитель Амплификатор «Терцик», ЗАО «НПФ ДНК‘ технология», Россия Ламинарный бокс биологической безои^^нр!§5з«-*- класс II БАВп-«Ламид^-С-и|ц^^у системы», Россия тПЕРИМЕ!^ И ПРОИЗВОДСТВЕ А- к. Ни к и ф о р о в --- стр. 3 --- ПЦР-бокс Штатив IsoFreeze на О °С или термостат твердотельный с функцией охлаждения Бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) при проведении ПЦР- диагностики БАВ-ПЦР-«Ламинар-С» «Ламинарные системы», Россия Микроцентрифуга-встряхиватель Центрифуга лабораторная Термостат твердотельный Отсасыватель вакуумный медицинский с колбой-ловушкой Источник питания Камера для горизонтального электрофореза с заливочным устройством для подготовки геля Система гельдокументирования Дозатор 0,5-10 мкл Дозатор ГО - 100 мкл Дозатор 20 - 200 мкл Дозатор 100- 1000 мкл Штатив-подставка для дозаторов Штатив «рабочее место» для микропробирок на 0,6 мл Штатив «рабочее место» для микропробирок на 1,5 мл рН-метр Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 18°С Аквадистиллятор Микроволновая печь Ёмкость (для сброса отработанных расходньрс материалов) Штатив IsoFreeze двусторонний для пробирок 0,5 ' мл и 1,5-2 мл, 20 лунок, «SSI», США или термостат твердотельный с функцией охлаждения от 4 до 120 С, «Биоком», Россия Микроцентрифуга-встряхиватель «ТЭТА-2», «Биоком», Россия Центрифуга лабораторная «Mini-Spin», «Eppendorf» Германия ’ Термостат твердотельный от 25 до 100 ° С Теомо 24-15, «Биоком», Россия. Отсасыватель медицинский «ОМ-1», г. Ульяновск ' Россия Источник питания «Эльф-4» с напряжением 150-460 В, ЗАО «НПФ ДНК-технология», Россия «SE-2» (ООО «Компания Хеликон», Россия) Система гельдокументирования «GelDoc 2000» «BioRad», США _________ Дозатор многофункциональный 1 -канальный механический 0,5 - 10 мкл, «Biohit». Финляндия Дозатор многофункциональный 1-канальный механический 10-100 мкл, «Biohit». Финлянлия Дозатор многофункциональный 1-канальный механический 20 - 200 мкл, «Biohit», Финлянлия Дозатор многофункциональный 1-канальный- 1 ^ -------..-^*д^***«х* 1 1\ЫХ10Л1>П0Ш механический 100- 1000 мкл, «Biohit». Финлянпия Штатив-подставка для дозаторов универсальная на 5 дозаторов, «Хеликон», Россия Штатив «рабочее место» для микропробирок на 0,6 мл, 10x20 мест, «Хеликон», Россия Штатив «рабочее место» для микропробирок на 1,5 мл, 5x10 мест, «Хеликон», Россия рН-метр «Sartorius РТ-10», Германия. Диапазон измерения: величины pH от 0,00 до 14,00; температуры от минус 5 до 105 °Г У У л ТТЛ ■* » I ) — ^ ^ ^ ‘ --- «Атлант», Россия Аквадистиллятор ДЭ-25-1, ОАО «Биомашприбор», Россия «Samsung», Корея «Гем», Россия * Примечание: допускается применение оборудования другого типа п хапактепигтиь-яхд и*» --------------------------------- ^^PEKfOP,характеристикам не уступающего рекомендуемому П О ЭКСПЕРИМЕНТ И производственной А- к.НИКИФОРОВ --- стр. 4 --- 6. АН АЛ И ЗИ РУЕМ Ы Е ОБРАЗЦЫ Материалом для исследования служат: биологический материал - суспензии комаров, клещей, суспензии органов животных (мозг, селезенка, печень); клинический материал - сыворотка или плазма крови, лейкоцитарная фракция крови, ликвор, материал, полученный при аутопсии (кусочки головного и спинного мозга,' селезенки, печени, лимфатических узлов). Материал для исследования забирают в стерильные емкости с герметично завинчивающимися крышками в соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности», МУ 3.1.3.2600-10 «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации», МУ 3.1.1027-01 «Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих - переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций». Транспортирование материала в лабораторию для исследований проводят при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036 - 95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». При длительной транспортировке - материал помещают в сосуд Дьюара с жидким азотом, или контейнер с сухим льдом. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. 6.1. Подготовка проб 6.1.1 Пробы комаров Комаров, объединенных в пробы до 50 щт (в зависимости от вида, места сбора), растирают в охлажденной стерильной фарфоровой ступке, добавляют 1-2 мл охлажденного 0,9% раствора натрия хлористого. Переносят по 1,0 мл жидкой фазы в микропробирки объемом 1,5 мл. Образцы осветляют отстаиванием или центрифугированием при 3000 об/мин в течение 2 мин. Для выделения РНК < мл надосадочной жидкости. Оставщийся материал хранят при температуре не выйН?^^ 70 °С в течение 1 года. ЗАМ. ДИРЕКТО* П О ЭКСПЕРИМЕНТ И ПРОИЗВОДСТВЕННА к- 1.Е.1КИФ0Р0В --- стр. 9 --- 4 Л мкл.(Н.|), где N - необходимое колннесгво образцов. Полунениу. смесь гнгагельио перемеш„вак,т и переиоеяг „о 23 мкл в полгоговленные пробирки объемом 0.6 мл. Во все пробирки сверху добавляют каплю минерального масла. Затем во все пробирки „од масло вносят, используя „акоиечиики с аэрозольиьгм арьером. по 2 мкл амплификата из соответствующей пробирки первого этапа. Запускают „а термоциклере типа «Терцик» программу 2 этапа амплификации: Этапы программы 2. 3. 4. Температура 95 °С 95 °С 94 °С 52 °С 72 °С 5. 72 °С 10 °С Время 5 мин пауза Количество повторов 30 сек 30 сек 30 сек 5 мин 1 35 первом этапе) - 2 мкл. Применяется матричное регулирование температуры. ^ Когда температура в ячейках достигнет 95 «С (режим паузы), пробирки помещают в ячейки прибора, закрывают крышку и снимают программу с паузы. По окончании ПЦР реакционную смесь (продукты реакции) хранят при температуре от 2 до 8 °С. ^ 8. РЕГИСТРАЦР1Я РЕЗУЛЬТАТОВ Регистрацию результатов ПЦР осущеетвляют методом электрофореза в 1.7 % агарозном геле с использованием коммерческого набора реагентов «ЭФ., (ООО «ИитерЛабСервис». Россия). Работу проводят в соответствии с инструкцией к набору. Электрофорез проводят при градиенте напряжения 10 В/см в течение 30-45 мин. ЗАМ. ДИРЕКТО ПО ЭКСПЕРИМЕ И ПРОИЗВОДСТВЕ к Л iiKHpJPOB --- стр. 10 --- 9. У Ч ЕТ РЕЗУЛ ЬТАТО В Результаты учитывают на основании наличия (или отсутствия) на электрофореграмме специфичных полос амплифицированных фрагментов нуклеиновых кислот путем сравнения с полосой фрагмента ДНК (размером 106 п.н.) положительного контрольного образца. Для интерпретации результатов реакции используют приведенную ниже таблицу. Учет результатов исследуемых проб осуществляют только в случае соответствия положительного (К+) и отрицательного (К-) контролей амплификации, а также отрицательного контроля вьщеления (ОКВ) параметрам, приведенным в таблице. Пробы/ контроли Выявление фрагмента ДНК размером 106 п.н. Результат анализа ОКВ, - Результаты анализа подлежат учету. Контаминация реактивов положительно реагирующей РНК, кДНК или ампликонами отсутствует. К- + Результаты анализа учету не подлежат. Контаминация реактивов положительно реагирующей РНК, кДНК или ампликонами. К+ . + Результаты анализа подлежат учету - Результаты анализа учету не подлежат + Результат анализа положительный. В пробе выявлена РНК вируса ЗН Исследуемые - Результат анализа отрицательный. В пробе РНК вируса ЗН не обнаружена пробы Выявляется полоса, не соответствующая полосе положительного контроля Результат анализа отрицательный. В пробе РНК вируса ЗН не обнаружена i ! ‘ f ЗАМ. ДИРЕКТ01|А|| по ЗКСПЕРИМЕН и ПРОИЗВОДСТВЕН! А. К-ЙАКИФОРОВ --- стр. 11 --- 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА Условия хранения — ПЦР-смесь-1 (1 этап), ПЦР-смесь-1 (2 этап), ПЦР-смесь-2, ТЕ- буфер. Минеральное масло - при температуре от 2 до 8 °С, Taq ДНК-полимераза, ПКО ВЗН-гес и Праймер ОТ - при температуре от минус 16 до минус 20 °С. Срок годности - 6 месяцев. Рекламации на качество «Набора реагентов для выявления РНК вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (ГенНил — РЭФ)» в течение срока годности направлять в ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» (410005, г. Сарато^,^8Я^^^^^^^итетская, 46 Тел. (845-2) 51-59-65). Зам. директора по экспериментальной и производственной работе Зав. кафедрой клинической лабораторно диагностики ГБОУ ДНО РМАПО Минздравсоцразвития России I _______Долгов В.В. ов А.К. удостоееряю: С п е ц и а л и ^ о jja^psM РМАПО Подпись Директор ФКУЗ «Противочумный центр» Роспотребнадзора Безсмертный В.Е. ЗАМ. ДИРЕКТОРА ПО ЗКСПЕРИМЕН И ПРОИЗВОДСТВЕНН А - к. Н И К И Ф О Р О В