Набор реагентов для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 ("SARS-CoV-2 ddPCR Kit") методом цифровой капельной ПЦР (ddPCR) в биологическом материале — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 10 ---
^ZU§ Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, с
принадлежностями (Хе ФСЗ 2008/03399 от 21 июня 2016 года).
Ридер «QX200 Droplet Reader» для детекции флюоресценции
капель в методе цифровой капельной ПЦР с принадлежностями, в
составе
Необходимое общее лабораторное оборудование, не предоставленное в
наборе Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
V -- . Описание
Регулируемые пипетки (Rainin или Eppendorf)
1-10 мкл
10-100 мкл
20 - 200 мкл
100 - 1000 мкл
Регулируемые 8-канальные пипетки (Rainin или
Eppendorf)
10 - 50 мкл, 10 - 100 мкл или 20 - 200 мкл
Микроцентрифуга
Центрифуга для планшета с микролунками
Вортекс-миксер
ОБЩИЕ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ
• Результат теста должен интерпретироваться врачом вместе с клиническими данными и
результатами других лабораторных тестов.
• Утилизация диагностических наборов; все образцы и использованныё набор имеют
инфекционны(Г риск. При утилизации диагностических наборов соблюдаете местныё законы об
утилизации инфицированного оборудования или правила лаборатории.
• Организация лабораторной диагностики COVID-19 осуществляется в соответствии с
требованиями санитарного законодательства по работе с микроорганизмами II групп
патогенности.
• к работе с тест-системами для диагностики COVID-19 в лаборатории организаций допускаются
специалисты, давшие письменное согласие и прошедшие инструктаж, проведенный
сотрудниками лабораторий Роспотребнадзора, имеющих санитарно-эпидемиологическое
заключение на работу с возбудителями инфекционных заболеваний человека II группы
патогенности.
• Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет работник медицинской организации,
обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала,
подозрительного на зараженность микроорганизмами II группы патогенности.
• Все образцы, собранные для лабораторных исследований, должны рассматриваться как
потенциально инфекционные, и медицинский персонал, который собирает или перевозит
клинические образцы, должен строго соблюдать требования биологической безопасности как
при работе с микроорганизмами II группы патогенности. Медицинские работники, которые
собирают или транспортируют их в лабораторию,должны быть обучены практике безопасного
обращения с биоматериалом, строго соблюдать меры предосторожности и использовать
соответствующие средства индивидуальной зашиты (СИЗ). При работе с образцами должны
учитываться требования СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1—II групп
патогенности (опасности)».
• Перевозка образцов должна осуществляться в соответствии с требованиями санитарного
законодательства по отношению к микроорганизмам И группы патогенности.
• При работе с набором реагентов следует обращаться к Методическим рекомендациям МР
3.1.0169-20 Лабораторная диагностика COVID-19 (в редакции МР 3.1.0174-20 «Изменения К® 1 в
МР 3.1.0170-20 «Лабораторная диагностика COVID-19», утвержденных Роспотребнадзором
--- стр. 11 ---
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
30.04.2020).
Для диагностики in vitro (IVD) в случае разрешения на использование в экстренных случаях.
Только для профессионального использования.
Положительные результаты указывают на присутствие РНК SARS-CoV-2.
Лаборатории в США и на принадлежащих им территориях обязаны сообщать обо всех
положительных результатах в соответствующие органы здравоохранения.
Обработку всех биологических образцов следует осуществлять таким образом, как если бы они
были способны передавать возбудителей инфекции, используя безопасные лабораторные
процедуры, аналогичные представленным в публикации Министерства здравоохранения и
социальных служб США (IfflS) (CDC) 21-1112, Биологическая безопасность в
микробиологических и биомедицинских лабораториях, а также в документе Института
клинических и лабораторных стандартов (CLSI) М29-А4, Защита лаборантов от воздействия
инфекционных заболеваний, передающихся через кровь, биологические жидкости и ткани.[1,2]
Выполняйте тщательную очистку и дезинфекцию всех рабочих поверхностей
свежеприготовленным раствором 0,5% гипохлорита натрия (10% хлорная известь) в
деионизированной или дистиллированной воде, а затем 70% спиртом.
Чтобы свести к минимуму загрязнение нуклеиновой кислотой, выполняйте дезинфекцию
рабочего места, пипетторов и оборудования на регулярной основе и изолируйте зону обработки
образцов и РНК/ДНК от зоны проведения анализа.
Оптимизируйте рабочий процесс и рабочее пространство, чтобы свести к минимуму риск
загрязнения при переносе от заверщенных реакций ПЦР.
Убедитесь, что автоматический генератор и ридер капель установлены в специальньЕХ местах,
отделенных друг от друга, во избежание загрязнения ампликона.
Подготовку к процедуре анализа и добавление матриц в разных местах выполняйте с
использованием разных пипетторов.
При работе с химическими соединениями и биологическими образцами соблюдайте
лабораторные правила техники безопасности.
При работе с реагентами и их транспортировке меняйте защитные перчатки на регулярной
основе.
Несоблюдение процедур и условий, представленных в настоящем документе, может привести к
получению неверных результатов и к неблагоприятным последствиям.
Не заменяйте реагенты для теста Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR другими реагентами.
Настройку или добавление матриц необходимо выполнять при отсутствии
рибонуклеазы/дезоксирибонуклеазы.
Убедитесь, что все оборудование проходит регулярное обслуживание и калибровку согласно
инструкциям производителя.
Используйте наконечники пипеток и реагенты, не содержащие нуклеазы; регулярно очищайте
пипетторы.
Для получения оптимальных результатов убедитесь, что используется только рекомендуемый
протокол термоциклирования.
Не используйте воду, обработанную диэтилпилокарбонатом, для амплификации ПЦР.
Строго следуйте процедурам и рекомендациям для проведения тестирования надлежащим
образом. Любые отклонения от процедур и рекомендаций могут повлиять на оптимальные
характеристики теста.
Отсутствие надлежащего контроля при переносе образцов в процессе их обработки может
привести к ложноположительным результатам
СБОР, ТРАНСПОРТИРОВКА И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Для получения точных результатов тестирования необходимо обеспечить надлежащий сбор, хранение и
транспортировку образцов. Для обеспечения качества образцов и результатов настоятельно рекомендуется
пройти обучение правильным процедурам сбора образцов. В качестве подходящего ресурса поддержки
можно использовать стандарт CLS1 ММ13-А.
1. Критерии приемлемости образцов
• Сбор образцов необходимо осуществлять в стерильные пробирки с соответствующей маркировкой, с
последующей отправкой пробирок в упаковках с замороженным гелем при температуре от 2°С до 8®С.
2. Критерии отбракованных образцов
• Образцы, которые не были предварительно одобрены для тестирования, и образцы с неправильной
маркировкой, не подлежат тестированию до получения необходимой информации.
3. Сбор образцов
• См. внутренние рекомендации по сбору, обработке и тестированию клинических образцов пациентов.
X 10000128901 ред. А
--- стр. 12 ---
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
исследуемых на носительство нового коронавируса 2019 (2019-nCoV) https://www.cdc.gov/coronavirus/20l9-
nCoV/guidelines-clinical-specimens.html
• Соответствующие методики можно найти в инструкциях изготовителей устройства для сбора образцов.
• Образцы мазков следует собирать только тампонами с синтетическим наконечником, например, из нейлона
или материала Dacron ®, и алюминиевым или пластиковым стержнем. Не допускается использование
тампонов из альгината кальция, а также не рекомендуется использовать ватные палочки с деревянными
стержнями. Немедленно поместите тампоны в стерильные пробирки, содержащие 2-3 мл транспортной
среды для вирусов или универсальной транспортной среды.
4. Транспортировка образцов
• Упаковку, отгрузку и перевозку образов необходимо осуществлять в соответствии с действующей
редакцией Правил обращения с опасными грузами Международной ассоциации воздущного транспорта
(IATA). При отправке потенциальных образцов с 2019-nCoV в испытательную лабораторию соблюдайте
правила перевозки биологического вещества UN 3373, Категория В.
• Образцы следует хранить при температуре 2-8 *^0 и отправлять в испытательную лабораторию на ночь на
пакете со льдом. Если образец замораживают при температуре
-70°С или ниже, то его следует отправлять в испытательную лабораторию на ночь на сухом льх 1у.
5, Хранение образцов
• Образцы могут храниться при температуре 2-8°С в течение 72 часов после сбора.
• Если ожидается задержка экстрагирования, то образцы следует хранить при температуре -70®С или ниже.
• Экстрагированную нуклеиновую кислоту следует хранить при температуре 4®С, если она будет
использоваться в течение 4 часов, или при температуре -70°С и ниже, если она должна храниться более 4
часов.
ПОДГОТОВКА И ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ
Наборы для диагностики SARS-CoV-2 методом цифровой капельной ПЦР
• Хранить при температуре 4®С, при долговременном хранении рекомендуется поддерживать температуру
-20°С.
• Разморозку всех компонентов рекомендуется осуществлять на льду в течение 30 минут.
• Тщательно перемешайте компоненты, поместив каждую пробирку в вихревую мешалку, в течение 30 сек,
убедившись в их однородности, поскольку при хранении при температуре
-20*С может образоваться градиент концентрации.
• Центрифугируйте в течение короткого времени, собрав содержимое на дне каждой пробирки.
Подготовьте аликвоту смеси для проведения необходимого количества реакций (Таблица 7).
Соберите все требуемые компоненты, за исключением образца, диспенсируйте аликвоты в каждую лунку, и
в завершение добавьте образец в каждую лунку.
Перед процессом генерации капель реакции должны быть установлены на льду, а фермент RT должен
храниться при температуре -20°С все время или на льду в процессе использования.
КОНТРОЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Контрольные образцы, входящие в комплект поставки набора для диагностики SARS-CoV-2 методом цифровой
капельной ПЦР от Bio-Rad:
1. Образец «без матрицы» представляет собой (отрицательный) контроль, необходимый для обнаружения
загрязнения реагента и/или окружающей среды, в котором вместо клинического образца используется вода, не
содержащая РНКазы /ДНКазы, для каждой партии экстрагированных образцов и как минимум в одной лунке на
каждом 96-луночном планшете.
2. Контроль с положительной матрицей необходим для обнаружения существенного сбоя процесса обратной
транскриптазы и/или проблем с реагентом, включая целостность праймера и зонда. В процессе тестирования
будет использоваться стандарт SARS-CoV-2 от компании Exact Diagnostic, при производстве которого
использовались синтетические транскрипты РНК, содержащие пять генов-мишеней: гены Е, N, ORF1 аЬ, RdRP и S
SARS-CoV-2. каждый в количестве 200000 копий/мл на фоне геномной ДНК человека. Материал вводят в
матрикс, близкий к образцу, для которого требуется экстракция нуклеиновой кислоты, аналогично клиническому
образцу пациента (аликвота 100 мкл на экстракцию). Положительный контроль будет использоваться в
концентрации, близкой к пределу детектирования (<5х LoD) теста, и тестироваться как клинический образец. В
каждую партию экстрагированных образцов должен быть включен один контроль с положительной матрицей,
помещенный как минимум в одну лунку на каждом 96-луночном планшете.
3. Контроль экстракции необходим для обнаружения отказа на этапе экстракции. В процессе тестирования будет
использоваться отрицательный образец SARS-CoV-2 от компании Exact Diagnostic, при производстве которого
использовались геномные РНК и ДНК человека, введенные в матрикс, близкий к образцу, для которого требуется
экстракция нуклеиновой кислоты, аналогично клиническому образцу пациента (аликвота 100 мкл на экстракцию).
В каждую партию экстрагированных образцов должен быть включен один контроль экстракции, помешенный как
минимум в одну лунку на каждом 96-луночном планшете.
--- стр. 34 ---
T T T irrC T r
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
H 1
Oa^hboafd
Plate Editor
Plate View
Plate 2D
ID Amplitude
15. При выборе применяются кластерные назначения. Окончательная конфигурация будет выглядеть как на
изображении ниже.
Примечание. После применения обозначения кластера ко всему планшету необходимо выбрать каждую
лунку и проверить соответствующие кластеры. Используйте инструмент «Щклический переход в режим
пороговой кластеризации», чтобы переназначить плотные кластеры для каждой лунки и проверить неточную
кластеризацию или кластеры, которые не были полностью выбраны.
19. Количественные данные представлены в окне «Данные о лунке» в правом верхнем углу. Используйте
значок с тремя полосами в верхнем правом углу таблицы «Данные скважины» для экспорта данных в Excel /
CSV. Это также можно сделать через вкладку «Таблица данных» слева.
20. Концентрация указывается в копиях / мкл конечной реакции IX ddPCR для каждой из мишеней (N1, N2
h RP).
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Необходимо проверить все испытательные контрольные образцы, прежде чем интерпретировать результаты
пациента. Если контрольные образцы не действительны, результаты пациента не могут быть
интерпретированы.
L Контроли для теста на SARS-CoV-2 методом цифровой капельной ПЦР от Bio-Rad -
положительные, отрицательные и экстрагированные
Безматричный контроль (NTC)
Вместо РНК безматричный контроль (NTC) включает в себя воду, не содержащую нуклеазу, при
--- стр. 35 ---
Гг/Г# Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
использовании в одноступенчатой реакции ПЦР с обратной транскрипцией. Реакции безматричного
контроля для смеси триплексных зондов не должны демонстрировать положительный сигнал в каком-
либо канале (HEX или РАМ) для любой из трех тестируемых мишеней, N1, N2 или RP. Если какая-либо
из реакций безматричного контроля демонстрирует положительный сигнал, возможно, произошло
загрязнение образца. Аннулируйте результаты и повторите анализ с остаточной экстрагированной
нуклеиновой кислотой, строго соблюдая рекомендации. Если результат повторного теста
положительный, повторно экстрагируйте и протестируйте все образцы, которые были включены в эту
партию.
Положительный контроль SARS-CoV-2
Стандарт SARS-CoV-2 от компании Exact Dx используется в качестве положительного контроля и
состоит из РНК, транскрибированной in vitro, и дает положительный результат со следующими наборами
праймеров и зондов: N1, N2 (>28,8 копий/мкл и >170 положительных капель для каждой мишени N1 и
N2) и RP (> 10,8 копий/мкл и > 150 положительных капель).
Контроль экстракции
Отрицательный контроль SARS-CoV-2 от Exact Dx используется в качестве контроля экстракции. Когда
отрицательный контроль запускается с помощью теста на SARS-CoV-2 методом цифрового капельного
ПЦР от Bio-Rad, то он используется в качестве процедурного контроля экстракции РНК, чтобы
продемонстрировать успешное извлечение РНК. а также целостность экстракционного реагента.
Отрицательный контроль состоит из общего количества нуклеиновых кислот, экстрагированных из
неинфекционного культивированного клеточного материала человека. Очищенная нуклеиновая кислота
должна демонстрировать положительный результат с набором праймеров и зондов RP (>10,8 копий/мкл
и >150 положительных капель) и отрицательные результаты со всеми маркерами SARS-CoV-2 (^,1
копий/мкл и <1 положительной капли).
2. Исследование и интерпретация результатов образцов пациентов
Оценка результатов тестирования клинических образцов должна проводиться после исследования
положительного и отрицательного контроля и признания их действительными и приемлемыми.
Контроль считается действительным, если он соответствует ожидаемой концентрации копии/мкл и
количеству положительных капель, указанных в Таблице И. Если контроли недействительны,
результаты пациента не могут быть интерпретированы. Программа рассчитывает значение копий/мкл, а
также количество положительных капель. Учитывая, что все контроли демонстрируют надлежащие
характеристики, пользователь может использовать эти параметры, чтобы вручную определить,
присутствуют ли мишени N1 и N2 в образце, согласно Интерпретации результатов теста (Таблица 12).
Требуется, чтобы образец демонстрировал >5000 принятых событий, интерпретируемых как «SARS-
CoV-2 обнаружен», и >10000 принятых событий, интерпретируемых как «SARS-CoV-2 не обнаружен».
Образцы, количество принятых событий которых меньше этих пороговых значений, следует считать
недействительными. Интерпретация итогового теста представляет собой качественный анализ.
Ожидаемые xapaicrepHCTHKH контролей набора для диагностики SARS-CoV-2 методом капельной
ПЦР от Bio-Rad приведены в Таблице 11 (см. следующую страницу).
Таблица 11. Ожидаемая заданная эффективность контрольных образцов для испытания Bio-Rad SARS-CoV-
2 ddPCR
Тин
контро.1ьног
О обра^ця
]Тя1вание
внешнего
контроль
ною
образца 1
исно.тьзуггсяЛВ
моннюринга
SARS-<JoV-2 Внутренн
Ий
коитро.1ь
нын
П О К1
(чясл
Ожидаемый
затель ср/мкл и
9 пи.1ожнтелы11.1ж
каие^зь)
NJ N2' RP _JVI N2 1 UP
11олож>ггель
но
EDx
SARS-
CoV-2
Стандарт
Существенный
сбой реагента,
включав
целостность
праймера и
зонда
11оложитель
но
11оложитель
но
Положитель
но
>28,8
(>170)
>28,8
(>170)
>10.8
(>150)
Огрииатель)ю NTC
Загрязнение
реагента и (ти)
окружающей
среща
Отрицатель
но
Огрицатель
но
Отрицатель
но
Не обнар)'жец
xxxiv 10000128901 ред. A
--- стр. 36 ---
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Экстракция
EDx
SARS-
CoV-2
Огр1шателы1
О
Сбой процедуры
экстракции Отрицатель
но
Отрицатель
но
Положитель
но
<0,1*
(<1)
<0,1*
(<1)
>10,8
(>4)
* <0,1 (<1); значения ниже LoB для анализа ddPCR и считаются отрицательными для N1 и N2
Рнбонуклеаза P (внутренний контроль)
Все клинические образцы должны демонстрировать положительный сигнал от праймеров и зонда
рибонуклеазы Р, что указывает на присутствие гена рибонуклеазы Р человека. Отсутствие рибонуклеазы Р в
каких-либо клинических образцах может указывать на;
• Неправильную экстракцию нуклеиновой кислоты из клинических материалов, приводящую к
потере РНК и/или деградации РНК
• Отсутствие достаточного количества человеческого клеточного материала вследствие
ненадлежащего сбора или потери целостности образца
• Неправильную подготовку и выполнение анализа
• Непригодность реагента или неисправность оборудования
Если анализ RP не дает положительного результата для клинических образцов человека, интерпретация
выполняется следующим образом:
• Если N1 и/или N2 для SARS-CoV-2 являются положительными даже при отсутствии положительного RP,
результат следует считать действительным. Возможно, некоторые образцы могут демонстрировать
отсутствие капель, положительных по рибонуклеазе Р, вследствие малого количества клеток в исходном
клиническом образце. Отрицательный сигнал RP не исключает присутствия РНК вируса SARS-CoV-2 в
клиническом образце.
Если все маркеры SARS-CoV-2 И рибонуклеазы Р являются отрицательными, то для данного образца результат
следует считать недействительным. При наличии остаточного образца, повторите процедуру экстракции и
тестирования. Если после повторного тестирования все маркеры остаются отрицательными, запротоколируйте, что
полученные результаты являются недействительными и, по возможности, соберите новый образец.
Маркеры SARS-CoV-2 (N1 и N2)
• Когда все контроли демонстрируют ожидаемые характеристики, образец считается отрицательным, если все
маркеры SARS-CoV-2 (NI, N2) не демонстрируют положительных капель, И рибонуклеаза Р демонстрирует
положительные капли.
• Когда все контроли демонстрируют ожидаемые характеристики, образец считается положительным на SARS-CoV-
2, если маркеры SARS-CoV-2 N1 и/или N2 демонстрируют положительные капли. Результат для SARS-CoV-2
останется действительным вне зависимости оттого, является ли рибонуклеаза Р положительной или нет.
• Когда все контроли демонстрируют ожидаемые характеристики, но отсутствуют положительные капли для
^ маркеров SARS-CoV-2 (N1, N2) ИЛИ для рибонуклеазы Р, то результат является недействительным. РНК,
^ экстрагированную из образца, следует протестировать повторно. При отсутствии остаточной РНК, повторно
экстрагируйте РНК из остаточного образца и повторите тест. Если повторно протестированный образец
отрицателен для всех маркеров и рибонуклеазы Р, результат является недействительным, и следует рассмотреть
возможность сбора нового образца у пациента.
• Если контроль экстракции (SARS-CoV-2 отрицательный) положителен для маркеров N1 или N2, это означает, что в
процессе экстракции или обработки образца могло произойти загрязнение. Аннулируйте все результаты для
образцов, взятых вместе с контролем экстракции. Повторно извлеките образцы, контроль экстракции и проведите
повторный тест.
Табличная версия Руководства по интерпретации представлена в Таблице 12. Концентрация (копии/мкл) и количество
положительных капель отображаются в программе QuantaSoft Analysis Pro для каждой протестированной лунки. Для
облегчения интерпретации пользователь может обратиться к данной таблице.
Таблица 12. Руководство по интерпретации результатов теста Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
SARS-CoV-2 М
Ожидаемый
показатель ср/мкл
(кол-во
псьюжитсльных
капсльИ
SARS-CoV-2 М
Ожидаемый
, показатель ср/мкл
(кол-во
по.1ожнтельных
, капель!^ ..
RP
Ожидаемый
показатель
ср/мкл (кол-во
положительных
капель)
Расшифровка Действия
Отрицательно
<0,1
(<2)
Отрицательно
<0,1
(<2)
Положительно
>0,2
(>4)
SAKS-CoV-2 не
обнаружен
—
--- стр. 37 ---
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Положительно
>0,1
(>2)
Положительно
>0,1 или
(>2)
Положительный или
отрицательный
SARS-CoV-2
o6Hap>^CH,
Храните образцы при -70 “С и,
если требуется, обратитесь в
соответствующую
медицинскую лабораторию.
Отрицательно
<0.1
(<2)
Отрицательно
<0,1
(<2)
Отрицательно
<0.2
(>4)
11едействительно
Повторите экстракцию и
RT-ddPCR. Если повторный
результат по-прежнему
является недействительным,
рассмотрите возможность
получения нового образца от
пациента.
Бели только одна из двух мишеней
является положительной
^.1
(>2)
Положительный или
отрицательный
SARS-CoV-2
обнар>жен.
Храните образцы при -70 и,
если требуется, обратитесь в
соответствуюш)^©
медицинскую лабораторию.
4
2.
3.
5.
6.
7.
8.
9.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Набор для диагностики SARS-CoV-2 методом цифровой капельной ПЦР от Bio-Rad оценивался только с
точки зрения использования в системах цифровой капельной ПЦР QX200 и QXDx.
Получение надежных результатов зависит от надлежащего выполнения процедур сбора, хранения и
обращения с образцами.
Этот тест предназначен для выявления РНК SARS-CoV-2 мазков из носоглотки, переднего и среднего
отдела полости носа, а также из образцов носоглоточного смыва/аспирата и образцов назального аспирата,
собранных в универсальную транспортную среду (UTM) или универсальную транспортную систему для
вирусов (UVT). Исследование других типов образцов с помощью теста на диагностику SARS-CoV-2
методом цифровой капельной ПЦР может привести к неточным результатам.
На обнаружение РНК SARS-CoV-2 могут влиять методы сбора образцов, особенности пациента (например,
наличие симптомов) и/или стадия инфекции.
Носоглоточный смыв/аспират или назальный аспират являются дополнительными приемлемыми
образцами из верхних дыхательных путей, которые можно протестировать с помощью теста на SARS-CoV-
2 методом цифровой капельной ПЦР; однако характеристики тест-системы при использовании данных
типов образцов не были определены.
Носоглоточный смыв/аспират или назальный аспират, а также образцы из переднего и среднего отдела
полости носа, собранные самостоятельно или медицинским работником, являются дополнительными
приемлемыми образцами из верхних дыхательных путей, которые можно протестировать с помощью
набора для диагностики SARS-CoV-2 методом цифровой капельной ПЦР; однако характеристики тест-
системы при использовании данных типов образцов не были определены.
Результаты тестирования с использованием набора для диагностики SARS-CoV-2 методом цифровой
капельной ПЦР являются количественными, включая количество копий/мкл и количество положительных
капель. Пользователь оценивает данные пороговые значения на концентрацию образца, а также на наличие
положительных капель для выполнения качественного анализа обнаруженного или не обнаруженного
SARS-CoV-2; однако представленные в отчете значения не следует использовать или интерпретировать
как количественные.
Вследствие существенных различий между методиками рекомендуется, чтобы до перехода с одной
методики на другую пользователи провели корреляционные исследования методов в своей лаборатории,
чтобы определить различия в методиках. Не следует ожидать стопроцентного совпадения результатов
вследствие вышеупомянутых различий между методиками. Пользователи должны следовать своим
собственным политикам/процедурам.
Ложноотрицательные или недействительные результаты могут быть получены из-за помех. В набор для
диагностики на SARS-CoV-2 методом цифровой капельной ПЦР от Bio-Rad включен внутренний контроль
для идентификации образцов, содержащих вещества, которые могут препятствовать выделению
нуклеиновых кислот и амплификации ПЦР.
xxxvi 10000128901 ред. А
--- стр. 38 ---
fr?/'#
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
ТЕХНИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитическая чувствительность
Предел детектирования (LoD) определяет самую низкую выявляемую концентрацию SARS-CoV-2, при
которой не менее 95% от общего количества (истинно положительных) репликатов демонстрируют
положительные результаты теста. Для определения LoD инактивированный нагреванием вирус из
коммерческого источника (АТСС SARS-CoV-2 штамм VR-1986HK, 390Е6 копий / мл) серийно разводили в
пулированной матрице мазков из носоглотки. Всего было протестировано 9 уровней концентраций с 10-
кратными серийными разведениями между уровнями с 3 повторностями экстракции на концентрацию и
одной репликой RT-ddPCR на экстракцию на уровень. Это было выполнено в трех наборах, по одному для
каждого метода экстракции, утвержденного для использования с набором для лдПЦР Bio-Rad SARS-CoV-2:
руководство QlAamp Viral RNA, руководство Thermo MagMAX и Thermo MagMAX в системе Kingfisher
Flex. Каждый набор для ручной экстракции запускался и анализировался с помощью обоих вариантов
программного обеспечения: QuantaSoft 1.7 и QuantaSoft Analysis Pro 1.0 или QX Manager 1.1. Набор для
экстракции KingFisher Flex запускался с QuantaSoft 1.7 и анализировался с помощью QuantaSoft Analysis Pro
1.0. Тестирование LoD было завершено на термоциклере С1000 Touch с 96-луночным реакционным модулем.
Результаты предварительных исследований по определению дальности приведены в Таблице 13 и Таблице
17 для планшетов, запускаемых с рабочим процессом QuantaSoft и QX Manager 1.1, соответственно.
Подтверждение LoD было определено на основе самой низкой концентрации, при которой 3/3 повторов были
положительными для обеих мишеней (400 копий / мл), плюс два 2-кратных серийных разведения ниже (200
и 100 копий / мл), каждое с 20 отдельными экстракция повторяется. После первоначального
подтверждающего тестирования требовалось от одного до двух дополнительных промежуточных уровней
(180 и 150 копий / мл) для определения LoD, каждый с 20 отдельными повторностями экстракции. LoD для
обоих наборов для экстракции, набора для выделения нуклеиновых кислот вирусов / патогенов Thermo
MagMAX (ручного и автоматического на системе Kingfisher Flex) и мини-набора для вирусной РНК QlAamp,
составлял 150 копий / мл, как показано в Таблице 14. Таблице 15 и Таблице 16. соответственно для
планшетов, запускаемых с QuantaSoft 1.7 и анализируемых с помощью QuantaSoft Analysis Pro 1.0.
Подтверждающие исследования LoD для образцов, извлеченных с помощью ручных методов MagMAX и
QlAamp и проанализированных с помощью QX Manager 1.1, показаны в Таблице 18 и Таблице 19.
Исследования LoD с использованием набора для ддПЦР Bio-Rad SARS-CoV-2 подтвердили эквивалентность
наборов для экстракции нуклеиновых кислот (ручной и автоматический протоколы) и обеих программных
платформ, включая приложения QuantaSoft и QX Manager.
Таблица 13. Начальный предел обнаружения - Оценка теста Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Образцы, экстрагврованные с помощью
................................... Шмч г- ____________
Образцы, экстрагированные г иомощью
ttlAamttViralRNA
S.\RS-Co\-2
копий/мл
N1 Ио.10 ЖИте.1ьпые
коав!
/ Общее К0.1-ВО
копий
\2 По.1ожите.1Ы1ые
копан
/ Общее К0.1-ВО
копий
N1 1[а10Ж'нте.1Ы1ые
копни
/ Общее ка'1-80
копий
N2 Полпжнте.1Ы1ые
копни
/ Общее кол-во
копии
4.Е+07 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
4.Е+06 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
4.Е+05 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
4.Е+04 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
4000 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
400 3/3 -3/3 3/3 3/3 3/3 3/3
40 1/3 1/3 1/3 1/3 3/3 0/3
4 1/3 0/3 0/3 0/3 1/3 0/3
0.4 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3
Таблица 14. Предел обнаружения* Подтверждение теста Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR Предел обнаружения с
использованием набора для экстракции Thermo MagMAX. ручной протокол (программное обеспечение; QuantaSoft
1.7 + QuantaSoft Analysis Pro 1.0)
Концентрация
образцов,
копий/мл
ddPCR Концентрация (копий/мл)
N1 N2
Avg Станд. Avg Станд.
Проверено
образцов
Положительные
образцы
%
положительных
--- стр. 39 ---
^ZU9 Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
откл откл
400 0.94 0.29 0.95 0.37 20 20 100%
200 0.50 0.22 0.43 0.16 20 20 100%
180 0.29 0.22 0.34 0.19 20 19 95%
ГТ50 У * 5 /о -гхх:—
100 0.23 0.15 0.24 0.12 20 18 90%
Таблица 15. Предел обнаружения набора для ddPCR Bio-Rad SARS-CoV-2 с использованием набора для экстракции
Thermo MagMAX, автоматический протокол в системе KingFisher Flex (программное обеспечение: QuantaSoft 1.7 +
Концентрация
образцов,
копий/мл
ddPCR Концентрация (копий/мл) Проверено
образцов
Положительные
образцы
%
положительныхN1 N2
Avg Станд.
откл
Avg Станд.
откл
400 0.47 0.19 0.46 0.13 20 20 100%
200 0.24 0.15 0.29 0.16 20 20 100%
150 . _ 0.23 -~ ш : шш ' ■ :Ж12 20 . 20 100%
100 0.13 0.09 0.19 0.12 20 18 90%i
Таблица 16. Предел обнаружения набора для ddPCR Bio-Rad SARS-CoV-2 с использованием набора для экстракции
Концентрация
образцов,
копий/мл
ddPCR Концентрация (копий/мл) Проверено
образцов
По ложител ьн ы е
образцы
%
положительныхN1 N2
Avg Станд.
откл
Avg Станд.
откл
400 0.95 0.26 0.88 0.26 20 20 100%
200 0.43 0.20 0.41 0.18 20 20 100%
180 0.35 0.17 0.28 0.12 20 19 95%
т /Ш.29 :: 0Л9 0.31 0.22 20 .19 95%
100 0.28 0.22 0.22 1 0.21 1 20 17 85%
Таблица 17. Начальный предел обнаружения - Оценка теста Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR Software: QX
Manager 1.1
Обрязцы^эксгряшровяыныс с ИОМОШЬЮ Образцы, эк€1ра1нровяиныс с иомощыи
OlAampViral RNA
SARS-CoV'-2
копий/мл
N1 Положительные
KOUHH /
/ Общее кол-во
копий
N2 Положительные
" копии
/ Общее кол-во
____копий_______
N1 Ио.1шжнтельные
к'О И Н И
/ Общее кол-во
авияЖ -
N2 Положительные
копии
/ Общее кол-во
копий :
4.Е+07 3/3 3/3 3/3 3/3 4.Е-Ю7 3/3
4.Е-Ю6 3/3 3/3 3/3 3/3 4.Е+06 3/3
4.Е+05 3/3 3/3 313 3/3 4.Е+05 3/3
4.Е+04 3/3 3/3 3/3 3/3 4.Е-Ю4 3/3
4000 3/3 3/3 3/3 3/3 4000 3/3
400 3/3 3/3 . 400“ - . . 3/3
40 1/3 2/3 0/3 2/3 40 1/3
4 1/3 0/3 0/3 0/3 4 1/3
0.4 0/3 0/3 0/3 0/3 0.4 0/3
Таблица 18. Предел обнаружения набора для ddPCR Bio-Rad SARS-CoV-2 с использованием набора для экстракции
Концентрация ddPCR Концентрация (копий/мл) Проверено Положительные %
образцов, N1 N2 образцов образцы положительных
копий/мл
Avg Станд. Avg Станд.
xxxviii 10000128901 ред. А
--- стр. 45 ---
^:1[ф Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Таблица 18. Описание исключенных и случаев несоответствия.
Идентиф
икационн
ый номер
случая
Тест Bio-Rad SARS-CoV-2
ddPCR
Сравнительный тест
(тест Seegene —
Экстренное
разрешение на
Подтверждающий тест
(Анализ CDA -
Экстренное разрешение
на применение)
132 Недействительно Отрицательно
Отрицательный
N1 Cq= НД
N2 Cq = НД
RPCq = 25,41
619
Положительно
Концентрация N1 =0,182 сП/мкл
Концентрация N2 = 0,364 сП/мкл
Концентрация RP = 71,6 сП/мкл
Отрицательно
Положительный
N1 Cq = 33,33
N2 Cq = 35,6
RP Cq = 26,83
127
Положительно
Концентрация N1 = 0,171 сП/мкл
Концентрация N2 = 0,514 сП/мкл
Концентрация RP = 277 сП/мкл
Отрицательно
Положительный
N1 Cq = 35,52
N2Cq = 41.48
(отри цател ьны й)
RP Cq = 26,65
818
Отрицательно
Концентрация N1=0 сП/мкл
Концентрация N2 = 0 сП/мкл
Концентрация RP = 71,7 сП/мкл
Положительно
Отрицательный
N1 Ся = НД
N2Cq= НД
RP Cq = 27.05
398
Отрицательно
Концентрация N1=0 сП/мкл
Концентрация N2 = 0 сП/мкл
Концентрация RP = 49,1 сП/мкл
Положительно
Отрицательный
N1 Сц = НД
N2 Cq = НД
RP Cq = 26,6
Таблица 22. Результаты РРА и NPA теста Bio-Rad SARS-CoV-2 (QIAamp экстракция вирусной РНК) в
сравнении со сравнительным тестом
Сравнительный тест
положительный
Сравнительный тест
отрицательный
Bio-Rad SARS-CoV-2
П ол ожител ьн ы й
35 2
Bio-Rad SARS-CoV-2
Ддожительный
2 38
РРА = 94,59 %, 95 % ДИ [80,47, 99,06]
NPA = 95,00 %, 95 % ДИ [81,79, 99,13]
В общей сложности 77 образцов подвергались анализу с использованием метода выделения вирусной РНК
QIAamp, поскольку два образца были исключены вследствие недостаточного количества образцов,
доступных для выделения. Были идентифицированы те же 4 случая несовпадения. Результаты для
исключенных случаев и случаев несовпадения представлены в Таблице 20.
Таблица 23. Описание исключенных и случаев несоответствия.
1|||Ш 111фи ка ци
ониый номер
случая
Тест Bio-Rad SARS-CoV-2
ddPCR
С'равннтельный
тест (тест Seegene -
Экстренное
разрешение на
Подтверждающий тест
(Анализ CDA ~
Экстренное разрешение
на применение)
998 Недостаточно образцов для Положительно НД
xliv 10000128901 ред. А
--- стр. 46 ---
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
тестирования
44 Недостаточно образцов для
тестирования
Положительно нд
619
Положительно
Концентрация N1 =0,166 сП/мкл
Концентрация N2 = 0.498 сП/мкл
Концентрация RP = 59,1 сП/мкл
Отрицательно
Положительный
N1 Cq = 33,33
N2 Cq = 35,6
RP Cq = 26,83
127
Положительно
Концентрация N1 = 0,383 сП/мкл
Концентрация N2 = 0,230 сП/мкл
Концентрация RP = 124 сП/мкл
Отрицательно
Пол ожите льн ы й
N1 Cq = 35,52
N2 Cq = 41,48
(отрицательный)
RP Cq = 26,65
818
Отрицательно
Концентрация N1=0 сП/мкл
Концентрация N2 = 0 сП/мкл
Концентрация RP = 59,6 сП/мкл
Положительно
Отрицательный
N1 Cq= НД
N2 Cq = НД
RP Cq = 27,05
398
Отрицательно
Концентрация N1=0 сП/мкл
Концентрация N2 = 0 сП/мкл
Концентрация RP = 51,1 сП/мкл
Положительно
Отрицательный
N1 Cq = lia
N2 Cq = НД
RP Cq = 26,6
Тестирование эталонной панели FDA SARS'CoV-2
Оценка чувствительности и перекрестной реактивности БВРС-КоВ проводилась с использованием эталонного
материала {Т1), слепых образцов и стандартного протокола, предоставленного FDA. Исследование включало
исследование диапазона и подтверждающее исследование LoD. Для установления специфичности и подтверждения
LoD использовали слепое тестирование образцов. В качестве метода экстракции использовались набор для
выделения патогенов / нуклеиновых кислот ThermoFisher MagMAX и система цифровой капельной ПЦР Bio-Rad
QX200 AutoDG. Результаты представлены в таблице 25.
Таблица 25. Сводка результатов подтверждения LoD с использованием справочной панели FDA SARS-CoV-2
Эталонный материал
представленный FDA
Тип образца Полученный LoD Перекрестная
реактивность
SARS-CoV-2 Мазки из носоглотки 0.6x103 NDU/mL N/A
MERS-CoV N/A ND
NDU / мл = обнаруживаемые единицы РНК NAAT / мл
. N / А: Не применимо
Щ ND; не обнаружено
МАРКИРОВКА И УПАКОВКА
SARS-CoV-2
ddPCR Kit
boreal-20^. (01)036l0622iete96
(17}Sei231
(КЛХХХХХХХХЮС
REF 12013743
600 tests [Ji) b»o.rad.corT^ARSCoV2-ddPCfl
Indudes
t vial of assay
6 vials oi supemvx
6 vials of r^erse transcriptase
6 vials of DTT
2 vials of positive standard
2 иа1а of negative standard
^ YYYY-MM-DD
Hof] XXXXXXXX
2 YYYY-MM-DO
Bio-Rad Laboraioriee, Inc. wtMw.bio-rad.com
5731 W Las Positas Blvd. Pleasanton, CA в45вв
Made in USA 10000128954 0
List of symbols are below/Список символов ниже:
--- стр. 47 ---
zU 9t:/iU :
Набор Bio>Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Symbol/Символ Definition/Определение
Consult
instruction
for use
Обратитесь к инструкции по применению
REF
Catalog
number
Номер в каталоге
Date of
manufacture
Дата изготовления
LOT
Lot Лот
Expiry date Г оден до
i Маркировка компонентов набора
I. Смесь праймеров и зондов для детекции РНК вируса SARS»CoV-2, 600 мкл
5v
В Ю -RAD Control: ХХХХХХХ
Exp:YYYY-MM-DD
Store at -20*C
SARS-CoV-2 ddPCR Assay
2019-nCoV CDC Triplex
6СЮ X 20 ui reactk>ns(^x)
Cat. #12013751 РАЛШ ЕХ
m»4tadLabofHortw.in6 lyWemuniiidStaiM
xivi 10000128901 ред. A
--- стр. 48 ---
'Z Ф
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
Маркировка содержит следующую информацию:
- логотип Bio-Rad
- штрих-код
- данные о контроле качества
- срок годности
- условия хранения
- наименование
- объем реагента во флаконе
- номер по каталогу
- информация о составе (FAM/HEX)
- информация о производителе
2. Обратная транскриптаза по 1 мл
3. DTT Дитиотреитол 300 мМ по 1 мл
4. Смесь реагентов для проведения одноступенчатой реакции RT-ddPCR для зондов, по 1 мл
5. Контрольный материал SARS-CoV-2 Positive (положительный), по 0,3 мл
S A R S ^ V - lS t e m lin l
И х х х х ш х 2 у т ш ю о ^ |
m l iM ct Diapmllct г Oft VMrth ТХ. USA
- логотип производителя
- штрих-код
- лот
- срок годности
- условия хранения
- наименование
- объем реагента во флаконе
- биологическая опасность
- обозначение: для однократного использования
6. Контрольный материал SARS-CoV-2 Negative (отрицательный), по 0,3 мл
--- стр. 49 ---
iT»
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
SAR8-CoV-2 N tg iiv t
(i^XXXXXXXX gmY.M400 @ g
t
^ E x a d aignM ttct F««t VltofttiTX, USA
- логотип производителя
- штрих-код
- лот
- срок годности
- условия хранения
- наименование
- объем реагента во флаконе
- обозначение; биологическая опасность
• обозначение: для однократного использования
- информация о производителе
Маркировка на русском языке
12013743
Набор реагентов для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 (''SARS-CoV-2 ddPCR Kit")
методом цифровой капельной ПЦР (ddPCR) в биологическом материале, в составе:
1. Смесь праймеров и зондов для детекции РНК вируса SARS-CoV-2, 600 мкл -1 шт.
2. Обратная транскриптаза по 1 мл - 6 шт.
3. DTT Дитиотреитол 300 мМ по 1 мл - 6 шт.
4. Смесь реагентов для проведения одноступенчатой реакции RT-ddPCR для зондов,
по 1 мл - 6 шт.
5. Контрольный материал SARS-CoV-2 Positive (положительный), по 0,3 мл - 2 шт.
6. Контрольный материал SARS-CoV-2 Negative (отрицательный), по 0.3 мл - 2 шт.
7. Инструкция по применению -1 шт.
Только для диагностики in v itr o
Регистрационное удостоверение № РЗН ХХХХ/ХХХ от ДД.ММ.ГГГГг.Номер серии, срок
годности, условия хранения и графические символы указаны на оригинальной упаковке
Антитела к вирусу гепатита С и HBsAg отсутствуют
Производитель Bio-Rad Laboratories, Inc. / "Био-Рад Лабораториез, Инк.", 5731 W. Las
Positas Blvd PLEASANTON, CA 94588 UNITED STATES. США
Уполномоченный представитель производителя: ООО «Био-Рад Лаборатории»
Адрес: 105064, г. Москва, Нижний Сусальный переулок, дом 5, стр. 5А
Телефон: (495)721 14 04 diag_support^rcis@bio-rad.com wviw.bio-rad.com
Страна происхождения: США
Информация об упаковке
Вторичная упаковка: картонная коробка
Размеры вторичной упаковки:
xlviii 10000128901 ред. А
--- стр. 50 ---
ZU9rz7ilB]
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
СРОК годности
Максимальный срок годности - 12 месяцев
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ
Набор расходных материалов подлежит транспортировке и хранению при соблюдении условий, указанных ниже
Хранение
JHa46HHe
Температура во5л\ \а. ®С (-I5H-25)
Относительная влажность воздуха, без конденсата, % 20-80
Гранспортировка
^впмнЫ Н Значение
Температура возд\ха. °С (-15Н-25)
Относительная влажность воздуха, без конденсата, % 20-80
СТЕРИЛЬНОСТЬ
Не применимо. Изделие поставляется не стерильным.
Перечень национальных и международных нормативных документов,
И — fc — ш и т Описание
EN 13485:2016 Изделия медицинские. Системы менеджмента качества.
Требования для целей регулирования
EN 14971:2012 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к
медицинским изделиям
EN 13640:2002 Исследование стабильности реагентов для диагностики in vitro
EN 13975:2003 Процедуры отбора проб, используемые для приемных
лабораторных испытаний медицинского диагностического
оборудования. Статистические аспекты.
EN ISO 15193:2009 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Измерение
величин в образцах биологического происхождения. Требования
к содержанию и представлению референтных процедур
измерения
1 EN ISO 15194:2009 Медицинские изделия для in vitro диагностики. Измерение
величин в образцах биологического происхождения. Требования
к аттестованным стандартным образцам и содержанию
сопроводительной документации
EN ISO 17511:2003 Оборудование медицинское для диагностики in vitro.
Количественные измерения в биологических образцах.
Метрологическая прослеживаемость величин, заданных для
калибраторов и контрольных материалов
ENISO 18113-
1:2011
Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1.
Термины, определения и общие требования
EN iSO 18113-
2:2011
Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем(маркировка). Часть 2. Реагенты
для диагностики in vitro для профессионального применения
EN 62366-1:2015 Изделия медицинские. Часть 1. Проектирование медицинских
изделий с учетом эксплуатационной пригодности
EN 15223-1:2016 Символы, применяемые при маркировании на медицинских
изделиях, этикетках и в сопроводительной документации. Часть
1. Основные требования
ПОРЯДОК И УСЛОВИЯ УТИЛИЗАЦИИ
Изделия, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности, а также использованные
изделия следует утилизировать в соответствии с применимыми местными законами и правилами, и с соблюдением
обязательных требований по охране окружающей среды.
--- стр. 51 ---
AT*
Набор Bio-Rad SARS-CoV-2 ddPCR
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
Компания Bio-Rad Laboratories гарантирует качество выпускаемой продукции и соответствие требованиям
технической и эксплуатационной документации производителя, а также требованиям нормативной документации.
По вопросам, связанным с качеством продукции, обращаемой на территории РФ обращаться к представителю
производителя Био-Рад лаборатории.
ПРАВИЛА ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ РЕКЛАМАЦИЙ
Поддержка пользователей осуществляется компанией:
Общество с ограниченной ответственностью "БИО-РАД ЛАБОРАТОРИИ"
Запросы и рекламации могут направляться по адресу: 105064, г. Москва, переулок Нижний Сусальный, д. 5, стр. 5а
Телефон:(495) 721 14 04, diag_support_rcis@bio-rad.com , www.bio-rad.com
10000128901 ред. А