Набор реагентов "HPA-FluoGene" (ХПА-ФлуоГен) для типирования генов HPA, кодирующих поверхностные антигены тромбоцитов человека, методом аллель-специфической ПЦР по конечной точке на анализаторе «FluoVista» (ФлуоВиста) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
inno-train \ VA\\c\p\K\w« uo чримсиению \
i 1 111 к'р\о\шKMicp i 11 ip ь2
D <1!-Pfi Kpoiiocpi ia\ 1 1\ (.•
I c.i 144-6173-607930 0>: -50
Версия 1.6 «НРА-FluoGcne»
(ХНА-ФлуоГен)
C€
CMK 07.20
Approved by
inno-train Diagnostik GmbH
/Alexander Keck
Generali Onager
Signature,
Date,
Seal
Ипегрукиия 110 применению
(Версия 2)
Набор peaieiiioH «llPA-Fluo(iene» {ХН.А-Флуо! ен) для гипириваиия генов ПРА,
кодирующих иоверхиоегиые аипп еиы громбоиигов, мегодом аллсль-специфнческои
ПЦР 110 конечной ючке на анализаторе «FluoVista» (ФлуоВие га)
1роизводство «инно-трейи Диагностик 1'мбХ», Германия
Public Notary document register No. 114
of the year 2022
Public Notary David Jeitner
with the seat in Frankfurt am Main
Office; Berliner Strade 42a, D-60311 Frankfurt am Main
hereby certify the above signature, confirmed in mv presence, of
Mr. Alexander Keck,
Managing Director, born 25.02.1966,
official resident in Niederhdehstadter Stralie 62, D-61476 Kronberg / Taunus,
proven by German Identity Card.
It is stated that neither the Notary nor any member of her/his firm had acted in
the matter which is the subject of this instrument, except in the notary capacity.
Frankfurt am Main, 23th of February 2022
David Jeitner
Notary
--- стр. 2 ---
Содержание
Спиеок еокращений и определений ..........................................................................................3
Наименование медицинского изделия и его назначение.......................................................3
Область применения......................................................................................................................4
Специфическая патология, состояние или фактор риска, для обнаружения,
определения или дифференцирования которого предназначено медицинское изделие для
диа1 нос гики in vitro..................................................................................................................................4
5. 1 loll) ляционные, демографические аснекгы применения медицинского изделия ......4
11огенцисЫЫ1ые пользователи Наборов....................................................................................5
Харакгерис'гики изделия..............................................................................................................6
Сое гав медицинского изделия, описание, назначение компонентов .................................6
Описание принципов работы.......................................................................................................8
Дополнигельные материалы (оборудование).........................................................................9
Перечень применяемых производителем (изготовителем) медицинского изделия
национа.||Ы1ых сгандартов....................................................................................................................Ю
К). Анали гические характеристики изделия................................................................................1 1
1 1. С'нособ применения.....................................................................................................................11
11.1. Информация о сборе образцов для исследования и их подготовке ................................11
1 1.2. Создание задания в программе FluoGene..............................................................................12
1 1.3. IЩР / Амплификация.................................................................................................................12
1 1.3.1. 4’ср.моциклирование...........................................................................................................16
1 1.4. Флуоресцен гная детекция.........................................................................................................16
1 1.5. Расчёг данных.............................................................................................................................. 16
12. Анализ данн 1>1х..............................................................................................................................17
13. Ус.ювня применения...................................................................................................................19
Хранение и срок с.чужбы............................................................................................................19
Tpaiiciiopi ировка..........................................................................................................................20
Меры предосторожности при работе с Наборами ...............................................................20
()1раничения метода....................................................................................................................22
Объяснение си.мволов.................................................................................................................23
Гарантийные обязательства......................................................................................................23
1 рсбования к техническому обслуживанию и ремонту медицинского изделия.
Сервисное обслуживание....................................................................................................................23
21. 1 ребования к охране окружающей среды. Порядок осуществления утилизации и
) нич гожения 1 Оборов...........................................................................................................................23
22. Информация о наличии в медицинском изделии лекарственного средства для
медицинского применения, материалов животного и (или) человеческого нроисхождения24
23. Биологический референтный интервал применения медицинского изделия ...............24
24. Информацию об интерферирующих веществах или ограничениях, связанных с
пробой, козорые могут повлиять на результат исследования ....................................................25
25. Рекламация....................................................................................................................................26
26. Нифс)рмация об изготовителе и уполномоченном представителе...................................26
27. (.'ведения о выпуске и пересмотре жсилуатационной документации ............................27
11риложение ,Л........................................................................................................................................28
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
--- стр. 3 ---
i
,L
1. Список сокращений и определений
1 i 11 ас тоя uie й ш i струк! щи приме и яются следующие сокращения и определения: _________
нолимера'}11ая цеiншя реакция _________________________________
громбоци гарные антигены человека, которые являются
гликонротеинами мембраны тромбоцитов. В случае если >
реципиента обнаруживаются антитела на тромбоцигарные
1РД
ССП (SSj^ ____
ж гА ,;'1
Л2бр^280_
Тац-начтнмсраза
Фл\оро.\ром
ДМСО
Одно тинирование
антигены донора, запускается иммунная реакция, приводящая к
лизису тромбоци'гов из переливаемой крови __________________
Секвенененифическис праймеры
Этилендиаминтетрауксусная кислота
Отношение поглощения на длинах волн 260 и 280 нм
Гермое габильная ДНК-нолимераза
Флуореенентный краситель
Диметилеульфокеид _______
Исследование одного клинического образна для определения
щщелей семи генов (НРА-1 а/Ь, НРА-2 а/Ъ, НРА-3 а/Ь, НРА-4 а,
МРА-5 а/Ь, НРА-6 а/Ь и ЫРА-15 а/Ь), которое проводится е
использованием одно 1 0 ряда из восьми лунок (А - И) на ИЦР-
нланшеге
2. Наименование медицинскою изделия и его назначение
Па именование медицинского изделия:
«Набор реагентов «НРА-FluoGene» (ХПА-ФлуоГен) для типирования генов ИРА,
кодирующих поверхностные антигены громбоцигов, методом аллель-снсцифичеекой ИЦР
но конечной точке на анализаторе «FluoVista» (ФлуоВиста)» (далее по тексту -Наборы
реагентов HPA-FluoGene (ХНА-ФлуоГен), Наборы HP А, Наборы. Набор).
Назначение медининекого изделия:
Изделие предназначено для качественного определения аллелей генов, кодирующих
новерхноетные ан тигены тромбоцитов человека (Human Platelet Antigens, НРА): НРА-1 а/Ь,
НРА-2 а/Ь, НРА-3 аФ, НРА-4 а, НРА-5 а/Ь, НРА-6 а/Ь и НРА-15 а/Ь в клиническом образце в
качестве веномога' 1елыюго средства диагностики
Определяемые изделием ттчлели нредегавлены в таблице «Аллели, определяемые Набором
peai emoB «1 IPA-FluoGene».
Таблица - Ал.чели, определяемые Набором реагентов «НРА-FluoGene».
1Ч *акния
Номер лунки
ПРЛ-1 НР.Л-2 НРА-3 НРА-4 НРА-5а НРА-бЬ НРА-9 НРА 15
А2 В2 С2 D2 Е2 F2 G2 Н2
Определяемы
е аллели
НРЛ-1а,
НРЛ-1Ь
НРА-2а,
НРА-2Ь
НРА-За,
НРА-ЗЬ
НРА-4а,
НРА-4Ь
ЫРА-5а,
НРА-5Ь
НРА-ба,
НРА-бЬ
НРА-9а,
НРА-9Ь
НРА-15 а.
НРА-15Ь
11ашание
гена
що I1GNC)
Одиои\клео1
идиы П
по. тморфигм
ITGB3
1 '^6 г>с
GP1BA
4S2 ОТ
1, 2
ГГСА2В ггевз ITGA2 ITGB3 ITGA2B CD 109
2621 r>G
1 ,2
506 G>A
1 ,2
1600 G>A 1544 G>A 2602 G>A 2108 ОА
Специфичеек j
И И маркер I 1,2
ПР.\(цвет) 1
1 ,2 1 ,2 1 ,2 1. 2
--- стр. 4 ---
3. Облас! ь 11рн1че11еиия
^ Набор peaieiiTOB HPA-KluoGcne (ХПА-ФлуоГен) применяется в клинике-
лаоораюриой лиагпос гике.
4. Специфическая патология, состояние или фактор риска, для обнаружения,
оиределеиин или диффсреицирования которою предназначено медицинское изделие
ДЛЯ диагностики in vitro
Набор реагентов не выявляет специфическую патологию, состояние или фактор
риска, а определяет состав индивидуальных антигенных характеристик лейкоцитов
человека в еоответетвии е назначением Наборов реагентов HPA-FluoGene.
5. Ионуляционные, демографические аспекты применения мсдицинско 1 о изделия
1рансфузии тромбоцитов являются эффективным методом лечения многих
заоолеваиий^ Однако в некоторых случаях они не только не приводят к ожидаемому
клиническому эф(1)екту, но и сопровождаются осложнениями негемолитического тина.
1ромооцигы являются носителями антитенов различных алло 1'енпых систем Наиболее
значимыми являются антигены собственно тромбоцитарные, юавного комплекса
итсюеовместимости, а также эритроцитов. На мембране тромбоцитов присутствуют
аи|игеиы системы ЛВО, Левис, I, i, |>, но отсутствуют антигены систем Резус, Лаффи Кетт
Кид,т и Лютеран.
1ромбоцитам свойственно наличие своих собственных антигенов. Более 20
aiiiHieiioB были описаны как тромбоцит-специфичиые. Современные иммуногенетические
методы позволили изучить молекулярттую структуру как самой белковой молекулы гак и
гена, кодирующет о ее синтез. Гены системы НРА локализованы на длинном плече 5, 17 и
__-и хромосом. Наличие аллельных вариантов обусловлено единичттым нуклеоги’дттым
no.iTiMopilTTiTMOM (заменой одною нуклеотида в алле.ть-снецифичных участках). В 1990 г
оы.та соз.тана .международная номенклатура тромбонит-сненифичных аллоанти|-енов - НРА
( имтап Platelet Antigens). С'оглаено этой номенклатуре каждый локус нумеруется
мосле.човагелыю с буквенным обозначением аллеля, один из которых («а») встречается
тначителыю чате второго («Ь»). В номенклатуру были включены только те антигены, к
коюрым оыли выявлены антитела. Нели антитела были выявлены только к одному аллелю
то к названию антигена добавляется «w» (HPA-IObw). К настоящему времени хороню
изучены гены 6 основных локусов (IIPAI-5, 15) и несколько редко встречаюшихся генов,
кодирующих продукцию антигенов.
Распределение НРА-генотипов
Применение молекулярно-генетических методов позволило изучить частоту
аллелей среди различных расовых и этнических групп населения. В популяции белых
европейцев частота аьлелей большинства НРА- систем отклоняется в сторону «а» аллеля а
юмозиготъ! по «Ь» составляют (тколо 0-15 %. Исследования частоты встречаемости
агтоантигенов тромбоцитов в разных зарубежных понуляниях указывают на значительные
р<тт 1чия в раснространенности этих антигенов среди жителей разных стран. Например
Ь\- по.шморфизм почти отсутствует в популяциях Дальнего Востока, в то время Kah
ili Л-4 но.1и.морфизм практически отсутстттует у белых европейцев, но присутствует в
да.1Ы1свос1очнои популяции. Данные о частоте встречаемости НРА в российской
нону.тянии шраничепы единичными исследованиями. Полученные данные представлены в
lao.mne ниже (данного раздела) в сравнении с данными европейской популяции, у доноров
крови I . Санкт-|1етербур,а гены локусов НРА-1, 2, 3, 5 являются тюлиморфными, а гены
--- стр. 5 ---
f
локуса И PA-4 не полиморфны. Поэтому, при подозрении на НРЛ аллоиммунизацию важно
\ чи 11>1ва1л^ этническую принадлежность пациентов.
Таблица 1
11е герб) pi а
Тк’нределение НРЛ-генотипов среди ' белых европейцев
Частота генотипов,%
Генотип
J.G. McFarland,
1993
Bontadini et
al., 2000
Собственные
данные
НРЛ-1а/1а 72 78 74,7
НРЛ-1а/1Ь 26 16 21,9
HPA-lb/lb 2 6 3,4
НРА-2а/2а 85 76 83,3
НРА-2а/2Ь 14 22 15,5
11РА-2Ь/2Ь 1 2 1.7
НРА-За/За 37 53 38,35
НРА-За/ЗЬ 48 38 50,7
НРА-ЗЬ/ЗЬ 15 9 14,95
11РА-4а/4а 99 нет данных 100
НРА-4а/4Ь <0,1 нет данных 0
11РА-4Ь/4Ь <0,1 нет данных 0
НРА-5а/5а 80 58,5 83,8
НРА-5а/5Ь 19 40 16,2
НРА-5Ь/5Ь 1 1,5 0
Исно.1ьз\емые ис 1 очники;
1. II.В. Минеева, И.И. Кробинец, М.Н. Блинов, С.И. Капусзин. Антигены и антитела к
тромбоцизам (обзор ли тературы) // С)р1когематология - 2013 - № 3 - С. 57-65.
6. По гсчщинльные пользовал ели Наборов
11огенциальными пользователями Наборов реагентов HPA-FluoGene являютея
снециалисгы с высшим и средним специальным образованием, прошедшие подголовку на
лицсчпированны.х курсах специализации (повышения квалификации) но молекулярно-
генетически.м (ИЦР) методам диагностики.
--- стр. 8 ---
'
используемых наборов для проведения анализа исследуемых образцов, (не более 5ти
файлов);
Файлы, содержащие информацию для обновления базы данных аллелей используемых
наборов (F1C более ЗОти файлов);
-- Инегрукция но имноргу файлов е компакт-диска, в программное обеспечение FluoGene
(Флуо1 ен) - 1 HIT.
I! • ШчG_U 1 е' комнонен гов Наборов Реагентов НРА:
* • Ье,1 ыи mi(i4н — [ 1ШЗ~и-’|^чн1ет со шрих-кодом и маркированной покровной
ii-ie^HKOH на одно или теегь тинирований (HPA-FluoGene) предназначен для проведения
исследований семи человеческих громбоцитарных генов (HPA-FluoGene).
Щобирка со смесью FluoMix (ФлуоМикс) предназначена для проведения 111 (Р.
Лист пленки оптической прозрачной предназначен для запечатывания 1 ЩР-нланшета.
Пленка для ПЦР и других флуоресцентных анализов, без растворителей (ДМСО,
ацегонитрил, метанол), без РНКаз/ДНКаз.
И11слру_кция но применению наооров «НРА-FluoGene» (ХПА-ФлуоГен) нрелназначена
для Hoiiiai 0В010 описания применения наборов реагентов «FIPA-FluoGene» в вариангах
иено.тения на 10 и 48 гинирований.
^.Лф1 1и]нн<сП_ каче^^^^ для подтверждения качества наборов реагентов
«11 PA-MuoGene» в вариангах исполнения на 10 и 48 гинирований.
б- Ijj6щзца cjIецифичности предназначена для получения информации о гом: в какой
л\нке в нлантете какие аллели детектируются, а также указаны нуклеотидные замены,
которые детектируются в каждом случае при нуклеотидном полиморфизме. 1'аблица
енецифичноети носит информативный характер.
” 7- У 1ц1нщм41.Ш0 1ФЬ1Й лис'г_с изменениями но сравнению е предыдущим лотом (партией)
предназначен для отображения отличий лотов (партий). Информационный 7 ihci
нрнкладываегся к документации к Наборам только в случае нщшчия изменений в лотах
(партиях) Наборов.
8. Ксум и акт-диск предназначен для обновления базы данных но лотам (партиям) и аллелям
используемых наборов, для импорта в программное обеспечение FluoGene (ФлуоГ'ен), и для
информирования пользователя о процедуре импорта файлов с компакт-диска в
программное обеспечение FluoGene (ФлуоГен)
7.2. Описание принципов работы
Молекл лярная система детекции SSP компании inno-train основана на методе
полимера той ценной реакции, которая позволяет проводить амплификацию определенных
носледовательное тей ДНК. После проведения амплификации, последователыюеть целево 1о
учаез ка 1еномной ДНК накапливается в достаточной контщнтрации для анализа. В Наборах
peaiemoB HPA-MuoGene используются специфические олигонуклеотидные зонды,
позволяющие различать азлели НРА а и Ь, в то время как связывание праймеров
нроиеходи т азлсль-неспсцифично. Образцы, в которых праймеры и зонды гибридизуютея е
целевыми енецифическими последовательностями ДНК, содержат специфический НЦР-
нродук! после проведения НЦР. Образцы, в которых нс происходит снецифичеекого
связывания праймеров и зондов с целевыми последовательностями ДНК, специфического
111 [Р-нродукза после нровс/ 1ения 11ЦР не содержат.
Детекция 11Ц1 "Нродукюв осуществляется путем измерения флуоресценции, а не
ноередет вом гель-электрофореза как в обычных тест-системах, основанных на методе НЦР.
В каждой реакции используются два флуорохрома, различающиеся по спектрам эмиссии
флуоресценции, которые находятся на олигонуклеотидных зондах. Один из зондов
специфичен к ноеледователыюети аллели НРА а, а другой к ноелсдователыюети НРА Ь.
Де1екция флуоресценции оеущеетвляетея но конечной точке при помощи флуориметра
(анализатор MuoVista нроизводства inno-train). При определении прохождения реакции
конечной ючке детекция эмиссии флуоресценции осуществляется до
(нрещзари 1ел1>ное считывание) и после проведения реакции НЦР (детекция конечных
8
--- стр. 9 ---
)
продуктов амплификации), после чего рассчитывается разница между этими значениями
при помощи нрограммно 1'о обеспечения FluoGene, которое предустановлено на
персональный компьютер, входящий в базовый состав Анализатора FluoVista (ФлуоВиста).
Гены ИРА-системы (НРА-1, ЫРА-2, НРА-3, ИРА-4, НРА-5, НРА-6, НРА-9 и НРА-15)
являются биш 1лельными с двумя аллельными вариантами, известными как а и Ь. Эти аллели
различаются однонуклеотидными заменами, которые приводят к одиночным
аминокнсло 1иым заменам в белке. Наборы HPA-FluoGene производства inno-train
позволяет различать эти однонукдеотидные полиморфизмы. Каждая из
олитон) клсотидных смесей содержи т праймеры и зонды, меченные различными
(])л \ орес нсн тн ым и крас итслям и:
Зонд, специфичный к HP А а (флуорохром 1);
Зонд, специфичный к НРА Ь (флуорохром 2).
Расно.1ожсние отрицательного контроля (контроля на контаминацию), отмечено на
нланщетс черной линией.
I (елевым аналигом для набора «НРА-FluoGene» являются: гены, нуклеиновые
кислоты, нуклеотиды и их последовательности.
Метод ана-тиза - качественный.
8. Дополнительные материалы (оборудование)
1аблица № 2. Дополнительные материалы (изделия), необходимые для работы с наборами
реагстов HPA-FIuoG^ie
н/н г НаименованиеI донолнн ie.ibiibix
ма 1 ериалов (изделий)
Д амплификации;
Вода для 11ЦР
1 .2
1.3
1.4
Примечание
1аконечники для пинеток
Образец
тиннрования
ДНК для
л -
1.5
.6
11инстка лабораторная
об'ьсмом от 2 до 20 мкл
11инетка лабораторная
объемом от 100 до 1000 мкл
1^рм они клер (ам нлификатор)
Основные параметры: Стерильная вода,
свободная от РНКаз и ДНКаз, с удельным
сопротивлением 16-18 Мом*см, предназначенная |
для работы с нуклеиновыми кислотами ______
Наконечники для автоматических и
полуавтоматических лабораторных пинеток в
штативах. Сертифицированые на отсутствие
ДНКаз, РНКаз, человеческой ДНК и ингибиторов
НЦР. Гидрофобные, химически инертные,
обладающие низкой сорбцией дозируемых
веществ. Объемы до Юмкл, до 20мкл, до 200 мкл
и до 1000 мкл. _________________
........ ноказатсле.м
(оптической
Выделенная ДНК человека, с
чистоты образца А260/А280
плотности при длине волн 260/280) равным 1,8 (i
0,18).______________________
Основные параметры:
Высокоточные авго.матические и
полуавтоматические лабораторные пинетки
объёмом от 2 до 20 мкл. Химическая и УФ-
устойчивость корпуса пинетки. ______________
Основные параметры:
Высокоточные автоматические и
полуавтоматические лабораторные пинетки
объёмом от 100 до 1000 мкл.
Химическая и УФ-устойчивость корпуса пинетки.
1 ермоциклер для амплификации нуклеиновых
--- стр. 10 ---
w
кислот I'lOO (Т100 Thermal Cycler), «Био-Рад
Лабораториез, Инк.». США, РУ № ФС'З
2012/12788 от 21.06.2016
1.7 11рижимная прокладка Прижимная прокладка «ПиоРас!» (ФлуоИад).
«riuoPad» (ФлуоИад) артикул № 002 07С Р01, производство inno-train
1.8 .Линликатор «ПиоАрр» Аппликатор «ПиоАрр» (ФлуоАпп), артикул
(Ф.зуоАнн) №002 07FA01, производство inno-train.
1.9 Набор для экстракции Иа.боры реагентов для гинирования генов
нуклеиновых кислот главного комплекса гистосовместимости
человека in vitro; 3. Выделение и очистка ДИК
(DNA Extraction and Purification): ИРО'ГРАИС
ДИК Box 500 (PROTRANS DNA Box 500).
производства «ИРОГРАИС медицините
диагностише Иродакте ГмбХ», Германия, РУ №
ФС'З 2009/03600 от 26.01.2009
1.10 А н а: I и за тор определения Используйте любой доступный на рынке и
концентрации выделенной анализатор, зарегистрированный в установленном
ДИК порядке на территории РФ.
1.11 1 laoop для измерения Используйте любой доступный на рынке набор.
KOI щеп грации выделенной зарегистрированный в установленном порядке на
ДИК территории РФ.
2 Для дегекции и оценки рсзулыатов:
2.i Ансыизатор «Пио Vista» Анализатор riuoVista флуоримстричсский
(ФлуоВиста) (артикул № 006 010 000) производства компании
inno-train Diagnostik GmbH/ инно-трейн
Диагностик ГмбХ
Дополнительные материалы (изделия), необходимые для работы с Наборами
peaiemoB 1 IPA-MuoGene, не входят в комплект поставки наборов и нриобретаюгся
110 1 ьзоваге;iем отдельно.
>
9. Перечень 11рименяе 1У1ых производителем (изготовителем) медииииекого изделия
иаииоиальиых e i aiuap ioB
Наборы реагентов HPA-FluoGene (ХНА-ФлуоГен), а также техническая и
)ксн.1\азационная документация к ним, соответствует национальным стандартам РФ на
нро;1укни1о:
ГОС'Т Р 1;11 13612-2010 «Оценка функционазьных характеристик медицинских
изделий ;ыя диагностики in vitro»;
ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 «Медицинские изделия для диагностики m vitro.
Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для
диапюе тики in vitro для профессионального применения»;
ГОС Г Р ИСО 18113-1-2015 «Медицинские изделия для диагностики in vitro.
Инфор.мация, нредоетавляС.мая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины,
онре.челения и обнтие требования»;
ГОС'Т Р ИСО 23640-2015 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. (Оценка
c iaoTuibHOC TH реаген тов для диагностики in vitro»;
TOC'Г Р ИСО 15223-1-2014 «Изделия медицинские. Символы, применяемые при
маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной документации.
Час ть 1. Основные требования»;
^ ГОС'Т ISO 14971-2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к
м е; I и ц и 11 с к и м и з де л и я .м.
--- стр. 11 ---
К). Лна.ш I ические харакгерисгики изделия
Гаолта 2.1 Лiiaim ические харакгерисгики Наборов HPA-FluoGene.
Вид биолог ичееко 1'о
магериала для
исследований
Лиалитическая
I специфичность
Аналитическая
ч) ветвицельность
(1 1 редел де ГС к ни и)
Чувс I вигелмюс I ь
специфичность
Воспроизводимость
и новгоряемость
Внешняя валидация
рабочих показателей
(клинические
исследования)
(ельиая кровь
При исследовании влияния интерферирующих веществ: гемоглобин (в
концентрации 2000 мг/дл), билирубин (в концентрации 20 ivji).
липопротеиды (в 'концет рации 37 ммоль/л), - на проведение
тинироваиия, выполненного при помощи наборов HPA-FluoGene.
интерференции не выявлено. ______________________________________
Рекомендованная концентрация ДНК для наборов реагентов HPA-
FluoGene. - 1 нг'мкл.
99,74%
В исследовании было сопоставлено 48 образцов, типированных для
НРА е помощью HPA-FluoGene в сравнении с HPA-ReadyGene. Все
результаты типирования на 99,74% согласуются с результатами
предварительного типирования с помощью систем типирования SSP
НЦР, шркированных СЕ______________________________________
100%
Наборы реагентов HPA-FluoGene дают одинаковые результаты при
повторном тинировании и ноказыварот сопоставимые коэффициенгы
значений сигналов флуоресценции_______________________________
Исследование было проведено для демонстрации того, что наборы I
HPA-FluoGene могут использоваться [ю предназначению. Н,ель |
заключалась в демонстрации того, что тииирование является
допустимым и надежным. j
В итоге валидация рабочих показателей продемонстрировала, что I
наборы HPA-FluoGene дают допус тимые результаты типирования. !
Было успешно продемонстрировано, что наборы HPA-FluoGene дают !
ис тинные и воснроизводи.мые результаты, сопоставимые с результатами |
эталонных систем. !
I
Диагностическая чувствительность: все результаты типирования иа !
100% совпадали с системами типирования НЦР-ССН с маркировкой !
СЕ. I
Диагиоетическая специфичность: все результаты типирования иа 100% |
совпадали с системами типирования ИЦР-С ХЧ1 с маркировкой CF2___
11 . СИосиб iipii!vieiieiiHH
С'иособ применения Наборов НРА приведен ниже.
11 .1. Ипфор.хзация о сборе образцов для исследования и их подготовке
Гии анализируемого образца: цельная венозная кровь. Забор крови осуществляется
ну тем веиеиункции в ваку} .мные пробирки, содержащие антикоагулянт (цитрат натрия, К2-
')/( Г/\ и.чи КЗ-')/1,ТЛ).
В качестве ан i икоа 1'улянта для получения образцов крови должны использоваться К2-
')/1,ТЛ. К3-')ДТА или цитраз натрия так как оставшийся, после выделения ДНК, гепарин
может ишибировать реакцию НЦР. При экстрагировании ДНК из крови в качестве
источника ДНК используются лейкоциты. Перед начало.м теста необходимо определить
копией 1 рацию образца Д1IK.
Для экстракции нуклеиновых кислот используйте Наборы реагентов для типирования
ICHOB главного комплекса гистосовместимости человека in vitro; 3. Выделение и очистка
--- стр. 12 ---
»
ЛИК (DNA Kxtraction and Purification): ПРО'ГРАНС ДНК Box 500 (PROTRANS DNA Box
500)», проичиодства «ПРО'ГРАНС медицинише диагиостише Нродакте ГмбХ», Германия,
РУ Xl> ФСЗ 2009.03600 от 26.01.2009 [-.
Образец 21.НК разбавляется водой для НГД^ (без флуоресценции) до концентрации
около 1 иг/мкл. Или же неразведенная ДНК может быть смешана со смесью FluoMix
(IlpooufJKu со смесью FluoMix (ФлуоМикс), входящая в состав набора реагентов «ИРЛ-
FluoCiene») и разбавлена водой до конечной концентрации 0,5 нг/мкл. Соотношение
от ического поглощения, характеризующее чиетоту образца - А260/280 должно быть 1,8
t0,18.
/1,он\скаезся хранить иеследуемые образцы цельной крови при температуре от 2°С до
8°С не более 24 часов после забора крови.
11.2. Создание задания в программе FluoGene
Для регисграции Белых 96-луночных ПЦР-нланшет со шрих-кодом и маркированной
покровной пленкой (далее но тексту - НЦР-нланшетов FluoGene) и теетирования образцов
/1НК в программе FluoGene (ФлуоГен) должно быть еоздано задание в соответствии с
инс1р\ кцнсй но использованию iipoi раммного обеспечения FluoGene. Программа FluoGene
ав1Ч)ма1ичсскн создает протокол НЦР, что является нормативом для подготовки НЦР в
тссI-сис теме (наборах реаген тов).
11.3. НЦР / Амплификация
Схематично проведение теста приведено ниже (см. Рис. 1)
Смешать выделенную ДНК и ФлуоМикс
Аликвотировать по 15 мкл смеси в каждую лунку
ПЦР-планшета.
Заклеить ПЦР-планшет оптически прозрачной
пленкой
Провести предварительное считывание на
ализаторе ФлуоВиста
Термоциклирование и амплификация
Провести конечное считывание на
ализаторе ФлуоВиста
Автоматическое создание заключения
Рис. 1 схема проведения исследования с помощью наборов HPA-FluoGene.
Для удобств^ описания работы с белым 96-луночным 11ЦР-нланшетом ео шрих-
кодом и маркированной покровной пленкой на одно или шееть типирований (дачее но
12
Ж.
--- стр. 22 ---
i
i
13несе11ный объем слитком мал Проверьте настройки пинетки
Внесенное количество ДИК
СЛИ 1НКОМ велико
Измерьте концентрацию ДНК и доведите ее до
концентрации 1нг/мкл. Разводите ДИК только
специальной водой для ПЦР.
11енравильные условия
’ ам1ии(|)икации
1 1 к'исправен Термоциклер
11еправильные условия
амплификации
Проверьте программу термоциклирования (См. пункт
11.3. Г)
Проверить З'ермоциклер (амплификатор) при ;
необходимое ти - замени i ь.
Красный или желтый маркер
бы.1 использован для нанесения
надписей на нланшез
Используйте только маркер черного или синего цвета
для надписей на планшете.
Наличие воздушных пузырей в
лунке в ходе снятия
иредвартельных показаний до
ИЦР
Удалите возможные воздушные пузыри аккуратно
постучав планшетом по столу или посредством
центрифугирования. |
Испарение жидкости из-за
плохого прилегания пленки.
Используйте Аппликатор «FluoApp» (ФлуоАпп) для
тщательного запечатывания планшета. Позаботьтесь
О том, чтобы по краям планшет был также плотно
запечатан.
Промежуток времени между
концом ИЦР и детекцией
(|). 1 \ о рес це н ци и сл и ш ко м
длинный.
Йрыз1 и И.1И 1 рязь на оп тической
пленке.
Снимите показания с планшета не позднее чем 15
минут после окончания ПЦР.
Смените оптическую пленку.
Занозевание или загрязнение
оптической пленки.
Выдержать ПЦР-планшет в течение около 30 сек. в
термоциклере с включенным подогревом крышки или
заменить оптическую пленку. 11ри работе с пленкой
надевать чистые одноразовые перчатки. Убедтесь,
что Анализатор FluoVisla не находится в зоне
прямого действия кондиционера
Период между подготовкой
ИЦР и предварительным
! считыванием показаний
i дольше, чем 15 минут.
Снимите измерение с планшета не позднее, чем через
15 минут после подготовки 11ЦР-реакций.
17. Ограпичс'ния метода.
uOi рай имен ИЯ метола:
'йиряаиеиие ДИК ингибиторами ИЦР, такими как гемоглобин, гепарин, этанол,
обраина. разделенные фиколлом (лейкоцитарная взвееь, клеточные еуенензии) и т.д.,
может нривеет к еерьезному вметательетву в реакцию ПЦР.
1'ели пациент получает гепарин, иенользуйте альтернативный иеточник ДНК (не
цельную кровь).
Избегайте иенользования линемичных или гемолизированных образцов, поскольку
свободный гемоглобин .может помешать реакции ИЦР.
Иенользование образцов, собранных без антикоагулянта, или замороженных /
размороженных несколько раз, не рекомендуется, поскольку эти условия могут не
обеспечи ть достаточное количес тво или качество ДИК для типирования.»^
• - Schrader С, Schielkc А, Ellcrhroek L and R. Johne R (2012), PCR inhibitors - occurrence,
properties and removal. ,) ApplMicrobiol 2012 Nov: 113(5): 1014-26.
11
--- стр. 23 ---
18. Объяснение символов
1^ данной инструкции но применению и в печатной продукции для Наборов ИРЛ
исноль'}у1 0 1ся следующие предупредительные и информационные знаки:
Условные обозначения:
Дата окончания срока
годности
L 0
С'одсржимого дос таточно для
выполнения (п) тестов
11омер ло'га REF № артикула
Соблюдать инструкцию но применению!
Соблюдать верхний температурный
предел
d
Производитель
IV D
In vitro диагностика
. BLOCK
[ BUFFLR
QMS XX.XX
Знак CFCmark: СН-маркировка
Белый 96-луночный ПЦР-иланшет со шрих-кодом и маркированной
покровной пленкой на одно или шесть тинирований
Пробирка со с.мссью FluoMix (ФлуоМикс)
Менедж.меит контроля качества «месяц»л од» (документ для
внутренне 1'о использования)
19. Гарантийные обязательства
Набор реагентов «НРА-FluoGene» (ХПА-ФлуоГен) не подлежит ремонту и
|'аран'1ийному обслуживанию.
^ 20. Грсбовання к зсхннческому обслуживанию и ремонту медицинского изделия.
( ервисиое обслуживание
11е нримени.мо.
21 . Гребоваиия к охране окружающей среды. Порядок осуществления ути. 1изации и
уиичюжеиия Наборов
Наборы реатенгов «НРА-FluoGene» (ХНА-ФлуоГен) относится к классу
тниде.миолотически опасных отходов (Класс Б). Р1еиспользованные и использованные
Наборы peai eH'ioB подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-
21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городеких и
сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общесгвенных помещений, организации и проведению саиитарно-нрогивоэнидемических
(нро(1)илак1 ических) мероприя тий» для отходов класса Б.
23
--- стр. 24 ---
Пользователь Наборов реагентов «НРА-FluoGene» (Х11А-Флуо1 ен) несет обязанность
но утилизации всех отходов (материалов проб), накапливающихся в результате рабогы с
Наборами.
22. Информация о наличии в медицинском изделии лекарственного средства для
.медииииско1 о применения, материалов животного и (или) человеческого
ироисхождения
Изделие предназначено для диагностики in vitro, лекарственных средств для
медиципекого применения и человеческой предварительно тинированной ДНК не
содержи 1.
23. Вио .101 ический реферси гиый интервал применения медининско! о изделия
4
Частота генотипов, %
Генотип J.G. McFarland,
1993
Bontadini et al.,
2 0 0 0
ФГБУ «НИИГиТ», г.
Санк г-Петербу рг,
2013
НРАНдНа 72 78 74,7
НРА-1а/1Ь 26 16 21,9
НРАНЬ 1Ь 2 6 3,4
: НРА-2а 2а 85 76 83,3
НРА-2а/2Ь 14 22 15,5
НРА-2Ь/2Ь 1 2 1,7
НРА-За/За 37 53 38,35
НРА-За/ЗЬ 48 38 50,7
НРА-ЗЬ ЗЬ 15 9 14,95
!
Н1^А-4а/4а 99 нет данных 100
НРА-4а/4Ь <0,1 нет данных 0
НРА-4Ь/4Ь <0,1 нет данных 0
НРА-5а/5а 80 58,5 83,8
НРА-5а.5Ь 19 40 16,2
11РА-5Ь.5Ь 1 1,5 0
- 11.1Г Мииссиа, И И, Кробиисц, М.И. Ьлииов, С .И. Капустин Ст. «Лмтигены и антитела к тромбоцитам» Журнал
(Онкогемаюло! ия» Ж>3 за 2013т. Стр.62.
24