Набор реагентов для выявления и дифференциации ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) 6 и 11 генотипов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® ВПЧ 6/11-FL" по ТУ 9398-181-01897593-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Приказом Росздравнадзора от № УТВЕРЖДАЮ Директор Федерального бюджетного учреждения науки «Центральный научно- исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере 'защиты прав потребителей и благополучия человека ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления и дифференциации ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) 6 и 11 генотипов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® ВПЧ 6/11-FL» АмплиСенс ® ш1 Федеральное бюджетное учреждение науки « Центральн ы й науч но-исследовател ьски й институт эпидемиологии», Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом За IV D --- стр. 2 --- СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ......................................................................................................3 НАЗНАЧЕНИЕ....................................................................................................................... 3 ПРИНЦИП МЕТОДА..............................................................................................................4 ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ................................................4 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................6 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ..........................................................................................6 ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ................................................8 ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА... 9 ФОРМАТ FEP.......................................................................................................................1 1 СОСТАВ................................................................................................................................ 11 ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................ 12 ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ....................................................13 ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ..................................................................................... 13 А. Подготовка пробирок для амплификации....................................................................13 Б. Проведение амплификации............................................................................................ 16 ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ ПО «КОНЕЧНОЙ ТОЧКЕ».................................................................................................................................18 ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.................................................................................. 18 ФОРМАТ FRT.......................................................................................................................21 СОСТАВ................................................................................................................................21 ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................22 ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....................................................22 ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».......................................................................................................................... 23 А. Подготовка пробирок для амплификации................................................................... 23 Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ...........25 АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................................................. 27 СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ .....................30 ПРИЛОЖЕНИЕ 1................................................................................................................. 31 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ........................................33 ОГЛАВЛЕНИЕ --- стр. 3 --- список СОКРАЩЕНИЙ В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения: ВКО - внутренний контрольный образец (участок р-глобинового гена человека)____________ _________________________ ВПЧ - вирус папилломы человека - дезоксирибонуклеиновая кислота ОКО - отрицательный контрольный образец ПЦР РШМ тем - полимеразная цепная реакция - рак шейки матки - транспортная среда с муколитиком ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора - федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека _____ FEP - флуоресцентная детекция по «конечной точке» FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»__________________________________ НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «АмплиСенс® ВПЧ 6/11-FL» предназначен для выявления и дифференциации ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) 6 и 1 1 генотипов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, выделенные из соскобного отделяемого слизистых оболочек урогенитального тракта. ВПЧ 6 и 11 генотипов относятся к генотипам низкого онкогенного риска, при этом являются неассоциированными с развитием рака шейки матки (РШМ). Для генотипов низкого онкогенного риска характерно оказание продуктивного воздействия на клетки. Данные вирусы ответственны за образование генитальных бородавок (остроконечных кондилом гениталий), рецидивирующего респираторного папилломатоза гортани, при этом более 95 % случаев данных патологий связаны с6 и 11 генотипами. Следует также отметить, что 6 и 1 1 генотипы входят в состав квадривалентной вакцины, защищающей от инфицирования ВПЧ 6, 11, 16 и 18 генотипами. Таким образом, выявление ВПЧ 6 и 11 генотипов может быть также использовано для оценки эффективности вакцинопрофилактики РШМ и доброкачественных генитальных образований. ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания\ ^ в соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС. --- стр. 4 --- ПРИНЦИП МЕТОДА Выявление ДНК ВПЧ методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в себя три этапа: экстракцию ДНК из образцов клинического материала, амплификацию участка ДНК данного микроорганизма и гибридизационно-флуоресцентную детекцию. Детекция флуоресцентного сигнала при использовании формата FEP осуществляется после окончания ПЦР с помощью флуоресцентного ПЦР-детектора, а при использовании формата FRT - непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени». Метод основан на одновременной амплификации участков ДНК ВПЧ и участка ДНК р-глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. ПЦР-анализ на наличие ДНК ВПЧ 6 и 11 генотипов проводится в одной пробирке ДНК-мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, является участком генома человека и должна всегда присутствовать в образце (цервикальный соскоб) в достаточном количестве, эквивалентном количеству клеток в мазке (10^-10^ клеток/мл). Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать этапы ПЦР-анализа (экстракцию ДНК и проведение ПЦР-амплификации), но и оценивать адекватность взятия материала и его хранения. В случаях, когда соскоб эпителия взят неправильно (недостаточное количество эпителиальных клеток), сигнал амплификации р- глобинового гена будет заниженным. ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Набор реагентов выпускается в 2 форматах. Формат FEP Набор реагентов выпускается в 7 формах комплектации: Форма 1 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100 F. Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP (пробирки 0,5 мл). Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP (пробирки 0,2 мл). Форма 4 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант FEP-100 F. Форма 5 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант FEP (пробирки 0,5 мл). --- стр. 5 --- Форма 6 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант FEP (пробирки 0,2 мл). Форма 7 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке. Формы комплектации 1, 2, 3 предназначены для амплификации ДНК ВПЧ 6, 1 1 генотипов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «по конечной точке». Для проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Формы комплектации 4, 5, 6 предназначены для проведения полного ПЦР- исследования, включая экстракцию из клинического материала ДНК и амплификацию ДНК ВПЧ 6, 11 генотипов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «по конечной точке». Форма комплектации 7 предназначена для производственных целей для последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам. ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 7 используется только в соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Формат FRT Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации: Форма 1 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F. Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT. Форма 3 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант FRT-100 F. Форма 4 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант FRT. Форма 5 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке. Формы комплектации 1, 2 предназначены для проведения амплификации ДНК 6, 1 1 генотипов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Формы комплектации 3, 4 предназначены для полного ПЦР-исследования, включая экстракцию из клинического материала ДНК и амплификацию ДНК ВПЧ 6, --- стр. 6 --- 1 1 генотипов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для последующей маркировке на языке заказчика и комплектации по наборам. ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Аналитическая чувствительность Вид: клинического' материала Соскоб цервикального эпителия Транспортная среда'||Щ| «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» ; выделе «ДНК-сорб- АМ» «ПЦР-комплект» варианты F E P и F R T 1x1 0= * Аналитическая специфичность Набор реагентов обнаруживает фрагмент ДНК ВПЧ 6 и 1 1 генотипов. Аналитическая специфичность набора была исследована посредством добавления в реакцию ДНК/РНК различных микроорганизмов: Аденовирус типы 2, 3, 7; Цитомегаловирус; вирус Эпштейна-Барр; вирус ветряной оспы; вирус гепатита В, С; вирус иммунодефицита человека первого типа; вирус герпеса человека типы 6, 8; вирус простого герпеса; Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, M.genitalium, Ureaplasma urealyticum\ Gardnerella vaginalis] Neisseria gonorrhoeae\ Trichomonas vaginalis] Candida albicans] Streptococcus pyogenes] Staphylococcus aureus] ДНК вирусов папилломы человека рода 3, у, м (1, 3, 4, 5, 8, 37, 38, 65, 20, 24, 49, 50, 15), рода а низкого и неустановленного риска (26, 53, 7, 27, 10), рода а высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) в концентрации 10° копий ДНК ВПЧ на мл. Перекрестных реакций при этом не наблюдалось. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца клинического материала, помещенного в указанную транспортную среду. --- стр. 7 --- патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе всегда следует выполнять следующие требования: - Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». - Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». - Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. - Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. - Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции. - Допускать к работе с набором только специально обученный персонал. - Не использовать набор по истечении срока годности. - Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании работы. - Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью. --- стр. 30 --- СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут. «ПЦР-комплект» вариант FEP-100 F и вариант FRT-100 F при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» хранить при температуре от 2 до 25 °С. «ПЦР-комплект» вариант FEP и вариант FRT хранить при температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100 F и вариант FRT- 100 F (кроме полимеразы (TaqF), ПЦР-смеси-1-FL ВПЧ 6/11 и ПЦР-смеси-2-FRT) хранить при температуре от 2 до 8 °С. Полимеразу (TaqF), ПЦР-смесь-1-FL ВПЧ 6/11 и ПЦР-смесь-2-FRT хранить при температуре не выше минус 16 °С. ПЦР- смесь-1-FL ВПЧ 6/11 в защищенном от света месте. Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений. Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс® ВПЧ 6/11-FL» направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (111123 г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За) в отдел по работе с рекламациями и организации обучения (тел. (495) 974-96-46, факс (495) 916-18- 18, e-mail: products@pcr.ru)^. Заведующий НПЛ ОМДиЭ ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» Управления делами Президента Российской Федерации Е.Н. Родионова Никонов ^ Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы м ож ете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте: w w w .am plisens.ru. 30 --- стр. 31 --- ЭКСТРАКЦИЯ ДНК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПЛЕКТА РЕАГЕНТОВ «ДНК- сорб-АМ» Порядок работы. 1 . Лизирующий раствор (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть, перемешивая при температуре 65 °С до полного растворения кристаллов. 2. Добавление реагентов. Способ 1: - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл (включая отрицательный контроль экстракции). - ресуспендировать сорбент универсальный до гомогенной консистенции, внести в каждую пробирку по 300 мкл лизирующего раствора и по 20 мкл сорбента универсального, используя наконечники с фильтром. Промаркировать пробирки. Способ 2: - перед началом работы во флакон с лизирующим раствором добавить весь объем (2 мл на 30 мл лизирующего раствора) предварительно гомогенизированного сорбента универсального и перемешать. Допускается хранение полученной смеси в течение 2 сут при комнатной температуре. Перед применением тщательно перемешать. - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл (включая отрицательный контроль экстракции) и, используя наконечник с фильтром, внести в каждую пробирку по 320 мкл подготовленной смеси лизирующего раствора и сорбента универсального. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки согласно маркировке внести по 100 мкл пробы, используя для каждой пробы отдельный наконечник с фильтром. В пробирку отрицательного контроля (В-) экстракции внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с фильтром. 4. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе и инкубировать 5 мин при температуре 65 “С в термостате. После окончания инкубации перемешать на вортексе и поставить в штатив на 2 мин. 5. Осадить сорбент универсальный в пробирках центрифугированием при 10 тыс об/мин в течение 30 с. Не захватывая сорбент универсальный, удалить ПРИЛОЖЕНИЕ 1 31 --- стр. 32 --- надосадочную жидкость в колбу-ловушку с помощью вакуумного отсасывателя, используя для каждой пробы отдельный наконечник без фильтра. 6. Добавить в пробы по 1 мл отмывочного раствора, перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. 7. Повторить п. 5. 8. Поместить пробирки в термостат с температурой 65 °С на 5-10 мин для подсушивания сорбента универсального. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 9. В пробирки добавить по 100 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин. 10.Перемешать на вортексе. Центрифугировать пробирки при 12 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК (ДНК-проба). Указанный материал готов к постановке ПЦР. ДНК-пробы можно хранить в течение 1 над при температуре от 2 до 8 “ С и в течение года при температуре не выше минус 16 “С. Пробирки с ДНК-пробами переносят в зону ПЦР-амплификации. 32