Набор реагентов для выделения и качественного выявления РНК SARS-CoV-2 методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в реальном времени "МБС-Тест SARS-CoV-2 РНК" по ТУ 21.20.23-045-26329720-2021 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 --- эндогенного внутреннего контроля (ВКО), отражающего качество взятия, транспортировки, хранения и обработки клинического материала. 3. КОМПЛЕКТНОСТЬ 1. Набор реагентов «МБС-Тест SARS-CoV-2 РНК»: - Комплект реагентов для выделения ЬЖ - 1 шт.; - Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР - 1 шт.; - Планшет 96-луночный для проведения ПЦР - 1 шт.; - Пленка для запаивания планшета 96-луночного - 1 шт.; - Инструкция по применению - I шт. 2. Паспорт' ~ 1 шт. 4. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ В работе необходимо использовать компоненты строго из одной серии набора реагентов. Запрещается использование отдельных компонентов, относящихся к разным сериям набора реагентов. Состав набора реагентов представлен в таблице 1. Таблица 1 Состав Объем Количество Описание Комплект реагентов для выделения НК: ЛБ 28 мл 1 флакон Лизирующий буфер - прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость с магнитными частицами. Допускается расслоение на надосадочную жидкость и осадок магнитных частиц. Осадок магнитных частиц может быть черного или коричневого цвета. Допускается выпадение кристаллов и хлопьев белого цвета РП 31 мл 1 флакон Раствор для преципитации - прозрачная бесцветная жидкость ПР-1 30 мл или 55 мл 2 флакона или 1 флакон Буферный раствор для отмывки магнитных частиц 1 - прозрачная бесцветная жидкость ПР-2 22 мл 1 флакон Буферный раствор для отмывки магнитных частиц 2 - прозрачная бесцветная жидкость ЭР 11 мл 1 флакон Буферный раствор для элюции. Консервант: 0,1 % проклин 300 Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР: К+ 100 мкл 1 пробирка Положительный контроль, прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 К- 100 мкл 1 пробирка Отрицательный контроль, прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 PC 1,7 мл 1 пробирка Реакционная смесь - прозрачная жидкость Паспорт вкладывается один на транспортную упаковку. стр. 3 из 22, Версия 01/10 --- стр. 4 --- фиолетового цвета. Консерванты: 0,1 % проклин 300 Фермент RT 70 мкл 1 пробирка MMLV -обратная транскриптаза - прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 Фермент Р 70 мкл 1 пробирка Hot-start Г<я^-полимераза - прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 Планшет 96- луночный для проведения ПЦР - 1 штука Белый непрозрачный или прозрачный планшет с 96 лунками из полипропилена для проведения ПЦР Пленка для запаивания планшета 96- луночного - 1 штука Прозрачная клейкая пленка Инструкция по применению 1 штука - Число анализируемых образцов биологического материала Набор реагентов предназначен для выполнения 96 определений, включая контрольные образ цы. 5. ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПОНЕНТОВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Контрольные образцы «К+» и «К-» используются для контроля ОТ-ПЦР при выявлении РНК коронавируса SARS-CoV-2 в анализируемых образцах. «К-» (Отрицательный контроль), представляет собой раствор, НЕ содержащий плазмидную конструкцию со вставкой фрагмента РНК коронавируса SARS-CoV-2. «К+» (Положительный контроль), представляет собой раствор, содержащий плазмидную конструкцию со вставкой фрагмента РНК коронавируса SARS-CoV-2 и плазмидную конструкцию со вставкой фрагмента ДНК одного из генов «домашнего хозяйства». «РС» (Реакционная смесь), представляет собой смесь специфических олигонуклеотидных последовательностей в необходимом для проведения реакции буферном растворе. «Фермент RT», представляет собой раствор фермента MMLV -обратной транскриптазы в необходимом для проведения реакции буферном растворе. «Фермент Р», представляет собой раствор фермента Hot-start 7а^-полимеразы в необходимом для проведения реакции буферном растворе. «ЛБ», представляет собой буферный раствор с магнитными частицами для лизирования вируса и эпителиальных клеток в анализируемом образце. «РП» представляет собой раствор для осаждения нуклеиновых кислот на магнитные частицы. «ПР-1» представляет собой буферный раствор для промывки магнитных частиц от остатков «ЛБ» и «РП». «ПР-2» представляет собой раствор для промывки магнитных частиц от остатков «ПР-1». «ЭР» представляет собой буферный раствор для элюции нуклеиновых кислот с поверхности магнитных частиц. 6. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 6.1. Предел обнаружения стр. 4 из 22, Версия 01/10 --- стр. 5 --- Предел обнаружения набора реагентов составляет 1000 копий РНК коронавируса SARS-CoV-2 на 1 мл образца. 6.2. Специфичность Специфичность набора реагентов проверялась in silico со следующими инфекционными агентами: Коронавирус 229Е Риновирус Коронавирус ОС43 Параэховирус Коронавирус HKU1 Candida albicans Коронавирус NL63 Corynebacterium diphtheriae SARS-коронавирус Legionella pneumophila MERS- коронавирус Bacillus anthracis (Anthrax) Аденовирус Moraxella catarrhalis Метапневмовирус человека Neisseria elongata and Neisseria meningitidis Парагрипп первого типа Pseudomonas aeruginosa Парагрипп второго типа Staphylococcus epidermidis Парагрипп третьего типа Streptococcus salivarius Парагрипп четвертого типа Leptospira sp. Грипп типа А Chlamydophila pneumoniae Грипп типа В Chlamydophila psittaci Г рипп типа С Coxiella burnetii (Q-Fever) Энтеровирус Staphylococcus aureus Респираторный синцитиальный вирус типа А Haemophilus influenzae Респираторный синцитиальный вирус типа В Legionella pneumophila Bordetella pertussis Mycobacterium tuberculosis Mycoplasma pneumoniae Streptococcus pneumoniae Pneumocystis jirovecii (PJP) Streptococcus pyogenes При проведении анализа были использованы ресурсы доступные в сети Интернет: BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), MUSCLE (https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/). Среди проанализированных инфекционных агентов гомология геномной последовательности SARS-CoV-2 выявлена только для SARS-коронавируса и составляет 82%. Указанная гомологичность недостаточна для получения учитываемого результата в представленной диагностической системе. Для всех других проанализированных инфекционных агентов гомологии не обнаружено. Проведенные анализы in silico указьшают на то, что неспецифическая амплификация, которая могла бы привести к перекрестной реакции или повлиять на амплификацию целевых участков SARS-CoV-2, крайне маловероятна. Специфичность набора реагентов проверялась in vitro на базе ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора на охарактеризованных музейных штаммах с биологической активностью не менее 1,0 х 105 УЕ-мл-1: Streptococcus pneumoniae штаммы АТСС 49619 и № 101, Haemophilus influenzae type В штамм № 3689, Legionella pneumophila штамм АТСС 33152, Metapneumovirus штамм НМ-1, Rhinovirus штаммы JH2060 и штамм 6669 (тип 39), Human respirovirus 1 штамм С-39, Коронавирус штаммы «ОС-43» (256) и «Р/Ленинград/2/77», Коронавирус КРС штамм «КВ-90». Полученные данные подтверждают отсутствие неспецифических реакций с РНК/ДНК Streptococcus pneumoniae штаммы АТСС 49619 и № 101, Haemophilus influenzae type В штамм № 3689, Legionella pneumophila штамм АТСС 33152, Metapneumovirus штамм НМ-1, Rhinovirus штамм JH2060 и штамм 6669 (тип 39), Human respirovirus 1 штамм С-39, Коронавирус штаммы «ОС-43» (256) и «Р/Ленинград/2/77», Коронавирус КРС штамм «КВ-90». Специфичность набора реагентов проверялась in vitro на базе ООО «МБС-Технология» с по стр. 5 из 22, Версия 01/10 --- стр. 6 --- мощью образцов клинического материала (объединенные мазки из носоглотки и ротоглотки), не содержащих РНК коронавируса SARS-CoV-2, но положительных на другие инфекции: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, вирус Парагриппа, вирус гриппа А, Аденовирус, вирус Гриппа В, Метапневмовирус, Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), Риновирус, Legionella pneumophila, подтверждённых с использованием зарегистрированных в установленном порядке на территории Российской Федерации наборов реагентов. Полученные данные подтверждают отсутствие неспецифических реакций с РНК/ДНК Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, вирус Парагриппа, вирус гриппа А, Аденовирус, вирус Гриппа В, Метапневмовирус, Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), Риновирус, Legionella pneumophila, содержащихся в образцах из коллекции ООО «МБС-Технология». Способность исследуемого набора реагентов выявлять РНК коронавируса SARS-CoV-2, в том числе вариантов коронавирусов: 20I/501Y.V1 (Alpha); 20H/501Y.V2 (Beta); 21A/S478K (Delta); AY.l («Delta +»); 20J/501Y.V3 (Gamma); B.1.525 (Eta); B.1.526 (Iota); B.1.617.1 (Kappa); C.37 (Lambda); B.1.621; B. 1.1.519; B.1.620; B.1.177; 21C (Epsilon); 20A/S:439K; S:Q677; S:S477N; 20A/S:98F; S:D80Y; 20B/S:626S; 20B/S:1122L, была подтверждена в ходе испытаний биологиче ских образцов из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор” Роспотребнадзора. 6.3. Потенциально интерферирующие вещества Для оценки потенциальной интерференции были выбраны эндогенные вещества - муцин, ге моглобин, и экзогенные вещества - водный раствор хлоргексидина биглюконата для местного и наружного применения. Для изучения влияния потенциально интерферирующих веществ на полученные результаты, испытуемым набором реагентов были протестированы модельные образцы, содержащие и не со держащие эндогенные и экзогенный потенциально интерферирующие вещества. Модельные об разцы представляли собой образцы Рабочей Панели №5, №6, №7 и №8, контаминированные эндо генными (муцин, гемоглобин) и экзогенным (водный раствор хлоргексидина биглюконата для местного и наружного применения) потенциально интерферирующими веществами и без добавле ния данных веществ. Оценивали полученные значения пороговых циклов контрольных и испыту емых образов согласно паспорту на Рабочую панель. При соответствии/ не соответствии значений пороговых циклов контрольных и испытуемых образцов заданным в паспорте диапазонам делали вывод об отсутствии или наличии влияния потенциально интерферирующих веществ на результат ОТ-ПЦР. Результаты тестирования представлены в Таблице 2. Таблица 2 Материал Вид вещества Потенциально интерферирующие вещества Наличие интерференции Мазки из носоглотки и/или ротоглотки, рас твор бронхоальвеолярно го лаважа Эндогенные Муцин (до 5% по объему) Не обнаружено Г емоглобин (до 5 % по объему) Не обнаружено Экзогенные Водный раствор хлоргекси дина биглюконата (0,5% в образце) Не обнаружено 6.4. Воспроизводимость Воспроизводимость результатов исследований, проводимых с использованием набора реаген тов, была определена в разные дни, разными операторами, на различных приборах и сериях испы туемого набора реагентов путем тестирования положительных и отрицательных модельных об стр. 6 из 22, Версия 01/10 --- стр. 7 --- разцов. Положительные образцы представляли собой образцы Рабочей Панели №5, №6, №7 и №8, в качестве отрицательных образцов были использованы образцы Рабочей Панели №13, №14, №15 и №16. Полученные результаты представлены в таблице 3. Таблица 3 Условия исследования образцов Тип обэазца Маэок ш носоглотки Мазок из ротоглотки Мажн из носоглоткн и D O T O r л отки БАЛ Моэок из носоглотки Мазок из ротоглот км Мазки из носоглоткн и оо то гл е ткн БАЛ Образец РП№5 Образец РПМб Образец РП №7 Образ ец РП т Образец РП№13 Образе цРП Ш4 Образец РПМ15 Образ ец РП ЛИб в одной постановке Кол-во образцов 8 8 Совпадение результатов, % 100 100 Между сериями Кол-во образцов 16 18 Совпадение результатов, % 100 100 Между операторам и Кол-во образцов 16 16 Совпадение результатов, % 100 100 Между приборами Кол-во образцов 40 40 Совпадение результатов, % 100 100 Между днями Кол-во образцов 16 16 Совпадение результатов, % 8 8 7. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Диагностическая чувствительность Набора регентов при исследовании: ‘ мазков из носоглотки (в том числе вариантов коронавируса 201/501Y.VI (Alpha); 20H/501Y.V2 (Beta); 21A/S478K (Delta); AY.l («Delta +»); 20J/501Y.V3 (Gamma); B.1.525 (Eta); B.1.526 (Iota); B.1.617.1 (Kappa); C.37 (Lambda); B.1.621; B. 1.1.519; B.1.620; B.1.177; 21C (Epsilon); 20A/S:439K; S:Q677; S:S477N; 20A/S:98F; S:D80Y; 20B/S:626S; 20B/S:1122L) составила 100% (до верительная вероятность 95%, ДИ: 99,4% - 100%) при 525 положительных образцах; - мазков из ротоглотки (в том числе вариантов коронавируса 20I/501Y.V1 (Alpha) 20H/501Y.V2 (Beta); 21A/S478K (Delta); AY.l («Delta +»); 20J/501Y.V3 (Gamma); B.1.525 (Eta) B.1.526 (Iota); B.1.617.1 (Kappa); C.37 (Lambda); B.1.621; B. 1.1.519; B.1.620; B.1.177; 21C (Epsilon) 20A/S:439K; S:Q677; S:S477N; 20A/S:98F; S:D80Y; 20B/S:626S; 20B/S:1122L) составила 100% (до верительная вероятность 95%, ДИ: 99,4% - 100%) при 525 положительных образцах; - объединенных мазков из носо- и ротоглотки (в том числе вариантов коронавируса 20I/501Y.V1 (Alpha); 20H/501Y.V2 (Beta); 21A/S478K (Delta); AY.l («Delta +»); 20J/501Y.V3 (Gamma); B.1.525 (Eta); B.1.526 (Iota); B.1.617.1 (Kappa); C.37 (Lambda); B.1.621; B. 1.1.519; B.1.620; B.1.177; 21C (Epsilon); 20A/S:439K; S:Q677; S:S477N; 20A/S:98F; S:D80Y; 20B/S:626S; CTp. 7 из 22, Версия 01/10 --- стр. 8 --- 20B/S:1122L) составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 99,4% - 100%) при 525 поло жительных образцах; - раствора бронхоальвеолярного лаважа (в том числе вариантов коронавируса 201/501Y.VI (Alpha); 20H/501Y.V2 (Beta); 21A/S478K (Delta); AY.l («Delta +»); 20J/501Y.V3 (Gamma); B.1.525 (Eta); B.1.526 (Iota); B.1.617.1 (Kappa); C.37 (Lambda); B.1.621; B. 1.1.519; B.1.620; B.1.177; 21C (Epsilon); 20A/S:439K; S:Q677; S;S477N; 20A/S;98F; S:D80Y; 20B/S:626S; 20B/S;1122L) составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 99,4% -100%) при 525 положительных образцах. Диагностическая специфичность Набора реагентов при исследовании: - мазков из носоглотки составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 88,7% - 100%) при 25 отрицательных образцах; - мазков из ротоглотки составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 88,7% - 100%) при 25 отрицательных образцах; - объединенных мазков из носо- и ротоглотки составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 95,6% -100%) при 67 отрицательных образцах; - раствора бронхоальвеолярного лаважа составила 100% (доверительная вероятность 95%, ДИ: 88,7% - 100%) при 25 отрицательных образцах. 8. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 8.1. Использовать только для диагностики in vitro. 8.2. Потенциальный риск применения набора реагентов - класс 3 (Приказ Минздрава России от 6 июня 2012 г. № 4н «Об утверждении номенклатурной классификации медицинских изделий»). 8.3. Исследования по выявлению в клиническом материале возбудителей инфекционных болезней, относящихся ко II группе патогенности, должно проводиться с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил и норм СанПиН 3.3686-21 «Санитарно- эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» и СанПиН 2.1.3684- 21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий». Диагностика возбудителей инфекционных болезней II группы патогенности молекулярно-генетическими методами (не сопровождающихся накоплением (культивированием или концентрированием) жизнеспособного патогена) может проводиться в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами III группы патогенности в соответствии с п.319 СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней». 8.4. Материал для исследований подлежит предварительной обработке в соответствии методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе необходимо всегда вьшолнять следующие требования: рассматривать исходные исследуемые образцы биологического материала как инфекционно-опасные; инактивировать исходные исследуемые образцы биологического материала в соответствии методическими указаниями МУ 1.3.2569-09. 8.5. Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по стр. 8 из 22, Версия 01/10 --- стр. 12 --- - контейнер для сбора и обеззараживания наконечников; - штатив для пробирок; - магнитный штатив для пробирок типа эппендорф объемом 1,5-2,0 мл. - крио штативы для микропробирок (при наличии); - ледяная баня или источник льда; - пробирки и пластик для амплификатора типа «Rotor Gene» (при необходимости). П. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Материалом для исследования являются пробы биологического материала - мазки из носоглотки и/или ротоглотки, раствор бронхоальвеолярного лаважа, полученные от пациентов с клинической симптоматикой респираторного заболевания, схожего с инфекцией, вызванной SARS-CoV-2. Идентификацию и прослеживаемость проб пациента (мазки из носоглотки и /или ротоглотки, раствор бронхоальвеолярного лаважа) проводить в соответствии с системой менеджмента качества лаборатории. Взятие, упаковку, хранение и транспортирование анализируемых образцов осуществлять согласно МР 3.1.0169-20 «Организация лабораторной диагностики C0VID-19», МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности» и «Временным методическим рекомендациям по лабораторной диагностике нового коронавируса 2019 (2019- nCoV) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)». Перед постановкой анализа анализируемые образцы, хранивщиеся в морозильной камере, необходимо разморозить. Все образцы перед экстракцией РНК необходимо аккуратно перемешать. Не допускается повторное замораживание/оттаивание образцов. Полученный препарат РНК необходимо сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции. Препарат РНК не подлежит хранению. 12. ПРИЧИНЫ СНИЖЕНИЯ ПРАВИЛЬНОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ 12.1. Использование компонентов набора реагентов с истекшим сроком годности. 12.2. Использование компонентов из наборов реагентов разных серий или смешивание их в процессе приготовления растворов. 12.3. Использование компонентов из наборов реагентов других производителей. 12.4. Несоблюдение условий и сроков хранения невскрытых компонентов набора реагентов. 12.5. Несоблюдение условий и сроков хранения вскрытых компонентов набора реагентов. 12.6. Неправильное дозирование растворов, которое приводит как к росту, так и к снижению регистрируемой флуоресценции. 12.7. Изменение концентрации раствора за счет испарения жидкости из открытого флакона с компонентом. 12.8. Недостаточное перемешивание компонентов набора реагентов. 12.8. Использование для работы с компонентами, анализируемыми и контрольными образца ми грязных наконечников. 12.9. Неправильная утилизация планшетов и/или пробирок после проведения реакции ампли фикации может приводить к контаминации лаборатории и, как следствие, получению ложнополо жительных результатов в дальнейших постановках. стр. 12 из 22, Версия 01/10 --- стр. 13 --- 12.10. Использование для дезинфекции посуды, оборудования, материалов и рабочих поверх ностей неразрешенных и/или оказывающих влияние на результат амплификации дезсредств. Ре комендуется использовать, например, хлорамин и другие хлорсодержащие средства. 12.11. Рекомендуется использовать перчатки медицинские одноразовые нестерильные не- опудренные и нарукавники одноразовые. 12.12. Проведение анализа в неблагоприятных условиях окружающей среды, например, при температуре воздуха, в лаборатории выше 25 °С и относительной влажности воздуха более 70 %. 13. ПОДГОТОВКА ОБОРУДОВАНИЯ Для проведения анализа с помощью набора реагентов с использованием амплификатора, необходимо оборудование подготовить заранее в соответствии с руководством по эксплуатации. 14. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ВНИМАНИЕ! При работе с набором реагентов и анализируемыми образцами необходимо использовать одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free. Для манипуляций с набором реагентов и анализируемыми образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером. 14.1. Извлечь из коробки набора реагентов «ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР», проверить це лостность упаковки и срок годности каждого компонента набора реагентов. При обнаружении по вреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. Перед применением все вышеперечисленные компоненты инкубировать при комнатной темпера туре (от 15 до 25 °С) в течение 15 минут, затем аккуратно перемешать содержимое флаконов (кроме «ЛБ»). Хранение: неиспользованные и вскрытые компоненты хранить при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора реагентов. 14.2. Промаркировать количество пробирок типа эппендорф вместимостью 1,5-2,0 мл по ко личеству анализируемых образцов. ВНИМАНИЕ! При наличии в «ЛБ» кристаллического осадка или хлопьев необходимо инку бировать флакон с «ЛБ» при 65 ®С до полного растворения осадка. Необходимо периодически встряхивать «ЛБ» для перемешивания магнитных частиц во время разнесения его по пробиркам. 15. ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ (РУЧНЫМ МЕТОДОМ) 15.1. Перемешать «ЛБ» вручную, вращая флакон между ладонями в течение 20 с, до равно мерного распределения магнитных частиц в объёме раствора. Внести пипеточным дозатором по 250 мкл «ЛБ» в каждую пробирку. 15.2. Добавить по 50 мкл анализируемого образца в пробирки с «ЛБ» и аккуратно переме шать содержимое пробирки пипетированием 3-5 раз. ВНИМАНИЕ! Необходимо использовать каждый раз новый одноразовый наконечник с аэро зольным барьером, для каждого анализируемого образца во избежание контаминации. 15.3. Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 65 °С в течение 10 минут. ВНИМАНИЕ! Для пп. 15.6 - 15.13 рекомендуется открывать крышку только той пробирки, с которой идет работа, и сразу закрывать её после проведения манипуляции. НЕ открывать сразу несколько пробирок, для исключения контаминации! стр. 13 из 22, Версия 01/10 --- стр. 14 --- 15.4. После инкубации добавить по 300 мкл «РП» в каждую пробирку, и аккуратно переме шать содержимое пробирки пипетированием 3-5 раз. 15.5. Инкубировать пробирки на столе в течение 10 минут. НЕ СТАВИТЬ пробирки в магнитный штатив во время инкубации! 15.6. Поместить пробирки в магнитный штатив, вьщержать 1-2 минуты, затем убрать надоса- дочную жидкость из пробирок с помощью вакуумного отсасывателя или пипеточного дозатора, не задевая осадок магнитных частиц. ВНИМАНИЕ! Держать пробирки в магнитном штативе при удалении надосадочной жидко сти. Использовать отдельный одноразовый наконечник с аэрозольным барьером для каждого ана лизируемого образца. ВНИМАНИЕ! При добавлении растворов из пп. 15.9-15.12, пробирки не вынимать из маг нитного штатива! На каждом этапе необходимо убедиться, что магнитные частицы все время остаются смоченными растворами. НЕ ДОПУСКАТЬ высыхания магнитных частиц! 15.7. Внести по 500 мкл «ПР-1» в каждую пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать надосадочную жидкость пипеточным дозатором или ваку умным отсасывателем из пробирок, не задевая осадок магнитных частиц, и держа пробирки в маг нитном штативе. 15.8. Внести по 200 мкл «ПР-2» в каждую пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать надосадочную жидкость пипеточным дозатором или ваку умным отсасывателем из пробирок, не задевая осадок магнитных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. 15.9. Открыть пробирки и подсушить осадок магнитных частиц в твердотельном термостате при температуре 65 ®С в течение 5 минут. 15.10. Не вынимая пробирки из твердотельного термостата добавить на дно пробирок по 100 мкл «ЭР». Закрыть крышки пробирок. Проверить, что «ЭР» полностью покрывает магнитные частицы, иначе аккуратно пере мешать в течение 1-3 секунд на вортексс. 15.11. Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 65 ®С в течение 10 минут. 15.12. После инкубации перемешать образцы на вортексе в течение 5 с и осадить капли на ми ницентрифуге. Образцы вьщеленной РНК готовы для постановки ПЦР анализа. ВНИМАНИЕ! Образцы выделенной РНК хранить при температуре 2-8 ®С не более 30 минут. Полученные образцы РНК разрешается замораживать, но не более 1 раза. Большое количество циклов размораживания-оттаивания вьщеленных образцов РНК и более длительное хранение при температуре 2-8 °С может приводить к получению ложноотрицательных результатов. Перед внесением в реакционную смесь пробирки с образцами выделенной РНК необхо димо поставить на магнитный штатив. ВНИМАНИЕ! Отбирать образец выделенной РНК для постановки ПЦР необходимо аккурат но, избегая попадания магнитных частиц в наконечник пипеточного дозатора. 16. ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ (АВТОМАТИЧЕСКИМ МЕТОДОМ) JV o пп Наименование процедуры Описание процедуры стр. 14 из 22, Версия 01/10 --- стр. 15 --- 16.1 Внесение образцов внести в лунки - по 50 мкл анализируемых образцов 16.2 Внесение «ЛБ» внести в лунки — по 250 мкл «ЛБ», в процессе данной про цедуры необходимо перемешивать ЛБ в емкости 16.3 Инкубация и перемешива ние термостатирование в течение 10 мин при температуре 65 °С, в ходе инкубации перемешивать с частотой вращения 1200 об/мин в течение 30 с каждые 3 минуты. 16.4 Внесение «РП» внести в лунки - по 300 мкл «РП» 16.5 Перемешивание перемешать с частотой вращения 600 об/мин в течение 30 секунд 16.6 Инкубация инкубация в течение 10 мин при комнатной температуре 16.7 Выдерживание в магнитном штативе перенос планшета на магнитный штатив и вьщерживание в течение 1 минуты 16.8 Удаление иадосадочной жидкости удаление иадосадочной жидкости из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном штативе 16.9 Внесение внести в лунки — по 500 мкл «ПР-1», при внесении пере мешать пипетированием 2 раза 16.10 Удаление иадосадочной жидкости удаление раствора «ПР-1» из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном штати ве. 16.11 Внесение внести в лунки - по 200 мкл «ПР-2», при внесении пере мешать пипетированием 2 раза 16.12 Удаление иадосадочной жидкости удаление раствора «ПР-2» из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном штативе 16.13 Высушивание термостатирование в течение 5 мин при температуре 65 °С 16.14 Внесение «ЭР» внести в лунки - по 100 мкл «ЭР», при внесении переме шать пипетированием 2 раза 16.15 Инкубация и перемешива ние термостатирование в течение 10 мин при температуре 65 ®С, в ходе инкубации перемешивать с частотой вращения 1200 об/мин в течение 30 с каждые 3 минуты. Перенести планшет на магнитный штатив 17. ПОДГОТОВКА К ПРОВЕДЕНИЮ АНАЛИЗА Вскрыть упаковку с компонентами набора реагентов для проведения ОТ-ПЦР. Пробирки с компонентами набора реагентов проверить на целостность и срок годности. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. Все компоненты набора реагентов готовы к использованию. Перед применением все компоненты набора реагентов, кроме «Фермент RT» и «Фермент Р», инкубировать при комнатной температуре до достижения комнатной температуры, аккуратно перемешать и осадить капли с крышки пробирки, возможно для этого использование центрифугирования в течение 1-3 секунд. Хранение: неиспользованные и вскрытые компоненты хранить при температуре (минус 16' минус 24) ®С в течение срока годности набора реагентов. Неиспользованный «РС» хранить в защищенном от света месте, поместив в пакет из комбинированного материала, сразу после приготовления реакционной смеси. стр. 15 из 22, Версия 01/10 --- стр. 16 --- ВНИМАНИЕ! Запрещается хранение компонентов «Фермент RT» и «Фермент Р» при комнатной температуре, а также хранение «РС» на свету. 18. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА ВНИМАНИЕ! При работе с набором реагентов и образцами выделенной РНК необходимо использовать одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специ альную маркировку RNase-free, DNase-free. Для манипуляций с реагентами, образцами вьще- ленной РНК и контрольными образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером_____________________________________________________________ ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси («РС», «Фермент RT» и «Фермент Р») смещи- вать непосредственно перед проведением анализа_______________________________________ Подготовка планшета 96- луыочного Достать планшет 96-луночный из пакета с zip-lock. Рассчитать количество лу нок в соответствии с количеством образцов выделенной РНК и контрольных образцов, исходя из того, что каждый образец выделенной РНК будет анализи роваться в одном повторе. Расчет количества лунок производится по формуле: Количество лунок (N) = п + 2, где п - количество образцов выделенной РНК, 2 - «К+» и «К-» При необходимости промаркировать лунки планшета, согласно идентификаци онному номеру исследуемого образца. Планшет поместить на ледяную баню или хладагент (Внимание! не замо раживать) Дополнительно рекомендуется использовать крио-штативы для того, чтобы образцы выделенной РНК в планшете не нагревались вьшхе 2-8 °С____________ ВНИМАНИЕ! В зависимости от используемого оборудования для проведения анализа надпи си на планшете следует располагать таким образом, чтобы они не мешали детектированию флуоресцентного сигнала. См. руководство по эксплуатации амплификатора ________________ Приготов ление реак ционной смеси В пробирке вместимостью 1,5 - 2,0 мл для приготовления реакционной смеси смешать компоненты «РС» и холодные! «Фермент RT» и «Фермент Р», из рас чета на необходимое число лунок, согласно приведенной ниже таблице. Пере мешать приготовленный раствор на вортексе и осадить капли с крьппки про- бирки коротким центрифугированием (1-3 с) ______________________________ Название компонента Объем реагента на один образец (без учета контрольных образ- цов) Объем реагента для анализа п образцов выделенной РНК с учетом постановки кон т р о л ьн ы х о б р а зц о в «РС» 14 мкл (N + 1) * 14 мкл «Фермент RT» 0.5 мкл (N + 1) * 0.5 мкл «Фермент Р» 0.5 мкл (N + 1) * 0.5 мкл Пример: Количество образцов выделенной РНК - 5 шт. N = 5 + 2 = 7. Следовательно, необходимо смешать: (7 + 1) * 14мкл = 112мкл «РС» (7 + 1) * 0.5 = 4 мкл «Фер.мент RT» (7 + I) * 0.5 = 4 МК.П «Фермент Р» Внесение реакцион ной смеси В каждую промаркированную лунку 96-луночного планшета (холодного!) вне сти по 15 мкл реакционной смеси (или возможно использование микропроби рок типа эппендорф вместимостью 0,2 мл с крьпикой) Внесение образцов в В каждую промаркированную лунку 96-луночного планшета (или в пробирку для амплификатора «Rotor Gene») внести по 5 мкл подготовленных образцов выделенной РНК, затем в предпоследнюю и последнюю - по 5 мкл контроль- стр. 16 из 22, Версия 01/10 --- стр. 17 --- лунки 96- луночного планшета или в про бирки для амплифика- тора «Rotor Gene» ных образцов «К+» и «К-», соответственно. ВНИМАНИЕ! Для каждого образца вьщеленной РНК и контрольных образцов использовать новый наконечник. Не допускать образование пузырей! Отрезать фрагмент подходящего размера от входящей в набор реагентов плен ки для запаивания и плотно! наклеить его на промаркированные лунки, ис пользуя для этого аппликатор. Пленка приклеивается к краям лунок при надав ливании. Перед постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со стенок лунок. ВНИМАНИЕ! Очень важно герметично запаивать планшет, чтобы не проис ходило испарение во время амплификации, во избежание получения ложнопо- ложительных результатов, а также избежание контаминации лаборатории._____ ВНИМАНИЕ! но поместить в Планщет с реакционной смесью и образцами вьщеленной РНК незамедлитель- заранее подготовленный амплификатор и начать проведение анализа! Регистрация результатов анализа Вьшолнить в соответствии с разделом «Процедурой измерения и оценки ре зультата» Процедура измерения и оценка результата Ввести в амплификатор программу проведения обратной транскрипции совмещенной с ОТ- ПЦР^_______________ 1. 2. 3. 37 ®С 15 мин, 95 °С15мин. 40 циклов: 95 °С Юс. 60 °С Юс. 72 Юс. ВНИМАНИЕ! Считывание флуоресценции осуществлять на этапе при 60°С Для детектирования следует выбирать канал детекции ROX, HEX и РАМ. Запрограммировать положение лунок с контрольными и образцами выделенной РНК согласно инструкции к прибору. Поместить планшет с реакционной смесью и образцами вьщеленной РНК в амплификатор. Запустить программу и провести обратную транскрипцию, совмещенную с ОТ-ПЦР. 19. УЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА 19.1. Условия правильности работы набора реагентов В положительном контроле «К+» прибор должен определять: - нарастание сигнала флуоресценции в каналах ROX, HEX и FAM. В отрицательном контроле «К-» прибор должен: - НЕ фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в канале ROX. - НЕ фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в канале HEX, - Не фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в канале FAM. В анализируемом образце, при наличии РНК коронавируса SARS-CoV-2. прибор должен: - фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в каналах ROX, HEX и FAM и определять значение порогового цикла Ct (пересечение кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией) в каналах ROX, HEX и FAM. В анализируемом образце. НЕ содержащем РНК коронавируса SARS-CoV-2. прибор должен: стр. 17 из 22, Версия 01/10 --- стр. 20 --- 25. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ Информация, об особенностях хранения и транспортирования должна учитываться всеми лицами, участвующими в хранении, перевозке и утилизации (уничтожении) данного набора реагентов. 25.1. Условия хранения «Комплект реагентов для выделения НК», «Планшет 96-луночный для проведения ПЦР» и «Пленку для запаивания планшета 96-луночного» хранить при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности. «Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР» хранить при температуре от минус 16 до минус 24°С в течение всего срока годности. Хранение «Комплекта реагентов для выделения НК», «Планшета 96-луночный для проведения ПЦР», «Пленки для запаивания планшета 96-луночного» и «Комплекта реагентов для проведения ОТ-ПЦР» при температуре от 2 до 8°С и от минус 16 до минус 24®С соответственно должно осуществляться в холодильных и морозильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной регистрацией температуры. 25.2. Условия транспортирования «Комплект реагентов для выделения НК», «Планшет 96-луночный для проведения ПЦР» и «Пленку для запаивания планшета 96-луночного» транспортировать при температуре от 2 до 8®С. Не замораживать! Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР» транспортировать при температуре от минус 16 до минус 24°С. Допускается однократное транспортирование набора реагентов («Комплект реагентов щ\я выделения НК» и «Комплект реагентов для проведения ОТ-ПЦР») при температуре от 2 до 8®С в течение не более 5 суток. Транспортирование набора реагентов производится всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями и правилами, уетановленными на данном виде транспорта, при соблюдении указанного выше температурного режима. Транспортирование набора реагентов при температурах, требуюших соблюдения «Холодовой цепи», обеспечивающей сохранность температурного режима, должно осуществляться в термоконтейнерах одноразового пользования, содержащих хладоэлементы, или в термоконтейнерах многократного применения с автоматически поддерживаемой температурой или в авторефрижераторах с использованием термоиндикаторов. Наборы реагентов, транспортировавшиеся с нарушением температурного режима, применению не подлежат. 26. СРОК ГОДНОСТИ Срок годности Набора реагентов «МБС-Тест SARS-CoV-2 РНК» составляет 12 месяцев с даты производства набора реагентов. Сроки годности вскрытых компонентов набора реагентов - в течение срока годности набора реагентов. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. 27. СВЕДЕНИЯ О ПРОИЗВОДИТЕЛЕ: ООО «Медико-биологический Союз» 630090, г. Новосибирск, ул. Инженерная, д.16, оф. 353 тел: +7 (383) 363-77-14, 363-77-16 стр. 20 из 22, Версия 01/10 --- стр. 21 --- факс:+7 (383)363-77-18 E-mail: info@mbu.ru www.mbu.ru 28. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ И СВЕДЕНИЯ О РЕКЛАМАЦИЯХ Производитель гарантирует соответствие выпускаемого Набора реагентов «МБС-Тест SARS- CoV-2 РНК» требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество набора реагентов гарантируются в течение всего срока годности. Производитель отвечает за недостатки набора реагентов, за исключением дефектов, возникших вследствие нарушения правил применения, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. Производитель обязуется за свой счет заменить набор реагентов, технические и функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления набора реагентов производителем. По вопросам, касающимся качества Набора реагентов «МБС-Тест SARS-CoV-2 РНК», а также в случае изменения аналитических характеристик следует обращаться к производителю: ООО «Медико-биологический Союз», 630090, г. Новосибирск, ул. Инженерная, д.16, оф. 353, тел: +7 (383) 363-77-14, 363-77-16, факс: +7 (383) 363-77-18, info@mbu.ru. При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному вьппе, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере здравоохра11ения) в соответствии с действующим законодательством. 29. СИМВОЛЫ, НАНОСТМЫЕ НА УПАКОВКУ НАБОРА РЕАГЕНТОВ |i v d | Медицинское изделие для диагностики in vitro Il o t I Код партии V Содержимого достаточно для п-тестов Использовать до □ 3 Обратитесь к инструк ции по применению 1 Температурный диапазон " Г Беречь от влаги А Осторожно! Обрати тесь к инструкции по применению Не использовать при повреждённой упаковке 'О''-' Не допускать воздей ствия солнечного све та Запрет на повторное применение Место нанесения: Ф «Восклицательный знак» Сигнальное слово: «Опасно» Н302: Вредно при проглатывании стр. 21 из 22, Версия 01/10 --- стр. 22 --- «ЛБ» «Жидкость, выливаю щаяся из двух проби рок, поражающая ме талл и руку» Н332: Вредно при вдыхании Место нанесения: «ЛБ» НЗ14: При попадании на кожу и в глаза вызы вает химические ожоги Н402: Вредно для водных организмов Н413: Может вызвать долгосрочные отрица тельные последствия для водньк организмов Место нанесения: «РП», «ПР-1», «ПР-2» < % >«Пламя» Сигнальное слово: «Опасно» Н225: Легковоспламеняющаяся жидкость. Па ры образуют с воздухом взрывоопасные смеси Н319: При попадании в глаза вызывает выра женное раздражение Н336: Может вызьшать сонливость и голово кружениеФ «Восклицательный знак» стр. 22 из 22, Версия 01/10