Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22C3, для выявления клеток, экспрессирующих PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 ---
Agilent
Dako
Одобрено «Аджилент Текнолоджис, Инк.»
(A^roved Ьу; Agilent Technologies, Inc.)
Джоэл Вайзенбергер
О (Joel Weisenberger)
2021г.
ИСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
(INSTRUCTIONS FOR USE)
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для
выявления клеток, экспрессирующих PD-L1, иммуногистохимическим
методом
(Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll Clone 22C3)
США
(USA)
1
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
I
--- стр. 4 ---
Оглавление
Информация для оператора
1. Наименование..............................................................................................................................................4
2. Описание изделия........................................................................................................................................4
3. Состав...................... 4
4. Содержимое упаковки (комплектность поставки)...............................................................................4
4.1 Необходимые, но не поставляемые материалы и оборудование...................................................4
5. Назначение....................................................................................................................................................7
5.1 Функциональное назначение...................................................................................................................7
5.2 Область применения..................................................................................................................................7
5.3 Популяционные, демографические аспекты применения медицинского изделия ....................7
5.4 Показания и противопоказания:..............................................................................................................7
5.5 Описание целевого аналита.....................................................................................................................8
5.6 Квалификация пользователя;...................................................................................................................8
5.7 Возможные побочные действия при использовании медицинского изделия ...........................8
5.8 Биологический референтный интервал применения медицинского изделия............................8
6. Потенциальный потребитель....................................................................................................................8
7. Информация о наличии в медицинском изделии лекарственного средства для медицинского
применения, материалов животного и /или человеческого происхождения ....................................9
8. Срок годности................................................................................................................................................9
9. Принцип метода определения..................................................................................................................9
Ю.Подготовка образцов к проведению анализа......................................................................................10
10.1 Подготовка гистологического препарата...........................................................................................10
10.2 Рекомендации по хранению................................................................................................................10
11. Протокол окрашивания..........................................................................................................................10
11.1 Подготовка Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ для анализа
10
11.2 Подготовка реагентов и оборудования к проведеникханализа...................................................11
12. Интерпретация результатов окрашивания........................................................................................11
13. Неклинические характеристики. Аналитическая специфичность. Аналитическая
чувствительность..............................................................................................................................................15
13.1 Аналитическая специфичность............................................................................................................15
13.1.1Интерферирующие вещества.............................................................................................................15
13.2 Аналитическая чувствительность.........................................................................................................16
14. Диагностическая чувствительность и специфичность.......................................................................16
14.1 Диагностическая чувствительность и специфичность по данным испытаний в РФ................16
15. Повторяемость и внутрилабораторная прецизионность ...............................................................18
15.1 Критерии приемлемости........................................................................................................................18
15.2 Результаты испытания прецизионности в условиях повторяемости и прецизионности в
условиях воспроизводимости в РФ..............................................................................................................18
2
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 5 ---
16. Контроль окрашивания..................................................................................................................... 19
17. Общие меры предосторожности:................................................................................................... 20
18. Ограничения........................................................................................................................................20
19. Специфические для продукта ограничения .................................................................................21
20. Утилизация...........................................................................................................................................21
21. Условия транспортировки, хранения и эксплуатации изделия................................................ 22
21.1 Транспортирование................................................................................................................................22
21.2 Хранение...................................................................................................................................................22
21.3 Эксплуатация...........................................................................................................................................22
22. Сведения об охране окружающей среды...................................................................................... 22
23. Сведения о стерильности.................................................................................................................. 22
24. Информация о порядке обработки медицинского изделия для его повторного
использования.................................................................................................................................................23
25. Гарантии изготовителя....................................................................................................................... 23
25.1 Отдел рекламаций.................................................................................................................................23
26. Маркировка.........................................................................................................................................23
26.1 Макет маркировки на русском языке................................................................................................ 24
26.2 Маркировка картонной упаковки........................................................................................................24
27. Контактная информация. Авторизованный представитель в РФ............................................... 24
28. Производитель....................................................................................................................................25
29. Место производства............................................................................................................................25
30. Инструкция по применению ..............................................................................................................26
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 6 ---
1. Н аименование
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для выявления клеток,
экспрессирующих PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll
Clone 22C3).
Далее по тексту- Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ; изделие.
2. О писание изделия
!? #•»» *
гГ .**"
Dako
CMsrmTia
Рис.1: Изображение Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для
выявления клеток, экспрессирующих PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse
Anti-Human PD-Ll Clone 22C3).
3. Состав
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для выявления клеток,
экспрессирующих PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll
Clone 22C3), в составе:
1. Раствор мышиного моноклонального антитела к PD-L1 человека, клон 22СЗ (0,2 мл) -1
флакон;
2. Инструкция по применению.
4. Содерж имое упаковки (комплектность поставки)
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ поставляется во флаконе
темного стекла, упакованном в коробку из мелованной бумаги. Один флакон содержит 0,2 мл
реагента, достаточное количество для проведения 50 тестов. Инструкция по применению уложена
в коробку.
В комплект поставки изделия Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон
22СЗ не входят контрольные материалы.
4.1 Н еобходимы е, но не поставляемы е материалы и оборудование
В таблице 1 приведен перечень материалов и оборудования, которые могут
потребоваться для ИГХ окрашивания. Требования к аппарату для иммуногистохимического
окрашивания указаны в таблице 2.
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 7 ---
Таблица 1
Наименование № Рег.удостов.
Разбавитель антител с компонентами снижения фоновой окраски;
(Antibody Diluent with Background-Reducing Components);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. ("Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.")
ФСЗ
2007/00210
Раствор для восстановления антигена ЭнВижн ФЛЕКС, низкий pH,
Концентрированный х 50, для использования в Автоматической Платформе
Линк, 3x30 мл;
(Envision FLEX Target Retrieval Solution, low pH, Concentrated (50x), to be used
in the Automatic Link Instrument, 3 x 30 mL);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08215
Контроль отрицательный, мышиные IgGl, I мл;
(Negative control. Mouse IgGl, IgGl 1.0 mL);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08215
Буфер промывной ЭнВижн ФЛЕКС, концентрированный х20, для
использования в использования в Автоматической Платформе Линк, 1л;
(Envision FLEX Wash Buffer (20x), 1 L);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08215
Предметные стекла с положительно заряженным покрытием Superfrost Plus;
(Slides with positively charged coating Superfrost Plus);
Gerhard Menzel B.V. & Co.KG ("Герхард Менцель Б. В. & Ко.КГ"), Германия
РЗН 2015/3107
Дако Стекло покровное 24х50мм, 5x200 шт.;
(Dako Coverslip 24 х 50 mm, 5 х 200 pcs.);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
РЗН 2015/3107
Дако Среда для заключения без толуола, 500 мл;
(Dako Toluene-Free Mounting Medium, 500 mL);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2011/11187
Гематоксилин ЭнВижн ФЛЕКС, Готовый к применению, для использования в
Автоматической Платформе Линк, 3 х 45 мл, 400-600 тестов;
(EnVision FLEX Hematoxylin, ready-to-use, to be used in the Automatic Link
Bench, 3 X 45 ml, 400-600 tests);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08215
Система детекции ЭнВижн ФЛЕКС+, ПХ, Мышиные, Высокий pH, для
использования в Автоматической Платформе Линк, 400-600 тестов;
(EnVision FLEX+ Detection System, PH, Mouse, high pH, to be used in the
Automatic Link Bench, 400-600 tests);
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08215
Усилитель Dako ДАБ, 110 мл;
(Dako DAB Enhancer, 110 ml);
Agilent Technologies, Inc. ("Аджилент Текнолоджис, Инк.")
Дистиллированная или деионизированная вода (химически чистая) pH 5,0-7,0 -
Модуль предварительной подготовки для депарафинизации и восстановления
антигена РТ Link;
ФСЗ
2010/08443
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 8 ---
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
Световой микроскоп общего назначения, снабженный объективами с 4х/5х,
1 Ох, 20х, 40х.
-
Положительные и отрицательные ткани для использования в качестве
контроля ИГХ окрашивания (самостоятельно изготавливается лабораторией):
контрольные стекла PD-L1 «+» ткань миндалины
контрольные стекла PD-L1 «-» ткань мышцы
Автоматические одноканальные дозаторы переменного объема: 0,5-10 мкл, 2-
20мкл, 10-100 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл; Eppendorf Manufacturing
Corporation, («Эппендорф Мануфэктуринг Корпорэйшн», Германия), или
аналогичные
Станция иммуногистохимического окрашивания "Автостейнер Линк 48"
(Autostainer Link 48); Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.
(«Аджилент Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд,»); возможно
применение оборудования с характеристиками, указанными в Таблице 2.
ФСЗ
2010/08443
Набор емкостей для реагентов для калибровки при монтаже 12 мл (упаковка 25
шт.), 1 упаковка;
(User-Fillable Reagent Bottles, 25 bottles, 12 mL)
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2010/08443
Лента клейкая для маркировки предметных стекол Seymour Label Kit for 3000
Labels;
( Seymour Label Kit f 3000 Labels)
Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»)
ФСЗ
2007/00214
Набор реагентов PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx для определения белка PD-L1
методом иммуногистохимического анализа, в составе: 1. Реагент
блокирующий пероксидазу -1 шт. (34,5 мл). 2. Антитело моноклональное к PD-
L1 мышиное, клон 22СЗ - 1 шт. (19,5 мл). 3. Реагент отрицательного контроля -
1 шт. (15 мл). 4. Линкер, антимышиный - 1 шт. (34,5 мл). 5. Реагент для
визуализации - пероксидаза хрена - 1 шт. (34,5 мл). 6. ДАБ-ь забуференный
субстрат - 15 шт. (7,2 мл). 7. ДАБ+ хромоген - 1 шт. (5 мл). 8. Усилитель ДАБ
- 1 шт. (34,5 мл). 9. Раствор для демаскировки антигена с низким pH EnVision
FLEX (50х) - 6 шт. (30 мл). 10. Предметные стекла с контрольной клеточной
линией** - 15 шт.; производства "Аджилент Текнолоджис, Инк."
РЗН 2018/7117
♦PD-L1 "+" клеточная линия NCI-H226
*PD-L1 клеточная линия MCF-7)
Таблица 2. Характеристики аппарата для иммуногистохимического окрашивания.
№ п.
п. Аппарат иммуногистохимического окрашивания
Требуемые
функции и
параметры
1
Окрашивание ИГХ препаратов в лабораторных условиях
стандартизированным методом с обеспечением проведения
реакции антиген-антитело
Наличие
2 Поддержка проведения депарафинизации во встроенном или
внешнем модуле Наличие
3 Поддержка проведения демаскировки антигенов во встроенном
или внешнем модуле Наличие
4 Количество позиций для загрузки реактивов не менее 10
5 Автоматическое нанесение стандартного количества реагентов
(антитела, системы детекции) на препараты Наличие
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 9 ---
6 Защита препаратов от высыхания Наличие
7 Емкости для слива отходов Наличие
8 Емкости для рабочих растворов Наличие
9 Управление с персонального компьютера Наличие
10 Русскоязычное программное обеспечение Наличие
5. Н азначение
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, предназначено для
применения в иммуногистохимии, используется как вспомогательное средство при диагностике ин
витро. Это антитело маркирует PD-L1 в мембранах нормальных и опухолевых эпителиальных
тканей. Клиническая интерпретация любого окрашивания или его отсутствия должна быть
дополнена морфологическими исследованиями и надлежащими контролями, а также другими
оценками в контексте клинического анамнеза пациента и других диагностических тестов,
проведенных квалифицированным специалистом (например, врачом патморфологом, цитологом,
медицинским технологом), прошедшим обучение. Данное антитело предназначено для применения
после первичной диагностики опухоли традиционными гистопатологическими методами с
использованием неиммунологического гистохимического окрашивания.
5.1 Ф ункциональное назначение
Качественная оценка экспрессии PD-L1 в эпителиальных опухолях с подтвержденным
патоморфологическим диагнозом.
5.2 О бласть применения
Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
5.3 П опуляционны е, дем ограф ические аспекты применения медицинского изделия
Применение изделия не зависит от популяционных и демографических аспектов.
5.4 П оказание и противопоказания:
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для выявления клеток,
экспрессируюших PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll
Clone 22C3) показано к применению для определения белка PD-LI в зафиксированных в формалине
и залитых парафином (FFPE) клинических образцах тканей эпителиальной природы:
немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ), рака желудка, трижды негативного рака молочной
железы (ТНРМЖ)*, рака шейки матки и уротелиальной карциномы. Клиническая интерпретация
окрашивания или его отсутствия должна дополняться гистологическими исследованиями и оценкой
соответствующих контролей. Оценка должна проводиться квалифицированным специалистом
(например, врачом патморфологом, цитологом, медицинским технологом), прошедшим обучение в
контексте истории болезни пациента и других диагностических тестов.
♦Трижды негативный рак молочной железы (ТНРМЖ)- подтип рака рак молочной железы, при котором не
экспрессируется рецептор эстрогена (ER-), рецептор прогестерона (PR-) и человеческий эпидермальный фактор роста тип
2 (HER2-).
НМРЛ:
-для образцов НМРЛ, используют расчет бальной доли опухоли (далее - TPS) - процента
жизнеспособных опухолевых клеток с частичным или полным окрашиванием мембраны любой
интенсивности (Таблица 3). Нормальные клетки и ассоциированные с опухолью иммунные клетки,
такие как инфильтрируюшие лимфоциты или макрофаги, не должны включаться в балльную оценку
для определения положительности на PD-L1.
Формула расчета TPS для образцов НМРЛ.
..ppg _ ЧислоРР-Ы-окрашенных клеток (мембраны опухолевых клеток) ^ j q q о/
Общее количество жизнеспособных опухолевых клеток ’
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v, 1.0
--- стр. 11 ---
подтверждение проведенного обучения, связанного с потенциальным риском, сочетающимся с
работой с любым медицинским (клиническим) лабораторным устройством. Квалифицированный
специалист (например, врач патморфолог, цитолог, медицинский технолог) должен быть
специально обучен интерпретировать алгоритмы окрашивания и оценки для Антитела
моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ.
7. И нформация о наличии в медицинском изделии лекарственного средства для
медицинского применения, материалов животного и /или человеческого
происхождения
Состав (информация о компонентах)
Подробный состав изделия описан в разделе «Предоставляемые реагенты» стр. 26. Изделие
не содержит лекарственных средств.
Изделие содержит следующие материалы животного происхождения:
Таблица 4.
Название
материала
Характер Тип Источник Поставщик
Антитело
моноклональное
мышиное к
лиганду- 1 белка
программируемой
гибели клетки
(PD-L1)
Потенциальный
возбудитель
инфекции*
Очищенное
рекомбинантное
мышиное
моноклональное
антитело
в растворе
0,05 моль/л Трис-
НС1, 0,015 моль/л
азида натрия
Мышь Agilent
Technologies,
Inc.
(“Аджилент
Текнолоджис,
Инк.”)
Бычий
сывороточный
альбумин
Потенциальный
возбудитель
инфекции*
Преимущественно
гамма-
глобулин
Бык Proliant
Biologicals, Inc.
(“Пролиант
Байолоджикалз,
Инк.”)
* Материалы, являющиеся потенциальными возбудителями инфекции, могут содержать инфекционные
жизнеспособные трансмиссивные агенты, хотя и с низкой вероятностью заражения. Производитель
утверждает, что материалы животного происхождения не содержат агентов инфекционной губчатой
энцефалопатии. Однако, так как никакие известные методы не гарантируют отсутствия инфекционных
агентов, обращайтесь с изделием и образцами пациентов как с потенциально инфекционно опасными.
Необходимо применять средства индивидуальной защиты (перчатки, защита для глаз), тщательно мыть руки
после анализа.
8. Срок годности
Срок годности Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ -24 мес. при 2-8“С
при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации. После первого
вскрытия флакона с изделием Антитело моноклональное мышиное к PD-L1, клон 22СЗ, сохраняет
свои свойства до окончания срока годности (указано на этикетке) при соблюдении условий
хранения. Срок годности предварительно разведенного антитела моноклонального мышиного к PD-
L1 человека, клон 22СЗ, готового к использованию (IX), составляет 30 дней при хранении 2-8°С.
9. Принцип метода определения
Иммуногистохимическое окрашивание (ИГХ). Антитело моноклональное мышиное к PD-L1
человека, клон 22СЗ разработано для выполнения процедуры ИГХ окрашивания FFPE образцов с
использованием станции иммуногистохимического окрашивания Autostainer Link 48 ("Автостейнер
Линк 48"); "Аджилент Технолоджис Сингапур (Интернешнл) Пте. Лтд." (возможно применение
Инструкция по применению Антителе моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 12 ---
оборудования с характеристиками, указанными в Таблице 2). После инкубации с первичным
моноклональным антителом к PD-L1 человека, клон 22СЗ или реагентом отрицательного контроля
(РОК)- контроль отрицательный, мышиные IgGl (Negative control. Mouse IgGl, IgGl), образцы
инкубируют с линкерным антителом, специфичным для первичного антитела, а затем инкубируют
с готовым к использованию реагентом для детекции, состоящим из молекул вторичного антитела и
молекул пероксидазы хрена, соединенных с основной цепью полимера декстрана. Ферментативное
превращение добавленного впоследствии хромогена приводит к образованию осадка видимого
продукта реакции. Цвет продукта цветной реакции изменяется с помощью реагента-усилителя
хромогена (энхансера). После данных процедур образец может быть докрашен и заклеен покровным
стеклом. Результаты интерпретируют с помощью светового микроскопа.
Полученные результаты облегчают дифференциальную диагностику патофизиологических
процессов, которые могут быть связаны или не связаны с определенным антигеном.
Процедура окрашивания данным антителом различных тканевых срезов идентична.
Результаты должны интерпретироваться квалифицированным специалистом (например, врачом
патморфологом, цитологом, медицинским технологом), прошедшим обучение, с учетом данных
гистологических исследований, соответствующих клинических данных и сравнения с
контрольными образцами.
Результаты должны интерпретироваться квалифицированным специалистом (например,
патоморфологом, цитологом) в контексте истории болезни, с учетом данных гистологических
исследований, соответствующих клинических данных и сравнения с контрольными образцами.
10. П одготовка образцов к проведению анализа
Образцы тканей следует подготовить для ИГХ окрашивания, руководствуясь Приказом от
24.03.2016 № 179Н «О правилах проведения патолого-анатомических исследований» и иными
релевантными нормативными документами.
10.1 П одготовка гистологического препарата
Для использования пригодны зафиксированные в нейтральном забуференном формалине,
залитые в парафин ткани (FFPE). Альтернативные фиксаторы не были валидированы и могут дать
ошибочные результаты. Рекомендуемое время фиксации составляет 12-72 часов в 10% нейтральном
забуференном формалине (НЗФ), однако исследование с использованием ограниченного числа
образцов показало, что время фиксации 4-168 часов в 10% НЗФ систематически не изменяет
обнаружение PD-L1. Время фиксации < 3 часов может привести к вариабельности обнаружения PO
LL Образцы должны быть приготовлены в виде блоков толщиной 3 или 4 мм, зафиксированы в
НЗФ, обезвожены и очищены в серии спиртов и ксилола (гистологической степени очистки) с
последующей инфильтрацией расплавленным парафином. Температура парафина не должна
превышать 60 °С. В блоках FFPE ткани, которые хранятся в течение 5 лет или более, может быть
утрачена иммунореактивность PD-L1.
Необходимо изготовить срезы толщиной 4-5 мкм. Готовые срезы поместить на предметные
стекла типа Superfrost Plus или аналог.
Использование изделия на декальцифицированных тканях не валидировалось и не
рекомендуется.
10.2 Рекомендации по хранению
Готовые неокрашенные срезы хранить в темноте при температуре 2^8° С не более 5 месяцев
для сохранения антигенности.
11. П ротокол окраш ивания
см в основной части Инструкции, раздел «Методика окрашивания».
11.1 П одготовка Антитела моноклонального мы ш иного к PD-L1 человека, клон
22СЗ для анализа
10
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v.1.0
--- стр. 13 ---
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ следует подготовить для
анализа. Рекомендовано разведение антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон
22СЗ- 1:50. Изделие разводят в разбавителе антител с компонентами снижения фоновой окраски
(Antibody Diluent with Background-Reducing Components); номер по каталогу S3022). Разведите РОК
до той же рабочей концентрации IgGl, что и первичное антитело. Разведенное Антитело
моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ можно использовать в течение 30 дней
после приготовления при хранении при 2-8°С. Используйте РОК в соответствии с инструкцией по
применению.
11.2 П одготовка реагентов и оборудования к проведению анализа
Следуюшие реагенты и оборудование (см. Таблицу 1) необходимо приготовить до ИГХ
окрашивания.
Оборудование и реагенты должны быть подготовлены согласно инструкции по применению.
12. И нтерпретация результатов окраш ивания
Окрашенные микропрепараты интерпретируются квалифицированным специалистом
(например, врачом патморфологом, цитологом, медицинским технологом), прошедшим обучение, с
использованием средств световой микроскопии. Перед интерпретацией полученных результатов
квалифицированный специалист, имеющий опыт применения иммуногистохимических методик,
должен оценить тканевые контроли и приемлемость качества окраски микропрепарата.
12.1 Алгоритм оценивания НМ РЛ;
Следует оценить и включить в оценку экспрессии PD-L1 все жизнеспособные опухолевые
клетки на всем срезе ткани. Чтобы образец считался подходящим для оценки PD-L1, на PD-L1
окрашенном предметном стекле должно присутствовать минимум 100 жизнеспособных опухолевых
клеток.
Оценка предметного стекла должна выполняться квалифицированным специалистом с
помощью оптического микроскопа. Для оценки иммуногистохимического окращивания и оценки
целесообразно использовать объектив с 10-40-кратным увеличением. В процентую оценку должно
быть включено любое видимое окрашивание мембраны опухолевых клеток.
Таблица 5. Критерии включения/исключения клеточных элементов при расчете TPS
Элементы
ткани
Включаются в определение TPS
для образца НМРЛ
Исключаются из определения TPS
для образца НМРЛ
Опухолевые
клетки
Убедительное частичное или полное
окрашивание клеточной мембраны
(любой интенсивности) жизнеспособных
опухолевых клеток
Любое окрашивание цитоплазмы.
Иммунные
клетки
Не включаются Любое окрашивание иммунных клеток,
например:
• Мононуклеарные воспалительные клетки
(крупные лимфоциты, моноциты,
легочные макрофаги)
• Клетки плазмы
• Нейтрофилы
Другие
клетки
Не включаются Любое окрашивание:
• Нормальных клеток, примыкающих к
опухолевым клеткам
• Клеток стромы (фибробластов)
• Некротических клеток и/или клеточного
дебриса
• Антракозный пигмент
11
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1,0
--- стр. 16 ---
клетки опухоли. Однако МВК, которые непосредственно НЕ связаны с ответом на опухоль, должны быть
исключены из оценки.
***Макрофаги и гистиоциты рассматриваются как одинаковые клетки
См. дополнительные указания в Руководст ве по интерпретации результ ат ов
окраш ивания. Обрат ит есь за информаций к авт оризованному предст авит елю,
https://pathology-education , agilent. com /en-us/atlas.htm l
12.5 Алгоритм оценивания ТНРМЖ:
Таблица 9. Критерии включения/исключения при расчете CPS для образцов ТНРМЖ
Элементы
ткани Включаются в знаменатель Исключаются из знаменателя
Опухолевые
клетки
Убедительное частичное или полное
линейное окрашивание клеточной
мембраны (любой интенсивности)
жизнеспособных опухолевых клеток
уротелиальной карциномы, включая:
• карциномы in situ (CIS)
• любя инвазия базальной мембраны
• метастатической карциномы
• Неокрашенные опухолевые клетки
• Опухолевые клетки с окрашиванием
только цитоплазмы.
Иммунные
клетки
Мононуклеарные воспалительные
клетки (МВК) с окрашиванием
мембраны и/или цитоплазмы в гнездах
опухолевых клеток и в прилежащей
поддерживающей строме
о Лимфоциты (включая скопление
лимфоцитов)
О Макрофаги
Оцениваются только МВК,
непосредственно связанные с ответом на
опухоль.
• Неокрашенные МВК
• МВК (включая лимфоидные
скопления), связанные с язвами,
хроническим воспалением и с другими
неопухолевыми процессами.
• МВК, связанные с нормальными
структурами.
• Нейтрофилы, эозинофилы и клетки
плазмы
Другие клетки
Не включаются.
• Нормальные клетки
• Стромальные клетки (включая
фибробласты)
Некротические клетки и/или
клеточный дебрис.
См. дополнительные указания в Руководст ве по интерпретации результ ат ов
окраш ивания. Обрат ит есь за информаций к авт оризованному предст авит елю.
https://pathology-education.agilent.com /en-us/atlas.htm l
12.7 Алгоритм оценивания тканевых контролей:
Таблица 10 Оценивание тканевых контролей.
Предметное стекло с
тканью
положительного
контроля (ткань
миндалины)
Предметное стекло с тканью положительного контроля (ткань миндалины) позволяет
проверить, что метод фиксации и процесс демаскировки антигена являются
эффективными. Для интерпретации результатов окрашивания используют
неповрежденные клетки, поскольку некротические или дегенерировавшие клетки
часто окрашиваются неспецифически. Должно наблюдаться коричневое окрашивание
плазматической мембраны. Должно наблюдаться сильное положительное
окрашивание участков эпителия крипт и слабое или умеренное окрашивание
фолликулярных макрофагов в зародышевых центрах. Отрицательное окрашивание
должно наблюдаться в эндотелии, фибробластах, а также на поверхностном эпителии.
Должна наблюдаться окраска герминальных центров. Неспецифическое окрашивание
должно оставлять 0.
Предметное стекло с Предметное стекло с тканью отрицательного контроля следует обследовать после
14
Инструкция по применению Антитепа моноклонального мышиного кРО-И, клон 22СЗ v.1.0
--- стр. 17 ---
4
тканью
отрицательного
контроля (ткань
мышцы)
ткани положительного контроля для верификации специфичности мечения антигена-
мишени первичным антителом. Отсутствие специфического окрашивания на
предметном стекле с тканью отрицательного контроля подтверждает отсутствие
перекрестной реактивности набора с клетками/клеточными компонентами. В качестве
альтернативы, отрицательные участки ткани положительного контроля могут служить
в качестве ткани отрицательного контроля, но это должно быть проверено
пользователем. Если происходит нежелательное специфическое окрашивание
клеточной мембраны на предметном стекле с тканью отрицательного контроля,
результаты с образцом пациента должны считаться недействительными.____________
Предметное стекло с
тканью пациента,
окрашенной с
использованием
реагента
отрицательного
контроля__________
Следующим обследуют образцы пациента, окрашенные с использованием РОК.
Отсутствие окрашивания клеточной мембраны верифицирует специфическое мечение
антигена-мишени первичным антителом. Окрашивание, происходящее в цитоплазме
образца, обработанного РОК, следует считать неспецифическим окращиванием.
Предметное стекло с
контрольными
клеточными
линиями
(не предоставляется
с изделием)
В каждом цикле окращивания, при необходимости, рекомендуем использовать
окращивание изделием одного предметного стекла с двумя контрольными
клеточными линиями (положительная по PD-L1 NCI-H226 и отрицательная по PD-L1
MCF-7) из Набора реагентов PD-L1 1НС 22СЗ pharmDx для определения белка PD-L1
методом иммуногистохимического анализа (РЗН 2018/7117).
Критерии приемлемости NCI-H226 (PD-L1-положительная контрольная клеточная
линия):
Окрашивание клеточной мембраны у > 70% клеток
Неспецифическое окрашивание с интенсивностью 0
Критерии приемлемости MCF-7 (PD-L1-отрицательная контрольная клеточная
линия):
Нет специфического окрашивания.
Следует отметить, что иногда может наблюдаться окрашивание нескольких
клеток в клеточном осадке MCF-7. Применимы следуюшие критерии приемлемости:
приемлемым является наличие < 10 от общего числа клеток с отчетливым
окращиванием плазматической мембраны.
Если какая-либо из контрольных клеточных линий не отвечает этим критериям, то все
результаты с образцами пациентов следует считать недействительными.____________
Внимание! Недопустимо применять решения медицинского характера без предварительной
консультации с врачом (медицинским работником).
13. Неклинические характеристики. Аналитическая специфичность.
Аналитическая чувствительность.
13.1 Аналитическая специфичность
Специфичность антитела моноканального мышиного PD-L1 человека, клон 22СЗ, определяли
с использованием клеток с повышенным уровнем экспрессии PD-L1 и PD-L2. Клетки с
повышенным уровнем экспрессии PD-L2 не окрашивались антителом моноканальным мышиным к
PD-L1 человека, клон 22СЗ. Эти результаты доказывают, что клон 22СЗ антител против PD-L1
является специфичным в отношении белка PD-L1 человека.
13.1.1 Интерферирующие вещества
не применимо.
Ткани людей, инфицированных вирусом гепатита В и содержащие поверхностный антиген
гепатита В (HBsAg), могут проявлять неспецифическое окрашивание пероксидазой хрена (6).
Ложноположительные результаты могут быть получены из-за неиммунологического
связывания белков или продуктов реакции субстрата. Они также могут быть вызваны
15
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 18 ---
псевдопероксидазной активностью (эритроциты) и эндогенной пероксидазной активностью
(цитохром С) (6).
13.2 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность определена методом Вестерн блоттинга. Показано, что
аналитическая чувствительность составляет 0,5 нг/мл белка PD-L1.
14. Диагностическая чувствительность и специфичность
Было проведено многоцентровое клиническое исследование и сравнительное контрольное
испытание в трех клинических центрах Китая, с целью продемонстрировать соответствие антитела
моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ предполагаемому использованию по
сравнению с реагентом Ventana PD-L1 (SP263) Assay для качественного обнаружения лиганда-1
белка программируемой смерти Programmed Death Ligand 1 (PD-Ll) иммуногистохимическим
анализом в in vitro диагностике к иммуностейнерам автоматическим серии Ventana BenchMark
(далее - реагент VENTANA PD-L1 (SP263)), производства Roche Diagnostics GmbH (Рош
Диагностике ГмбХ, Германия); РЗН 2018/7620. У пациентов медицинских учреждений,
участвующих в исследовании, были отобраны образцы тканей с четко диагностированным
немелкоклеточным раком легких (НМРЛ), подтвержденным гистологически или цитологически,
тканей паракарциномы и других доброкачественных и злокачественных опухолей. Всего в трех
клинических центрах было отобрано 1094 образца (из них далее отобрано 1058 образцов; в итоге
использовалось 1036 образцов). Ткани подвергали окрашиванию антителом моноклональным
мышиного мышиным к PD-L1 человека, клон 22СЗ и реагентом VENTANA PD-L1 (SP263). Для
определения согласованности результатов проводился статистический анализ положительной,
отрицательной и общей согласованности с 95 % доверительным интервалом и исследованием
значения каппа с целью оценки согласованности двух реагентов. При статистическом анализе
образцов НМРЛ использовались показатели в 1 %, 20 % и 50 % бальной доли опухоли (TPS).
Результаты анализа согласованности исследований тестируемого изделия и референтного
Реагента VENTANA PD-L1 (SP263) продемонстрировали положительную согласованность в
99,70 %, отрицательную в 70,00 %, общую в 98,84 %. Значение согласованности каппа составило
0,7719, 95 % доверительный интервал (0,6468, 0,8971).
14.1 Диагностическая чувствительность и специфичность по данным
испытаний в РФ
Было проведено валидационное/инструментальное исследование с целью продемонстрировать
соответствие Антитела моноклонального мышиного к PD-Ll^ человека, клон 22СЗ предполагаемому
использованию в лабораторных условиях потребителя и продемонстрировать соответствие
эксплуатационных качеств изделия запросам потребителя.
При помощи Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ было
выполнено окрашивание каждой тканевой матрицы с образцами ткани НМРЛ, рака желудка,
ТНРМЖ, рака шейки матки и уротелиальной карциномы, заданный объем выборки в совокупности
составлял более 500 уникальных случаев. Ткани окрашивали антителом моноклональным
мышиным к PD-L1 человека, клон 22СЗ, реагентом VENTANA PD-L1 (SP263), производства Roche
Diagnostics GmbH (Рош Диагностике ГмбХ, Германия); РЗН 2018/7620 и набором реагентов PD-L1
IHC 22СЗ pharmDx для определения белка PD-L1 методом иммуногистохимического анализа,
производства Agilent Technologies, Inc. (Аджилент Текнолоджис, Инк., США); РЗН 2018/7117.
При статистическом анализе образцов НМРЛ, рака желудка, ТНРМЖ, рака шейки матки и
уротелиальной карциномы использовали критерии порогов отсечки, указанные в Таблице 3.
Для определения согласованности результатов исследовали значения каппа согласованности
результатов ИГХ окрашивания эпителиальных опухолевых тканей, используя пороги отсечки из
Таблицы 3, при помощи двух референтных изделий: антитело моноклональное мышиное к PD-L1
16
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 19 ---
человека, клон 22СЗ и реагент VENT AN А PD-L1 (SP263); антитело моноклональное мышиное к PD-
L1 человека, клон 22СЗ и набор реагентов PD-L1 IHC 22СЗ phatmDx для определения белка PD-L1
методом иммуногистохимического анализа.
Результаты анализа согласованности исследований тестируемого изделия и референтного
изделия- реагента VENTANA PD-L1 (SP263), производства Roche Diagnostics GmbH (Рош
Диагностике ГмбХ, Германия); РЗН 2018/7620 продемонстрировали следующие результаты:
НМРЛ TPS<1% коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом (0,905 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
НМРЛ TPS>1% коэффициент каппа - 0,97 с доверительным интервалом (0,912 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
ТНРМЖ CPS<10 коэффициент каппа - 0,936 с доверительным интервалом (0,849 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
ТНРМЖ CPS>10 коэффициент каппа - 0,972 с доверительным интервалом (0,917 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак желудка CPS<1 коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом (0,905 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак желудка CPS>1 коэффициент каппа - 0,945 с доверительным интервалом (0,869 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак шейки матки CPS<1 коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом (0,905 до
1.0) - практически идеальное согласие;
Рак шейки матки CPS>1 коэффициент каппа - 0,945 с доверительным интервалом (0,869 до
1.0) - практически идеальное согласие;
Уротелиальная карцинома CPS<10 коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом
(0,905 до 1,0) - практически идеальное согласие;
Уротелиальная карцинома матки CPS>10 коэффициент каппа - 1,0 с доверительным
интервалом (1,0 до 1,0) - идеальное согласие;
Результаты анализа согласованности исследований тестируемого изделия и референтного
набора реагентов PD-L1 Ш С 22СЗ pharmDx для определения белка PD-L1 методом
иммуногистохимического анализа, производства Agilent Technologies, Inc. (Аджилент
Текнолоджис, Инк., США); РЗН 2018/7117 продемонстрировали следующие результаты:
НМРЛ TPS<1% коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом (0,905 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
НМРЛ ТР8>1% коэффициент каппа - 0,970 с доверительным интервалом (0,912 до 1,0);
ТНРМЖ CPS<10 коэффициент каппа - 0,936 с доверительным интервалом (0,849 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
ТНРМЖ CPS>10 коэффициент каппа - 0,972 с доверительным интервалом (0,917 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак желудка CPS<1 коэффициент каппа - 0,936 с доверительным интервалом (0,849 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак желудка CPS>1 коэффициент каппа - 0,945 с доверительным интервалом (0,869 до 1,0) -
практически идеальное согласие;
Рак шейки матки CPS<1 коэффициент каппа - 0,936 с доверительным интервалом (0,849 до
1.0) - практически идеальное согласие;
Рак шейки матки CPS>1 коэффициент каппа - 0,945 с доверительным интервалом (0,869 до
1.0) - практически идеальное согласие
Уротелиальная карцинома CPS<10 коэффициент каппа - 0,968 с доверительным интервалом
(0,905 до 1,0) - практически идеальное согласие;
Уротелиальная карцинома матки CPS>10 коэффициент каппа - 0,972 с доверительным
17
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 20 ---
интервалом (0,917 до 1,0) - практически идеальное согласие;
Диагностическая чувствительность и специфичность для тканей НМРЛ была оценена
методом ROC-анализа:
Результаты ROC-анализа тестируемого изделия и референтного реагента VENTANA PD-L1
(SP263), производства Roche Diagnostics GmbH (Рош Диагностике ГмбХ, Германия); РЗН 2018/7620
продемонстрировали диагностическую чувствительность в 100 %, доверительный интервал (92,7 %
до 100,0%); диагностическую специфичность в 100 %, доверительный интервал (86,8 % до 100,0%);
площадь под ROC кривой - 1,0 доверительный интервал (0,952 до 1,0)
Результаты ROC-анализа тестируемого изделия и референтного набора реагентов PD-L1 ШС
22СЗ pharmDx для определения белка PD-L1 методом иммуногистохимического анализа,
производства Agilent Technologies, Inc. (Аджилент Текнолоджис, Инк., США); РЗН 2018/7117
продемонстрировали диагностическую чувствительность в 98 %, доверительный интервал (89,4%
до 99,9%); диагностическую специфичность в 100%, доверительный интервал (86,3% до 100,0%);
площадь под ROC кривой - 0,99 доверительный интервал (0,934 до 1,0).
15. Повторяемость и внутрилабораториая прецизионность
15.1 Критерии приемлемости
Воспроизводимость результатов между лотами (кодами партии) Антитела
моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ (intra-run).
ИГХ окращивание с использованием Антитела моноклонального мыщиного к PD-L1
человека, клон 22СЗ, должно приводить к такому воспроизводимому окращиванию, при котором
одинаковый отрицательный или положительный клинический показатель экспрессии PD-L1 будет
выявляться не менее чем у 90% стекол с одним образцом ткани, испытанным в рамках одного цикла
окрашивания на одном аппарате для иммуногистохимичеекого окрашивания.
Воспроизводимости результатов в пределах одного цикла и между циклами на аппарате
для иммуногистохимического окрашивания (характеристики указаны в Таблице 2) (inter
run):
ИГХ окрашивание с использованием Антитела моноклонального мышиного к PD-L1
человека, клон 22СЗ, должно приводить к такому воспроизводимому окрашиванию, при котором
одинаковый отрицательный или положительный клинический показатель экспреесии PD-L1 будет
выявляться не менее чем на 90% стекол с одним образцом ткани, испытанным в рамках одного
цикла на одном аппарате в течение пяти непоследовательных дней по одному протоколу
окрашивания.
т
Критерий приемлемости для фона:
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, должно обеспечивать
такое неспецифическое окрашивание фона, при котором интенсивность фонового
окрашивания не меньше, чем у 90% всех образцов тканей должна составлять менее или быть равным
фоновому окрашиванию.
15.2 Результаты испытания прецизионности в условиях повторяемости и
прецизионности в условиях воспроизводимости в РФ
Прецизионность в условиях повторяемости
Прецизионность в условиях повторяемости была изучена на 10 образцах для каждого типа
эпителиальной опухоли: НМРЛ, рак желудка, ТНРМЖ, рака шейки матки и уротелиальная
карцинома. Для оценки прецизионности использовали критерии порогов отсечки из Таблицы 3.
Результаты показали, что значения TPS и CPS для каждого типа эпителиальной опухоли совпадают
в 100% случаев.
Прецизионность в условиях воспроизводимости
18
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 21 ---
Воспроизводимость результатов между лотами (кодами партии) Антитела моноклонального
мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ
Ткани миндалины в качестве положительного контроля.
Оценка воспроизводимости ИГХ окрашивания изделием для эпителиальных опухолевых тканей, с
использованием критериев порога отсечки из Таблицы 3, была проведена на 10 срезах для каждой
ткани с использованием двух лотов (кодов партий) Антитела моноклонального мышиного к PD-L1
человека, клон 22СЗ и одной Станции иммуногистохимического окрашивания "Автостейнер Линк
48" (Autostainer Link 48), производства Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.
(«Аджилент Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.»). Окрашивание выполнялось двумя
операторами, интерпретация результатов иммуногистохимического окрашивания была проведена
двумя квалифицированными специалистами. Общий процент совпадения для воспроизводимости
между лотами (кодами партии) изделия составил 100 %.
Межплатформенная воспроизводимость
Оценка межплатформенной воспроизводимости ИГХ окрашивания Антителом
моноклональным мышиным к PD-L1 человека, клон 22СЗ с использованием двух Станций
иммуногистохимического окрашивания "Автостейнер Линк 48" (Autostainer Link 48),
производства Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент Текнолоджис
Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.») с использованием одного лота (кода партии) Антитела
моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ была проведена на 10 уникальных
образцах для каждой эпителиальной опухолевой ткани, с учетом критериев порогов отсечки
из Таблицы 3, по одному протоколу одним оператором. Интерпретация результатов
иммуногистохимического окрашивания была проведена двумя квалифицированными
специалистами. Общий процент межплатформенной воспроизводимости составил 100 %.
16. Контроль окрашивания
Реагент отрицательного контроля
Для облегчения интерпретации результатов необходимо использовать РОК при окрашивании
каждого образца ткани. РОК- Контроль отрицательный, мышиные IgGl (Negative control. Mouse
IgGl, IgGl); производства Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. («Аджилент
Текнолоджис Сингапур (Интернэшнл) Пте. Лтд.») используется вместо первичного антитела для
оценки неспецифического окрашивания. Процедура окрашивания ткани РОК должна быть
идентична окрашиванию с первичным антителом. Использование другого реагента для
отрицательного контроля или несоблюдение использования рекомендованного реагента
отрицательного контроля может привести к неверной интерпретации окрашенного для анализа
препарата.
Тканевый контроль
Препараты контрольных тканей должны включаться в каждый цикл окрашивания.
Оптимальная лабораторная практика — помещение срезов для положительного и отрицательного
контроля на одно стекло с образцом исследуемой ткани. Это позволяет распознать случаи, когда
реагенты нанесены на предметное стекло неправильно. Контрольные образцы ткани следует
зафиксировать как можно скорее и обработать способом, идентичным способу обработки ткани
пациента. С помощью таких тканей можно контролировать все этапы анализа, начиная от
подготовки ткани и заканчивая окрашиванием. Тканевые срезы, зафиксированные или
обработанные отличным от тканей пациента образом, можно использовать в качестве контроля для
реагентов и окрашивания, но не для фиксации или подготовки ткани.
Ткань небной миндалины человека может быть использована в качестве положительного тканевого
контроля, а ткань мышцы может быть использована в качестве отрицательного тканевого контроля.
Если в ходе изучения контрольных микропрепаратов мышцы и миндалины не выявлены
признаки надлежащего окращивания или наблюдается изменение интерпретации, все результаты
анализа исследуемых образцов следует считать недействительными. В этом случае требуется
19
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1. клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 23 ---
специалиста (например, патоморфологом, цитологом и тд.), который несет ответственность за
рассмотрение окрашенных предметных стекол и обеспечение пригодности положительного и
отрицательного контроля.
• Возможность непредвиденных реакций не может быть полностью исключена даже в
протестированных типах тканей из-за биологической изменчивости экспрессии антигена в
новообразованиях или других патологических тканях. При регистрации непредвиденных реакций
обратитесь в службу технической поддержки компании Agilent Technologies, Inc. («Аджилент
Текнолоджис, Инк.») или к авторизованному представителю.
• Реагенты и указания, описанные в инструкции по применению изделия, были разработаны
для обеспечения оптимальной производительности. Дополнительное разбавление реагентов или
изменение времени либо температуры инкубации может давать ошибочные или противоречивые
результаты.
19. Специфические для продукта ограничения
• Ложноотрицательные результаты могут быть вызваны разрушением антигена в тканях с
течением времени. Образцы должны быть окрашены в соответствии с рекомендациями по хранению
срезов.
• Для получения оптимальных и воспроизводимых результатов при стандартной фиксации
(нейтральным забуференным формалином) и заливке ткани парафином, белок PD-L1 требует
предварительной обработки для демаскировки антигена.
• Использование Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ на
тканях с фиксатором, отличным от нейтрального забуференного формалина, не было валидировано.
• Использование Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ на
препаратах тонкоигольной аспирационной биопсии не было валидировано.
• Использование Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ на
декальцифицированных тканях не валидировали.
20. Утилизация
• Неиспользованные изделия, изделия с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, в т.ч. стекла, пробирки, содержащие образцы тканей, реакционные смеси, после
проведения анализа, следует уничтожать (хранить и транспортировать) в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21 "Санитарно- эпидемиологические требования к содержанию
территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому
водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации
производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно
противоэпидемических (профилактических) мероприятий. Неиспользованные изделия, изделия с
истекщим сроком годности, отходы упаковки относятся к классу А. Использованные изделия,
реагенты, биологический материал, включая инструменты и предметы, загрязненные материалом,
относятся к классу опасности медицинских отходов Б.
• Утилизация проводится специализированными организациями, которые имеют лицензию
на право утилизации медицинских отходов.
• Изделие содержит азид натрия, который может вступать в реакцию со свинцом и медью в
канализационной системе и формировать взрывоопасные скопления азидов металлов. После
утилизации смыть большим количеством воды, чтобы предотвратить накопление азидов металла в
канализационной системе.
По вопросам, касающимся утилизации изделия , следует обращаться к авторизованному
представителю в РФ; АО «Эрба Рус»: РФ, 109029, г. Москва, ул. Нижегородская, дом 32 строение
А
Н317 Может вызывать аллергические реакции при попадании на кожу и
глаза
EUH302 При контакте с кислотой выделяется очень токсичный газ
21
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 24 ---
Р261 Избегайте вдыхания паров
P2S0 Надевайте защитные перчатки и очки
Р272 Загрязненная одежда не может храниться на рабочем месте
Р302+Р352 При попадании на кожу промыть большим количеством воды.
РЗЗЗ+Р313 При раздражении или порезе кожи обратитесь к врачу
Р501 Утилизируйте согласно национальным правилам
21. Условия транспортировки, хранения и эксплуатации изделия
Информация, об особенностях транспортирования должна учитываться всеми лицами,
участвующими в хранении, перевозке и утилизации (уничтожении) этого изделия.
21.1 Транспортирование
Транспортирование Антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ
должно производиться всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями и
правилами, установленными на данном виде транспорта, при температуре от плюс 2^8 °С.
Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не
подлежат.
21.2 Хранение
Хранить при 2-8“С. Условия хранения описаны в основной части Инструкции на стр. 27.
21.3 Эксплуатация
Изделие в представленной комплектации предназначено для постановки на аппарате
иммуногистохимического окрашивания (см. раздел «Необходимые, но не поставляемые материалы
и оборудование»).
Общее количество повторов определяется квалификацией персонала и рекомендациями GLP.
Рекомендуется постановка исследуемых образцов в дубликатах. Производитель гарантирует
сохранение всех технических характеристик изделия и достоверность результатов.
При использовании Антитела моноклонального мыщиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ
необходимо придерживаться следующих правил:
- не использовать изделие после окончания срока годности;
- не использовать изделие, если упаковка повреждена;
- использовать реагенты и расходные материалы, рекомендованные компанией Agilent
Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»);
- при работе с флаконом, держите флакон с антителом только за края;
-не допускайте попадания в открытый флакон с антителом посторонних веществ; После
забора необходимого объема антитела для анализа, закройте флакон, не оставляйте открытым,
верните в холодильник.
Антитело моноклональное мыщиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ при соблюдении
требований данной Инструкции стабильно в течение всего срока годности. Срок годности изделия
указан на внещней стороне упаковки.
Неправильное обращение с образцами и изменение процедуры проведения анализа могут
повлиять на результаты. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение
Инструкции по применению.
Изделие не подлежит ремонту и техническому обслуживанию.
22. Сведения об охране окружающей среды
Изделие содержит азид натрия в неопасной для окружающей среды концентрации. Изделие
при использовании, транспортировке и хранении не оказывает негативного воздействия на человека
и окружающую среду при соблюдении условий применения и мер предосторожности, указанных в
инструкции.
23. Сведения о стерильности
Изделие поставляется нестерильным. Не подлежит повторному использованию и/или
стерилизации пользователем.
22
Инструкция по применению Антителе моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ и. 1.0
--- стр. 25 ---
24. Информация о порядке обработки медицинского изделия для его повторного
использования
Изделие не подлежит повторному использованию. Изделие предназначено для однократного
применения по назначению.
25. Гарантии изготовителя
Изделие не подлежит гарантийному обслуживанию.
Производитель Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.») гарантирует, что
ее продукция будет иметь качество, пригодное для продажи, и будет соответствовать информации,
содержащейся в данном инструкции, а также в соответствующих спецификациях Agilent
Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.») и брощюрах по продуктам. Производитель не
дает никаких гарантий относительно пригодности продукции для конкретного применения
покупателем продукции.
Пригодность для применения должна определяться покупателем или пользователем
продукции. Ответственность за качество продукции ограничивается возмещением стоимости или
заменой.
Клиенты должны уведомить компанию Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис,
Инк.») и уполномоченного представителя в течение 30 рабочих дней с момента получения
информации о каких-либо дефектах изделия (за исключением повреждений при транспортировке),
чтобы запросить возврат средств или замену изделия.
Эксплуатационные характеристики изделия гарантируются до истечения срока годности
продукта. Производитель гарантирует срок годности Антитела моноклонального мышиного к PD-
L1 человека, клон 22СЗ - 24 мес. с даты изготовления, при условии соблюдения условий хранения
и транспортировки (2-8 °С). Дата окончания срока годности отпечатана на флаконе изделия.
25.1 Отдел рекламаций
В соответствии с нормами действующего законодательства Российской Федерации,
регулирующего вопросы по защите прав потребителей, при выявлении брака и возникновении
спорных вопросов обращайтесь в Отдел рекламаций уполномоченного представителя.
Уполномоченный представитель в РФ:
Акционерное общество «Эрба Рус» (АО «Эрба Рус»)
РФ, 109029, г. Москва, ул. Нижегородская, д.32 стр. 15, эт.5 пом.1 ком. 35А, 37, 38, 39
Тел.; +7 (495) 755-78-81, +7 (495) 755-78-92
e-mail: sale@erbamannheim .com
26. Маркировка
В соответствии с ДИРЕКТИВАМИ ЕС производитель использует следующие символы и знаки:
С€ Соответствует требованиям ЕС
Изделие медицинское для диагностики in vitro
lL.P„f,„| Номер лота (код партии)
Ш ,1 Номер по каталогу
у Производитель
1 ЕС 1 REP 1 Уполномоченный представитель
V Содержимого достаточно для п- тестов
I Температурный диапазон
Использовать до ...
ш Обратитесь к сопроводительной
документации
А
Осторожно! Обратитесь к сопроводительной
документации
23
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 26 ---
Биологический риск
Продукт имеет Европейский сертификат ^ ^
26.1 Макет маркировки на русском языке
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ, для выявления клеток, экспрессирующих
PD-L1, иммуногистохимическим методом (Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll Clone 22C3).
Состав:
1. Раствор мышиного моноклонального антитела к PD-L1 человека, клон 22СЗ (0,2 мл) -1 флакон;
2. Инструкция по применению.
V 50 «только для профессионального применения»
Регистрационное удостоверение № ________
Срок годности см. на упаковке (изделие стабильно 24
мес. с момента производства. После первого вскрытия флакона с изделием, сохраняет свои свойства до
окончания срока годности (указано на этикетке) при соблюдении условий хранения. Срок годности
предварительно разведенного антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека, клон 22СЗ, готового
к использованию (IX), составляет 30 дней при хранении при 2-8°С). Температура хранения см. на упаковке
Номер лота см. на упаковке
Концентрация белка см. на упаковке.
Производитель: Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
5301 Stevens Creek Blvd. Santa Clara, CA 95051 United States (США)
Место производства:
1. Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
6392 Via Real Carpinteria, CA 93013 United States
(6392 Виа Риал Карпинтерия, Калифорния 93013 США)
2. Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
1170 Mark Ave., Carpinteria, CA 93013 United States
(1170 Марк Авеню Карпинтерия, Калифорния 93013, США)
3. Agilent Technologies Denmark ApS (Аджилент Текнолоджис Денмарк АпС)
Produktionsvej 42 2600 Glostrup Denmark
(Продюктионсвей 42 DK-2600 Глоструп, Дания)
Осторожно, содержит азид натрия.
Содержит вещества животного происхождения.
Изделие предназначено для диагностики in-vitro
Уполномоченный представитель производителя на территории
РФ: Акционерное общество «Эрба Рус» (АО «Эрба Рус»)
РФ, 109029, г. Москва, ул. Нижегородская, дом 32 строение 15, эт.5 пом 1 ком 35А, 37, 38, 39
Тел.: +7 (495) 755-78-81, +7 (495) 755-78-92. E-mail: sale@erbamannheim.com
26.2 Маркировка картонном упаковки
Маркировка картонной упаковки содержит следующую информацию:
- знак маркировка СЕ;
-наименование изделия «Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll Clone 22СЗ»;
- название и адрес Производителя;
- срок годности в формате год-месяц-дата хххх-хх-хх;
- номер по каталогу;
- номер лота (код партии);
-объем реагента во флаконе (0,2 мл);
- температурный диапазон хранения (2-8°С);
- знак «обратитесь к инструкции по применению»
- знак о том, что изделие предназначено для in-vitro диагностики;
- штрих-код.
27. Контактная информация. Авторизованный представитель в РФ.
Акционерное общество «Эрба Рус» (АО «Эрба Рус»)
А ^
24
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 27 ---
РФ, 109029, г. Москва, ул. Нижегородская, дом 32 строение 15, эт.5 пом 1 ком 35А, 37, 38, 39
Тел.: +7 (495) 755-78-81, +7 (495) 755-78-92
e-mail: sale@erbamannheim.coiTi
28. Производитель
Разработчик:
Agilent Technologies, Гпс; («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
5301 Stevens Creek Blvd. Santa Clara, CA 95051 United States
(5301 Стивенс Крик Бульвар
Санта Клара, Калифорния 95051, США)
Тел. 805 566 6655 Факс: 805 566 6688
e-mail: customercare_russia@agilent.com
Производитель:
Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
5301 Stevens Creek Blvd. Santa Clara, CA 95051 United States
(5301 Стивенс Крик Бульвар
Санта Клара, Калифорния 95051, США)
Тел. 805 566 6655 Факс: 805 566 6688
e-mail: customercare_russia@agilent.com
29. Место производства
1. Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
6392 Via Real Carpinteria, CA 93013 United States
(6392 Виа Риал Карпинтерия, Калифорния 93013 США)
2. Agilent Technologies, Inc. («Аджилент Текнолоджис, Инк.»)
1170 Mark Ave., Carpinteria, CA 93013 United States
(1170 Марк Авеню Карпинтерия, Калифорния 93013, США)
3. Agilent Technologies Denmark ApS (Аджилент Текнолоджис Денмарк АпС)
Produktionsvej 42 2600 Glostrup Denmark
(Продюктионсвей 42 DK-2600 Глоструп, Дания)
25
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 29 ---
избежать контакта с кожей и попадания в глаза.
Неиспользованный раствор следует утилизировать в соответствии с местными,
государственными и федеральными правилами._______________________________
Хранение Хранить при температуре 2-8 °С. Не использовать после даты истечения срока
годности, отпечатанной на флаконе. Если изделие хранятся при любых условиях,
отличных от указанных, пользователю необходимо проверить эти условия. Нет
никаких очевидных признаков, указывающих на нестабильность этого изделия.
Следовательно, одновременно с анализом образцов пациентов, должен выполняться
анализ положительного и отрицательного контроля. В случае наблюдаемого
неожиданного окрашивания, которое нельзя объяснить изменениями лабораторных
методик, и подозрений на проблемы, связанные с антителом, обратитесь к
авторизованному представителю. Хранение изделия при температуре 2-8 ° С должно
осуществляться в холодильниках, обеспечивающих регулируемый температурный
режим с ежедневной регистрацией температуры.
Продукты, хранящиеся с нарушением регламентированного режима, не подлежат
использованию. Срок годности изделия составляет 24 месяца при температуре 2-
8°С. После первого вскрытия флакона с изделием. Антитело моноклональное
мышиное к PD-L1, клон 22СЗ, сохраняет свои свойства до окончания срока
годности (указано на этикетке) при соблюдении условий хранения. Срок годности
предварительно разведенного антитела моноклонального мышиного к PD-L1
человека, клон 22СЗ, готового к использованию (IX), составляет 30 дней при
хранении при 2-8°С.________________________________________________________
Подготовка образцов Залитые в парафин срезы: изделие можно применять для мечения срезов ткани.
фиксированных в формалине и заключенных в парафин. Следует получать срезы
образцов ткани толщиной приблизительно 4 мкм.
Методика окрашивания Подготовка реагентов перед окрашиванием:
Антитело моноклональное мышиное к PD-L1 человека, клон 22СЗ. для выявления
клеток, экспрессирующих PD-L1. иммуногистохимическим методом
(Monoclonal Mouse Anti-Human PD-Ll Clone 22C3):
Рекомендовано разведение антитела моноклонального мышиного к PD-L1 человека,
клон 22СЗ (номер по каталогу М3653), 1 ;50. Антитело разводят в Разбавителе антител
компонентами снижения фоновой окраски (Antibody Diluent with Background-
Reducing Components; номер no каталогу S3022).______________________________
К о н т р о л ь отрицательный, мышиные leGl, 1 мл:
(Negative control. Mouse leGl. IgGl 1.0 mL: номер no каталогу Х093П:
В качестве реагента отрицательного контроля (РОК) рекомендовано использование
отрицательного контроля, представляющего собой мышиный IgGl, разведенный до
такой же концентрации IgGl, что и первичное антитело. Если стабильность
разведенного реагента отрицательного контроля не установлена при фактическом
выполнении методики окрашивания, этот реагент разводят непосредственно перед
использованием. Следовательно, одновременно с анализом образцов пациентов
должен выполняться анализ положительного и отрицательного контроля.________
Раствор для восстановления антигена ЭнВижн ФЛЕКС. низкий pH.
Концентрированный х 50. для использования в Автоматической Платформе Линк.
3x30 мл (Envision FLEX Target Retrieval Solution, low pH. Concentrated (50x). to be
used in the Automatic Link Instrument. 3 x 30 mL; номер no каталогу K8005~):
Готовят достаточное количество 1 x раствора для восстановления с низким pH путем
разбавления раствора для восстановления антигена с низким pH (50х) в
соотношении 1:50 дистиллированной или деионизированной водой (химически
чистой); pH 1х раствора для демаскировки должен составлять pH 6,1± 0,2. pH 1х
раствора для восстановления ниже 5,9 может приводить к ошибочным результатам.
Один флакон объемом 30 мл раствора для восстановления с низким pH (50х),
разбавленный в соотношении 1:50, позволит получить 1,5 л 1х реагента,
достаточного для заполнения одного резервуара РТ Link, в котором будет
обрабатываться до 24 предметных стекол на одно использование. После трех
использований 1х раствор для восстановления антигена выбрасывают и не
используют его по прошествии 5 дней после разбавления.
Буфер ПРОМ Ы ВНОЙ ЭнВижн ФЛЕКС. концентрированный х20. для использования в
использования в Автоматической Платформе Линк. 1л (EnVision FLEX Wash Buffer
(20x). 1 L: номер no каталогу K8007~): _____________________________________
27
Инструкция no применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ и. 1.0
--- стр. 30 ---
Готовят достаточное количество промывного буфера путем разбавления
промывного буфера (20х) в соотношении 1:20 дистиллированной или
деионизированной водой (химически чистой) для этапов промывания.
Неиспользованный 1х раствор хранят при температуре 2-8 °С в течение не более
одного месяца. Если буфер мутный, его выбрасывают. Дополнительную
информацию см. в Руководствах пользователя к Станции иммуногистохимического
окрашивания "Автостейнер Линк 48"
(Autostainer Link 48) (или к станции, с характеристиками см. Таблица 2).__________
Раствор ДАБ+ субстрат-хромоген (DAB+ Substrate-Chromogen Solution: номер по
каталогу К3468Е
Этот раствор тшательно перемешивают перед использованием,
образовавшийся в растворе, не влияет на качество окрашивания.
Для подготовки раствора ДАБ+ субстрат-хромоген добавляют 1 каплю жидкого
ДАБ+ хромогена на 1 мл ДАБ+ забуференного субстрата и перемешивают.
Подготовленный раствор субстрата-хромогена стабилен в течение 5 дней при
хранении в темном месте при температуре 2-8 °С.______________________________
Протокол окрашивания
Осадок,
Этап 1. Процедура депарафинизации, регидратации и демаскировки (3 в 1)
Подробная информация приведена в руководстве пользователя РТ Link.
На РТ Link (номер по каталогу РТ100/РТ101/РТ200) устанавливают
«Предварительный нагрев и охлаждение до 65 °С». Устанавливают «Нагрев до 97
°С в течение 20 минут».
► В емкости РТ Link заливают по 1,5 л/емкость раствора для восстановления
антигена с низким pH (1х рабочего раствора) для покрытия срезов ткани.
► Предварительно нагревают раствор для восстановления до 65 °С.
► Погружают стойки станции иммуногистохимического окрашивания
«Автостейнер», содержащие фиксированные в формалине и залитые парафином
срезы тканей, в предварительно нагретый раствор для восстановления антигена с
низким pH (1х рабочий раствор) в емкость модулей предварительной обработки РТ
Link. Инкубируют в течение 20 минут при температуре 97 °С.
► После завершения инкубации в растворе для восстановаления и снижения
температуры до 65 °С, вынимают каждую стойку станции
иммуногистохимического окрашивания «Автостейнер» с предметными стеклами из
резервуара модуля предварительной обработки РТ Link и сразу же помешают их в
емкость (например, станции для промывания РТ Link, номер по каталогу РТ109),
содержащую разведенный промывной буфер комнатной температуры (К8007).
► Предметные стекла инкубируют в разведенном промывном буфере комнатной
температуры в течение 5 минут.______________________________________________
Этап 2. Процедура окрашивания
После процедуры депарафинизации, регидратации и восстановления (3 в 1) стойки
платформы «Автостейнер» с предметными стеклами помещают в станцию
иммуногистохимического окрашивания "Автостейнер Линк 48" (Autostainer Link
48) (или используют аппарат для иммуногистохимического окрашивания, с
характеристиками см. Таблиц^ 2*). Станция иммуногистохимического
окрашивания "Автостейнер Линк 48" будет автоматически выполнять процесс
окрашивания, применяя соответствующий реагент, контролируя время инкубации
и промывая предметные стекла между реагентами.
Если медицинская организация использует альтернативные платформы для
окрашивания, то они должны быть валидированы конечным пользователем перед
применением.
► Инкубируйте предметные стекла с реагентом, блокирующим пероксидазу
(EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent; номер по каталогу SM801), в течение
5 минут.
► Промойте предметные стекла разбавленным промывочным буфером комнатной
температуры.
► Инкубируйте предметные стекла с подготовленным первичным антителом 22СЗ
или подготовленным РОК в течение 30 минут.
► Промойте предметные стекла разбавленным промывочным буфером комнатной
температуры.
► Инкубируйте слайды с линкером анти-мышиным (EnVision FLEX-t, Mouse
(LINKER); номер по каталогу К8021 / К8022) в течение 30 минут.
► Промойте предметные стекла разбавленным промывочным буфером комнатной
28
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v. 1.0
--- стр. 31 ---
/
температуры.
► Инкубируйте предметные стекла с реагентом для визуализации HRP (EnVision
FLEX/HRP; номер по каталогу К8002 / SM802) в течение 30 минут.
► Промойте и инкубируйте предметные стекла в разбавленном промывочном
буфере комнатной температуры в течение 5 минут.
► Инкубируйте предметные стекла с подготовленным раствором хромогена DAB+
(EnVision FLEX Substrate Buffer; номер по каталогу SM803) в течение 5 минут.
► Промойте предметные стекла разбавленным промывочным буфером комнатной
температуры.
► Инкубируйте слайды с Усилителем Dako ДАБ (Dako DAB Enhancer) (номер по
каталогу S1961) в течение 5 минут
► Промойте предметные стекла разбавленным промывным буфером комнатной
температуры._______________________________________________________________
Этап 3. Докрашивание
Предметные стекла необходимо докрасить гематоксилином (Гематоксилин
ЭнВижн ФЛЕКС, Готовый к применению, для использования в Автоматической
Платформе Линк, 3 х 45 мл, 400-600 тестов;) (EnVision FLEX Hematoxylin, ready-to-
use, to be used in the Automatic Link Bench, 3 x 45 ml, 400-600 tests; номер no каталогу
K8008) в течение 5 минут. Время инкубации с гематоксилином предварительно
запрограммировано в протоколе._____________________________________________
Этап 4. Заливка в среду.
Используйте безводную среду для заключения (Дако Среда для заключения без
толуола, 500 мл; Dako Toluene-Free Mounting Medium, 500 mL).
Необходимо использовать неводные среды для постоянной заливки.
Примечание: может происходить некоторое выцветание окрашенных предметных
стекол, зависящее от нескольких факторов, включая, помимо прочего, материалы и
методы докрашивания и заливки, а также условия хранения предметных стекол. Для
сведения выцветания к минимуму предметные стекла следует хранить в темном
месте при комнатной температуре (20-25 °С).
Примечания к процедуре окрашивания:
Пользователь должен внимательно прочесть «Информацию для оператора» и
ознакомиться со всеми компонентами и оборудованием перед использованием (см.
«Меры предосторожности»).
Перед иммунным окрашиванием температура всех реагентов должна быть
доведена до комнатной температуры (20-25 ° С). Точно также все процедуры
инкубации нужно проводить при комнатной температуре.
Нельзя допускать высыхания срезов ткани во время процедуры окрашивания.
Высохшие срезы ткани могут демонстрировать повышенное неспецифическое
окрашивание.
Примечание: Реагенты и инструкции, упоминаемые в этом документе, были
разработаны для обеспечения оптимальной производительности при применении с
рекомендованными реагентами и материалами. Дополнительное разбавление
реагентов или изменение време^й или температуры инкубации может давать
ошибочные или противоречивые результаты.___________________________________
К о н т р о л ь : Анализ положительных и отрицательных контрольных тканей следует
проводить одновременно с анализом образцов пациентов, следуя тому же
протоколу. Положительная контрольная ткань должна включать контрольную
ткань доброкачественной миндалины человека, и клетки/структуры должны
проявлять характер реакции, описанный для этой ткани в разделе
«Эксплуатационные характеристики»._________________________________________
Интерпретация
результатов окрашивания
Клеточный характер окрашивания представляет собой окрашивание мембран.
Эксплуатационные
характеристики (общие)
Нормальные ткани:
Окрашивание плазматической мембраны наблюдалось на иммунных клетках и
клетках эпителиального происхождения. В некоторых типах клеток отмечалось
окрашивание цитоплазмы, но оно не было зарегистрировано как положительное
окрашивание. В таблице 1 приведены сводные данные по иммунореактивности PD-
L1 на рекомендованной панели нормальных тканей. Все ткани были зафиксированы
в формалине, залиты в парафин и окрашены антителом моноклональным мышиным
к PD-L1 человека, клон 22СЗ в соответствии с инструкциями, приведенными в
29
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v.1.0
--- стр. 32 ---
данном листке-вкладыше в упаковку. В исследованных типах клеток или типах
тканей непредвиденных результатов не отмечалось. Наблюдаемое окрашивание
соответствовало данным, опубликованным в литературе для ИГХ экспрессии PD-
L1 в нормальных тканях (1,2).
Таблица 1. Сводные данные по реактивности нормальных тканей на
моноклональное мышиное антитело к PD-L1 человека, клон 22СЗ
Тип ткани (кол-
во
исследованных)
Положительные
элементы ткани
Тип ткани (кол-
во
исследованных)
Положительные
элементы ткани
Надпочечники
(3) 0/3 Паращитовидна
я железа (3)
1/3 Железистый
эпителий
Костный мозг
(3) 3/3 Мегакариоциты Поджелудочная
железа (3) 0/3
Молочная
железа (3) 0/3 Гипофиз (3) 1/3 Передняя доля
гипофиза
Мозжечок (3) 0/3 1/3 Задняя доля
гипофиза
Головной мозг
(3) 0/3 Простата (2) 2/2 Эпителий
Шейка матки
(3) 1/3 Клетки эпителия Слюнная железа
(3) 0/3
Ободочная
кишка (3) 1/3 Лимфоциты Кожа (3) 0/3
1/3 Макрофаги Тонкий
кишечник (3) 0/3
Пищевод (3) 0/3 Селезенка (3) 2/3 Макрофаги
Почка (3) 1/3 Тубулярный
эпителий Желудок (3) 2/3 Лимфоциты
Печень (3) 1/3 Макрофаги 1/3 Желудочные железы
1/3 Гепатоциты Яичко (3) 0/3
Легкое (3) 3/3 Макрофаги Тимус (3) 3/3 Спинной мозг
Мезотелиальны
е клетки (2) 0/2 Щитовидная
железа (3) 0/3
Мышца,
сердечная (3) 0/3 Миндалина (3) 3/3 Эпителий крипт
Мышца,
скелетная (3) 0/3 2/3 макрофаги
Нерв,
периферически
й(3)
0/3 Матка (3) 0/3
Яичник (3) 0/3
Патологически измененные ткани:
Окрашивание плазматической мембраны наблюдалось на иммунных клетках и
клетках эпителиального происхождения. В некоторых типах клеток отмечалось
окрашивание цитоплазмы, но оно не было зарегистрировано как положительное
окрашивание. В таблице 2 приведены сводные данные иммунореактивности PD-L1
на панели опухолевых тканей. Все ткани были зафиксированы в формалине, залиты
парафином и окрашены антителом моноклональным мышиным к PD-L1 человека,
клон 22СЗ в соответствии с инструкциями, приведенными в данном листке-
вкладыше в упаковку. В исследованных образцах опухоли непредвиденных
результатов не отмечалось. Наблюдаемое окрашивание соответствовало данным,
опубликованным в литературе для ИГХ экспрессии PD-L1 в опухолевых тканях (1-
4).
Таблица 2. Сводные данные по реактивности опухолевых тканей на
моноклональное мышиное антитело к PD-L1, клон 22СЗ ____________
Тип опухоли Локализация PD-L1-
30
Инструкция по применению Антитела моноклонального мышиного к PD-L1, клон 22СЗ v.1.0