Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени "АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6" по ТУ 21.20.23-090-09286667-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 --- .:::П АмплиПрайм / Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени «АмплиПрайм® EBV/CMV/HHV6» по ТУ 21.20.23-090-09286667-2020 «АмплиПрайм® EBV/CMV/HHV6» ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ у ООО «НекстБио». Россия, 111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru --- стр. 3 --- ОГЛАВЛЕНИЕ 1. НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................4 2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.......................................................................................5 2.1. Формы выпуска, состав и комплектность..............................................................5 2.2. Принцип метода........................................................................................................7 2.3. Прослеживаемость значений калибраторов К1 HS и К2 HS................................8 3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА.......................................' .......................................................8 3.1. Внутренний контроль качества................................................................................8 3.2. Рекомендуемые контрольные материалы............................................................10 4. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................................................11 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ........................................11 6. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ........................................13 6.1. Взятие исследуемого материала..........................................................................13 6.2. Предварительная подготовка исследуемого материала....................................14 6.3. Экстракция ДНК из исследуемых образцов..........................................................15 6.4. Амплификация, детекция продуктов амплификации, анализ и интерпретация результатов.....................................................................................................................16 7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ.....................................................................................18 7.1. Цельная кровь........................................................................................................18 7.2. Слюна.......................................................................................................................19 7.3. Мазки со слизистой оболочки влагалища.............................................................19 7.4. Соскобы эпителия со слизистой оболочки уретры.............................................20 7.5. Мазки со слизистой оболочки прямой кишки.......................................................20 7.6. Мазки (соскобы) со слизистой оболочки ротоглотки...........................................20 7.7. Моча.........................................................................................................................21 7.8. Спинномозговая жидкость (ликвор)......................................................................22 7.9. Секрет предстательной железы............................................................................22 7.10. Эякулят................................................................................................................23 7.11. Биоптаты внутренних органов...........................................................................23 8. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................................................................24 8.1. Экстракция ДНК из исследуемого материала.....................................................24 8.2. Подготовка реагентов для амплификации...........................................................24 8.3. Внесение проб ДНК, проведение амплификации и детекции............................25 8.4. Анализ и вычисление результатов.......................................................................27 8.5. Интерпретация результатов..................................................................................28 8.6. Возможные ошибки и рекомендации по их решению.........................................30 8.7. Диагностическое значение полученного результата..........................................31 9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА ................................................31 9.1. Предел обнаружения.............................................................................................31 9.2. Линейный диапазон измерения и предел измерения.........................................33 9.3. Аналитическая специфичность.............................................................................33 9.4. Воспроизводимость и повторяемость измерения...............................................34 9.5. Правильность измерения.......................................................................................35 9.6. Диагностическая специфичность и диагностическая чувствительность.........35 9.7. Оценка влияния интерферирующих веществ.....................................................37 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА.... 38 10.1. Срок годности......................................................................................................38 10.2. Транспортирование............................................................................................38 10.3. Хранение.............................................................................................................38 11. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ..................................................................................40 12. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ...............41 Версия 20.07,21 --- стр. 4 --- СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ ct - Cycle threshold (пороговый цикл) CMV - Cytomegalovirus EBV - Epstein-Barr virus HHV6 - Human Herpesvirus 6 «АмплиПрайм® EBV/CMV/HHV6» Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени «АмплиПрайм® EBV/CMV/HHV6» по ТУ 21.20.23-090-09286667-2020 вко - внутренний контрольный образец ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ДНКаза - дезоксирибонуклеаза дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфаты К1 - калибровочный образец 1 К2 - калибровочный образец 2 К- - отрицательный контроль ПЦР око - отрицательный контрольный образец экстракции ПЦР — полимеразная цепная реакция РУ - регистрационное удостоверение ТУ - технические условия УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза НАИМЕНОВАНИЕ ИЗДЕЛИЯ Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» по ТУ 21.20.23-090-09286667-2020. Далее по тексту употребляется краткое наименование: Набор реагентов «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6», а также сокращение Набор реагентов. Версия 20.07.21 --- стр. 5 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» предназначен для выявления и количественного определения ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) в биологическом материале (цельная кровь, плазма крови, лейкоциты крови, слюна, отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, прямой кишки и ротоглотки, моча, ликвор, секрет предстательной железы, эякулят, биоптаты внутренних органов) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени». 1.2. Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из исследуемого материала с помощью наборов реагентов, рекомендованных в разделе инструкции «Дополнительное оборудование и материалы». 1.3. Функциональное назначение: набор предназначен для диагностики in vitro (выявление и количественное определение ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса человека (CMV) и герпеса 6 типа (HHV6) методом ПЦР в биологическом материале человека). 1.4. Показания к проведению исследования: Набор реагентов используется в клинической лабораторной диагностике для исследования биологического материала, полученного от лиц с подозрением на герпесвирусную инфекцию вне зависимости от формы и стадии заболевания всех групп населения. Результаты ПЦР- исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания. 1.5. Применение набора не зависит от популяционных и демографических аспектов. 1.6. Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории (врачи клинической лаборатории и медицинские лабораторные техники). 1.7. Применять набор строго по назначению согласно инструкции по применению. 1.8. Противопоказания к применению: Нарушение целостности упаковки, истекший срок годности, несоблюдение требований инструкции. Версия 20.07.21 --- стр. 6 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 2.1. Формы выпуска, состав и комплектность Набор выпускается в трех формах (состав набора и комплектность поставки указаны в таблице 1 и 2 соответственно). Все три формы предназначены для проведения амплификации ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени. Для проведения полного исследования необходимо использовать наборы реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные в разделе «Дополнительное оборудование и материалы». Форма выпуска 1 включает смесь для проведения ПЦР, раскапанную под прослойку парафина по пробиркам объемом 0,2 мл. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного и роторного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Форма выпуска 2 включает смесь для проведения ПЦР в пробирке объемом 1,5 мл для дозирования в любые типы пробирок. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного и роторного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Форма может быть использована как для ручной раскапки, так и совместно с автоматическими станциями для приготовления и дозирования реакционных смесей. Форма выпуска 3 включает смесь для проведения ПЦР, раскапанную под прослойку парафина по стрипованным (12,5 стрипов по 8 пробирок) пробиркам объемом 0,2 мл. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Таблица 1 Состав набора Реагент Объем, мл Количество Описание Форма выпуска 1 ПЦР-смесь EBV/CMV/HHV6 0,01 100 пробирок Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. (Поозоачная жидкость, раскапана под парафин. ПЦР-буфер-К 1,20 1 пробирка Буферный раствор с термостабильной ДНК- полимеразой Tag, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликоэилазой. Прозрачная жидкость красного цвета. К1 HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. К2 HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. ОКО 1,10 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. К- 0,26 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. Версия 20.07.21 --- стр. 7 --- Реагент Объем, мл Количество 1 Описание Форма выпуска 2 ПЦР-смесь EBV/CMV/HHV6 1,20 1 пробирка Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. Прозрачная жидкость. ПЦР-буфер-Н 0,65 1 пробирка Буферный раствор с термостабильной ДНК,- полимеразо^! Taq, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликозилазой. Прозрачная жидкость. К1 HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. K2HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. ОКО 1,10 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. К- 0,26 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. Форма выпуска 3 ПЦР-смесь EBV/CMV/HHV6 0,01 100 пробирок (12,5 Стрипов по 8 пробирок)^ Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. Прозрачная жидкость, раскапана в стрипованные пробирки под парафин белого цвета. ПЦР-буфер-К 1,20 1 пробирка Буферный раствор с термостабильной ДНК- полимеразой Taq, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликозилазой. Прозрачная жидкость красного цвета. К1 HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. K2HS 0,12 1 пробирка Положительный контрольный образец, ДНК- калибратор. Прозрачная жидкость. ОКО 1,10 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. К- 0,26 1 пробирка Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. Таблица 2 Комплектность набора Компонент Формат Количество Набор реагентов (форма выпуска 1. 2 или 3) - 1 Инструкция по применению набора в электронном виде на официальном сайте Производителя: www.nextbio.ru - Краткое руководство по применению набора в бумажном виде 1 Комплект вкладышей к набору в бумажном виде 1 Паспорт качества в электронном виде на официальном сайте Производителя: www.nextbio.ru - ' Пробирки с голубым парафином не используются. Версия 20.07.21 --- стр. 10 --- исследуемых образцов в постановке считаются недостоверными, необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить исследование всех исследуемых образцов, в которых обнаружена ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), герпеса 6 типа (HHV6), цитомегаловируса человека (CMV) и контроля, начиная с этапа экстракции. В качестве положительного контроля используются реагенты К1 HS и К2 HS, входящие в состав набора. В случае несоответствия результатов для положительных контролей заданным критериям валидности, результаты для всех образцов в постановке считаются недостоверными, требуется повторить исследование всех исследуемых образцов и контролей, начиная с этапа ПЦР. 3.1.2. Анализ калибровки Количественная оценка концентрации ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), герпеса 6 типа (HHV6), цитомегаловируса человека (CMV) и ДНК р -глобинового гена человека в исследуемых образцах проводится относительно количественно охарактеризованных калибровочных образцов К1 HS и К2 HS. Исследование калибровочных образцов К1 HS и К2 HS проводится параллельно с исследованием образцов, начиная с этапа ПЦР. Определение концентрации ДНК производится в соответствии с заданными значениями концентраций калибровочных образцов К1 HS и К2 HS и полученными значениями порогового цикла (Ct) для калибровочных образцов К1 HS и К2 HS и исследуемых образцов. Эффективность калибровки должна укладываться в заданный диапазон. Если эффективность калибровки выходит за пределы граничных значений, необходимо повторить исследование с этапа ПЦР. 3.1.3. Контроль ингибирования и качества забора материала Для оценки качества забора биоматериала и контроля всех этапов исследования, эффективности экстракции ДНК и оценки влияния ингибиторов ПЦР предусмотрено использование экзогенного ВКО^, который добавляется в каждый исследуемый и отрицательный контрольный образец на этапе экстракции и эндогенного ВКО - ДНК р-глобинового гена человека, который присутствует в каждом исследуемом образце, содержащем клинический материал от человека, и контрольных калибраторах. Результаты исследования ВКО должны соответствовать заданным критериям валидности для положительных и отрицательных исследуемых образцов, указанным в разделе «Интерпретация результатов». Если в исследуемых образцах не ^ВКО (BKO-FL) входит в состав набора реагентов, рекомендованного Производителем для экстракции ДНК из исследуемого материала, или приобретается дополнительно. Версия 20.07.21 9 --- стр. 11 --- обнаружена ДНК ВКО, то результаты исследования данных образцов считаются недостоверными, требуется повторить их анализ, начиная с этапа экстракции. Если при проведении количественного анализа в исследуемых образцах цельной крови, лейкоцитов крови и биоптатов внутренних органов не обнаружена ДНК р-глобинового гена человека или обнаружена в количестве ■'•менее 2000 копий/реакцию, то/ результаты исследования данных образцов считаются недостоверными, требуется повторить анализ, начиная с этапа забора материала. Для образцов плазмы крови, слюны, отделяемого слизистых оболочек урогенитального тракта, прямой кишки и ротоглотки, мочи, ликвора, секрета предстательной железы, эякулята допустимое количество ДНК р-глобинового гена человека может быть менее 500 копий/реакцию. 3.1.4. Мониторинг лаборатории на наличие контаминации Рекомендуется раз в месяц проводить мониторинг лаборатории на контаминацию продуктами амплификации, исследуемыми образцами, положительными контрольными образцами. Оценка наличия/отсутствия контаминации проводится путем исследования смывов с различных объектов: пипеток, рабочих поверхностей лабораторной мебели, оборудования и поверхностей помещений. Взятие и исследование смывов следует проводить согласно процедуре, описанной в МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При обнаружении контаминации необходимо провести обработку лаборатории моющими и дезинфицирующими растворами согласно указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09. Также для предотвращения контаминации лаборатории или в качестве мер по деконтаминации рабочих зон рекомендуется использовать раствор для дезактивации нуклеиновых кислот, например, «Олигатор» производства ООО «НекстБио», Россия. 3.2. Рекомендуемые контрольные материалы В качестве контрольных материалов для проверки заявленных функциональных характеристик набора могут быть использованы зарегистрированные на территории Российской Федерации панели контрольных образцов, предназначенные для проведения внутреннего и внешнего контролей качества лабораторных исследований по обнаружению ДНК вирусов Эпштейна-Барр (EBV), герпеса 6 типа (HHV6), цитомегаловируса человека (CMV). Версия 20.07.21 10 --- стр. 12 --- 4. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ 4.1. Набор применяется только для диагностики in vitro. 4.2. Набор предназначен для работы только с исследуемым материалом, указанным в разделе «Назначение». Исследование других видов биологического материала может привести к получению недостоверных результатов./ 4.3. Непригодными для исследования являются образцы цельной крови и плазмы крови, взятые в пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта и образцы цельной крови, содержащие кровяной сгусток или подвергшиеся заморозке. 4.4. Получение достоверных результатов обеспечивается выполнением требований, предъявляемых к взятию, транспортированию, подготовке и хранению образцов исследуемого материала (см. раздел «Исследуемый материал»). 4.5. С помощью набора возможно ПЦР-исследование только проб ДНК, экстрагированных из исследуемого материала совместно с внутренним контрольным образцом - BKO-FL. Без использования BKO-FL невозможно провести оценку валидности постановки. 4.6. Набор предназначен для профессионального применения. Набор должен использоваться только квалифицированным, обученным (в области клинической лабораторной диагностики) персоналом (врачи клинической лаборатории и медицинские лабораторные техники, обученные молекулярным биологическим методикам). 4.7. При работе с набором следует использовать только амплификаторы с системой детекции флуоресцентного сигнала, характеристики которых удовлетворяют требованиям, указанным в разделе «Дополнительное оборудование и материалы». 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ 5.1. Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно- эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 Версия 20.07.21 11 --- стр. 13 --- «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 5.2. При работе необходимо всегда выполнять следующие требования: - Применять набор строго по назначению в соответствии с данной инструкцией. Отклонение от прописанных процедур и порядка действий может привести к получению недостоверных результатов анализа. - Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ следует проводить в отдельных помещениях (зонах) в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Не возвращать образцы, оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. - Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08. - Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08. - Удалять неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные реагенты, упаковку^, биологический материал®, включая материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. - Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания медицинских отходов. - Набор предназначен для однократного применения для проведения ПЦР- исследования указанного количества образцов (см. раздел «Формы выпуска, состав и комплектность»). - К работе с набором допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории ^ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г. 5Биологический материал, включая инструменты и предметы, загрязненные материалом, относятся к классу опасности медицинских отходов Б, Версия 20.07,21 12 --- стр. 17 --- - набор позволяет исследовать образцы объемом не менее 100 мкл; - набор позволяет проводить элюцию очищенной ДНК в объеме не менее 50 мкл. В ходе проведения клинических испытаний валидацию прошли следующие наборы реагентов для экстракции ДНК: «МагноПрайм ФАСТ» (РУ № РЗН 2019/8043), «МагноПрайм ЮНИ» (РУ № РЗН 2019/8955), «АмплиПрайм ДНК-сорб-В» (РУ № ФСР/ 2012/14019), «АмплиПрайм РИБО-преп» (РУ № ФСР 2012/14017). Рекомендуется использовать наборы для экстракции ДНК в соответствии с таблицей 4. Таблица 4 Рекомендуемые наборы для экстракции ДНК Биоматериал Набор для экстракции Отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, прямой кишки, ротоглотки, моча, секрет предстательной железы МагноПрайм ФАСТ Отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, ротоглотки, моча, слюна, цельная кровь, плазма крови, лейкоциты крови, ликвор МагноПрайм ЮНИ Эякулят, биоптаты внутренних органов АмплиПрайм ДНК-сорб-В Отделяемое слизистой оболочки ротоглотки, плазма крови, ликвор, слюна АмплиПрайм РИБО-преп 6.3.2. Реагент BKO-FL (ООО «НекстБио», Россия) - при использовании наборов реагентов для экстракции «МагноПрайм ЮНИ», «АмплиПрайм ДНК-сорб-В», «АмплиПрайм РИБО-преп», или любого другого набора, в состав которого не включен BKO-FL. 6.3.3. Дополнительные материалы и оборудование, необходимые для экстракции ДНК, ~ согласно инструкции к набору реагентов для экстракции ДНК. 6.4. Амплификация, детекция продуктов амплификации, анализ и интерпретация результатов 6.4.1. Одноразовые полипропиленовые пробирки, свободные от ДНКаз, следующих видов (при использовании формы выпуска 2): - завинчивающиеся пробирки и крышки к ним или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл - для приготовления реакционной смеси; - тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с прозрачными крышками - для проведения ПЦР при использовании прибора планшетного типа; - тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой или пробирки для ПЦР объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками - для проведения ПЦР при использовании прибора роторного типа. 6.4.2. Одноразовые наконечники, свободные от ДНКаз, для дозаторов переменного объема с фильтром от 100 до 1000 мкл. Версия 20.07.21 16 --- стр. 18 --- 6.4.3. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл (в соответствии с используемыми пробирками для ПЦР). 6.4.4. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс). 6.4.5. Центрифуга-вортекс. 6.4.6. Автоматические дозаторы переменного объема. I 6.4.7. Станция автоматическая с модулем для приготовления и раскапки реакционных смесей и комплект расходных материалов к ней согласно инструкции Производителя, - при использовании формы выпуска 2 в случае приготовления реакционной смеси с использованием автоматической станции. 6.4.8. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме реального времени роторного либо планшетного типа, зарегистрированный в РФ и соответствующий следующим требованиям: - наличие независимых каналов флуоресцентной детекции для флуорофоров РАМ, R6G, ROX, Су5, Су5.5 со следующими характеристиками: Таблица 5 Требуемые характеристики каналов флуоресцентной детекции Канал для флуорофора Длины волн, нм Возбуждения Детекции Минимум Максимум Минимум Максимум РАМ 450 470 510 530 R6G 515 532 545 580 ROX 565 585 605 650 Су5 620 640 660 690 Су5.5 660 690 705 750 - для приборов планшетного типа наличие подогреваемой крышки с температурой более 100 °С; - точность поддержания температуры ^ ±0,4 “С; - скорость нагрева не менее 2 °С/сек; - скорость охлаждения не менее 1 ®С/сек. В ходе проведения клинических испытаний валидацию прошли следующие программируемые амплификаторы с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме реального времени: Rotor-Gene Q (РУ № ФСЗ 2010/07595), Applied Biosystems QuantStudio 5 (РУ № РЗН 2019/8446), С1000 Touch в комплекте с модулем CFX96 (РУ № ФСЗ 2008/03399). 6.4.9. Холодильник от 2 до 8 °С. 6.4.10. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Версия 20.07.21 17 --- стр. 19 --- 6.4.11. Емкость для сброса наконечников. 7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ Материалом для исследования служит - цельная кровь, плазма крови, лейкоциты крови; - слюна; ' - отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта; - отделяемое слизистой оболочки прямой кишки; - отделяемое слизистой оболочки ротоглотки; - моча; - спинномозговая жидкость (ликвор); - секрет предстательной железы; - эякулят; - биоптаты внутренних органов, Взятие, транспортирование и хранение исследуемого биологического материала следует проводить в соответствии с нижеперечисленными требованиями, несоблюдение которых может привести к получению некорректных результатов исследования. 7.1. Цельная кровь 7.1.1. Взятие материала Взятие крови проводится натощак или через 3 часа после приема пищи в пробирку с антикоагулянтом (раствором ЭДТА или цитрата натрия). ВНИМАНИЕ! Недопустимо использовать гепарин в качестве антикоагулянта. Для тщательного перемешивания крови с антикоагулянтом необходимо несколько раз перевернуть пробирку. Допускается хранение и транспортирование образцов цельной крови до проведения ПЦР-исследования; - при температуре от 20 до 25 °С - в течение 6 часов с момента получения материала; - при температуре от 2 до 8 °С - в течение 2 суток. ВНИМАНИЕ! Недопустимо замораживание образцов цельной крови. 7.1.2. Предварительная обработка для получения лейкоцитарной массы Пробирки с цельной кровью центрифугировать при 800 - 1600 g в течение 20 мин. После удаления плазмы, используя наконечник с фильтром, аккуратно собрать клетки крови (лейкоцитарную массу) с поверхности осадка в объеме 200 мкл и перенести в стерильную пробирку объемом 1,5 или 2,0 мл. Версия 20.07.21 18 --- стр. 26 --- 8.2.2. При использовании формы выпуска 2. ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед проведением ПЦР. ВНИМАНИЕ! В случае приготовления реакционной смеси с помощью автоматической станции следуйте указаниям инструкции по ее использованию. 8.2.2.1. Рассчитать объемы ПЦР-смеси EBV/CMV/HHV6 и ПЦР-буфера-Н, требующиеся для приготовления реакционной смеси (см. таблицу 6). Смесь готовить на общее число исследуемых и контрольных образцов плюс запас не менее чем на одну реакцию. Таблица 6 Расчет объемов компонентов для одной реакционной смеси Реагент Объем, мкл Обозначения ПЦР-смесь EBV/CMV/HHV6 10,0*(N+1) N - количество амплифицируемых образцов, включая контролиПЦР-буфер-Н 5,0*(N+1) 8.2.2.2. Перемешать содержимое пробирок с ПЦР-смесью EBV/CMV/HHV6 и ПЦР-буфером-Н, осадить капли на вортексе. 8.2.2.3. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого амплификатора с системой детекции в режиме реального времени. 8.2.2.4. Внести в пробирки по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. ВНИМАНИЕ! Неиспользованные остатки реакционной смеси хранению не подлежат. 8.2.3. При использовании формы выпуска 3. 8.2.3.1. Отобрать необходимое количество стрипованных пробирок с ПЦР- смесью EBV/CMV/HHV6 для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. 8.2.3.2. Убедиться, что парафин полностью покрывает раствор на дне пробирок. В противном случае, не использовать данные пробирки. 8.2.3.3. На поверхность парафина внести по 10 мкл ПЦР-буфера-К, при этом он не должен проваливаться под прослойку парафина и смешиваться с ПЦР-смесью. 8.3. Внесение проб ДНК, проведение амплификации и детекции ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с помощью наборов реагентов для проведения экстракции методом сорбции на силикагеле или магнитной сепарации, необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. Версия 20.07.21 25 --- стр. 27 --- ВНИМАНИЕ! При ручном анализе (качественный формат) программирование и запуск амплификатора проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для программирования амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. При использовании программного обеспечения FRT Manager программирование амплификатора устанавливается автоматически. 8.3.1. Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью по 10 мкл проб ДНК. полученных в результате экстракции. 8.3.2. Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью контрольные образцы. При проведении качественного анализа; а) Положительный контроль ПЦР - в одну пробирку для образца К2 внести 10 мкл К2 HS. б) Отрицательный контроль экстракции - в одну пробирку для образца ОКО внести 10 мкл пробы, экстрагированной из ОКО. в) Отрицательный контроль ПЦР - в одну пробирку для образца К- внести 10 мкл реагента К-. При проведении количественного анализа: а) Образец К1 - в одну пробирку внести 10 мкл К1 HS. б) Образец К2 - в одну пробирку внести 10 мкл К2 HS. в) Отрицательный контроль экстракции - в одну пробирку для образца ОКО внести 10 мкл пробы, экстрагированной из ОКО. г) Отрицательный контроль ПЦР (К-) - в одну пробирку для образца К- внести 10 мкл реагента К-. 8.3.3. Запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме реального времени для выполнения единой программы амплификации и детекции флуоресцентного сигнала (см. таблицу 7). Таблица 7 Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала Цикл Температура, °С Время Детекция по каналам для йшгбввДтип Количество вйклов 1 50 15 мин - 1 2 95 15 мин - 1 3 95 Юс - 45 60 20 с РАМ, R6G®, ROX, Суб, Су5.5 в Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow, VIC. Версия 20.07.21 26 --- стр. 28 --- Примечание - С использованием единой программы можно одновременно проводить в одном приборе любое сочетание тестов, включая тесты с обратной транскрипцией и амплификацией. При одновременном проведении нескольких тестов детекция флуоресцентного сигнала назначается и по другим используемым каналам, помимо указанных в таблице. В случае если в одном приборе одновременно проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из данной программы первый шаг обратной транскрипции (50 °С - 15 минут) для экономии времени. 8.3.4. Установить пробирки или стрипы в ячейки реакционного модуля прибора. Примечание - Рекомендуется перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок на вортексе. 8.3.5. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала. 8.3.6. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в режиме реального времени. 8.4. Анализ и вычисление результатов ВНИМАНИЕ! При ручном анализе обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени, проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. ВНИМАНИЕ! Количественный анализ результатов возможно проводить только в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИнтерЛабСервис», Россия, РУ № РЗН 2019/8870) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИнтерЛабСервис» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/. Обработка и расчет результатов происходит на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной (сигмообразной) формы с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы ДНК значения порогового цикла (Ct) в соответствующей графе таблицы результатов. Параметры обработки флуоресцентных кривых зависят от используемой модели амплификатора (см. вкладыш к набору и инструкцию по применению амплификатора). Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются по пяти каналам детекции (см. таблицу 8). Версия 20.07.21 27 --- стр. 29 --- Таблица 8 Детекция флуоресцентного сигнала Канал для флуорофора FAM R6G ROX 1 Суб Суб.5 Продукт амплификации ДНК EBV ДНКННУб ДНКСМУ ДНК Glob BKO-FL На основании полученных значений порогового цикла (Ct) и заданных значений концентраций для калибраторов строится калибровочная кривая, по которой проводится расчет концентрации ДНК выявляемых вирусов и количество геномов человека на 1 мл исследуемого образца /реакционную смесь. Полученные значения используются для расчета количества ДНК выявляемых возбудителей, приходящегося на 10^ клеток человека. Нормированные значения концентраций отражают количество копий возбудителя относительно клеток человека. Полученные значения концентрации ДНК человека позволяют оценить качество взятия биологического материала. При количественном анализе расчет концентрации выполняется в трех вариантах: • в логарифмах копий ДНК возбудителя на стандартное количество клеток человека (10^) • в копиях ДНК на стандартное количество клеток человека (10^)^°; • в копиях ДНК возбудителя на 1 мл образца. 8.5. Интерпретация результатов Интерпретацию результатов проводят в двух вариантах: - в качественном формате вручную в соответствии с таблицей 9 и вкладышем, прилагаемым к набору. Результат исследования считают достоверным, если результаты, полученные для контрольных образцов, соответствуют критериям валидности, указанным в таблице 11; - в качественном и количественном формате в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИнтерЛабСервис», Россия, РУ № РЗН 2019/8870) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИнтерЛабСервис» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/. Используемые в программном обеспечении алгоритм интерпретации результатов для исследуемых образцов и критерии валидности результатов, полученных для контролен, представлены в таблицах 10 и 11 соответственно. ® Если в исследуемых образцах плазмы крови, слюны, отделяемого слизистых оболочек урогенитального тракта, прямой кишки и ротоглотки, мочи, ликвора, секрета предстательной железы, эякулята обнаружена ДНК р-глобинового гена человека в количестве менее 500 копий/реакцию, то расчет концентрации выполняется только в копиях ДНК возбудителя на 1 мл образца. Если полученное значение концентрации ДНК возбудителя выходит за рамки линейного диапазона измерения набора, расчет точного значения концентрации ДНК производится только в копиях ДНК возбудителя на 1 мл образца. Версия 20.07.21 28 --- стр. 31 --- Таблица 11 Критерии валидности для контрольных образцов Контроль Результаты амплификации по каналу для флуорофора FAM 1 1 ROX 1 Су5 Су5.5 око (отрицательный контроль экстракции) Значение Ct отсутствует Определено значение Ct не выше граничного^^ К- (отрицательный контроль ПЦР) Значение Ct отсутствует К1 HS(K1) Определено значение Ct К2 HS (К2) Определено значение Ct не выше граничного К1 HS(K1) К2 HS (К2) Показатель эффективности (Е) для калибраторов укладывается в диапазон 0,8 -1,2 8.6. Возможные ошибки и рекомендации по их решению 8.6.1. Для отрицательного контроля экстракции (ОКО) по каналу для флуорофора FAM, и/или R6G/HEX/JOE/VIC, и/или ROX, и/или Суб определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории лродуктами амплификации или контаминация реагентов или исследуемых образцов на каком-либо этапе исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых вирусов, начиная с этапа экстракции ДНК. 8.6.2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналу для флуорофора FAM, и/или R6G/HEX/JOE/VIC, и/или ROX, и/или Суб, и/или Суб.б определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех образцов. 8.6.3. Если показатель эффективности Е для калибраторов не укладывается в диапазон 0,8 - 1,2, необходимо проверить правильность заданных концентраций калибраторов в соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях калибраторов и уровне пороговой линии показатель эффективности не укладывается в требуемый диапазон, следует повторить исследование, начиная с этапа ПЦР. 8.6.4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Версия 20,07.21 30 --- стр. 32 --- или параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию для этого образца. 8.6.5. В случае получения невалидных или недостоверных/сомнительных результатов требуется повторное исследование образца, начиная с этапа забора / биоматериала. 8.7. Диагностическое значение полученного результата ПЦР-исследование является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению пациента. Результаты, полученные при использовании набора, следует рассматривать и интерпретировать в сочетании с данными других клинических и лабораторных исследований. 9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 9.1. Предел обнаружения'*^ Предел обнаружения набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» был определен с использованием пробит-анализа с 95%-ой доверительной вероятностью (см. таблицу 12). Значения характеристики, указанные в таблице 12, достигаются при соблюдении правил, указанных в разделе «Исследуемый материал». Таблица 12 Предел обнаружения набора Вирус Биоматериал Набор для экстракции ДНК Предел обнаружения по ProbIt 95%, «■nriUlmi 95%-ый доверительный интервал, колий/мл......... EBV Отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта «МагноПрайм ФАСТ» 4x102 3.20x102 - 5,26x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3,02x102-4,57x102 CMV «МагноПрайм ФАСТ» 2.98x102-4,61x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2.75x102 - 4,28x102 HHV6 «МагноПрайм ФАСТ» 3.19x102 - 5,02x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,68x102 - 4,17x102 EBV Отделяемое слизистой оболочки прямой кишки «МагноПрайм ФАСТ» 4x102 3,06x102 - 4,55x102 CMV 3,27x102-5,01x102 HHV6 3,52x102-5,65x102 EBV Отделяемое слизистой оболочки ротоглотки «АмплиПрайм РИБО- преп» 4x102 2,76x102 - 6,52x102 «МагноПрайм ФАСТ» 3,05x102-5,83x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,47x102-4,50x102 CMV «АмплиПрайм РИБО- преп» 2,22x102 - 6,00x102 предел обнаружения - 95%-ое положительное пороговое значение концентрации (концентрация ДНК выявляемого возбудителя, при которой 95% тестов дают положительный результат). Версия 20.07.21 31 --- стр. 33 --- Вирус Биоматериал Набор для экстракции ДНК Предел обнаружения по ProbIt 95%, raradHtan 95%-ый доверительный интервал, копий/мл «МагноПрайм ФАСТ» t 3,08x102-5,30x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,60x102-5,40x102 HHV6 «АмплиПрайм РИБО- преп» 3,29x102 - 6,03x102 «МагноПрайм ФАСТ» 2,95x102 - 5.24x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3,08x102 - 5,30x102 EBV Моча «МагноПрайм ФАСТ» 4x1Q2 3,06x102 - 4,55x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3,37x102 - 5,26x102 CMV «МагноПрайм ФАСТ» 3,52x102 - 5,65x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3,27x102-5,08x102 HHV6 «МагноПрайм ФАСТ» 3,03x102 - 4,51x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,87x102-4,12x102 EBV Слюна «АмплиПрайм РИБО- преп» 4x1Q2 2,53x102-4,19x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,64x102-4,59x102 CMV «АмплиПрайм РИБО- преп» 2,77x102 - 5,19x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,47x102-4,50x102 HHV6 «АмплиПрайм РИБО- преп» 2,95x102-5,24x102 «МагноПрайм ЮНИ» 2,60x102 - 5,40x102 EBV Секрет предстательной железы «МагноПрайм ФАСТ» 4x102 3,29x102-5,23x102 CMV 2,83x102-4,16x102 HHV6 2,75x102-4,28x102 EBV Цельная кровь «МагноПрайм ЮНИ» 4x102 2,63x102 - 4,16x102 CMV 2.73x102-4,51x102 HHV6 2,84x102 - 4,93x102 EBV Плазма крови «МагноПрайм ЮНИ» 4x102 3,20x102-5,26x102 «АмплиПрайм РИБО- преп» 2,77x102-4,12x102 CMV «МагноПрайм ЮНИ» 2,86x102-4,27x102 «АмплиПрайм РИБО- преп» 2,93x102-4,58x102 HHV6 «МагноПрайм ЮНИ» 2,98x102 - 4,61x102 «АмплиПрайм РИБО- преп» 3,07x102-5,02x102 EBV Лейкоциты крови «МагноПрайм ЮНИ» 4x102 3,25x102 - 5.56x102 CMV 2,68x102-4,21x102 HHV6 2,78x102 - 4,30x102 EBV Ликвор «АмплиПрайм РИБО- преп» 4x102 3,39x102 - 5,59x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3,03x102 - 4,51x102 CMV «АмплиПрайм РИБО- преп» 3.19x102 - 5,02x102 «МагноПрайм ЮНИ» 3.02x102 - 4,57x102 HHV6 «АмплиПрайм РИБО- преп» 3,29x102 - 5,23x102 Версия 20.07.21 32 --- стр. 34 --- Вирус Биоматериал Набор для экстракции ДНК Предел обнаружения по Probit 95%, jeoim M ill . . . 95%-ый доверительный интервал, ШЛвЛЛт «МагноПрайм ЮНИ» 2,89x102-4,63x102 EBV Биоптаты внутренних органов «АмплиПрайм ДНК- сорб-В» 4x1Q2 2,68x102-4,17x102 CMV 2,83x102 - 4,16x102 HHV6 2,75x102-4,28x102 EBV Эякулят «АмплиПрайм ДНК- сорб-В» 4x102 3,37x102 - 5,26x102 CMV 3,27x102 - 5,08x102 HHV6 2,87x102-4,12x102 9.2. Линейный диапазон измерения и предел измерения Диапазон, в котором набор дает линейный ответ, находится в пределах от 8x10^ до 1x10^ копий/мл. Предел измерения набора является нижним пределом линейного диапазона измерения набора. Указанные значения характеристики достигаются при соблюдении правил, указанных в разделе «Исследуемый материал». 9.3. Аналитическая специфичность Набор обнаруживает фрагменты ДНК Epstein-Barr virus, Cytomegalovirus и Human herpesvirus 6. Аналитическая специфичность набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» оценивалась тестированием ДНК микроорганизмов (см. таблицу 13) и геномной ДНК человека. ДНК микроорганизмов в концентрации не менее 1x10® копий/мл и геномную ДНК человека вносили в образцы биологического материала, не содержащие определяемые с помощью набора вирусы. Дополнительно подтверждалось отсутствие перекрестных реакций между выявляемыми вирусами при тестировании ДНК данных вирусов в концентрации не менее 1x10^ копий/мл. Таблица 13 Микроорганизмы, используемые для оценки аналитической специфичности Микроо рганизм , ; Candida albicans Neisseria sicca Chlamydia trachomatis Neisseria subfiava Escherichia coli Streptococcus agalactiae Mycoplasma genitallum Streptococcus pyogenes Neisseria gonorrhoeae Staphylococcus aureus Neisseria mucosa - При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов и геномной ДНК человека, а также ДНК выявляемых вирусов с использованием набора перекрестных реакций выявлено не было. Версия 20.07.21 33 --- стр. 35 --- 9.4. Воспроизводимость и повторяемость измерения Воспроизводимость и повторяемость измерений с помощью набора оценивали путем тестирования разведений модельных образцов в трех диапазонах концентраций (см. таблицу 14 и 15). Модельные образцы были приготовлены разведением в ТЕ-буфере стандартных образцов предприятия, содержащих ДНК выявляемых вирусов. Каждый образец проходил все этапы исследования (экстракцию ДНК, амплификацию ДНК и детекцию результатов). Тестирование каждого разведения для оценки повторяемости проводилось в 48 повторах, для оценки водпроизводимости - в 96 повторах. Таблица 14 Повторяемость измерения Вирус Исходное значение концентрации, копий/мл Среднее измеренное значение Стандартное ВВЙШ)НП(ЗО), 1одю Коэффициент вариации (CV), % Epstein-Barr virus 1,0х10'*-3,0х10'’ 4,24 0,13 3.0 Human herpesvirus 6 4,22 0,15 3,6 Cytomegalovirus 4,27 0,14 3.4 Epstein-Barr virus 1,0x10^-3,0x10^ 5,24 0,14 2,6 Cytomegalovirus 5,23 0,14 2.7 Human herpesvirus 6 5,23 0,14 2.8 Epstein-Barr virus 1,0x10^-3,0x10® 6,22 0,15 2,4 Cytomegalovirus 6,25 0,14 2.3 Human herpesvirus 6 6,23 0,15 2,4 Воспроизводимость измерения Таблица 15 Вирус Исходное значение концентрации, 1(0№1Й/МЛ Среднее измеренное значение |нш 1ш нтпнк Стандартное щ^ВВВШие (SD), 1одю Коэффициент вариации (CV), % Epstein-Barr virus 1,0x10'’-3,0x10'' 4,27 0,15 3,61 Human herpesvirus 6 4,25 0,15 3,46 Cytomegalovirus 4,25 0,15 3.47 Epstein-Barr virus 1,0х10®-3,0х10® 5,24 0,15 2,79 Cytomegalovirus 5,27 0,13 2,54 Human herpesvirus 6 5,26 0,13 2,53 Epstein-Barr virus 1,0x10®-3,0x10® 6,28 0,16 2,62 Cytomegalovirus 6,24 0,16 2,58 Human herpesvirus 6 6,21 0,16 2,59 Версия 20.07.21 34 --- стр. 36 --- 9.5. Правильность измерения Правильность измерения с помощью набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» была определена путем тестирования стандартных образцов предприятия в 120 повторах (см. таблицу 16). Таблица 16 4 Правильность измерения Вирус Среднее значение измерения, 1одю Установленное ' значение , концентрации, iott« Систематическая погрешность (В) 1одю % Epstein-Barr virus 5,74 5,70 0,04 0,66 Cytomegalovirus 5,72 5,70 0,02 0,39 Human herpesvirus 6 5,74 5,70 0,04 0,62 9.6. Диагностическая специфичность и диагностическая чувствительность Для определения диагностической специфичности и диагностической чувствительности набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» были использованы образцы каждого вида биоматериала, предусмотренного назначением набора реагентов, в количестве, указанном в таблице 17. В качестве наборов сравнения, с помощью которых устанавливали наличие/отсутствие ДНК выявляемых вирусов, использовали следующие наборы: Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловируса (CMV) и вируса герпеса б типа (HHV6) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно- флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «АмплиСенс® EBV/CMV/HHV6- скрин-FL» по ТУ 9398-095-01897593-2012 (РУ № ФСР 2010/09502). - Набор реагентов для выявления ДНК цитомегаловируса человека (CMV) методом полимеразной цепной реакции ЦМВ-ГЕН по ТУ 9398-005-46482062-2008 (РУ № ФСР 2008/03945) - Набор реагентов для выявления ДНК вируса Эпштейна-Барр методом полимеразной цепной реакции (EBV) по ТУ 9398-021-46482062-2009 (РУ № ФСР 2010/06934). - Набор реагентов для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции (HHV6) по ТУ 9398-022-46482062-2009 (РУ № ФСР 2010/06932). В связи с отсутствием зарегистрированных в РФ наборов сравнения для образцов биоматериала: отделяемое слизистых оболочек прямой кишки, плазма крови и секрет предстательной железы, диагностические характеристики для данного биоматериала определяли с помощью модельных образцов, приготовленных с использованием 1 Международного стандарта ВОЗ по цитомегаловирусу человека, NIBSC code 09/162, 1 Международного стандарта ВОЗ по вирусу Эпштейна-Барра, NIBSC code: 09/260 и 1 Международного стандарта ВОЗ на вирус HHV-6B, NIBSC code: 15/266. Версия 20.07.21 35 --- стр. 37 --- Результаты тестирования образцов биологического материала с набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» Таблица 17 помощью ИсОЛМУ0МЫв Ы5»«»иы : ____________ Шия Тип Образцы EBWCMW HHV6 щтстштШтШт ЦМВ-ГЕН EBV HHV6 Цельная кровь 200 Положительных 100 100 - - - Отрицательных 100 100 - - - Плазма крови 60 Положительных 30 - - - - Отрицательных 30 - - - - Лейкоциты крови 60 Положительных 30 30 - - - Отрицательных 30 30 - Слюна 200 Положительных 100 100 - - - Отрицательных 100 100 - - - Отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта 200 Положительных 100 - 33 33 34 Отрицательных 100 - 33 33 34 Отделяемое слизистой 60 Положительных 30 - - - - оболочки прямой кишки Отрицательных 30 - - - - Отделяемое слизистой 60 Положительных 30 30 - - - оболочки ротоглотки Отрицательных 30 30 - - - Моча 200 Положительных 100 - 33 33 34 Отрицательных 100 - 33 33 34 Ликвор 200 Положительных 100 100 - - - Отрицательных 100 100 - - Секрет предстательной 60 Положительных 30 - - - - железы Отрицательных 30 - - - - Эякулят 60 Положительных 30 30 - - - Отрицательных 30 30 - - - Биоптаты внутренних 60 Положительны)^ 30 30 - - - органов Отрицательных 30 30 - - - Версия 20.07.21 36 --- стр. 38 --- Значения диагностической специфичности и диагностической чувствительности набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» с доверительной вероятностью 95 %, рассчитанные, исходя из полученных данных, приведены в таблице 18. Таблица 18 Диагностические характеристики набора реагентов «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» Тип образцов Диагностическая ........... Диагностическая Цельная кровь 100% (97,0%-100%) 100% (97,0%-100%) Плазма крови 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Лейкоциты крови 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Слюна 100% (97,0%-100%) 100% (97,0%-100%) Отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта 100% (97,0%-100%) 100% (97,0%-100%) Отделяемое слизистой оболочки прямой кишки 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Отделяемое слизистой оболочки ротоглотки 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Моча 100% (97,0%-100%) 100% (97,0%-100%) Ликвор 100% (97,0%-100%) 100% (97,0%-100%) Секрет предстательной железы 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Эякулят 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) Биоптаты внутренних органов 100% (90,5%-100%) 100% (90,5%-100%) 9.7. Оценка влияния интерферирующих веществ Влияние интерферирующих веществ, потенциально содержащихся или присутствующих в исследуемом биоматериале, на эффективность ПЦР при использовании набора реагентов «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» отсутствует. Не выявлено ингибирование реакции амплификации при добавлении к образцам биоматериала на этапе экстракции интерферирующих веществ, представленных в таблице 19, в максимально возможной концентрации для каждого вида биоматериала. Таблица 19 Интерферирующие вещества, использованные при тестировании набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» --------- ■ ■ и.. .< 1 I — Вид биоматериала . Интерферент Концентрация интерферента в образце цельная кровь гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл плазма крови гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл лактоферрин 0,1 мкг/100 мкл ацикловир 2,37 мкг/100 мкл гематин 1,52 мкг/100 мкл иммуноглобулин G 1,6 мг/100 мкл гликохолат натрия 11,1 нг/100 мкл Версия 20.07.21 37 --- стр. 39 --- Вид биоматериала Интерферент Концентрация интерферента в образце I натрий таурохолат гидрат 3,8 нг/100 мкл гликоген 12 мг/100 мкл лейкоциты крови гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл слюна муцин 0,23 мг/100 мкл гемоглобин ' 0,20 ммоль/100 мкп отделяемое слизистой оболочки ротоглотки муцин 0,23 мг/100 мкл гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл мирамистин 0,001 % действующего вещества в 100 мкп хлоргексидин 0,1 % в 100 мкп моча муцин 0,23 мг/100 мкл гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл мочевина 0,033 ммоль/100 мкл ликвор гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл секрет предстательной железы муцин 0,23 мг/100 мкл гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл мочевина 0,033 ммоль/100 мкл эякулят муцин 0,23 мг/100 мкл мирамистин 0,001 % действующего вещества в 100 мкл хлоргексидин 0,1 % в 100 мкл биоптаты внутренних органов гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл Ю.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 10.1. Срок годности Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После вскрытия реагенты использовать до истечения срока годности набора. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит. 10.2. Транспортирование Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Не допускается замораживание реагентов. Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 “С не более 3 суток. Набор, транспортированный с нарушением указанного температурного режима, применению не подлежит. 10.3. Хранение Набор хранить при температуре от 2 до 8 в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на Версия 20.07.21 38 --- стр. 40 --- этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Реакционная смесь, приготовленная из ПЦР-смеси EBV/CMV/HHV6 и ПЦР-буфера-Н, хранению не подлежит. Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не подлежит. Версия 20.07.21 39 --- стр. 41 --- 11.ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» направлять в адрес производителя ООО «НекстБио»: 111394, г. Москва, ул. Полимерная, 8 стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru. При выявлении нежелательных реакций при использовании набора, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при обращении и эксплуатации набора, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в Российской Федерации ~ Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. Консультацию по работе с набором, а также по вопросам, касающимся качества набора, можно получить по контактам, указанным на официальном сайте Производителя; www.nextbio.ru. Версия 20,07.21 40 --- стр. 42 --- 12.СИМВ0ЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ REF Номер по каталогу и А Изготовитель LOT Код партии г О Дата изготовления IVD V Медицинское изделие для диагностики in vitro Содержимого достаточно для проведения п- количества тестов I Использовать до Температурный диапазон as Обратитесь к инструкции по применению Ж Не допускать попадания солнечного света А Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению Версия 20.07.21 41