Набор реагентов «ДС-ИФА-RF-М». Тест-система иммуноферментная для качественного и количественного определения ревматоидного фактора класса М по ТУ 9398-101-05941003-2007 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 --- Обнаружение RF-M у новорожденных является дополнительным маркером внутриутробной инфекции. Также RF-M может являться причиной ложноположительных результатов в методах непрямого иммуноферментного анализа антител класса М. Кроме того, RF-M может обнаруживаться в сыворотке крови пациентов больных аутоиммунными и инфекционными заболеваниями (таблЛ). Таблица 1. Частота обнаружения RF-M при различных заболеваниях и у здоровых людей. Заболевания Ревматоидный артрит Частота выявления RF-M, % Ювенильный ревматоидный артрит Первичный билиарный цирроз Псориатическая артропатия Лимфопролиферативные опухоли Вирусный гепатит Грипп Системная красная волчанка Системная склеродермия Инфаркт миокарда Полимиозит Туберкулез Здоровые люди (моложе 70 лет) Количественное определение RF-M проводится: 1) при обследовании пациентов с подозрением на ревматоидный артрит; 2) для контроля лечения ревматоидного артрита. 1.3. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах в 48 пробах (40 неизвестных проб, одна проба контрольной сыворотки, шесть стандартных калибровочных проб и одна проба для определения оптической --- стр. 3 --- плотности ТМБ-Субстратного раствора) при одновременном использовании всех стрипов планшета. В случае дробного применения набора необходимо обязательное использование: при каждой постановке для качественного анализа - Калибратора О , Калибратора 2, Калибратора 5 и контроля ТМБ- Субстратного раствора; при каждой постановке для количественного анализа - всех стандартных калибровочных проб, контрольной сыворотки и контроля ТМБ-Субстратного раствора. 2. Характеристика набора 2.1. Принцип действия. Метод определения основан на «сэндвич» варианте двухстадийного иммуноферментного анализа, В лунках планшета полистиролового разборного сорбированы иммуноглобулины класса G кролика. При добавлении образца сыворотки происходит связывание RF класса М (RF-M) с Fc фрагментом IgG кролика. После отмывки иммуносорбента добавляются антитела козы против антител человека класса М, конъюгированные с пероксидазой хрена. Во время инкубации эти антитела связываются с RF-M, при наличии его в образце исследуемой сыворотки. После отмывки иммуносорбента определяется активность пероксидазы, связавшейся с антителами в лунках планшета. Количество связанного антителами конъюгата пропорционально количеству RF-M в образце сыворотки крови. Во время инкубации с ТМБ-Субстратным раствором происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски пропорциональна количеству связанного антителами конъюгата. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация RF-M в исследуемых образцах. 3 --- стр. 4 --- 2.2. Состав набора: - иммуносорбент - планшет полистироловый разборный (12 стрипов по 8 лунок каждый) с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок иммуноглобулинами класса G кролика, маркирован «Иммуносорбент» - 1 шт; - конъюгат - антитела козы против иммуноглобулинов класса М человека, конъюгированные с пероксидазой хрена; прозрачная или слегка опалесцирующая жёлтого цвета жидкость, допустимо образование аморфного осадка, при встряхивании распадающегося и приводящего к помутнению раствора; маркирован «Конъюгат» - 1 фл. (12,5 мл); - стандартные калибровочные пробы па основе сыворотки крови человека, содержащие ревматоидный фактор класса М в концентрациях, указанных на этикетках флаконов и в аналитическом паспорте качества; стандартная калибровочная проба №0 - прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная или светло-желтого цвета жидкость, стандартные калибровочные пробы №1 - №5 - прозрачные или слегка опалесцирующие малиново-красного или красно-оранжевого цвета разной интенсивности жидкости; маркированы: «Калибратор О » - 1 фл. (1,5 мл); «Калибратор Ь > - 1 фл. (1,5 мл); «Калибратор 2» -1 фл. (1,5 мл); «Калибратор 3» - 1 фл. (1,5 мл); «Калибратор 4» - 1 фл. (1,5 мл); «Калибратор 5» - 1 фл. (1,5 мл). - контрольная сыворотка с известным содержанием RF-M; прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная или светло-желтого цвета жидкость; значение концентрации ревматоидного фактора в сыворотке указано на этикетке флакона и в аналитическом паспорте качества, маркирована «Контрольная сыворотка» - 1 фл. (1,5 мл); - раствор для предварительного разведения сывороток; прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета; маркирован «РРС» - 1 фл. (12,5 мл); 4 --- стр. 5 --- € ^ - блок-раствор; прозрачная или слегка опалесцирующая розового цвета жидкость, допустимо образование аморфного осадка, при встряхивании распадающегося и приводящего к помутнению раствора; маркирован «БР» - 1 фл. (12,5 мл); - промывочный раствор, концентрат; прозрачная или слегка опалесцирующая, бесцветная или светло-жёлтого цвета жидкость, допустимо образование осадка, полностью растворяющегося при температуре от 35 до 39 °С и встряхивании; маркирован «ПР (концентрат х 25)» - 1 фл. (50,0 мл); - ТМБ-Субстратный раствор; прозрачная бесцветная жидкость; маркирован «ТМБ-Субстратный раствор» - 1 фл. (12,0 мл); - серная кислота в концентрации 0,2 моль/л; прозрачная бесцветная жидкость; маркирована «Стоп-реагент/0,2М» - I фл. (15,0 мл). - бланк для построения калибровочной кривой - 1 шт. - планшет для предварительного разведения сывороток - 1 шт. - инструкция по применению ~ 1 шт. Дополнительно в комплект поставки могут быть включены: -крышка к полистироловым 96-луночным планшетам; -одноразовые наконечники; -пластиковая ванночка для жидких реагентов; -пластиковая скрепка для закрывания пакета с иммуносорбентом. 3. Аналитические и диагностические характеристики набора 3.1. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация RP-M в сыворотке крови человека составляет не более 2 МЕ/мл 3.2. Коэффициент вариации результатов определения RF-M в одном и том же образце с использованием набора не превышает 8%. 3.3. Зависимость концентрации RF-M в образцах сывороток крови имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб № 2 - № 5. Значение «линейности» должно находиться в пределах от 90 до 110%. --- стр. 6 --- 3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» RF-M - соответствие измеренной концентрации RF-M предписанной в пробе, полученной путем смешивания равных объемов калибровочной пробы 10 МЕ/мл и контрольной сыворотки. Процент открытия составляет от 90 до 110%. 3.5. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора установить собственные значения нормального и патологического уровня RF. 4. Меры предосторожности 4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 2а. 4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 4.3. При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.). 4.4. Стоп-реагент представляет собой 0,2 М раствор серной кислоты. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случге. попадания раствора стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной воды. 4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы и производные крови человека являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусных инфекций. 4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. 6 --- стр. 7 --- 4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с наборами. 5. Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором: спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - вошер или устройство для промывания планшетов; - термостат для инкубации при температуре (37,0 ± 0,5) °С; - пипетки полуавтоматические одноканальные с изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 1000- 5000 мкл с наконечниками; пипетка полуавтоматическая восьмиканальная, позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл, с наконечниками; - цилиндр мерный, позволяющий отмерять 200 мл, 500 мл; •- стакан стеклянный вместимостью 500 мл; •- вода дистиллированная; •- бумага фильтровальная лабораторная; •- перчатки резиновые или пластиковые. 6. Анализируемые образцы сывороток крови человека Для исключения ложных результатов нельзя подвергать исследуемые образцы термоинактивированию, необходимо отбирать и хранить их в условиях, предотвращающих бактериальный рост. Каждый образец исследуемой сыворотки следует отбирать новым наконечником! Отобранные образцы хранить при температуре от 2 до 8 °С не более 3-х суток. Более длительное хранение допустимо при температуре не выше минус 20 °С (образцы могут подвергаться замораживанию и оттаиванию не более 1 раза). Нельзя использовать образцы с бактериальным ростом, выраженным гемолизом и гиперлипидемией. Образцы сыворотки крови, содержащие агрегаты или осадок, необходимо осветлять центрифугированием при 1000- 2000 об/мин в течение 15 мин при температуре от 4 до 8 °С. 7 --- стр. 9 --- 7.10. Стоп-реагент - готов к применению. 8. Проведение анализа 8.1. По истечении указанного времени содержимое лунок удалить с помощью вошера (или многоканальной пипетки) в ёмкость для сбора инфицированного материала, иммуносорбент промыть 2 раза рабочим ПР, заливая его до краев лунок (не менее 380 мкл в лунку) и удаляя промывочный раствор с помощью вошера (или многоканальной пипетки) в ёмкость для сбора инфицированного материала. По окончании промывки тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. Не допускать остатка жидкости в лунках планшета. 8.2. Исследуемые сыворотки развести в 10 раз раствором для предварительного разведения сывороток (РРС). Для этого внести в лунки вспомогательного планшета 90 мкл раствора, добавить 10 мкл сыворотки. Содержимое лунок тщательно перемешать осторожным пипетированием, при этом фиолетово-синий цвет должен измениться на голубовато-зеленый. 8.3. Постановка качественного анализа. Стандартные калибровочные пробы рекомендуется вносить по следующей схеме: в лунки иммуносорбента А1, А2 дозатором пипеточным внести по 100 мкл «Калибратора О », в лунки В1, В2 - по 100 мкл «Калибратора 2» и в лунки С1, С2 - по 100 мкл «Калибратора 5», лунки D-1, D-2 “ оставить для измерения оптической плотности ТМБ-Субстратного раствора. Постановка количественного анализа. Стандартные калибровочные пробы и контрольную сыворотку рекомендуется вносить по следующей схеме: в лунки иммуносорбента А-1, А-2 дозатором пипеточным внести по 100 мкл «Калибратора О », в лунки В-1, В-2 - по 100 мкл «Калибратора 1», в лунки С-1, С-2 - по 100 мкл «Калибратора 2», в лунки D-1, D-2 - по 100 мкл «Калибратора 3», в лунки Е- 1, Е-2 - по 100 мкл «Калибратора 4», в лунки F-1, F-2 - по 100 мкл 9 --- стр. 10 --- «Калибратора 5», в лунки G1 и G2 - по 100 мкл контрольной сыворотки. Лунки Ш и Н2 оставить для измерения оптической плотности ТМБ- Субстратного раствора. В остальные лунки в двух повторах внести по 90 мкл БР и по 10 мкл предварительно разведенных (1:10) образцов исследуемых сывороток, (конечное разведение сывороток в лунках - 1:100). Содержимое лунок тщательно перемешать осторожным пипетированием. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин при температуре (37,0±0,5) °С. Внимание! Время внесения образцов не должно превышать 10 минут! 8.4. Содержимое лунок удалить в ёмкость для сбора инфицированного материала и планшет промыть 4 раза рабочим ПР, как в п, 8.1. 8.5. Во все лунки планшета, кроме лунок D-1 и D-2 (или Н1 и Н2), внести по 100 мкл конъюгата. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин при температуре (37,0±0,5) °С, 8.6. Содержимое лунок удалить в ёмкость для сбора инфицированного материала и планшет промыть 4 раза рабочим ПР, как в п. 8.1. 8.7. ТМБ-Субстратный раствор внести по 100 мкл раствора во все лунки отмытого планшета, планшет выдержать 20 мин в защищённом от света месте при температуре от 18 до 24 °С. 8.8. Реакцию остановить добавлением во все лунки стрипов по 150 мкл стоп-реагента, и провести учет результатов. Время между остановкой реакции и измерением ОП не должно превышать 20 мин. 9. Регистрация результатов Регистрацию результатов проводить спектрофотометрически при двух длинах волн: 450 /620-680 нм с настройкой прибора по «воздуху». Допустим учет результатов при одной длине волны 450 нм. 10. Учет результатов 10.1. Учет результатов 10 --- стр. 11 --- Q 11 Реакцию учитывать, если среднее значение оптической плотности (ОП) в лунках с Калибратором 5 - не менее 1,3, среднее значение ОП ТМБ- Субстратного раствора не должно превышать 0,1. 10.2. Интерпретация результатов. 1) При качественном анализе: положительным считать образец со значением ОП, равным или превышающим среднее значение ОП калибратора 2. Отрицательным считать образец со значением ОП менее среднего значения ОП калибратора 2. Содержание RF-M в образце сыворотки (МЕ/мл) 1 нормальный уровень менее 20 1 повышенный уровень 20 и более Положительный результат должен быть подтвержден клиническим статусом пациента. 2) При количественном анализе - необходимо построить калибровочный график по средним величинам ОП «Калибратора О » ; «Калибратора 1»; «Калибратора 2»; «Калибратора 3»; «Калибратора 4»; «Калибратора 5». На бланке для построения калибровочной кривой по оси ординат Y откладывают средние значения ОП стандартных калибровочных проб, по оси абсцисс X откладывают соответствующие значения концентрации антител, выраженной в МЕ/мл. По полученным точкам строят калибровочн}то кривую. Для образцов со значением ОП, превышающим среднее значение ОП «Калибратора 2» определяют концентрацию антител RF-M по калибровочному графику. Контрольная сыворотка служит для проверки точности и достоверности результатов. Полученные величины концентраций RF-M в образцах считать достоверными, если вычисленное по калибровочному графику значение концентрации RF-M в контрольном образце попадает в пределы, указанные на этикетке флакона.