Набор реагентов «МилаБлот-ВИЧ» Тест-система иммуноферментная для выявления антител к индивидуальным белкам вируса иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) методом линейного иммуноблота, набор диагностический по ТУ 9398-229-05941003-2014 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ВЕР Соек: 1.0.ШТ «УТВЕРЖДАЮ» НОВО ^>90 * ,Р«ЬЛУИ У Заместитель генерального директора ООО «Научио-проитивдственное объеди 1НЛше^<Ди^ностические системы» О.Н. Шлюидин 2015 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов «МилаБлот-ВИЧ» Тест-система иммуноферментная для выявления антител к индивидуальным белкам вируса иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) методом линейного иммуноблота, набор диагностический --- стр. 2 --- Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» СОДЕРЖАНИЕ I. НАЗНАЧЕНИЕ...............................................................................................................................................................3 II. ПРИНЦИП МЕТОДА........................................................................................................,...........................................3 III. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «МилаБлот-ВИЧ»..................................................................................................3 IV. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ................................................................................................................. 4 V. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ..................................................................................................................................5 VI. УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ............................................................................................................................6 VII. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ.6 VIII. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ........................................................................................................................6 IX. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ.......................................................................................................................................6 X. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА............................................................................................................................................7 XI. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ...................................................................................................................................................8 XII. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА..............................................................................................................................................10 XIII. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ.........................................................10 XIV. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА........................................................................................................................10 XV. ОБЪЯСНЕНИЕ СИМВОЛОВ.....................................................................................................................................11 Приложение 1.......................................................................................................................................................................12 2 --- стр. 3 --- Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» <Алр реагентов выпускается в 3 комплектах: комплект 1 рассчитан на проведение 18 определений, включая контрольные, предназначен для ручной и автоматической постановки с возможностью дробного (3x6) использования набора. Комплект 2 рассчитан на проведение 24 определений, включая контрольные, предназначен для I ручной и автоматической постановки с возможностью дробного (Зх8) использования набора. Комплект 3 рассчитан на проведение 36 определений, включая контрольные, предназначен для ручной и автоматической постановки с возможностью дробного (3х 12) использования набора. Все комплекты набора реагентов эквивалентны по назначению, свойствам и функциональным характеристикам (аналитическая и диагностическая чувствительность и специфичность)._____________________________________ I. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «МилаБлот-ВИЧ» предназначен для выявления антител к индивидуальным белкам ВИЧ 1 и 2 типов в сыворотке или плазме крови человека методом иммунного блоттинга (линейный иммуноблот) с целью подтверждения положительного результата на наличие анти-ВИЧ антител и определения профиля антител при диагностике ВИЧ/СПИД. Клиническое назначение. Основным методом выявления ВИЧ-инфекции является тестирование с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Для подтверждения положительных результатов ИФА используют метод иммунного блоттинга. Этот метод позволяет выявить антитела к ВИЧ-1 или к ВИЧ-2 в исследуемом образце сыворотки (плазмы) крови человека за счёт взаимодействия с антигенами ВИЧ 1 типа (етЧ: §р160, §р 120: §р41; ^р41 гр.О; ро1: рЗ 1, р66/р51; 24, 17), или ВИЧ 2 типа (епу2: §р36, §р105), нанесенными на тест- стрип, и таким образом подтвердить серопозитивность образца или выявить возможные неспецифические реакции. Набор «МилаБлот-ВИЧ» содержит все необходимые реагенты для подтверждения положительных результатов ИФА и определения профиля антител к антигенам ВИЧ методом иммуного блоттинга. II. ПРИНЦИП МЕТОДА В основе теста лежит метод непрямого иммуноферментного анализа. На тест-стрип нанесены в виде отдельных линий рекомбинантные белки, содержащие антигенные детерминанты ВИЧ-1 и ВИЧ-2. На каждый тест-стрип также нанесены 4 контрольные линии: • 1 - си! оД; • 2 - контроль внесения конъюгата; • 3 - контроль внесения образца; • 4 - контроль специфичности. Контрольные линии располагаются в нижней части тест-стрипа. Методика включает следующие этапы: 1. Инкубация тест-стрипа с тестируемыми или контрольными образцами. Если в образце содержатся антитела к ВИЧ, они будут связываться с антигенами на тест-стрипе. 2. Инкубация тест-стрипа с конъюгатом. Конъюгат взаимодействует с комплексом ВИЧ- антиген/антитело, который сформировался на тест-стрипе на первой стадии. 3. При инкубации с хромоген-субстратным раствором на контрольных линиях и на тех линиях, где присутствует комплекс со специфическими антителами ВИЧ, наблюдается окрашивание. Для остановки реакции тсст-стрипы промываются дистиллированной водой. 4. В случае если тестируемый образец не содержит антител к ВИЧ, наблюдается связывание только с контрольными линиями 1, 2, 3 (си! оД, контроль внесения конъюгата и сыворотки) на тест- стрипе. Контроль специфичности реакции (линия 4) должен быть отрицательным во всех случаях. III. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «МилаБлот-ВИЧ» 3.1. Состав набора: Таблица 1 Характеристики реагентов Форма выпуска Комплект 1 Комплект 2 Комплект 3 Иммуносорбент Промаркированные тест-стрипы с нанесенными рекомбинант ными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и контрольными линиями, упакованы в контейнер с силикагелем. 1 контейнер 18 стрипов 1 контейнер 24 стрипа 1 контейнер 36 стрипов К+ Контрольный положительный образец, инактивированный. Прозрачная или слегка опалесцирующая красного цвета жидкость. 1 флакон 0,3 мл 1 флакон 0,3 мл 1 флакон 0,3 мл --- стр. 4 --- Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» Контрольный отрицательный образец, инактивированный. Прозрачная или слегка опалесцирующая зеленого цвета жидкость. 1 флакон 0,3 мл 1 флакон 0,3 мл 1 флакон 0,3 мл I Реагент 1 Буферный раствор для разведения образцов и приготовления промывочного раствора (ПР), содержит детергент, стабилизаторы белков. 11розрачная или слегка опалесцирующая бесцветная или светло-жёлтого цвета жидкость. 1 флакон 120,0 мл 2 флакона по 120,0 мл 2 флакона по 120,0 мл Реагент 2 Конъюгат (анти-Ьшпап антитела, меченые пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Прозрачная или слегка опалесцирующая от оранжевого до красного цвета жидкость. 1 флакон 25.0 мл или 1 флакон 50.0 мл 2 флакона по 25,0 мл или 1 флакон 50,0 мл 2 флакона по 25,0 мл или 1 флакон 50,0 мл Реагент 3 Субстратный раствор, содержащий ГМ В (3,3 ’,5,5 ’ -тетраметил бензидин) или ВС1Р/1ЧВТ(5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат/нитротетразол голубой). 11розрачная или слегка опалесцирующая бесцветная жидкость, допускается жёлто-зелёный оттенок. 1 флакон 25.0 мл или 1 флакон 50.0 мл 2 флакона по 25,0 мл или 1 флакон 50,0 мл 2 флакона по 25,0 мл или 1 флакон 50,0 мл Объемы реагентов указаны на этикетках флаконов. Набор комплектуется готовыми реагентами или концентрированными растворами. Имеется маркировка посредством штрих-кодов. Реагенты помещают в коробку картонную или пакет полиэтиленовый, куда вкладывают инструкцию по применению. 3.2. Принадлежности. Трафарет-схема (для идентификации окрашенных линий на тест-стрипах после проведения анализа), форма для учета результатов, лотки для инкубации тест-стрипов, защитная пленка к лоткам, пинцет пластиковый. Принадлежности могут быть дополнительно включены в комплект поставки. IV. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Диагностическая чувствительность набора реагентов «МилаБлот-ВИЧ» оценивалась при тестировании: • Образцов сыворотки крови от 200 пациентов, инфицированных ВИЧ-1 - все образцы выявлены как ВИЧ-1 положительные. • Образцов плазмы крови от 7 пациентов, инфицированных ВИЧ-2 - все образцы выявлены как ВИЧ-2 положительные. • Образцов плазмы крови от 3 пациентов, инфицированных ВИЧ-1 группы О - все образцы выявлены как ВИЧ-1 положительные. Чувствительность при тестировании ВИЧ позитивных образцов составила 100% (210 положительных результатов из 210 положительных образцов). Границы доверительного интервала (С1) при доверительной вероятности 95%: от 98.2% до 100%. Ложноотрицательных результатов 0% (0 отрицательных результатов из 210 позитивных образцов). Диагностическая чувствительность набора также оценена на 10 коммерческих сероконверсионных панелях (2ер1оМе1пх, ВВ1, США). Результаты представлены в таблице 2: Таблица 2 Диагностическая чувствительность набора реагентов «МилаБлот-ВИЧ» _________при исследовании сероконверсионных панелей___________________________ Панель Количество позитивных результатов по сравнению с количеством протестированных образцов «МилаБлот-ВИЧ» Тест сравнения 2МС Н1У9014 5/7 5/7 2МС Н1У9017 2/6 1/6 2МС Н1У9032 6/14 5/14 2МС Н1У6247 0/10 0/10 2МС Н1У9018 1/11 0/11 2МС Н1У6243 1/10 0/10 РКВ Н1У926 2/6 2/6 РКВ Н1У940 5/8 5/8 РКВ Н1У965 1/6 1/6 РКВ Н1У966 1/10 0/10 Итого 24/88 19/88 л --- стр. 5 --- Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» Ъфичность Оценка специфичности проведена на случайной выборке образцов сыворотки крови доноров, оеременных и соматических больных в количестве 288 образцов - все образцы выявлены как отрицательные. Специфичность при тестировании случайной выборки образцов сыворотки крови доноров, беременных и соматических больных составила 100% (288 отрицательных результатов из 288 отрицательных образцов) (95% С1: 98.68% до 100%.). Ложноположительных результатов 0% (0 положительных результатов из 288 отрицательных образцов). При тестировании стандартной панели сывороток «Стандарт ВИЧ-1,2 АТ(-), ВИЧ-1 АГ р24(-)», НПО «Диагностические системы», представляющего собой набор сывороток крови человека, не содержащих антитела к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген р24 ВИЧ-1, - все образцы выявлены как отрицательные. Дополнительными исследованиями коллекции положительных (п=25) и отрицательных (п=25) парных образцов сыворотки и плазмы была показана их эквивалентность, что позволяет отнести показатели диагностической чувствительности и специфичности к обоим видам исследуемых проб. V. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 5.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ Министерства здравоохранения РФ № 4Н от 06 июня 2012 г.). 5.2. Набор предназначен для профессионального использования в клинической лабораторной диагностике. 5.3. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению набора реагентов. 5.4. Достоверность результатов зависит от правильного выполнения правил лабораторной практики. Правила лабораторной практики и меры предосторожности, которые необходимо соблюдать при работе с набором представлены в таблице 3. Таблица 3 А • Постановку теста следует проводить в помещении с комнатной температурой, не превышающей установленные нормы в соответствии с существующими нормативными документами. • Не изменять процедуру и протоколы проведения анализа. • Не использовать реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке. • Нельзя использовать реагенты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов. • Не проводить ферментную реакцию в присутствии реактивных паров (кислота, щелочь, альдегиды) или пыли которые могут повлиять на активность Реагента 2. • Ферментная реакция особо чувствительна к ионам металлов. Нельзя допускать контакта металлических предметов с растворами Реагентов 2 и 3. • Тщательно промывать лабораторную посуду. • Рабочие растворы готовить осторожно, исключая какое-либо загрязнение. • Не использовать одну и ту же емкость для работы с разными Реагентами. • Нельзя допускать высыхания тест-стрипов в промежутках между отдельными операциями. • Убедитесь, что тест-стрип помещается в ячейку лотка всегда маркировкой вверх (при этом на тест-стрипе должен быть ясно виден номер). • В каждом исследовании обязательна пост ановка тест-стрипов с контрольными образцами. • Убедитесь в том, что для проведения анализа был выбран нужный объем образцов и протокол проведения анализа. • Все манипуляции с тест-стрипом проводить при помощи пинцета. • Не использовать тест-стрипы и лотки повторно. • Разрезание тест-стрипов может привести к недостоверным результатам. • Накрывать лотки специальной плёнкой во избежание высыхания образцов. • Промывка тест-стрипов - важный этап в данной процедуре: необходимо соблюдать рекомендованное количество циклов, не допускать остатка жидкости в ячейках лотка перед внесением следующего реагента Неправильно проведенный этап промывки может привести к неточным результатам. • Использовать валидированные дозаторы и оборудование, новые наконечники для каждого образца. • Предпочтительно использование материалов одноразового использования. • Не подвергать реагенты воздействию высокой температуры или прямого солнечного света во время инкубации и хранения. • Тест-стрипы (как проявленные, так и неиспользованные) хранить вдали от источников яркого свеч а и тепла. • Все 'этапы инкубации проводить при помощи шейкера, если не указано дополнительно (см. п.ГХ. Проведение анализа). О • Не пипетировать ртом. • Промывать руки после работы с набором реагентов и исследуемыми образцами. • В помещении с иммунодиагностическими материалами нельзя употреблять пищу, пить, курить, применять косметику. © О • При работе с набором реагентов и исследуемыми образцами использовать спецодежду и одноразовые перчатки. & • Сыворотки (плазмы) крови человека, используемые при приготовлении К-, не содержат НВзА§, антиген р24 ВИЧ-1 и антитела к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С. --- стр. 6 --- Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» к ^Необходимо избегать расплескивания образцов или растворов, содержащих образцы. При расплескивании немедленно дезинфицировать поверхность раствором хлорсодержащего дез. средства, согласно инструкции по применению. • Отходы, содержащие биологические образцы, нужно нейтрализовать до сброса в канализацию. Все использованные материалы дезинфицировать в соответствие с требованиями СП 1.3.2322-08 и МУ 187- 113. _____________ • Сыворотки (плазмы) крови человека, используемые при приготовлении К+, не содержат НВзА§ и антитела к вирусу гепатита С. • При работе с реагентами набора «МилаБлот-ВИЧ», исследуемыми образцами и оборудованием нужно обращаться как с потенциально опасными материалами, т.к. ни один известный метод тестирования не может гарантировать отсутствие инфекционных агентов. • Необходимо избегать контакта Реагента 3 с кожей и слизистыми. VI. УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ При утилизации и уничтожении все реагенты и материалы, являющиеся отходами, должны быть обработаны в соответствии с действующими нормативами (СанПиН 2.1.7.2790-10, СП 1.3.2322-08, МУ-287-113). VII. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ • Вода дистиллированная или деионизированная; • Дозаторы пипеточные переменного объема для отбора жидкостей; • Наконечники одноразовые для дозаторов пипеточных; • Флаконы для приготовления промывочного раствора; • Бумага фильтровальная лабораторная; • Лабораторное перемешивающее устройство шейкер, обеспечивающее медленное горизонтальное, горизонтально-вертикальное (10-15 колебаний в минуту (2-10 градусов)) или орбитальное (150-300 грт) покачивание платформы или прибор для автоматической постановки иммуноблота типа «Автоблот 3000»; VIII. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ Сбор образцов крови должен производиться в соответствии с надлежащей практикой методом венопункции (ГОСТ Р 53079.4-2008 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований»). Для анализа использовать неразведенную сыворотку или плазму. Образцы, содержащие видимые частицы, следует осветлить центрифугированием, т.к. частицы фибрина и агрегаты могут привести к ложнопозитивным результатам. Образцы можно хранить в соответствии с требованиями существующих нормативных документов. Во избежание осаждения фибрина плазму следует быстро размораживать в течение нескольких минут при температуре (39,0 ± 1,0) °С на водяной бане. Не рекомендуется использовать сыворотку (плазму), замороженную и размороженную более 3-х раз. Не рекомендуется использовать сыворотку (плазму) загрязненную или с гемолизом^ или гиперлипидемией, так как это может привести к некорректным результатам. IX. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ 1. Реагенты, готовые к применению: • Иммуносорбент. Тест-стрипы упакованы в контейнер с силикагелем. Вскрыть контейнер и отобрать необходимое количество тест-стрипов. • К+, К-, Реагент 1, Реагент 2, Реагент 3. 2. Реагенты, требующие предварительного приготовления: • Промывочный раствор (ПР) - готовится из Реагента 1. Содержимое флакона с Реагентом 1 тщательно перемешать. Для приготовления промывочного раствора необходимый объем Реагента 1 развести соответствующим объёмом воды дистиллированной или деионизированной (см. табл. 4). Полученный раствор тщательно перемешать. Расход реагентов набора при ручной постановке Количество используемых стрипов 3 6 9 12 15 18 24 36 11Р Реагент 1,мл 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 90,0 120,0 Вода, мл 40,0 80,0 120,0 160,0 200.0 240,0 360,0 480,0 Реагент 1, мл 6,0 12,0 18,0 24,0 30,0 36,0 48,0 72,0 Реагент 2, мл 3.0 6,0 9,0 12,0 15,0 18,0 24,0 36.0 Реагент 3, мл 3,0 6,0 9,0 12,0 15,0 18,0 24,0 36,0 Таблица 4 6 --- стр. 7 --- ^'ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Перед использованием набор выдержать не менее 30 мин при комнатной температуре. Реагент 2 тщательно перемешать, не допуская вспенивания. Внимание! • Возможны два протокола проведения анализа в зависимости от времени инкубации с образцом (протокол 1 - 2 ч, протокол 2 - 16-18 ч). • Положительный и отрицательный контрольный образцы необходимы в каждой постановке, независимо от количества анализируемых образцов. При постановке теста: • Тщательно приклеивайте пленку к лотку, чтобы избежать перетекания жидкости из одной лунки в другую во время инкубации. • Аккуратно устанавливайте лоток на шейкер, чтобы не допустить смачивания пленки. • Во время инкубационных этапов и этапов отмывки тест-стрип должен быть полностью погружён в жидкость маркировкой вверх. • Шейкер должен перемешивать содержимое ячейки таким образом, чтобы жидкость омывала тест- стрип, но не переливалась через края ячейки. • Плёнку с лотка после окончания инкубации поместите в ёмкость для дезинфекции. Тщательно удалите жидкость из каждой ячейки при помощи вакуумного аспиратора или автоматической пипетки. • Используйте новый наконечник для каждой ячейки. • Не нарушайте целостность тест-стрипов при аспирации жидкости. Промывка • Избегайте перетекания жидкости из одной лунки в другую во время этапов отмывки. • Следите, чтобы тест-стрип был полностью погружён в промывочный раствор; не позволяйте тест- стрипам высыхать между этапами процедуры отмывки. • Тщательно удаляйте жидкость из каждой ячейки лотка при помощи вакуумного аспиратора или автоматической пипетки. • Используйте новый наконечник для каждой ячейки. Инструкция но применению «МилаБлот-ВИЧ» Этап Протокол 1 Протокол 2 1 Внесите но 2 мл Реагента 1 в каждую ячейку лотка. 2 С помощью пинцета в каждую ячейку аккуратно маркировкой вверх поместите по 1 тест-стрипу, полностью погружая его в жидкость. 3 Проинкубируйте тест-стрипы на шейкере в течение 5 мин при температуре от 18 до 30 °С. 4 Внесите по 20 мкл исследуемого образца сыворотки (плазмы) или контрольных (К+, К-) образцов в соответствующие ячейки лотка Внесите по 10 мкл исследуемого образца сыворотки (плазмы) или контрольных (К+, К-) образцов в соответствующие ячейки лотка 5 Заклейте лоток плёнкой и инкубируйте образцы в течение 2 часов при температуре от 18 до 30 °С на шейкере. Заклейте лоток плёнкой и инкубируйте образцы в течение 16-18 часов при температуре от 18 до 30°С на шейкере. 6 Осторожно снимите плёнку с лотка после окончания инкубации. Тщательно удалите жидкость из каждой ячейки при помощи вакуумного аспиратора или пипеточного дозатора. Не нарушайте целостность тест-стрипов при аспирации жидкости. Используйте новый наконечник для каждой ячейки. 7 1 [ромойте каждый тест-стрип 2 мл Г1Р 3 раза. 11ри первой промывке раствор удалите сразу же после внесения. При второй и третьей промывках выдерживайте тест-стрипы в растворе 5 минут на шейкере. Тщательно удалите жидкость из каждой ячейки при помощи вакуумного аспиратора или пипеточного дозатора. Не нарушайте целостность тест-стрипов при аспирации жидкости. Используйте новый наконечник для каждой ячейки. 8 Внесите по 1 мл Реагента 2 в каждую ячейку лотка, закройте лоток новой плёнкой. 9 Инкубируйте в течение 1 часа при температуре от 18 до 30 °С на шейкере. 10 По истечении указанного времени содержимое ячеек удалите в емкость для сбора инфицированного материала (аккуратно, с помощью вакуумного аспиратора или пипеточного дозатора) и промойте каждый тест-стрип 2 мл ПР 3 раза. При первой промывке раствор удалите сразу же после внесения. При второй и третьей промывках выдерживайте тест-стрипы в растворе 10 минут на шейкере. Тщательно удалите жидкость из каждой ячейки лотка при помощи вакуумного аспиратора или пипеточного дозатора. Используйте новый наконечник для каждой ячейки. 7 --- стр. 8 --- Инструкции но применению «МилаБлот-ВИЧ» кЧромойте каждый тест-стрип 5 мл дистиллированной или деионизированной воды 2 раза без инкубации. Внесите по 1 мл Реагента 3 в каждую ячейку. /13 Инкубируйте 10 мин при температуре от 18 до 30 °С на шейкере. 14 Удалите жидкость из ячеек и промойте тест-стрипы 2 мл дистиллированной или деионизированной воды 3 раза. При первой промывке воду удалите сразу же после внесения. При второй и третьей промывках выдерживайте тест-стрипы в воде 5 минут на шейкере.___________________ 15 Удалите жидкость из ячеек, выньте тест-стрипы пинцетом и положите их маркировкой вверх на фильтровальную бумагу. Сушите тест-стрипы в защищённом от света месте не менее 15 мину т. 16 После высыхания тест-стрипов закрепите их в форме для учета результатов анализа. Используя трафарет- схему расположения полос, соответствующих определенным белкам ВИЧ-1,2, проведите учёт полученных результатов сразу после высыхания тест-стрипов. ____________________________________________________ Схема проведения анализа приведена в Приложении. XI. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Внимание! Учёт результатов проводигся сразу после полного высыхания тест-стрипов. Учет результатов проводится визуально 11.1. Расположение и идентификации антигенов и конт рольных линий на тест-стрипе. Антигенные и контрольные линии расположены на тест-стрипе в следующем порядке: - идентификационный номер; антигенные линии: ВИЧ-1: §р 160 - епу1 §р 120 - епу! §р 41 - епу1 р51 /66 - ро1 р 31 - ро! р24 - еа& р17-§а§ ВИЧ-1 группа О: • §р 41 - епу! Г ВИЧ-1 < ВИЧ-2: §р 36 - еиу2 §р 105 - еву2 контрольные линии: • 1 - си! оГГ; • 2 - контроль внесения конъюгата; • 3 - контроль внесения образца; • 4 - контроль специфичности. ВИЧ-1 группа О ВИЧ-2 Контрольные линии -<, врш ёр!20 ер 41 р51/66 р31 еаем еагп 8р41грО 8р36 ер 105 сиС оГГ Контроль внесения конъюгата Контроль внесения образна — Контроль специфичности 11.2. Критерии качества проведения анализа: На всех тест-стрипах должны присутствовать контрольные полосы 1, 2, 3: интенсивность окрашивания контрольной линии 1 (си! ой) должна быть меньше интенсивности окрашивания контрольных линий 2 и 3, которые должны быть чётко видимыми. Отсутствие данных контрольных полос указывает на ошибку при проведении анализа. В таком случае тестируемые образцы не могут быть оценены и необходимо проведение повторного анализа на новом тест-стрипе. Контрольная линия 4 (контроль специфичности) должна отсутствовать или допускается интенсивность окраски контрольной линии 4 меньше си! о1Т. Положительный контроль: на тест-стрипе с положительным контрольным образцом присутствуют полосы антигенных линий ВИЧ-1 (§р160, §р120, §р41, р51 /66, рЗ 1, §а§24, §а§17, §р4! группы О) и ВИЧ-2 (§р36, ёрЮ5) и контрольные полосы 1, 2, 3. Окрашивание линий §а§17 и црЮ5 может отсутствовать или соответствовать но интенсивности контрольной линии 1 (си! оГГ). Отрицательный контроль: на тест-стрипе с отрицательным контрольным образцом полосы, соответствующие вирусным белкам, отсутствуют, присутствуют только полосы внутреннего контроля (1, 2 и 3). я --- стр. 9 --- ч .3. Интерпретация результатов: Интенсивность окрашивания линий на тест-стрипе оценивается визуально для каждого исследуемого образца отдельно по сравнению с интенсивностью окрашивания контрольной линии си* о ГГ. Для облегчения оценки результата прилагается трафарет-схема и специальная форма для учета результатов. Закрепите проявленные тест-стрипы в форме для учёта результатов таким образом, чтобы контрольная линия 3 совпала с линией на форме для учёта результатов. При интерпретации результатов учитывается полоса, соответствующая антигену ВИЧ, если интенсивность ее окрашивания равна или выше интенсивности окрашивания полосы си! о ГГ. Интерпретация результатов проводится по таблице 5. Инструкция по применению «МилаБлот-ВИЧ» Таблица 5 Интерпретация результатов Нет линий с интенсивностью выше Си1 оГГ отрицательный 1 л и н и я с интенсивностью выше Си1 оГГ любая другая линия неопределенный 2 линии с интенсивностью выше СиГ оГГ нет епу 1 епу1 + или ро1 2 епу1 1 епу2 + да § или ро1 2 епу2 любая другая комбинация неопределенный ВИЧ-1 ВИЧ-1 ВИЧ-2 ВИЧ-2 неопределенный 3 и более л и н и й с интенсивностью выше Си1 оГГ нет епу 1 с п у 1 + §а§ + ро1 2 (и более) епу1 + §а§ или ро1 1 епу2 + §а§ + ро1 2 епу2 + или ро1 Более 2 епу1 1 епу1 + 1 епу2 2 епу1+2 епу2 1 (или более) епу! + 1 (или более) епу2 + §а§ или ро1 1 (или более) с п у ! + 1 (или более) епу2 + дад + ро1 неопределенный ВИЧ-1 ВИЧ-1 ВИЧ-2 ВИЧ-2 ВИЧ-1 ВИЧ* ВИЧ* ВИЧ* ВИЧ* *- В случае если интенсивность окрашивания полос епу2 выше интенсивности полос епу1, образец определяется как ВИЧ-2 положительный. 11.4. Примечания: • Если все антигенные линии тест-стрипа имеют интенсивность на уровне сШ оГГ, результаты постановки не могут учитываться. Исследование тестируемого образца повторите. • При получении неопределенного результата рекомендуется повторить анализ образца по протоколу 2, а также провести повторный забор крови через 3-4 недели и новое исследование на появление антител к антигенам ВИЧ-1 и ВИЧ-2. • неопределённые результаты могут проявляться в случае сероконверсии или перекрёстной реакции с другими ретровирусами. • контаминация исследуемого образца другой положительной сывороткой может привести к положительному или неопределённому результату. Пример существующих в настоящее время критериев позитивности в вестерн-блоге: Таблица 6 \УНО Две полосы ЕМУ с или без ОАО или РОЬ СЯ88, Рап Атепсап НеаЙЬ Оп>аш2аПоп Одна полоса р24 или рЗ 1 и одна полоса ЕЫУ СОС/АБТРНЬИ Комбинация из двух полос : §р41 или §р 120/др 160 или р24 БУУ Одна полоса ЕЧУ и по крайней мере одна полоса ОАО или РОЬ, (см. так же ЭШ 58 969, часть 41) РБА Полосы р24 и рЗ 1 и одна из полос: §р41 или §р120/§р160 8РТ8 Ргапсе Две полосы ЕМУ (§р 160 и §р120) с ОАО или РОЬ - (позитивный) Епу (§р160) и САО(р24) - (возможно позитивный) Только две ЕМУ полосы (§р 160 апё §р120) - (возможно позитивный) Американский красный крест (США) По одной полосе ОАО, РОЬ и ЕЧУ Институт Пауля Эрлиха (Германия) Две полосы, одна должна быть ЕМУ о