Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома (COVID-19) методом полимеразной цепной реакции "АмплиТест SARS-CoV-2" — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
СОГЛАСОВАНО
Заместитель генерального
директора по научно-
производственной деятельности
Федерального государственного
бюджетного учреждения «Центр
стратегического планирования и
управления медико-биологическими
риска^рпи^р^р^вью» Федерального
о л л . некого агентства
России)
ГА. Шилулин
2021 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 6
«Положительный контрольный образец, содержащий
фрагмент РНК 2019-nCoV»
(СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV)
i j
ФГБУ «ЦеП» ФМБА России,
119121, Российская Федерация,
город Москва, Погодинская улица,
д. 10 стр. 1
--- стр. 2 ---
i
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 6 «Положительный контрольный образец, содержащий
фрагмент РНК 2019-nCoV» (СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV), предназначенного
для проведения испытаний наборов реагентов для выявления РНК коронавируса
SARS-CoV-2.
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV
проводят путем внешнего осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV и при постановке ПЦР следует
соблюдать положения МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий,
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе
всегда следует выполнять следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические
требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации
производственных, общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытуемому набору реагентов.
3.2 Реагенты из испытуемого набора реагентов.
З.ЗТемпература в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75 %.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП № 6 ПКО РНК
2019-nCoV. СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV должен представлять собой
прозрачную жидкость, не содержащую каких-либо включений и посторонних
примесей. Оценивают визуально.
--- стр. 3 ---
5.1 Содержимое пробирки с СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV перемешивают и
осаждают капли на вортексе. Открывают пробирку и, используя наконечник с
аэрозольным барьером, отбирают необходимый объем (см. следующий пункт),
пробирку закрывают,
5.2 Готовят разведения, указанные в ТУ к испытуемому набору реагентов с
использованием ДНК-буфера, приложенного к СОП.
Разведения готовятся по следующей схеме:
1) Исходный препарат, имеющий концентрацию МхЮ"^, разводится N-кратно до
ближайшего разведения 10"^ с коэффициентом 1 (1x10"^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
Nx10^/1x10"’=N(1)
C/N=A (2)
С-А=В (3), где
NxlO"^ - исходная концентрация СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV,
IxlO"^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
ГЭ/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП, который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"^, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфера, который необходимо взять для лриготоврения С мкл
раствора, содержащего СОП в концентрации IxlO'", ближайшего к исходной
концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации 1x10"^.
2) Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10"^ ГЭ/мл разводится
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ к испытуемому набору реагентов;
3) Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, указанного в
ТУ, готовят последующие* разведения, указанные в ТУ, путем последовательных
десятикратных разведений.
Например, СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV имеет концентрацию 2x10® ГЭ/мл.
Необходимо приготовить препарат с концентрацией КР ПКО 2019-nCoV 1x10®
ГЭ/мл, 1x1 O'* ГЭ/мл и 1x10® ГЭ/мл.
Маркируют пробирки «1x10®», «IxlO^*», «1x10®».
В пробирку, маркированную «1x10®», последовательно вносят
автоматическим дозатором, используя наконечники с аэрозольным барьером, 475
мкл буфера и 25 мкл СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV в концентрации 2x10® ГЭ/мл,
тщательно перемешивают и осаждают на вортексе.
В пробирку, маркированную «1x10^^», последовательно вносят
автоматическим дозатором, используя наконечники с аэрозольным барьером, 450
мкл буфера и 50 мкл из пробирки, маркированной «1x10®», тщательно
перемешивают и осаждают на вортексе.
В пробирку, маркированную «1x10®», последовательно вносят
автоматическим дозатором, используя наконечник с аэрозольным барьером, 450
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
--- стр. 6 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. генерального директора по
научно-производственной деятельно
сти федерального государственного
бюджетного учреждения «Центр стра
тегического планирования и управле
ния медико-биологическими рисками
здоровью» Федерального медико-био-
логическ0^"'^ЭН7ства (ФГБУ «ЦСП»
Г.А. Шипулин
2021 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для выявления РНК коронавируса
SARS-CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома
(COVID-19) методом полимеразной цепной реакции
«АмплиТест SARS-CoV-2»
mJ
ФГБУ «ЦСП» ФМБА России,
Российская Федерация, 119121,
город Москва, Погодинская улица,
д. 10 стр. 1 IVD
--- стр. 7 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...............................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.......................................................................................4
КОМПЛЕКТАЦИЯ............................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.......................................................6
Интерферирующие вещества и ограничения по использованию проб
исследуемого материала..............................................................................7
Воспроизводимость........................................................................................8
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ........9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ........................13
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО
МАТЕРИАЛА.................................................................................................16
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК... 18
СОСТАВ........................................................................................................20
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ......................................................21
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ..............................21
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В
РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».........................................................23
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................23
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального
времени»............. 24
B. Анализ и интерпретация результатов......................................,..........25
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ 28
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ.............................29
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ...................30
стр. 2 из 30
--- стр. 8 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокраще
ния и обозначения:
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
вко - внутренний контрольный образец
гэ - геномный эквивалент - количество РНК-мишени (1 копия),
содержащаяся в 1 геноме вируса
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ПК - положительный контроль экстракции ДНК, обратной тран
скрипции и ПЦР, включает фрагмент РНК SARS-CoV-2
к- - отрицательный контроль ПЦР, не содержит фрагменты РНК
SARS-CoV-2
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция и ПЦР-амплификация
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
пив - потенциально интерферирующие вещества
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
ООП № 6 - стандартный образец предприятия, содержащий фрагмент
РНК SARS-CoV-2
ФГБУ «цеп»
ФМБА России
- федеральное государственное бюджетное учреждение
«Центр стратегического планирования и управления медико
биологическими рисками здоровью» Федерального медико-
' биологического агентства
FRT - флуоресцентная детекция'в режиме «реального времени»
ч
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-
CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома (COVID-19)
методом полимеразной цепной реакции «АмплиТест SARS-CoV-
2», далее - набор реагентов «АмплиТест SARS-CoV-2», предна
значен для качественного определения РНК коронавируса
SARS-CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома
(COVID-19) в биологическом материале (мазках со слизистой
носо- и ротоглотки, мокроте, фекалиях человека) методом ПЦР
с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «ре
ального времени».
Показания и противопоказания к применению набора реа
гентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике острых респираторных инфекций для исследования
стр. 3 из 30
--- стр. 10 ---
флуоресцентной детекцией. ВКО IC-R1 позволяет контролиро
вать все этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оце
нивать влияние потенциальных ингибиторов на результаты
ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами РНК проводится
обратная транскрипция РНК с помощью ревертазы и амплифи
кация участков кДНК при помощи специфичных к этим участкам
праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе реакционной
смеси присутствуют флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды,
которые гибридизуются с комплементарным участком амплифи-
цируемой кДНК-мишени, в результате чего происходит нараста
ние интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистриро
вать накопление специфического продукта амплификации путем
измерения интенсивности флуоресцентного сигнала. Детекция
флуоресцентного сигнала осуществляется непосредственно в
ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции флу
оресцентного сигнала в режиме «реального времени».
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке прово
дятся 2 реакции - амплификация кДНК SARS-CoV-2 коронави-
руса, а также амплификация последовательности кДНК ВКО 1С-
R1. Результаты амплификации кДНК коронавируса SARS-CoV-2
и кДНК ВКО IC-R1 регистрируются по 2 различным каналам флу
оресцентной детекци (см. табл.1).
Таблица 1 — Анализ результатов по каналам для флуорофоров
Канал
для флуорофора FAM JOE
кДНК-мишень кДНК ВКО IC-R1 кДНК SARS-CoV-2
Область
амплификации
искусственно
синтезированная
последовательность
фрагмент гена RdRP
КОМПЛЕКТАЦИЯ
«АмплиТест РИБО-преп» вариант 100; «ПЦР-комплект»
вариант FRT-96 F.
Набор реагентов предназначен для проведения полного
ПЦР-исследования, включающего экстракцию РНК из биологи
ческого материала, проведение реакции обратной транскрипции
РНК и амплификации участка кДНК с гибридизационно-флуорес-
центной детекцией в режиме «реального времени», позволяет
стр. 5 из 30
--- стр. 11 ---
определять РНК коронавируса SARS-CoV-2 в качественном
формате.
Набор реагентов рассчитан на проведение 96 определений.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие харак
теристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2 — Аналитическая чувствительность набора реаген
тов «АмплиТест SARS-CoV-2»
Вид
исследуемого
материала
Комплект для
экстракции РНК
Комплект для
ОТ-ПЦР
Аналитическая
чувствительность
(предел обнаруже
ния}, ГЭ/мл
Мазки со слизистой
оболочки носо- и ро
тоглотки, мокрота*
«АмплиТест
РИБО-преп»
вариант 100
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-96 F 1x103
Фекалии*
«АмплиТест
РИБО-преп»
вариант 100
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-96 F 5x103
*образцы после соответствующей предварительной обработки
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала».
Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана
при исследовании РНК штаммов коронавируса HCoV 229Е,
HCoV ОС43, HCoV NL63, SARS-CoV HKU39849, MERS-CoV из
Европейского вирусного архива (European Virus Archive Global
011N-03868 - Coronavirus RNA specificity panel); штаммов вируса
гриппа A (H1N1) (ATCC® VR-1469), вируса гриппа A (H3N2)
(ATCC® VR-776) и вируса гриппа В (Victoria Lineage) (ATCC® VR-
1930) из коллекции ATCC® (American Type Culture Collection,
США); штаммов Streptococcus pneumoniae ( IM q 131116j,
Streptococcus pyogenes (№ 130001j, Haemophilus influenza (№
151221), Staphylococcus aureus f№ 201108J, Klebsiella
стр. 6 из 30
--- стр. 12 ---
pneumoniae (№ 180129) из Государственной коллекции патоген
ных микроорганизмов (ГКПМ) ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава Рос
сии в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл.
При тестировании вышеперечисленных образцов положи
тельных реакций (результатов) выявлено не было.
Интерферирующие вещества и ограничения по использова
нию проб исследуемого материала
Для контроля эффективности экстракции нуклеиновых кислот
и ОТ-ПЦР в наборе реагентов предусмотрена одновременная
обратная транскрипция РНК и затем амплификация кДНК коро-
навируса SARS-CoV-2 и внутреннего контрольного образца
(ВКО). ВКО добавляется в каждый образец биологического ма
териала на этапе экстракции РНК. В ходе реакции амплифика
ции наличие сигнала, свидетельствующего о накоплении фраг
ментов кДНК ВКО, говорит об отсутствии ингибирования ОТ и
ПЦР.
Непригодными для исследования являются образцы, объем,
условия/срок хранения и транспортировки которых не соответ
ствуют требованиям, указанным в разделе «Взятие, транспорти
рование и хранение исследуемого материала».
Потенциально интерферирующие вещества
Для оценки потенциальной интерференции были выбраны
эндогенные - муцин, гемоглобин, и экзогенные - водный раствор
хлоргексидина биглюконата для местного и наружного примене
ния, 5 %, «Ибупрофен» (суппозитории ректальные 60 мг), «Эф-
фералган®» (суппозитории ректальные 80 мг) - вещества, кото
рые могут присутствовать в биологическом материале (мазки со
слизистой носо- и ротоглотки, мокрота, фекалии), используемом
для исследования.
Для изучения влияния потенциально интерферирующих ве
ществ (ПИВ) на полученные результаты, испытуемым набором
реагентов были протестированы модельные образцы, содержа
щие и не содержащие эндогенные и экзогенные потенциально
интерферирующие вещества. Модельные образцы представ
ляли собой мазки со слизистой носо- и ротоглотки, образцы мок
роты, фекалий, не содержащие РНК коронавируса SARS-CoV-2,
контаминированные разведением СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoV
стр. 7 из 30
--- стр. 13 ---
до конечной концентрации 1x10"^ ГЭ/мл, с последующим добав
лением эндогенных (муцин, гемоглобин) и экзогенных (водный
раствор хлоргексидина биглюконата для местного и наружного
применения, 5 %, «Ибупрофен» суппозитории 60 мг, «Эфферал-
ган®» суппозитории 80 мг) ПИВ и без добавления данных ве
ществ. Вычисляли разницу полученных средних значений Ct
(ACtcp.) между контрольными и испытуемыми образцами. При
значении ACfcp. менее 1 ,5 циклов делали вывод об отсутствии
влияния потенциально интерферирующих веществ на результат
ОТ-ПЦР.
Экстракцию РНК из модельных образцов и ОТ-ПЦР прово
дили в соответствии с Инструкцией по применению.
Результаты оценки представлены в табл. 3.
Таблица 3 — Оценка влияния потенциально интерферирующих
веществ
Биологи
ческий
материал
Вид
потенциаль
ного интер-
ферента
Потенциаль
ный
интерферент
Протестиро
ванная
концентрация
в образце
Наличие ин
терференции
Мокрота,
мазки
Эндогенные
вещества
Муцин 5% Не обнаружено
Гемоглобин 100 мг/мл Не обнаружено
Экзогенные
вещества
Водный раствор
хлоргексидина
биглюконата
2% (V/V) Не обнаружено
Фекалии
Эндогенные
вещества
Муцин 5% Не обнаружено
Гемоглобин 100 мг/мл Не обнаружено
Экзогенные
вещества
«Ибупрофен»
суппозитории 2 % (v/v) Не обнаружено
«Эфферал-
ган®» суппози
тории
2 % (v/v) Не обнаружено
I
Воспроизводимость
Воспроизводимость исследования была определена в двух
независимых лабораториях, разными операторами, в разные
дни, на различных приборах путем тестирования положитель
ных и отрицательных модельных образцов. Положительные об
разцы представляли собой разведения стандартного образца
предприятия СОП № 6 ПКО РНК 2019-nCoVc концентрациями
1x10^ и 1x10"^ ГЭ/мл, в качестве отрицательного образца был ис
пользован ОКО.
стр. 8 из 30
--- стр. 14 ---
Результаты исследования для набора реагентов представ
лены в табл. 4.
Таблица 4 — Воспроизводимость исследования для набора
реагентов «АмплиТест SARS-CoV-2»
Тип
образцов
Внутри поста
новки внутри се
рии
(повторяемость)
Между сериями
(повторяемость)
Между лаборато
риями (воспроиз
водимость)
Итого,
воспроизводи
мость
Коли
чество
образ
цов
Совпа
дение
резуль
татов, %
Коли
чество
образ
цов
Совпа
дение
резуль
татов, %
Коли
чество
образ
цов
Совпа
дение
резуль
татов, %
Коли
чество
образ
цов
Совпа
дение
резуль
татов, %
Положи
тельные
СОП № 6
1x10^ ГЭ/мл
6 100 12 100 12 100 24 100
Отрицатель
ные 6 100 12 100 12 100 24 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Диагностические показатели набора реагентов оценивали
при анализе проб мазков со слизистой носо- и ротоглотки, мок
роты, фекалий, предварительно охарактеризованных как содер
жащие и не содержащие коронавирус SARS-CoV-2.
Результаты применения набора реагентов представлены в
табл. 5.
Таблица
лей набора
5 — Результаты оценки диагностических показате-
Тип
образцов Характеристика образцов Результаты примене
ния набора реагентов
Мазки из
носо-и рото
глотки
Всего исбледо-
вано 115 образцов
положительных 51 0
отрицательных 0 64
Мокрота Всего исследовано
106 образца
положительных 52 0
отрицательных 0 54
Фекалии Всего исследовано
102 образцов
положительных 51 0
отрицательных 0 51
Были использованы:
154 образца биологического материала (мазков из носо- и ро
тоглотки, мокроты, фекалий), содержащих вирус SARS-CoV-
2, полученных от пациентов с установленной инфекцией
COVID-19;
стр. 9 из 30
--- стр. 15 ---
- 169 образцов биологического материала (мазков из носо- и
ротоглотки, мокроты, фекалий), не содержащих РНК SARS-
CoV-2.
Диагностические характеристики набора реагентов представ
лены в табл. 6.
Таблица 6 — Диагностические характеристики набора реагентов
«АмплиТест SARS-CoV-2»
Диагностическая Диагностическая
чувствительность специфичность
Тип образцов (с доверительной (с доверительной
вероятностью 95 %), вероятностью 95 %),
в интервале (%) в интервале (%)
Мазки из носо-
и ротоглотки 94,3-100 % 95,4-100 %
Мокрота 94,4-100 % 94,6-100 %
Фекалии 94,3-100 % 94,3-100%
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ
ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Исследования по выявлению в клиническом материале воз
будителей инфекционных болезней, относящихся ко И группе
патогенности, должно проводиться с соблюдением сауитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность ра
бот с микроорганизмами 1-11 групп патогенности (опасности)» и
СанПиН 2.1.7.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требо
вания к содержанию территорий городских и сельских поселе
ний, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснаб
жению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям,
эксплуатации производственных, общественных помещений,
организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий». В соответствии с п.2.1.6
СП 1.3.3118-13 диагностика возбудителей инфекционных болез
ней II группы патогенности молекулярно-генетическими мето
дами (без накопления возбудителя) может проводиться в лабо
раториях, имеющих санитарно-элидемиологическое заключение
о возможности проведения работ с микроорганизмами III группы
патогенности в соответствии с требованиями санитарных пра
вил СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами
III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями ларази-
стр. 10 из 30
--- стр. 16 ---
I
тарных болезней" (с изменениями на 29 июня 2011 года). Мате
риал для исследований подлежит предварительной обработке в
соответствии методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Орга
низация работы лабораторий, использующих методы амплифи
кации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержа
щим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе
необходимо всегда выполнять следующие требования: рассмат
ривать исходные исследуемые образцы биологического матери
ала как инфекционно-опасные; инактивировать исходные иссле
дуемые образцы биологического материала в соответствии ме
тодическими указаниями МУ 1.3.2569-09.
При работе необходимо всегда выполнять следующие требо
вания:
- Исследования проводятся в боксированных помещениях,
оборудованных системами приточной и вытяжной вентиля
ции или боксах микробиологической безопасности II класса.
- Температура в помещениях лаборатории от 20 до 28 °С, от
носительная влажность от 15 до 75 %.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опас
ные, организовывать работу и хранение в соответствии с СП
1.3.2322-08 «Безопасность работы с микpoopгaнизмa^\/lи III-IV
групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитар
ных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп пато
генности (опасности) и возбудителями паразитарных болез
ней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Ана
лиз проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу сле
дует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зонах Ампли
фикации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и
реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая ста
дия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку"', био
логический материал, включая материалы, инструменты и
^ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реа
генты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
стр.11 из 30
--- стр. 25 ---
СОСТАВ
«АмплиТест РИБО-преп» вариант 100 - комплект реагентов для
Реагент Описание Объем, мл Количество
Раствор для лизиса
Прозрачная жидкость от
бесцветного до
серо-голубого цвета
30 1 флакон
Раствор для преципита
ции
Прозрачная бесцветная
жидкость 20 2 флакона
Раствор для отмывки 3 Прозрачная бесцветная
жидкость 25 2 флакона
Раствор для отмывки 4 Прозрачная бесцветная
жидкость 20 1 флакон
РНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 8 пробирок
К комплекту реагентов «АмплиТест РИБО-преп» вариант 100
прилагаются контрольные образцы этапов экстракции РНК/ДНК
Реагент Описание Объем, мл Количество
око Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 2 пробирки
BKOIC-R1 Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 1 пробирка
Пко РНК SARS-CoV-2 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,15 1 пробирка
«АмплиТест РИБО-преп» вариант 100 рассчитан на выделение
РНК из 100 образцов, включая контроли.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-96 F - комплект реагентов для об
ратной транскрипции ЯНК и амплификации фрагмента кДНК ко-
ронавируса SARS-CoV-2 с детекцией в режиме «реального вре
мени» включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР смесь-FL SARS-
CoV-2
Прозрачная бесцветная
жидкость 0.9 2 пробирки
ОТ-ПЦР-буфер-R Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 1 пробирка
Taq полимераза Прозрачная бесцветная
жидкость 0,12 1 пробирка
Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,4 1 пробирка
стр. 20 из 30
--- стр. 26 ---
0
>
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций об
ратной транскрипции и амплификации (всего 96 тестов), включая
контроли.
Реагенты комплектов упакованы раздельно.
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с гибри-
дизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального
времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе С РНК необходимо использовать только
одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие
специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free».
1
3.
4.
Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от
2 до 8 °С) прогреть при температуре 65 °С до полногр раство
рения кристаллов.
Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на
1,5 мл с плотно закрывающимися крышками (включая отри
цательный и положительный контроли выделения). Внести в
каждую пробирку по 10 мкл ВКО IC-R1. Добавить в пробирки
по 300 мкл раствора для лизиса. Промаркировать пробирки.
В пробирки с раствором для лизиса и ВКО IC-R1, внести по
100 мкл подготовленных проб (для экстрактов фекалий вне
сти 20 мкл проб и 80 мкл фосфатного буфера (или стериль
ного физиологического раствора)), используя наконечники с
аэрозольным барьером. В пробирку отрицательного контроля
(ОК) выделения внести 100 мкл ОКО. В пробирку положи
тельного контроля (ПК) выделения внести 90 мкл ОКО и 10
мкл ПКО РНК SARS-CoV-2.
Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе,
процентрифугировать в течение 5 с на микроцентрифуге для
удаления капель с внутренней поверхности крышки и про
греть 5 мин при 65°С в термостате.
стр. 21 из 30
--- стр. 27 ---
t
p
5. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для преципита
ции, перемешать на вортексе.
6. Процентрифугировать пробирки на микроцентрифуге в тече
ние 5 мин при 13 тыс об/мин.
7. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая оса
док, используя вакуумный отсасыватель и отдельный нако
нечник на 200 мкл для каждой пробы.
8. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3,
плотно закрыть крышки, осторожно промыть осадок, перево
рачивая пробирки 3-5 раз. Можно провести процедуру одно
временно для всех пробирок, для этого необходимо накрыть
пробирки в штативе сверху крышкой или другим штативом,
прижать их и переворачивать штатив.
9. Процентрифугировать при 13 тыс об/мин в течение 1-2 мин
на микроцентрифуге.
10. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную
жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный
наконечник на 10 мкл для каждой пробы.
11. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4,
плотно закрыть крышки и осторожно промыть осадок, перево
рачивая пробирки 3-5 раз.
12. Процентрифугировать при 13 тыс об/мин в течение 1-2 мин
на микроцентрифуге.
13. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную
жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный
наконечник на 10 мкл для каждой пробы.
14. Поместить пробирки в термостат при температуре 65 °С на
5 мин для подсушивания осадка (при этом крышки пробирок
должны быть открыты).
15. Добавить в пробирки по 50 мкл РНК буфера. Перемешать
на вортексе. Поместить в термостат при температуре 65 °С
на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе. Допускается
при необходимости увеличение объема элюции до 90 мкл.
16. Процентрифугировать пробирки при 13 тыс об/мин в тече
ние 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость со
держит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к постановке
реакции обратной транскрипции и ПЦР.
Очищенная РНК/ДНК может храниться при температуре
не выше минус 16 °С до 1 месяца и при температуре не выше
стр. 22 из 30
--- стр. 31 ---
Таблица 8 — Принципы интерпретации результатов
Значение порогового цикла (CQ
по каналу для флуорофора Результат
РАМ JOE
определено меньше гра
ничного отсутствует
НЕ обнаружена
РНК коронавируса
SARS-CoV-2
определено
или отсутствует
олределено меньше гоа-
ничного
Обнаружена
РНК коронавируса
SARS-CoV-2
отсутствует или опреде
лено больше граничного
отсутствует или опреде
лено больше граничного Невалидный*
определено меньше гра
ничного
определено больше гра
ничного Сомнительный**
* В случае получения невалидного результата необходимо провести
повторное ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца,
начиная с этапа экстракции РНК.
** В случае получения сомнительного результата необходимо про
вести повторное ПЦР-исследование соответствующего исследуемого об
разца, начиная с этапа экстракции. В случае повторения аналогичного ре
зультата образец считать положительным. При получении отрицатель
ного результата в повторной постановке образец считать сомнительным
и рекомендовать повторное взятие материала для анализа.
*
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Cf указаны во вкладыше, при
лагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей эта
пов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с табл.
9 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 9 — Контроль достоверности этапов экстракции РНК,
обратной транскрипции и амплификация с детекцией
в режиме «реального времени»
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-исследо-
вания
Значение порогового цикла (СО
по каналу для флуорофора
РАМ JOE
ПК Экстракция РНК,
ОТ-ПЦР
определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
ок Экстракция РНК,
ОТ-ПЦР
определено меньше
граничного отсутствует
К- ОТ-ПЦР отсутствует отсутствует
стр. 26 из 30
--- стр. 32 ---
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля экстракции РНК и ОТ-ПЦР (ПК)
значение порогового цикла {Ci) по каналу для флуорофора
JOE отсутствует или превышает граничное значение. Необ
ходимо повторить ПЦР-исследование для всех образцов
(начиная с этапа экстракции РНК).
2. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) определено зна
чение порогового цикла {Ci) по каналу для флуорофора JOE
и/или РАМ. Вероятна контаминация лаборатории продуктами
амплификации или контаминация реагентов, исследуемых
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необхо
димо предпринять меры по выявлению и ликвидации источ
ника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) определено
значение порогового цикла {Ci) по каналу для флуорофора
JOE. Вероятна контаминация лаборатории продуктами ам
плификации или контаминация реагентов, исследуемых об
разцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника кон
таминации и повторить ПЦР-исследование для всех образ
цов, начиная с этапа экстракции РНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла {Ci), при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию). Необ
ходимо проверить" правильность выбранного уровня порого
вой линии или параметров расчета базовой линии. Если ре
зультат получен при правильном уровне пороговой линии (па
раметрах базовой линии), требуется повторно провести ПЦР-
исследование для этого образца.
стр, 27 из 30
--- стр. 33 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРА
НЕНИЯ
Срок годности. 12 месяцев.
Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует
сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реаген
тов.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать
при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспорт
ных средств.
Набор реагентов при получении разукомплектовать в соот
ветствии с указанными температурами хранения.
Хранение.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-96 F хранить в морозильной ка
мере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-
FL SARS-CoV-2 хранить в защищенном от света месте.
Допустимо размораживать и замораживать реагенты «ПЦР-
комплекта» не более 3 раз.
Комплект «АмплиТест РИБО-преп» вариант 100 и прилагае
мые к нему контрольные образцы хранить при температуре от
плюс 2 до плюс 8 °С.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный-температурный режим.
стр. 28 из 30
--- стр. 34 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных парамет
ров и характеристик набора реагентов требованиям, указанным
в технической и эксплуатационной документации, в течение ука
занного срока годности при соблюдении всех условий транспор
тирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по ад
ресу 119121, Российская Федерация, г. Москва, Погодинская ул.,
дом 10 стр.1, e-mail: promlab@cspmz.ru .
При выявлении побочных действий, не указанных в инструк
ции по применению набора реагентов, нежелательных реакций
при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих
угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при
применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполно
моченную государственную регулирующую организацию (в РФ -
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в
соответствии с действующим законодательством.
Руководитель
производственной лаборатории
Ж.Е.Тарасова
стр. 29 из 30
--- стр. 35 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
LOT
IVD
VER
I
f '
Номер по каталогу
А
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по
применению
Код партии
V
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
Медицинское изделие
для диагностики in vitro Использовать до
Дата изменения С И
Обратитесь к инструкции
по применению
Температурный диапа
зон
Не допускать воздей
ствия солнечного света
Изготовитель Дата изготовления
Беречь от влаги
стр. 30 из 30