Набор реагентов АмплиСенс® HHV7-скрин/монитор-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
а.
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
. /
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® ННУ7-скрин/монитор-РЬ
АмплиСенс'
M il
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
с п и с о к СОКРАЩЕНИЙ........................................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ..............................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА..................................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ....................................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ....................................................................................10
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ........................................................................................................11
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ...........................................................................................................13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ ......................................................14
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 17
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК ..............................19
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА........................................................................................................20
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ .........................................................................................21
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .............................................................21
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN)....................................................................23
СОСТАВ......................................................................................................................................................23
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ....................23
A. Подготовка проб для амплификации.................................................................................23
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ......25
B. Анализ и интерпретация результатов................................................................................26
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)................................................................................31
СОСТАВ.......................................................................................................................................................31
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ....................31
A. Подготовка проб для амплификации.................................................................................31
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ......32
B. Анализ и интерпретация результатов................................................................................34
СРОК го д н о с ти . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ .........................39
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ............................................................39
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ................................................41
стр. 2 из 41
L
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ВКО Glob - эндогенный внутренний контрольный образец (участок р-
глобинового гена человека)
ГЭ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
К1. К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
ВГЧ-7 {H H V 7 ) - вирус герпеса человека 7
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® Н/-/\/7-скрин/монитор-Р1
предназначен для количественного определения ДНК вируса
герпеса человека 7 (Human betaherpesvirus 7, ВГЧ-7, HHW) в
биологическом материале (плазма крови, цельная кровь,
слюна, мазки со слизистой оболочки ротоглотки,
спинномозговая жидкость) методом П Ц Р с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.
Материалом для проведения П Ц Р служат пробы ДНК,
экстрагированные из исследуемого материала.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на инфекцию, вызванную
ВГЧ-7, вне зависимости от формы и наличия манифестации
заболевания. Противопоказания отсутствуют, за исключением
стр. 3 из 41
--- стр. 5 ---
Количественное определение ДНК ВГЧ-7 возможно при
проведении П Ц Р в режиме «реального времени» и
основывается на существовании линейной зависимости между
логарифмом исходной концентрации ДНК-мишени в
исследуемом образце и циклом начала экспоненциального
увеличения флуоресцентного сигнала (пороговый цикл, Cycle
threshold, Ct). Для проведения количественного теста
амплификацию ДНК из исследуемых образцов проводят
одновременно с ДНК-калибраторами - образцами с известной
концентрацией ДНК-мишени, аттестованными по методике
Изготовителя. По результатам амплификации ДНК-
калибраторов строится калибровочная прямая, по которой
происходит определение концентрации ДНК-мишени в
исследуемых образцах.
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводится амплификация трех ДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по следующим каналам
флуоресцентной детекции (см. табл. 1);
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX
ДНК-мишень
ДНК участка (3-
глобинового гена
(ВКО Glob)
ДНК ВГЧ-7 ДНК BKO-FL
Область
амплификации р-глобиновый ген МСР-ген
Искусствемнан
нуклеотидная
последовательность
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1 и 2 предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в
количественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК.
стр. 5 ИЗ 41
--- стр. 6 ---
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 96 реакций амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Диапазон измерения и предел обнаружения
Таблица 2
Вид иссле
дуемого
материала
Транспорт
ная среда
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект
для
экстракции
___flHK___
Комплект для
амплифи
кации и
двте1бцйй
S y -
жения,
копий/мл копий/мл
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
Плазма
крови
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
200 «МАГНО-
сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
Цельная
кровь 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
Слюна 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
200 500-1x10^
Мазок со
слизистой
оболочки
ротоглотки
«Транспорт
ная среда для
хранения и
транспорти
ровки
респиратор
ных мазков»
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
Спинно
мозговая
жидкость
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
200 «МАГНО-
сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-
100 FN
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
Данные значения
соблюдении правил.
характеристик достигаются при
указанных в разделах «Взятие,
стр. 6 ИЗ 41
--- стр. 7 ---
транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участок ДНК ВГЧ-7
(клинический образец, содержащий ДНК ВГЧ-7 в концентрации
не менее 10“ * копий/мл, слецифичность лодтверждена методом
прямого секвенирования нуклеотидных последовательностей).
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана
при исследовании ДНК/РНК следующих
микроорганизмов/штаммов, а также ДНК человека;
- Штаммы Human gammaherpesvirus 4 N IB S C №09/260, Human
polyomavirus 1 N IB S C №14/212, Human polyomavirus 2 N IB SC
№14/114, Primate erythroparvovirus 1 N IB S C № 99/S02,
Human betaherpesvirus 5 N IB SC № 09/162 из коллекции
N IB SC (National Institute for Biological Standards and Control,
UK) в концентрации не менее 5х10®МЕ/мл;
- Штаммы Streptococcus pyogenes АТСС®_ 19615^''^,
Listeria12386 тмStreptococcus agalactiae А Т СС
monocytogenes АТСС® 7644^''^, Neisseria meningitidis АТСС®
13102^^, Haemophilus influenzae АТСС® 33930™,
Staphylococcus aureus ATCC® 6538P™ из коллекции А Т С С
(American Type Culture Collection, СШ А) в концентрации не
менее 1x10^ копий/мл;
- Клинические изоляты панели штаммов и изолятов,
находящейся в распоряжении ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора: Enterovirus spp.. Human alphaherpesvirus
1, Human alphaherpesvirus 2 Human alphaherpesvirus 3,
Human betaherpesvirus 6A, Human betaherpesvirus 6B,
Rubella virus, Human respiratory syncytial virus, Human
metapneumovirus. Human parainfluenza virus types 1 -4, Human
coronavirus (NL-63, 229E, HKU-1, OC43), Human rhinovirus.
Human adenovirus B, C, E, Human bocavirus. Influenza virus A,
Influenza virus В в концентрации не менее 1 х Ю'* копий/мл;
- ДНК человека, производства Sigma-Aldrich, США, в
концентрации не менее 1x10® копий/мл.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
стр. 7 из 41
--- стр. 9 ---
Воспроизводимость
Таблица 4
АмплиСенс^
HHV7-
скрин/мони-
Top-FL
Комплект
для
экстрак
ции
Выяв-
Л110МЫЙ
патоген
Исходное
значение
концент
рации,
копий/мл
Коли
чество
повто
ров
Среднее
значение
концентра
ции,
_____
Стандарт
ное
(Зтклонени!
(SD)
Коэффи:
циент
I вариа
ции (CV),
%
Форма 1
«РИБО-
преп» ВГЧ-7
1x10® 80 6.0 0.08 1.3
1x10® 80 5.0 О.Ю 2.1
1x10“ 80 4.0 0,09 2.3
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-7
1x10® 80 6.1 0,14 2.4
1x10® 80 5.1 0,20 4.0
1x1 O'* 80 4.1 0,16 4.0
Форма 2
«РИБО-
преп» ВГЧ-7
1x10® 80 6.1 0.12 2.0
1x10® 80 5,1 0,15 3.0
1x1 O'* 80 4,0 0,14 3.4
«МАГНО-
сорб» ВГЧ-7
1x10® 80 6.1 0,10 1.6
1x10® 80 5.0 0,12 2.5
1x10“ 80 4.0 0,10 2.4
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах, на разных
сериях набора реагентов.
Правильность
Правильность была определена путем тестирования
образцов негативной плазмы крови, в которых предварительно
не была выявлена ДНК ВГЧ-7, а затем был добавлен
стандартный образец предприятия, содержащий ДНК ВГЧ-7, до
конечной концентрации 1,3x10® копий/мл (см. табл.5).
Таблица 5
Правильность
АмплиСенс®
HHV7-
скрин/монитор-FL
Количество
повторов
Среднее
значение
измерения, Id
Установленное
значение, 1д
Систематическая
п о |р е Ш Ь о т|> \В),
%
Форма 1 25 6,00 6.00 0,00
Форма 2 25 6,04 6,00 0,67
стр. 9 из 41
--- стр. 10 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы образцы биологического
материала детей с первичной инфекцией в возрасте от года до
трех лет с подтвержденным диагнозом по Международной
классификации болезней 10-го пересмотра (МКБ 10);
В08.2 Экзантема внезапная (шестая болезнь), а именно:
180 образцов цельной крови, 180 образцов слюны и 180 мазков
со слизистой оболочки ротоглотки. Для подтверждения
диагностической чувствительности в спинномозговой жидкости
и образцах плазмы крови были протестированы по
180 негативных образцов с добавлением стандартного образца
предприятия, содержащего ДНК ВГЧ-7, до концентраций
ДНК ВГЧ-7 от 500 до 1x10^ копий/мл.
Для подтверждения диагностической специфичности
использовано по 180 образцов плазмы крови, цельной крови,
слюны, мазков со слизистой оболочки ротоглотки условно
здоровых доноров крови, а также 180 образцов спинномозговой
жидкости пациентов без вирусной инфекции.
В качестве референтного метода использовалась система
QX100 для проведения капельной цифровой П Ц Р (QX100
droplet digital P C R ) (Bio-Rad Laboratories, Inc. («Био-Рад
Лабораториз, Инк.»), США, РУ № Ф СЗ 2012/13278).
Результаты представлены в табл. 6 и 7.
стр. 10 ИЗ 41
--- стр. 11 ---
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® ННУ7-скрин/монитор-РЬ
Вид
исследуем
ого
матеОйдЛа
Результаты применения
АмплиСенс® HHV7-
скрин/монитор-FL
Результаты применения
ю ^ м н т н о г о т ш ш
пол ож 1гтйьн||1Х отрицательных
0Плазма
крови
Всего
исследовано
360 образцов
положительных 180
отрицательных 0 180
Цельная
кровь
Всего
исследовано
360 образцов
положительных 180 0
отрицательных 0 180
Слюна
Всего
исследовано
360 образцов
положительных 180 0
отрицательных 0 180
Мазок со
слизистой
оболочки
ротоглотки
Всего
исследовано
360 образцов
положительных 180 0
отрицательных 0 180
Спинномоз
говая
I жидкость
Всего
исследовано
360 образцов
положительных 180 0
отрицательных 0 180
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
Вид исследуемого
материала
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
т пст т ст ью 95 %)
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
веООШЯостью 95 %)
Плазма крови 100 (98,3-100)% 100 (98,3-100)%
Цельная кровь 100 (98.3-100)% 100 (98,3-100)%
I Слюна 100 (98,3-100)% 100 (98,3-100)%
I Мазок со слизистой
оболочки ротоглотки 100 (98,3-100)% 100 (98,3-100)%
Спинномозговая жидкость 100 (98,3-100)% 100 (98,3-100)%
’ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
^Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 11 из 41
--- стр. 12 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические
требования к содержанию территорий городских и сельских
поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому
водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым
помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно
противоэпидемических (профилактических) мероприятий» и
методических указаний М У 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового
применения для проведения ПЦР-исследования указанного
количества проб (см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования;
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно
инструкции.
стр. 12 ИЗ 41
--- стр. 16 ---
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки
объемом 1,5 мл (например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) для приготовления
реакционной смеси.
б) тонкостенные пробирки для П Ц Р объемом 0,2 мл с
выпуклой или плоской оптически прозрачной (например.
Ахудеп, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные)
крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт.
с прозрачными крышками (например, Q IA G EN GmbH
(«Киаген ГмбХ»), Германия, или аналогичные) - при
использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для П Ц Р объемом 0,2 мл с
плоской крышкой (например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) или пробирки для П Ц Р к
Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с
крышками (например, Q IA G EN Gm bH («Киаген ГмбХ»),
Германия, или аналогичные) - при использовании
прибора роторного типа.
24.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема с фильтром до 100 и до 200 мкл (например, Ахудеп,
Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
25. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл
(например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
26. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс)
(например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные
системы», Россия, или аналогичный).
27. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
28. Автоматические дозаторы переменного объема (например,
О О О «Биохит», Россия, или аналогичные).
29. Программируемый амплификатор с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»,
имеющий 3 или более независимых каналов
флуоресцентной детекции (например, Rotor-Gene О
(Q IAG EN Gm bH («Киаген ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad
Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз, Инк.»), СШ А) и
другие, рекомендованные Изготовителем).
30. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус
24 до минус 16 °С.
стр. 16 ИЗ 41
--- стр. 17 ---
31.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки.
32. Емкость для сброса наконечников.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- плазма крови,
- цельная кровь,
- слюна,
- мазки со слизистой оболочки ротоглотки,
- спинномозговая жидкость.
Плазма крови
Для получения образцов плазмы крови взятие крови следует
производить натощак или через 3 часа после приема пищи
одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в пробирку с ЭДТА
(специальная вакуумная система типа «Vacuett®» (сиреневые
крышки - 6 % EDTA)). После взятия крови пробирку следует
плавно несколько раз перевернуть вверх дном, чтобы кровь в
пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом. В
течение 6 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и
перенести в новую пробирку. Для этого центрифугируют
пробирки с цельной кровью при 3 тыс об/мин в течение
10 минут при комнатной температуре. Полученную плазму
отбирают в количестве не менее 1 мл отдельными
наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные сухие
пробирки объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов до предварительной
подготовки/ПЦР-исследования;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 5 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - до 3 месяцев.
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Цельная кровь
Взятие крови следует производить натощак или через 3 часа
после приема пищи одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в
пробирку с ЭДТА (специальная вакуумная система типа
«Vacuett®» (сиреневые крышки - 6 % EDTA)). После взятия
крови пробирку следует плавно несколько раз перевернуть
стр. 17 из 41
--- стр. 18 ---
вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась
с антикоагулянтом.
Допускается хранение образцов до предварительной
подготовки/ПЦР-исследования:
- при температуре от 18 до 25 °С - в течение 2 ч;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 72 ч с момента
взятия материала.
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!
Слюна
Перед получением слюны следует провести полоскание
полости рта водой. Слюну забирать в стерильные сухие
пробирки объемом 2,0 мл или в пластиковые стерильные
контейнеры объемом 50-60 мл в количестве не менее 0,5 мл.
Допускается хранение образцов исследуемого материала до
предварительной подготовки/ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 “С - в течение 24 часов;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - до 3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Мазки со слизистой оболочки ротоглотки
Взятие мазка проводят при помощи сухого стерильного зонда
с тампоном вращательными движениями с поверхности небных
дужек и задней стенки ротоглотки.
После взятия мазка рабочую часть зонда помещают в
стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной
среды для хранения и транспортировки респираторных мазков.
Аккуратно обламывают полистирольную палочку на расстоянии
не более 0,5 см от рабочей части и оставляют рабочую часть
зонда с биологическим материалом в пробирке. Пробирку с
раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Допускается хранение образцов исследуемого материала до
предварительной подготовки/ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 72 часов;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - до 3 месяцев;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
стр. 18 из 41
--- стр. 29 ---
ФОРМА 1. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов
ПЦР-исследования
Конт
роль
Контролиру
емый этап ^
ПЦР-иссле-
дования
----------------------— ----- ------ ------ ,Ш I. I ...I ---1
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора {Ct)
FAM JOE ROX
ПК Экстракция
ДНК
опоеделено меньше
опоеделено меньше
граничного; значение
концентрации
укладывается в
диапазон
опоеделено
меньше
граничногограничного
ОК Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует
опоеделено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует
К1 ПЦР
опоеделено
значение C fи
расчетная
концентрация
опоеделено значение
C t и расчетная
концентрация
опоеделено
значение C t и
расчетная
концентрация
К2 ПЦР
опоеделено
значение C t и
расчетная
концентрация
опоеделено значение
C t и расчетная
концентрация
опоеделено
значение C t и
расчетная
концентрация
ВН И М АНИ Е! Граничные значения Ct и диапазон концентрации
ПКО HHV7 указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение
порогового цикла (Ct) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JO E и/или R O X отсутствует или превышает граничное
значение. Необходимо повторить ПЦР-исследование,
начиная с этапа экстракции ДНК, для всех образцов.
2. Рассчитанная концентрация ПКО HHV7 не укладывается в
диапазон, указанный во вкладыше, необходимо повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, начиная с этапа
экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК);
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JO E
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
стр. 29 из 41
--- стр. 30 ---
ФОРМА 1. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
б)
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК;
по каналу для флуорофора R O X значение лорогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых микроорганизмов, начиная с этала
экстракции ДНК.
Для отрицательного контроля П Ц Р (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JO E и/или R O X определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминяция
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значения
порогового цикла (Ct) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 12). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
При проведении количественного ПЦР-исследования
коэффициент корреляции R при построении калибровочной
прямой менее 0,98. Необходимо проверить правильность
заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 30 ИЗ 41
--- стр. 31 ---
ФОРМА 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участка ДНК ВГЧ-7 с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» -
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь HHV7-Lyo Порошок белого цвета — 96 пробирок
объемом 0,2 мл
К1 HHV7 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.5 1 пробирка
К2 HHV7 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.5 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 2 пробирки
ПКО HHV7 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.1 1 пробирка
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕИ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью HHV7-Lyo
для амплификации ДНК исследуемых и контрольных
образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых
образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированной с
помощью комплектов реагентов для проведения экстракции
методом магнитной сепарации, необходимо избегать
попадания сорбента в реакционную смесь.
стр. 31 из 41
--- стр. 37 ---
ФОРМА 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров FAM и/или JO E
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора R O X значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых микроорганизмов, начиная с этапа
экстракции ДНК.
4. Для отрицательного контроля П Ц Р (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JO E и/или R O X определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
5. Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значения
порогового цикла (Ct) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 16). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. При проведении количественного ПЦР-исследования
коэффициент корреляции R^ при построении калибровочной
прямой менее 0,98. Необходимо проверить правильность
заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
стр. 37 из 41
--- стр. 38 ---
ФОРМА 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 38 из 41
--- стр. 39 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-
100 FN хранить в холодильных камерах при температуре от 2
до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-Н и ПЦР-смеси-FL HHV7. ПЦР-
буфер-Н и ПЦР-смесь-FL HHV7 хранить в морозильных
камерах при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL HHV7 хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С.
ПЦР-смесь /-//-/V7-Lyo хранить (до растворения) в пакетах с
влагопоглотителем в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Н1овогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru^°.
^ Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amDlisens.ru .
стр. 39 из 41
--- стр. 40 ---
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения)
закон од ател ьство м.
в соответствии действующим
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Директор
ГБУЗ М О МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amDlisens.ru .
стр. 40 из 41
--- стр. 43 ---
Система для проведения
монокапельной цифровой ПЦР QX100
QX100 droplet ридер
Руководство по эксплуатации
--- стр. 44 ---
ОБЗОР 1
ОБОРУДОВАНИЕ 1
ПРОГРАММНОЕ О Б ЕС П ЕЧ ЕН И Е-d d P C R 4
- Работа ddPCR 5
- Анализ результатов 7
ТАБЛИЦА ИНДИКАЦИИ ИНДИКАТОРА СОСТОЯНИЯ 10
ОЧИСТКА 10
КОНТРОЛЬ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ 10
ОБСЛУЖИВАНИЕ Ю
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ И ТРЕБОВАНИЯ 11
Общие данные 11
- Технические данные 11
- Расходные материалы и номера деталей 11
Требования по вентиляции 12
- Электротехнические требования 12
• Описание соединений 12
- Безопасность использования 13
- Удаление и утилизация отходов 13
- Опасные ситуации 14
- Обозначения 14
--- стр. 45 ---
ОБЗОР
НАЗНАЧЕНИЕ ОБОРУДОВАНИЯ:
Q X100 droplet ридер обеспечивает анализ капель с помощью программного
обеспечения ddPCR , которые были получены путем использования Q X100 droplet
генератора, а затем подвергнуты амплификации до конечной точки в стандартном
термоциклере. Q X100 droplet ридер использует 96-луночные планшеты с капельной
эмульсией в каждой лунке, загружает капли поочередно из каждой лунки, а затем
выводит амплитуду данных для точного подсчета каждой капли с использованием
программного обеспечения ddPCR.
Сопутствующая компьютерная информация
A. УЧЕТНЫЕ ДАННЫЕ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ
На компьютере, поставляемом с этой системой, имеется две учетные записи данных.
Первоначально следует запустить систему согласно учетным данным пользователя.
Учетная запись администратора предоставляется для установки программного
обеспечения и внесения изменений в сетевые установки.
* Пользователь: Местная учетная запись не администратора, отсутствие
пароля
* Администратор: Местная учетная запись администратора для установки
программного обеспечения и обновлений.
B. ПРИЛОЖЕНИЯ И УСТАНОВКИ
Приложения на компьютере настроены так, чтобы обеспечить безопасность данной
системы, хотя это не оказывает влияния на характеристики датчика капель.
* Антивирус: Установлена программа Free Microsoft Security Essentials.
* Обновления операционной системы Windows; Установлена автоматическая
загрузка, но установка сопровождается предварительным запросом.
ОБОРУДОВАНИЕ
QX100 Droplet ридер
A. ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ QX100 DROPLET РИДЕРА
• Плашка для ПЦР на 96-лунок, заклеенная пленкой из фольги.
• Масло для droplet ридера
B. ПРИНЦИП РАБОТЫ QX100 DROPLET РИДЕРА
1. Включение питания droplet ридера (ДК). Время ожидания для прогрева ДК 30 минут.
--- стр. 46 ---
2. Проверка индикаторов на передней панели для подтверждения того, что в масляном
резервуаре достаточное количество масла и в приемнике менее 400 мл. Это очень
важно для завершения работы (Рис. 1). С Ь й tiril
Рис 1 См. таблицу индикации индикатора состояния (Стр. 10)
При необходимости добавления какой-либо жидкости или удаления отходов
выдвинуть каретку (Рис, 2) и осторожно открыть бутыль, удерживая одной рукой верх
(или крышку), а другой поворачивая кольцо. Эту операцию выполняют двумя руками.
Ogji.
Рис 2
Выдвинуть
I
3. Поставить в держатель плашку, затем верхнюю часть держателя расположить на
плашке сверху (Рис. 3). Это следует выполнить с помощью фиксирующих язычков
сбоку, отогнув их вверх.
I- - - - -1
Рис. 3
--- стр. 53 ---
ТАБЛИЦА ИНДИКАЦИИ ИНДИКАТОРА СОСТОЯНИЯ
ДАТЧИК КАПЕЛЬ
ш я
—
й
ilHSlUsst о«о оо
Темно-синий Включено Уровень бутыли
ОК
Планшета на
месте
Полный
рабочий цикл
Мерцающий синий —
Уровень масла
меньше 20%
или отходы
превышают 80%
— В работе
Мерцающий
янтарный —
Уровень масла
меньше 5%
или отходы
превышают 95%
— Ошибка во
время работы
Off (выключено) Выключено i — Нет
планшеты Не работает
ОЧИСТКА
Может потребоваться общая чистка поверхностей прибора. Для общей протирки
прибора использовать только ионизированную/дистиллированную воду. Для удаления
загрязнений можно использовать 10% хлорную известь, а также 70% этанол и/или
ионизированную/дистиллированную воду. Не использовать ацетон или водопроводную
воду.
КОНТРОЛЬ и ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ
Профилактическое обслуживание не требуется. Регулярно проверять оборудование на
предмет повреждения внешних компонентов, проводов или трубок с жидкостью. В
случае повреждений не использовать.
А
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ; Использование прибора или относящихся к нему деталей не предписанным в
руководстве образом может быть опасно.
ОБСЛУЖИВАНИЕ
6 случае неисправностей позвоните, чтобы запланировать визит мастера по
обслухшванию. Для замены предохранителей, пробника или трубок позвоните, чтобы
запланировать визит мастера по обслуживанию.
10
--- стр. 54 ---
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ И ТРЕБОВАНИЯ
26 дюймов
16664 М 1Л )
20.5 ДЮЙМОВ
(520.69 мм)
I Общие данные
Вес Высота Ширина Длина
56.6 фунта 11.5" 20.5" 26"
(25.67 к г) (292.09 мм) (520.69 мм) (660.4 мм)
Технические данные
Температура Отметка высоты Влажность
15 “ С-30“ С 0-8000 футов 85% макс.
(без конденсации)
Расходные материалы
Наименование
QX100 droplet ридер
Держатель для QX100 droplet ридера
Масло для QX100 droplet ридера 1 л
Набор реагентов
Бутыль для отходов/масла из полиэтилена высокой плотности
(ПЭВП)1л
11
--- стр. 55 ---
Требования по вентиляции
Слева и справа от прибора должно быть 5" свободного пространства для правильной
вентиляции. Позади прибора должно быть 10" свободного пространства для правильной
вентиляции и доступа в случае аварийного отключения. С левой стороны прибора у
датчика калель имеется съемная панель, для которой требуется;
* Многократный доступ
* Минимум 8" для выполнения действий
Требования по электрочасти
Стандартная местная номинальная мощность:
100-240 В пер. тока (50/60 Гц)
1.8/0.9А(115/230 Впер.тока)
Тип предохранителя: 5 А/250 В пер. тока Тип 5НТ (5x20 мм)
А
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: Необходимо регулярно проверять кабели и при повреждении не использовать.
Не путать все поставляемые кабели.
Описание соединений
Номер детали: ETS240250UTC-P5RP-SZ, Вход: 100-240 В, 50-60 Гц/1.5 А, Выход; 24 В/2.5
А
1. USB 2.0 Тип штекера USB (на приборе) Standard-B, USB 2.0 Тип штекера USB
(на компьютере) Standard-A. Кабели предоставляются.
2. Стандарт США NEMA 5-15/CSA 22.2, №42). Рассчитан на 15 ампер при 125
вольт.
12
--- стр. 56 ---
Безопасность использования
При работе с маслами и плашками с образцами рекомендуется правильное применение
перчаток. Согласно требованиям 0$Н А (Управление США по охране труда и
промышленной гигиене) к средствам индивидуальной защиты, изложенным в Своде
федеральных правил (CFR) в 29 CFR1910.132 (Общие требования); 29 CFR 1910,138
(Защита рук); 29 CFR 1926,95 (Критерии для стандартных средств индивидуальной
защиты).
Следует выбросить или заменить любые перчатки с нарушенной защитной
способностью. При принятии рещения повторного использования перчаток,
подвергаемых химическому воздействию, учитывать токсичность химических веществ и
такие факторы, как продолжительность воздействия, хранения и температуры.
Правильный выбор перчаток при работе с приборами, пробами, маслами и очищающими
растворителями.
* Перчатки Butyl; изготовлены из синтетической резины и защищают от
пероксида, фтористоводородной кислоты, сильных щелочей, альдегидов и
кетонов.
* Перчатки из натуральной (латекс) резины: удобные при носке и отличаются
повышенной прочностью на разрыв, эластичностью и термостойкостью.
* Неопреновые перчатки; изготовлены из синтетической резины и отличаются
хорошей эластичностью, удобством для пальцев, высокой плотностью и
прочностью на разрыв, воздействие спиртов, органических кислот и щелочей.
* Нитриловые перчатки; изготовлены из сополимера и обеспечивают защиту от
хлорированных растворителей, таких как трихлорэтилен и тетрахлорэтан. Они
защищают при работе с маслами, смазками, кислотами и каустиками.
Отходы и утилизация
ВАЖНО: Планшеты droplet ридера генерируют 250 мл отходов масла на планшету.
При работе с накопившимися отходами и их удалении следует применять стандартные
практики M SD S (сертификат безопасности материала) и OSHA.
Генерирование и учет жидкостей QX100 droplet основаны на химии фторированных
углеводородов, которые следует удалять в соответствии с институциональными,
государственными и местными нормами. Эти негорючие жидкости отличаются
инертными свойствами, низким воздействием на экологию и невысокой токсичностью.
Отходы можно собирать в контейнеры ПЭНД, и в течение 1 месяца их следует
утилизировать. Капли, созданные смесительным устройством QuantaLife, отличаются
антимикробными свойствами, но со временем может наблюдаться рост микробов.
Рекомендуемые параметры отходов включают следующее; фторированные
углеводороды, воду, флюоресцентный краситель (от пробоотборников), протеиновая и
нуклеиновая кислоты.
S
ПРИМЕЧАНИЕ: Для предотвращения роста микробов добавить в отходы 50 мл 10%-го раствора
хозяйственной хлорной извести.
13
--- стр. 57 ---
Опасные ситуации
Оставить свободное пространство 10" сзади датчика капель. В случае непредвиденного
отключения выключатель питания, расположенный на задней панели прибора рядом с
силовым кабелем, отключит его от источника питания.
Обозначения
Знак C S A
Знак CSA указывает на то, что изделие, процесс или услуга
протестированы Канадской ассоциацией по стандартизации или
Соединенных Штатов, и отвечают требованияы действующего
Канадского стандарта.
Fg Знак FC C
Это оборудование протестировано и соответствует ограничениям
Класса А цифровых устройств согласно Части 15 Правил
Федеральной комиссии связи США(РСС). Эти ограничения
разработаны для обеспечения разумной защиты от вредных помех
при эксплуатации оборудования в коммерческой среде. Это
оборудование генерирует, использует и может излучать
радиочастотную энергию и. если оно установлено и используется в
соответствии с инструкциями изготовителя, может вызывать
вредные помехи для радиосвязи. Эксплуатация данного
оборудования в жилой зоне может вызывать помехи, и в этом случае
пользователь должен устранить их за свой счет.
X
W E E E
Символ Предписания по Утилизации электрического и электронного
оборудования указывает на то. что. когда конечный пользователь
хочет выбросить данный продукт, его следует направить на
отдельный объект сбора отходов для утилизации и переработки.
О
ВАЖ НО
Этот символ обозначает информацию, которая имеет решающее
значение для успеха вашего эксперимента и требует особого
уведомления или повторения.
А
П РЕД УПРЕЖ Д ЕН И Е
Этот символ используется для указания на то, что несоблюдение
инструкций или процедур может привести к физическим травмам или
повреждению оборудования.
1 П РИ М ЕЧАН И Е
Этот символ обозначает, что доступны сторонние обстоятельства,
которые могут способствовать успеху вашего эксперимента.
14
--- стр. 60 ---
Система для проведения
монокапельной цифровой ПЦР QX100
QX100 droplet генератор
Руководство по эксплуатации
Каталог № 1863002
--- стр. 61 ---
QX100 DROPLET ГЕНЕРАТОР
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
РАБОТА QX100 DROPLET ГЕНЕРАТОРА
ЗАКЛЕИВАНИЕ
ТАБЛИЦА ИНДИКАЦИИ ИНДИКАТОРА СОСТОЯНИЯ
ОЧИСТКА
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ И ТРЕБОВАНИЯ
Общие данные
Технические данные
- Требования по вентиляции
- Электротехнические требования
- Описание соединений
Безопасность использования
- Отходы и утилизация
- Обозначения
9
9
10
10
10
10
10
11
11
12
12
--- стр. 62 ---
Наша основная цель- ответить вам на любые
вопросы по данной технологии.
Если вам нужна помощь, позвоните нам или отправьте электронное лисьмо.
QX100 DROPLET ГЕНЕРАТОР - НАЗНАЧЕНИЕ ОБОРУДОВАНИЯ:
Система QX100 Droplet Digital™ PCR предназначена для лроведения
монокалельной цифровой ПЦР с высочайшей точностью и достоверностью
результатов.
Эта система состоит из Q X100 droplet генератора и Q X100 droplet ридера. в
котором измеряется флюоресценция в каждой калле.
Монокапельная цифровая ПЦР осуществляется в четыре последовательных
этапа. Сначала 20 мкл каждого из восьми подготовленных образцов помещаются
в картридж Q X 1 00 droplet генератора. Затем в соответствующие каналы
картриджа заливается масло, и наполненный картридж устанавливают в Q X 1 00
droplet генератор, где образцы и масло соединяются для получения эмульсии -
20000 капель монодисперсных нанолитров для каждого из 8 подготовленных
образцов. Эмульсионные образцы переносятся на стандартную 96-луночную
плашку для ПЦР амплифицируются до конечной точки с помощью стандартного
термоциклера. После завершения цикла плашка загружается в Q X100 droplet
ридер.
Ридер автоматически загружает каждый образец, разделяет капли и по одной
направляет их через детектор флюоресценции со скоростью 1000 капель в
секунду. Ридер детектирует каждую каплю по очереди и определяет, какие капли
содержат мишень (1), а какие кет (0).
--- стр. 70 ---
Рис. 13
Когда ппаншета правильно
заклеена, на фольге видны следы
вдавливания покрытых лунок (Рис.
13). Это визуальное
подтверждение является
решающим для вашего
эксперимента.
ВАЖНО Термоциклиование начать в течение 30 мин. после заклеивания планшеты.
m
ПРИМЕЧАНИЕ Перед началом теплового цикла планшету можно хранить при 4 “ С до
четырех часов.
ТАБЛИЦА ИНДИКАЦИИ ИНДИКАТОРА СО СТО ЯНИ Я
Генератор капель
(Ь
Темно-синий Питание включено Держатель DG8
установлен Полный рабочий цикл
Мигающий синий — — Создание капель
Мигающий янтарный —
Нет уплотнителя,
пустая лунка или не'
заклеено
Лунка с маленьким
объемом
Off (выключено) Питание выключено Нет держателя DG8 Не работает
ОЧИСТКА
Может потребоваться общая чистка поверхностей прибора. Для общей
протирки прибора использовать только ионизированную/дистиллированную
воду. Для удаления загрязнений можно использовать 10% хлорную известь, а
также 70% этанол и/или ионизированную/дистиллированную воду. Не
использовать ацетон или водопроводную воду.
ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖ ИВАНИЕ
Профилактическое обслуживание не требуется. Регулярно проверять
оборудование на наличие поврежденных компонентов или проводов. В случае
повреждений не использовать.
--- стр. 71 ---
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ И ТРЕБОВАНИЯ
(127 чи,
11 flK M fJoe
(279.4 ш(1
14ак1н'1о*|»9S9»«i|
Общие данные
Вес Высота Ширина Длина Требования по
электрочасти
4 54 к г 5" 14" 11" 100-240 В. 50/60 Гц
(127 мм) (355 59 мм) (279.4 мм) 60 Вт
Технические данные
Температура Отметка высоты Влажность
15‘С-ЗО X 0-8000 (Jjyroe 65% макс
(без конденсации)
Требования по вентиляции
Слева и справа от прибора должно быть 5" свободного пространства для правильной
вентиляции.
Электротехнические требования
Стандартная местная номинальная мощность
Вольт: 100-240 В, Частота: 50/60 Гц, Мощность: 60 Ватт
Q X100 droplet генератору требуется 1 стандартная электрическая розетка с силовым
заземлением. До подключения оборудования пользователь должен убедиться, что
заземление правильно работает.
10
--- стр. 72 ---
Описание соединений
№ детали; ETS240250UTC-P5RP-SZ. Вход: 100-240 В, 50-60 Гц/1.5 А. Выход: 24 В/2.5 А
1. Штепсель США Стандарт 3 к соединителю С5 (10 АЛ 25 В)
2. Блок питания для штепселя силового входа пост, тока 5 мм.
А
ПРЕДУПРЕЖ ДЕНИЕ Использовать ТОЛЬКО источники электропитания, предоставленные компанией Bio-
Rad для этого оборудования.
Безопасность использования
При работе с маслами и плашками для образцов рекомендуется применение перчаток.
Согласно требованиям OSHA (Управление США по охране труда и промышленной
гигиене) к средствам индивидуальной защиты изложенным в Своде федеральных
правил (CFR) в 29 CFR1910.132 (Общие требования), 29 CFR 1910,138 (Защита рук): 29
CFR 1926.95 (Критерии для стандартных средств индивидуальной защиты).
Следует выбросить или заменить любые перчатки с нарушенной защитной
способностью. При принятии решения повторного использования перчаток,
подвергаемых химическому воздействию, учитывать токсичность химических веществ и
такие факторы, как продолжительность воздействия, хранения и температуры.
Правильный выбор перчаток при работе с приборами, пробами, маслами и очищающими
растворителями.
* Перчатки Butyl: изготовлены из синтетической резины и защищают от
пероксида, фтористоводородной кислоты, сильных щелочей, альдегидов
и кетонов.
* Перчатки из натуральной (латекс) резины: удобные при носке и
отличаются повышенной прочностью на разрыв, эластичностью и
термостойкостью.
* Неопреновые перчатки: изготовлены из синтетической резины и
отличаются хорошей эластичностью, удобством для пальцев, высокой
плотностью и прочностью на разрыв, воздействие спиртов, органических
кислот и щелочей.
* Нитриловые перчатки: изготовлены из сополимера и обеспечивают
защиту от хлорированных растворителей, таких как трихлорэтилен и
тетрахлорэтан. Они защищают при работе с маслами, смазками,
кислотами и каустиками.
11
--- стр. 73 ---
Отходы и утилизация
При работе с накопившимися отходами и их удалении следует применять стандартные
практики MSDS {сертификат безопасности материала) и OSHA.
Генерирование и учет жидкостей QX100 droplet ридером капель основаны на химии
фторированных углеводородов, которые следует удалять в соответствии с
институциональными, государственными и местными нормами. Эти негорючие жидкости
отличаются инертными свойствами, низким воздействием на экологию и невысокой
токсичностью.
Отходы можно собирать в контейнеры ПЭНД, и в течение 1 месяца их следует
утилизировать. Капли, созданные смесительным устройством, отличаются
антимикробными свойствами, но со временем может наблюдаться рост микробов.
Рекомендуемые параметры отходов включают следующее: фторированные
углеводороды, воду, флюоресцентный краситель (из проб), белок и нуклеиновые
кислоты. Генератор капель не предназначен для использования с биологически
опасными материалами.
Опасные ситуации
Оставить свободное пространство 26 см сзади QX100 droplet генератора. В случае
опасной ситуации отсоединить прибор на задней панели от источника питания.
Обозначения
c '^ u s
знак CSA
Знак CSA указывает на то. что изделие, процесс или услуга протестиромны
Канадской ассоциацией по стандартизации или Соединенных Штатов . и
отвечают требованиям дойсгвуощего Канадского стандарта
F© знак FCC
Это оборудование протестировано и соответствует ограничениям Класса А
цифровых устройств согласно Части 15 Правил Федеральной комиссии связи
США (FCC) Эти ограничения разработаны для обеспечения разумной защиты
от вредных помех при зксллуатеции оборудования в коммерческой среде. Это
оборудование генерирует использует и может излучеть радиочастотную
энергию и. если оно установлено и используется в соответствии с
инструкциями изготовителя, может вызывать вредные помехи для радиосеятн
Эксплувтация данного оборудования в шлой зоне может вызывать помехи и в
этом случав пользователь должен устранить их за свой счет.
ж
WEEE
Символ Предписания по Утилизации электрического и эпепронного
оборудования указывает на то. что. когда конечный лользоватепь хочет
выбросить данный продукт, его следует направить на отдельный объект сбооа
отходов для утилизации и переработки
о ВАЖНО Этот символ обозначает инфорнвцию. которая имеет решающее значение для
успеха вашего эксперимента и требует особого уведомления ипи повторения.
А ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ
Этот символ используется для указания на то, что несоблюдение инструкций
или процедур может привести к физическим травмам или повреждению
оборудования.
Ш ПРИМЕЧАНИЕ Этот символ обозначает, что доступны сторонние обстоятельстве, которые
могут способствовать успеху вашего зкслеримента
12
--- стр. 74 ---
Авторское право © 2011 Bio-Rad Laboratories, Inc.
Воспроизведение настоящей документации в любом
виде, печатном или электронном, запрещено без
письменного разрешения компании Bio-Rad
Laboratories, Inc.
У в е д о м л е н и е п о к у п а т е л я о н а л и ч и и л и ц е н з и и
Настоящий базовый блок, серийный ном ер ______________,
предоставляет ограниченный иммунитет от привлечения к суду
без права передачи на всю деятельность заказчика, связанную с
внутренними исследованиями и разработками, а также с
применением в областях, защищенных патентом С Ш А № 5 475 610
(только патентные заявки 1,44,1 5 8 ,1 6 0-1 6 3 ) или
соответствующими формулами изобретения в неамериканских
аналогах, принадлежащих компании Applera Corporation. Права не
подлежат передаче в прямой форме или подразумеваемым
образом любым другим патентным притязаниям на аппаратуру,
реагенты, экипировку или методы, например анализы с
использованием 5' нуклеазы. Для получения более подробной
информации о приобретении лицензионных прав свяжитесь с
директором по лицензированию компании Applied Biosystem s no
адресу: 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California, 94404, USA.
Настоящий продукт защищен одним или более следующими
патентами США, их иностранными аналогами или заявленными
патентами, принадлежащими компании Eppendorf AG; Патенты
СШ А
№ 6 767 512 и 7 074 367.
--- стр. 76 ---
У Т В Е Р Ж Д А Ю
Директор Ф едерального бю дж етного
учреждения науки «Ц ентральны й
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Ф едеральной
служ бы по надзору в сф ере защ иты
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 211 «Положительный
контрольный образец, содержащий
ДНК вируса герпеса человека 7 {HHV7)»
(СОП № 211 ПКО ДНК HHV7)
tJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
--- стр. 77 ---
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
L
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 211 «Положительный контрольный образец, содержащий
ДНК вируса герпеса человека 7 {HHV7)» (С О П № 211 ПКО Д НК HHV7), далее по
тексту С О П . предназначенного для проведения испытаний методом полимеразной
цепной реакции (П Ц Р) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией набора
реагентов АмплиСенс® НН\/7-скрин/монитор-Р1.
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности С О П Nq 211 ПКО ДНК HHV7
проводят путем внешнего осмотра.
2 М ЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с С О П и при постановке П Ц Р следует соблюдать положения М У
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе всегда следует выполнять
следующие требования;
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защ ищ ать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖ АЮ Щ ЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМ Ы Е ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытываемому набору реагентов.
3.2Реагенты из испытываемого набора реагентов.
3.3Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 ®С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с С О П и дать
нагреться до комнатной температуры. С О П должен представлять собой
прозрачную жидкость, не содержащую каких-либо включений или примесей.
Оценить визуально.
--- стр. 78 ---
5.1 Содержимое пробирки с С О П перемешать и осадить капли на вортексе.
Открыть пробирку и, используя наконечник с аэрозольным барьером, отобрать
необходимый объем (см. следующий пункт), пробирку закрыть.
5.2 Приготовить разведения, указанные в ТУ / методике испытаний набора
реагентов, с использованием ТЕ-буфера, приложенного к С О П .
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
Разведения готовить по следующей схеме;
1) исходный препарат, имеющий концентрацию ЫхЮ"^, развести N-кратно до
ближайшего разведения 10"^с коэффициентом 1 (Ix lO ” ^).
Разведение провести согласно расчету, с использованием следующих формул;
Nx10^/1x10^=N(1)
C/N =A (2)
С -А = В (3). где
МхЮ "' - исходная концентрация С О П № 211 ПКО ДНК HHV7,
IxlO"^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
копий/мл,
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного С О П . который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего С О П в концентрации 1x10"’, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ТЕ-буфера, который необходимо взять для приготовления С мкл
раствора, содержащего С О П в концентрации Ix lO "’, ближайшего к исходной
концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий С О П в концентрации Ix lO "’.
2) Полученный препарат С О П с концентрацией Ix lO "’ копий/мл развести
последовательно десятикратно до получения первого разведения С О П с
концентрацией, указанной в ТУ / методике испытаний набора реагентов;
3) Из полученного первого разведения С О П с коэффициентом 1, приготовить
последующие разведения, указанные в ТУ/методике испытаний, путем
последовательных двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
Например, С О П № 211 ПКО ДНК HHV7 имеет концентрацию 1,5*10® копий/мл.
Необходимо приготовить разведения с концентрациями; 1,0*10^, 1,0*10®, 1,0*10® и
5,0*10^ копий/мл.
Маркируют пробирки «А», «В», «С» и «О».
В пробирку «А» последовательно вносят автоматической микропипеткой,
используя наконечники с аэрозольным барьером, 933 мкл ТЕ-буф ера и 67 мкл
исходного С О П №211 ПКО ДНК HHV7. При внесении С О П в буфер пипетируют
вносимый реагент не менее 5 раз, тщательно перемешивают и осаждают на
вортексе.
В пробирку «В» последовательно вносят автоматической микропипеткой,
используя наконечники с аэрозольным барьером, 990 мкл ТЕ-буф ера и 10 мкл из
пробирки «А». При внесении С О П в буфер пипетируют вносимый реагент не
менее 5 раз, тщ ательно перемешивают и осаждают на вортексе.
В пробирку «С» последовательно вносят автоматической микропипеткой,
используя наконечники с аэрозольным барьером, 990 мкл ТЕ-буф ера и 10 мкл из
пробирки «В». При внесении С О П в буфер пипетируют вносимый реагент не
менее 5 раз, тщ ательно перемешивают и осаждают на вортексе.
--- стр. 86 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИН.
Комплект реагентов выпускается в 2 формах комплекгации:
Форма 1 включает комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 50.
Форма 2 включает комплект реагентов «РИЬО-преп» вариант 100.
СОСТАВ,
Ко.мплскт реагсчгги» «РИВО-прен» вариант 50 или вариант 100 - комплект решентов для
вьгделения 1’НК/ДНК из клинического материа.та включасг:
вариант 50 т а Ш ю о _ ...]Реактив Описание Объём
(мл) Кол-во Объём
(лт) Кол-во
Раствор для лнзпея 11розрачиая жидкое i ь
голубого цвета’ 15 1 флакон 30 1 флакон
Раствор для
преципитации
Прозрачная
беецнешая жидкость 20 1 флакон 40 1 флакон
Раствор для
огмывки 3
Пfнv^paчнaя
бссцветая жидкость 25 1 флакон 50 1 флакон
Раствор для
от мывки 4
Прозрачная
беспнегная жидкост ь 10 1 1 флакон 20 1 флакон
РНК-б>фср 11розрачная
бссциешая жидкость 1.2 j 4 пробирки U 8 пробирок
Комплект реагентов вариант 50 рассчитан на выделение РИК'ДНК из 50 проб, включая
контроли.
Комплект реагентов вариант 100 раеечитан на вьщеление РПЮДИК из 100 проб, включая
контроли.
ВНИМАНИЕ! В работе исибхолилю испильзова гь контрольные образцы - ОКО, ВКО,
ПКО -для тех инфекционных aiсигов, РНК7ДНК которых необходимо выявить.
НАЗНАЧЕНИЕ.
Комплект реагентов «РИВО-иреи» прслшпначен ;ьтя выделения тотальной РНК/ДНК из
клиническою .ма1ериала (плазмы периферической крови, ликвора, а.мниотической жидкости,
мазков из носа, зева, слюны) для последующею анализа методо.м обратной транскрипции и
полимеразной цепной реакции.
ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА 1 РЛНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ПРОВ.
Перед начатом работы с.тедуст ознакомиться с методическими рекомендациями «Взятие,
транспортировка, хранение клинического матсриата для ПЦР-диагностики». подготовленными
ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнаиора. Москва, 2008 г.
--- стр. 87 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОС1 и.
Необходимо строго соб.под^пь «Прави.Еа устройства, техники безопасности,
прошводсгвеииин санитарии, 11рогиво>1иисмического режима н личной гигиены при
работе в лаборагорних (игделеииих, отделах) са1штарии>Э1111демиилог11ческ11Х учреисдений
системы здравоохранении СССР», Москва, 1981 г.
Работать только в одноразовых перчатках, использовать и менять при каждой операции
одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером. Одноразовую пластиковую
посуду (пробирки, накопочиики) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий лс'шнфшшруюпшй 0,2 % раствор ДП-2Т.
ДОПОЛНИ I ЕЛЬИЫЕ М.\ ГЕРИЛ М >1 И ОЬОРУДОВЛНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ВЫДЕЛЕНИЯ ДИК7РНК Ш 1ПЧ)Б.
(с указанием фирм-пронзиоди телей/иостанщикив):
1. Ламинарный бокс (например. «БЛВп-01-«Ламинар-С>ь1,2», «Ламинарные системы», Россия,
класс биологической безопасности II тип ,Л).
2. Термостат Д-ля пробирок типа «Оппенлорф» от 25 до 100 °С (например. «ТЕРМО 24-15»,
«Ьиоком». Россия).
3. .Микроцсн'гриф>та д;1я пробирок типа «Эппсидорф» до 16 тыс об/мин (например, «Elmi»,
Латвия, «Hettish», Германия).
4. Вортекс (например, «ТЭТЛ-2», «Биоком», Россия).
5. Вакуумный огсасьмштель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной
жидкости (например, «ОМ-1», г. У.тьяпоиск. Россия).
6. Набор электронных и;ш .ме.чанинеских дозаторов пере.менного объема (напри.мср,
«Ленпипс!», Россия).
7. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
микропробирки объе.мом 1,5 мл (например, «Axygen», СШЛ).
8. Одноразовые наконечники для дозагоров переменного объема с аэрозольным барьеро.м до
200 и до 1000 мкл (например. «Axygen». США).
9. Одноразовые накоиечникн для дозаторов нсременното объема до 10 и 200 .мкл (нацри.мер,
«Axygen», СШЛ}.
10. Штативы для микронробирок объе.мом 1.5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия) и
наконечников (например, «Axygen», США).
11. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.
12.Отдельный .\а.1ат и одноразовые перчатки,
13. Емкость с дезинфишфуюшим расi вором
ВНИМАНИЕ! При pauoic с РНК псобхидн.мо нспо.зьзовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные маюрна.Еы, и.меющие специальную .маркировку
«RNa.se-free», «DNase-free».
При хранении рас 1 вора дзя лизиса при темперазуре oi 2 до 8 ®С возможно образование осадка в виде криста.'иов.
--- стр. 88 ---
ПРОВЕДЕПИК АИЛЛПЗЛ.
1. Раствор дли Л 1П11са (ссл-и он хранился при температуре от 2 до 8 °С) ripoipexb при
температуре 65 °С до полного рас пюреиия кристаллов,
2. Отобрать необходимое количество одноратовых пробирок на 1,5 мл с плотно
закрывающимися крышками (включая отрицательный и положительный контроли
выделения). Внести в каждую пробирку по 10 мкл ВКО (если он предусмотрен для анализа
данного возбудителя ипфекцшп. Добаншь в пробирки по 300 m k ;i раствора для лизиса.
Промаркировать пробиркь.
3. В пробирки с paci'KopoM дли литси и ВКЧ) (если использугтея), внести по 100 мкл
подготовленных проб, используя наконечники е аэрозольным барьером. Б пробирку
отрицательною контроля (ОК) выле.зеиия внести 100 мкл ОКО. В пробирку
положительного контроля (1П\) выделения нисети 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО (если он
предусмотрен л.тя анализа данного иозочдителя ннфекцин).
4. Содержимое пробирок и.гпелмю перемешать на вортексе. нроцентрифу1ировать в течение
5 с на микроцеи'трифугс д.ти удаления капель е внуфснней поверхности крышки и прогреть
5 мии при 65 °С в тср.москдо.
5. Добавить в пробирки по 400 ,>«кл распзора для прсииптации. перемешать на вортексе.
6. Процептрифугировать нроЗнркн на микроцеитрнфуге в течение 5 мин при 13 тыс об/мин.
7. Лккура’тпо отобрать налосадомиую жидкость, не задевая осадок, используя вакуумный
отсасыватель и 01делыи>а. aaKvjHeHHHK на 200 мкм Х1Я каждой пробы.
8. Добавить в пробирки но 500 мкм pact нора для игмьшки 3. плотно закрыть крышки,
осторожно промыть oea,To.v, переворачивая пробирки 3-5 раз. Можно провести процедуру
одновре.менно для всех пробирок. ;ыя з им о необходимо накрыть пробирки в штативе сверху
крышкой или другим ш гат ' прижать их и переворачивать штатив.
9. Процентрифутнровать при > ыс об/.мпн н течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
10.Осторожно, нс захваты . ^..дж. oioGpaib иа.и)садочную жидкость, используя вакуумный
отсасыватель и отлельн1ан .нсчнпк на 10 мкм /шя каждой пробы.
11. Добавить в пробирки но 200 ,мкл paciBopa .ин ог.мывки 4, плотно закрыть крышки и
осторожно промыть оехчок, переворачивая пробирки 3*5 раз.
12. Процентрифупфовать при I." iыс об/мнн в 1ече*нис 1-2 .мии на микроценгрифуге.
13. Осторожно, не захватывая . еадок, отобрать иадосадочную жидкость, используя вакуумный
отсасыватель и отле.зьп.л:'’ . печник на 10 m k . i л .т я каждой пробы.
14. Поместить пробирки в те, >с1.л ijpn ic.Miieparypc 65 °С на 5 .мин ;ыя подсушивания осадка
(при зтом KpianiKH пробирч ; до.тжны быть открыты).
15. Добавить в пробирки по ;"0 m k . i lMIK-буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в
термостат при темперылр 65 на 5 мин. пернодически встряхивая на вортексе.
Допускается при необхоли', е:н увс.тнченис объема з.тюции до 90 мкл.
16. Процентрифугнровап. про^гр' и при 13 тыс об/мнн в течение 1 мин на микроцентрифую.
Падосадочиая жилкоель l lep.Mii ечшценпые 101К и ДИК. Пробы готовы к постановке
реакции обрашой транекр .цин и П1 [\\
Очищенная РПК'ДПК может .раниться до 24 ч при температуре от 2 до 8 ®С и до года при
температуре нс выше минус 16 '
--- стр. 91 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» ^^^^^ейералыюй
служб^^^Э№а>^^зору в сфере
за^^м^^-^^И^^^ггребителей и
| ^ ^ ^ ^ В.ИЛ1окровский
4;4"'<v;.....:*■'
ИНСТРУКЦИЯ
по применению комплекта реагентов
для выделения РНК/ДНК из клинического материала
«МАГНО-сорб»
АмплиСенс
mJ
Федеральное бюджетное >-чреждение науки
« Центра.'! ь мы Л на>-мно*исследовательскнП инепплт
7 П И Д С М И 0 : 1 0 Г ! 1 И » .
Российская Федерацля. 111123.
город Москва, улица Новогиреевская, дом За IVD
--- стр. 92 ---
НАЗНАЧЕНИЕ.
Комплект реагентов предназначен для выделения (экстракции) РНК/ДНК из плазмы
крови человека для последующего исследования на наличие вирусов гепатитов В и С, вируса
иммунодефицита человека и других инфекций методом ПЦР (полимеразной цепной
реакции).
ПРИНЦИП МЕТОДА ЭКСТРАКЦИИ.
Клинический образец обрабатывается лизирующим раствором в присутствии частиц
магнетизированной силики (магнитного сорбента). В результате происходит деструкция
клеточных мембран, вирусных оболочек и других биополимерных комплексов и
высвобождение нуклеиновых кислот (НК). Растворенная НК связывается с частицами
сорбента, в то время как другие компоненты лизированного клинического материала
остаются в растворе и удаляются при осаждении сорбента на магнитном штативе и
последующей отмывкой. При добавлении раствора для элюции НК к магнитному сорбенту
происходит переход НК с поверхности носителя в раствор, который затем отделяется от
частиц сорбента магнитной силой. В результате указанной процедуры получается
высокоочищенный препарат НК. свободный от ингибиторов реакции амплификации, что
обеспечивает высокую аналитическую чувствительность ПЦР-исследования.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ.
Комплект реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплект реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-200.
Форма 2 1жлючаег комплект реагенгов «МАГНО-сорб» вариант 100-1000.
Форма 3 включает комплекты реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с
маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Форма комплектации 3 предназначена для производственных целей для последующей
маркировки на языке заказчика и комплектации по комплектам.
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 3 используется только в соответствии с регламентом,
утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
--- стр. 93 ---
С0С1ЛВ.
Комплек! реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-200 или вариант 100-1000 — комплект
реагентов для выделения РНК/ДНК из клнническо1*о материала - включает:
Реактив Описание
Вариант 100-2йО Шттпт ш -ю о о
Объем
(ш) Кол-во Объем Кол-во
Л|П11ру10Щ11Й раствор
МАГНО-сорб
Прозрачная
бесцветная жидкость' 25 4 флакона 70 4 флакона
Компонент А Прозрачная
бесцветная жидкость 0,3 4 пробирки 0,6 4 пробирки
Раствор для отмывки 5 Прозрачная
бесцветная жидкость' 60 4 флакона 60 4 флакона
Раствор для О тмывки 6 Прозрачная
бесцветная жидкость 20 4 флакона 20 4 флакона
Раствор для отмывки 7 Прозрачная
бесцветная жидкость 6,0 4 флакона 6,0 4 флакона
Магнетизированная
силика
Суспензия черного
цвета 0,6 4 пробирки 0,9 4 пробирки
Буфер для элюции Прозрачная
бесцветная жидкость 1.2 12 пробирок 1,2 12 пробирок
Комплект реагентов вариант 100-200 рассчитан на экстракцию РНК/ДНК из 100 проб,
включая контроли. Объем исследуемого материала 200 мкл.
Комплект реагентов вариант 100-1000 рассчитан на экстракцию РНК/ДНК из 100 проб,
включая контроли. Объе.м исследуемого материала 1000 .мкл.
ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ПРОБ.
Перед началом работы следует ознакомиться с методическими рекомендациями «Взятие,
транспортировка. хранение клинического материала для ПЦР-диагиостикн».
подготовленными ФГУП ЦНИИЭ Роспотребнадзора. Москва. 2008г.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
Работа должна проводиться в лаборатории, вьтолняюшей молекулярно-биологические
(ПЦР) исследования клинического .материала на наличие возбудителей инфекционных
болезнен, с соблюдением санитарпо-эпндс.мических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами 111-IV групп патогенности (опасности) и возбудителя.ми
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицински.ми отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-
09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых
кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности».
При хранении лизирующего раствора и раствора .ъзя отмывки 5 при температуре ниже 20 ®С возможно
образование осадка в виде кристаллов.
--- стр. 94 ---
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя
лезинфицнр>зощне средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
• 11сиспользованные реактивы, реактивы с истекшим сроком годности, а также
использованные реактивы следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН
2.1.7.2790-10 «Санитарио-эпидемиолошческие требования к обращению с
медицинскими отхода.ми».
- 11римснять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
- Нс использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время
работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании работы.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно
промыть пораженное место водой н обра1и п>ся за медицинской помощью.
- Листы безопасности материалов (MSDS - material safety data sheet) доступны по
запросу.
ДОПОЛНИТЕЛЬПЫК МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ЭКС ГРАКЦИИ ДНК/РНК Ш ПРОБ.
(с указанием фирм-производптсмсП / пос гавшиков):
1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы».
Россия, класс биологической безопасности II тип А).
2. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком». Россия).
3. Набор электронных или механических дозаторов пере.менного объема с возможностью
дозирования от 1 до 1000 .мкл (напри.мср. «Ленпипст». Россия).
4. Штативы для пробирок (например. «ИшсрЛабСервис», Россия) и наконечников
(например, Axygen, США).
5. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до 200 и до
1000 .мкл (например, Axygen. США).
6. Термостат для пробирок объемом 5 мл. лиа.мезром 12 мм, с 1емпературой ог 25 до 100 ®С
(например, BioSan, Латвия)
4
1
--- стр. 95 ---
7. Термостат для гфобирок типа «Эппенлорф» с температурой от 25 до 100 ®С (например,
UioSan. Латвия).
8. Магнитный штатив для пробирок типа «Эппенлорф» объемом 1,5 мл (напри.мер,
Promega, США).
9. Магнитный штатив для пробирок объемом 5 мл. диаметром 12 мм (например, Promega,
США).
10. Вакуумный отсасыватель мелицнпскнн с колбой-ловушкой для удаления падосадочной
жидкости (например, «ОМ-Ь>, г. Ульяновск. Россия).
11. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл (например. Axygen. США).
12. Одноразовые полипропиленовые или полис гирольные пробирки объемом 5 мл
диаметром 12 мм, круглодонные (например. Axygen. CLIJA).
13. Одноразовые полипропиленовые крышки дтя пробирок объемом 5 мл диаметром 12 мм
(например, Axygen, США).
14. Электронный или механический дозатор переменного объема с возможностью
дозирования от 1000 до 5000 мкл (напри.мер, «Леипипет», Россия).
15. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл, до 1000 мкл и
до 5000 мкл (например, Axygen, США).
16. Холодильник от 2 до 8 °С.
17. Отдельный халат и одноразовые перчатки.
18. Емкость с дезипфнцируюшнм раствором.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
(проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обрабизки ириб).
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо ис 1юльзова 1Ь только одноразовые
езерильные плаешковые расходные материалы, имеющие сиеииальную маркировку
RNase-free, DNase-free.
Экстакиия из 1000 мк .1 образца плазмы.
Порзщок работы.
1. Лизирующий раствор МАГНО-сорб и раствор для озмывки 5 прогреть при темперагуре
60 ®С до полного растворения кристаллов.
2. Подготовить необходимое количество одноразовых пробирок объемом 5 мл и
одноразовых крышек (включая отрицательный и положительный контроли экстракции) и
промаркировать их.
3. При экстракции ДПК/РНК из 24 образцов:
а) во флакон с лизирующим раствором МАПЮ-сорб (70 мл) внести необходимое
количество содержимого из пробирки с ВКО (если он предусмотрен для анализа
5
--- стр. 96 ---
данного во'юудшеля инфекции), все содержимое пробирки с компонентом А (0,6 мд)
и все содержимое пробирки с MariieTiniiponaiiiioO силикон (0,9 мл).
б) закрыть крышку флакона и аккуратно перемешать переворачиванием 5-7 раз, избегая
образования пены.
в) внести в пробирки на 5 мл по 2,6 мл подгоговлешюй смеси лизирующего раствора
МЛГНО-сорб, ВКО, компонента А и магиетизироваинон енликн.
4. При экстракции ЛНК/РНК мснсс чем из 24 образцов:
а) смешать в отдельной стерильной пробирке на 1,5 мл ВКО (если он предусмотрен для
анализа данного возбудителя инфекции), компонент А и магнетизированную
сн.шку из расчета на одну точку 10 мкл ВКО. 20 мкл Компонента А и 30 мкл
Маг-иети'шроватюй снлики. При расчете необходимо учитывать запас - рассчизывазь
на одну точку больше, например:
Киличесгио образцов ВКО, мкл Компонент А, Магнетизнроканцаи
дли ЭК<ГГШ11ШШ1 РНК мкл спиткя. мкл,
6 70 ЫО 210
12 130 260 390
18 190 380 570
б) виеези в пробирки на 5 мл по 60 мкл подготовленной смеси ВКО, Компонента А и
Магнетизированной силики.
в) внести в пробирки на 5 мл по 2,6 мл ,'iiuiipyioiucro раствора МА1’НО-сорб.
5. Добавить в каждую пробирку с лизир>тошим раствором 1 мл исследуемого образца
плазмы, перемешать пипетированнем. закрыть крышкой.
6. В случае если это предусмотрено для анализа данного возбудителя, необходимо
поставить положигельиыи контроль (ПК). Для этого в пробирку с лизирующим
расз'вором добавить 1 мл соответствующего ПКО. Если предусмотренный объем ИКО
менее 1 мл, необходимо довести объем, используя ОКО. Перемешать нипетирование.м.
закрыть крышкой.
7. Д; 1я каждой панели необходи.мо поставить oipiiuaie,ibiibin контроль (ОК). Для этою в
пробирку с лизирчтощнм раствором добавить 1 мл ОКО, перемешать пипетированнем.
закрыть крышкой.
8. По.местить пробирки в термостат с температурой 60 ®С на 10 мин.
9. Перенести пробирки в магнитный штатив на 6 мни.
10. Но внутренней стенке пробирки осторожно отобрать налосадочн>то жидкость, используя
вакуумный отсаеыватель и отдельный наконечник без фильтра на 1000 мкл для каждой
пробы. Перенеез и пробирки в обычный штатив.
11. Добавить в пробирки по 700 мкл раезвора .иш отмывки 5. пробирки закрыть крышкой.
12,Отобрагь необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая
озрицательный и положизельный контроля экстракции) и промаркировать их.