Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека методом полимеразой цепной реакции (ПЦР) в реальном времени «artus® HBV RG PCR Kit» для диагностики in vitro — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 4 --- I ■ ■ ^ s m s * --- стр. 5 --- Оглавление 1. Наименование изделия.......................................................................................................... 3 2. Назначение изделия.............................................................................................................. 3 3. Описание целевого аналита................................................................................................. 4 4. Тип анализируемого образца............................................................................................... 4 5. Описание изделия и компоненты состава........................................................................... 4 6. Комплект поставки............................................................................................................... 5 7. Необходимые (но не предоставляемые) материалы для проведения анализа................6 8. Принцип действия................................................................................................................7 9. Условия хранения, эксплуатации и транспортирования, стабильность изделия .............7 10. Сбор и подготовка материалов для исследования.........................................................8 11. Выделение вирусной ДНК................................................................................................8 12. Внутренний контроль.......................................................................................................9 13. Установка порогового значения для анализа ПЦР..........................................................9 14. Количественный анализ....................................................................................................9 15. Предупреждения и меры предосторожности.................................................................10 16. Ограничения на применение изделия..............................................................................10 17. Меры предотвращения контаминации и меры индивидуальной защиты ...................10 18. Меры индивидуальной защиты........................................................................................11 19. Перечень лекарственных средств, материалов животного и (или) человеческого происхождения............................................................................................................................11 20. Характеристики изделия..................................................................................................11 20.1. Технические характеристики изделия....................................................................11 20.2. Функциональные характеристики изделия............................................................12 20.2.1. Испытание сероконверсионных образцов.......................................................12 20.2.2. Надежность.........................................................................................................12 20.2.3. Диапазон линейности........................................................................................12 20.2.4. Предел обнаружения.........................................................................................13 20.2.5. Аналитическая специфичность (кросс-реактивность) ...................................14 20.2.6. Интерферерирующие вещества........................................................................15 20.2.7. Прецизионность.................................................................................................15 20.2.8. Диагностическая оценка...................................................................................15 2Г. Протокол ПЦР и анализ данных......................................................................................15 22. Требования к техническому обслуживанию и ремонту...............................................23 23. Маркировка ...................... 23 24. Требование к охране окружающей среды......................................................................23 25. . Сведения об утилизации изделия...................................................................................23 26. Сведения о производителе изделия................................................................................24 27. Гарантийные обязательства.............................................................................................24 28. Претензии по качеству.....................................................................................................24 29. Руководство по устранению ощибок..............................................................................24 30. Индекс редакции...............................................................................................................26 --- стр. 6 --- 1. Наименование изделия Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека методом полимеразой цепной реакции (ПЦР) в реальном времени «artus® HBV RG PCR Kit» для диагностики in vitro, в вариантах исполнения: 1. Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека методом полимеразой цепной реакции (ПЦР) в реальном времени <шг1изФ HBV RG PCR Kit» для диагностики in vitro, на 24 образца, в составе: - Контроль внутренний HBV RG/TM 1C, 1000 мкл - 1 флакон. - Вода для ПЦР, 1 мл - 1 флакон. - Реагент HBV RG/TM Master, 360 мкл - 2 флакона. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 1, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 2, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 3, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 4, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 5, 200 мкл - 1 флакон. - Инструкция по применению - 1 шт. 2. Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека методом полимеразой цепной реакции (ПЦР) в реальном времени aartus® HBV RG PCR Kit» для диагностики in vitro, на 96 образцов, в составе: - Контроль внутренний HBV RG/TM 1C,1000 мкл -2 флакона. - Вода для ПЦР, 1 мл - 1 флакон. - Реагент HBV RG/TM Master, 360 мкл - 8 флаконов. - Материал контрольный HBV RG/1'М QS 1, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 2, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 3, 200 мкл - I флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 4, 200 мкл - 1 флакон. - Материал контрольный HBV RG/TM QS 5, 200 мкл - 1 флакон. г Инструкция по применению - 1 шт. 2. Назначение изделия «Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека методом полимеразой цепной реакции (ПЦР) «artus® HBV RG PCR Kit» для диагностики in vitro» предназначен для амплификации нуклеиновых кислот методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени в целях количественного определения ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме человека. Показания Изделие используется как вспомогательное средство для оценки реакции вируса гепатита В на антивирусную терапию. Данные анализа следует использовать в совокупности с результатами других медицинских и диагностических обследований Область применения Клиническая лабораторная диагностика. Противопоказания При использовании специально обученным персоналом и с учетом применения по назначению противопоказания не выявлены. 3 --- стр. 11 --- После вскрытия упаковки изделие сохраняет стабильность при хранении в рекомендуемых условиях (-30°С до - 15®С), при этом допускается только 2 цикла разморозки/заморозки компонентов, входящих в состав изделия. При хранении при температуре от 2 до 8®С изделие сохраняет стабильность в течении не более 5 часов. Стабильность Хранение при температуре от -30 до -15 °С До конца срока годности (23 месяца) Хранение после вскрытия флаконов при температуре от -30 до -15 °С До конца срока годности (23 месяца) Максимальное количество циклов размораживания не более 2 Хранение при температу'ре от 2 до 8 °С Не более 5 часов 10. Сбор и подготовка материалов для исследования ® Все образцы следует считать потенциально инфекционным материалом. Для анализа с использованием набора рекомендуется использовать образцы человеческой плазмы, стабилизированные ЭДТА (соли этилендиаминтетрауксусной кислоты). Сбор и подготовка образцов Любой процесс взятия крови приводит к повреждению кровеносных сосудов (артерий, вен, капилляров). Следует использовать только нетоксичный и стерильный материал. Венозную кровь следует отбирать в соответствующих участках локтевого сгиба, предплечья или с тьиьной стороны ладони. Отбор крови должен производиться с помощью стандартных пробирок для сбора образцов. Следует отбирать кровь с ЭДТА в объеме 5-10 мл. Непосредственно после отбора образца пробирки следует перемещивать переворачиванием вверх дном (8 раз, не встряхивать). Обработка м хранение образцов Цельную кровь необходимо сепарировать на плазму и клеточные компоненты в течение 6 часов после забора посредством центрифугирования в течение 20 минут при 800-1600 х g. Выделенную плазму переносят в стерильные полипропиленовые пробирки. Количественный анализ на HBV рекомендуется проводить сразу после подготовки пробы. Чувствительность анализа может снижаться, если образцы повторно замораживать. Выделенная ДНК вируса стабильна в течение минимум одного дня при температуре хранения 4°С, в течение трех недель при температуре хранения -20^С и в течение двух месяцев температуре хранения при хранении при -70°С. Перевозка образцов Материал образца следует перевозить в ударопрочном транспортном контейнере, чтобы избежать потенциального риска инфицирования из-за утечки образца. Образцы необходимо транспортировать согласно местным и национальнььм инструкциям по перевозке материала. Не рекомендуется хранить образцы в том месте, в котором они были собраны. После сбора, образцы следует отправлять в место проведения исследования в течение 6 часов. Транспортировку образцов крови необходимо производить в охлаждённом состоянии (2- 8^’С). а сепарированную плазму в глубокой заморозке (от -15 до -30°С). 11. Выделение вирусной ДНК Для вьщеления вирусной ДНК рекомендуется использовать набор реагентов QlAamp DSP Virus Spin Kit. производства QIAGEN. Данный набор прошел валидацию на выделение вирусной ДНК из образцов крови человека для применения совместно с набором реагентов artus® HBV RG PCR Kit. Выделение вирусной ДНК надо проводить согласно инструкции по применению набора QlAamp DSP Virus Spin Kit. 8 --- стр. 12 --- Возможно использование наборов для вьщеления вирусной ДНК HBV других производителей, обеспечивающих отсутствие ингибирования и соответствующие качество и чистоту ДНК, пригодные для последующего использования в ПЦР методе. 12. Внутренний контроль «Контроль внутренний HBV RG/TM 1C,1000 мкл» (внутренний контроль, 1C) входит в состав изделия. Он используется как для контроля процесса вьщеления ДНК гепатита В из образца, так и для выявления возможного ингибирования ПЦР. При вьщелении ДНК гепатита В из образца внутренний контроль используют в соотношении 0,1 мкл на 1 мкл элюирующего объема. Например, при использовании набора QIAamp DSP Virus Spin Kit. ДНК элюируется в 60 мкл элюирующего буфера (AVE). Следовательно, изначально следует добавлять 6 мкл «Контроля внутреннего HBV RG/TM 1C, 1000 мкл». Количество используемого внутреннего контроля зависит только от элюирующего объема. Внутренний контроль не следует добавлять напрямую в материал образца, он добавляется только в смесь буфера для лизиса (AL) и материала образца или непосредственно в буфер для лизиса (AL). При добавлении в буфер для лизиса (AL) обратите внимание, что должна быть приготовлена свежая смесь 1C и буфера для лизиса (АЬ)/носителя РНК, которая должна быть использована немедленно (хранение смеси при комнатной температуре или в холодильнике всего в течение нескольких часов может привести к ошибке внутреннего контроля и снижению эффективности экстракции). «Контроль внутренний HBV RG/TM 1СЛ000 мкл» также используется для проверки на возможное ингибирование ПЦР. В целях такого применения необходимо добавлять 1C непосредственно в «Реагент HBV RG/TM Master, 360 мкл», как описано в этапе 2Ь протокола ПЦР . 13. Установка порогового значения для анализа ПЦР Пороговое значение — это значение сигнала, превышающее произвольный уровень флуоресценции, выбранный на основе базовой линии. Сигнал, который обнаружен выше порога, считается реальным сигналом, который можно использовать для определения порогового цикла (Ct) для образца. Значение этого параметра необходимо задавать при каждом анализе данных. Оптимальные настройки пороговых значений для комбинации аппарата Rotor-Gene Q' и набора реагентов artus® HBV RG PCR Kit следует задавать эмпирически, посредством испытания каждой отдельной комбинации, поскольку это относительная величина, зависящая от общей диагностической технологии. Для начала пороговое значение можно установить предварительно на 0.04 для анализа первого запуска ПЦР, но это значение необходимо настроить в сравнительном анализе следующих запусков технологического процесса. Пороговое значение следует устанавливать вручную непосредственно выше фонового сигнала отрицательных контролен и отрицательных образцов. Пороговое значение обычно будет находиться в диапазоне 0.03-0.05 и должно быть округлено не более чем до тысячных. 14. Количественный анализ Для определения концентрации аналита в каждом из измеренных образцов используют кривую стандартов. Для получения кривой используют Материал контрольный HBV RG/TM QS, который входит в состав изделия. Вирусная нагрузка в стандартах количественного определения указана в МЕ/мкл. Для пересчета значений в МЕ/мл необходимо использовать следующее уравнение: Результат /МЕ\ Результат х Элюирующий объем(мкл) \мл/ Объем образца ( мл) --- стр. 13 --- По общему правилу, в представленном выше уравнении необходимо указывать исходный объем образца. Это необходимо учитывать, когда объем образца был изменен до выделения нуклеиновой кислоты (например, уменьшение объема центрифугированием или увеличение объема добавлением объема элюирования). 15. Предупреждении н меры предосторожности Пользователь всегда должен обращать внимание на следующие аспекты: - Используйте стерильные наконечники пипеток с фильтрами - При работе с химическими веществами, всегда необходимо одевать лабораторный халат, одноразовые перчатки и защитные очки; - Положительные материалы (образцы, положительные контроли и ампликоны) необходимо хранить и обращаться с ними отдельно от других реактивов, а также добавлять их в реакционную смесь в отдельном помещении; - Пред использованием, необходимо тщательно размораживать реагенты при комнатной температуре (15-25°С); - После размораживания компоненты необходимо перемешать (многократным перемешиванием в пипетке движениями вверх и вниз или пульсационным перемешиванием) и центрифугировать в течение короткого времени. - При работе, реагенты необходимо хранить на льду или на охлаждающем блоке (загрузочном блоке на 72/96 лунки). - Организация работы ПЦР- лаборатории, оборудование и материалы должны соответствовать Методическим указаниям МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности». 16. Ограничения на применение изделия - Изделие предназначено в качестве вспомогательного диагностического средства для подтверждения наличия инфекции HBV и оценки реакции вируса гепатита В на антивирусную терапию. Данные анализа следует использовать в совокупности с результатами других медицинских и диагностических обследований. - Изделие может использоваться исключительно для диагностики in vitro. Изделие может применяться только квалифицированным персоналом (обученными лаборантами или врачами клинической лабораторной диагностики). Изделие не предназначено для самоповерки. - Для получения оптимальных результатов ПЦР обязательно строгое соблюдение инструкции по применению изделия. - Использование изделия с истекшим сроком годности запрешается. - Образцы, собранные в пробирки с содержанием гепарина в качестве антикоагулянта, использовать не следует. Также не следует использовать образцы пациентов с гепаринизированной кровью. - Иногда мутации в высококонсервативных участках вирусного генома, на которые распространяются праймеры и/или зонды из набора, могут не позволять выявлять наличие вируса или приводить к недостаточному количественному определению. Валидность и эффективность конструкции набора и анализа проходят регулярный пересмотр. 17. Меры предотврашення коптамннацнн и меры индивидуальной защиты Меры предотвращения контаминации Все этапы работы необходимо проводить в раздельных помещениях с изолироваой системой вентиляции или тщательно изолированных зонах,снабженных комплею-ами пипеток, халатами, всеми необходимыми расходными материалами и оборудованием: - Зона № 1 для работы с геномной ДНК (выделение ДНК, пробоподготовка); - Зона № 2 «чистая» для подготовки ПЦР (изолированная от источника ДНК); 10 --- стр. 14 --- - Зона № 3 для внесения ДНК; - Зона № 4 для манипуляций с ПЦР-продуктом. ПЦР амплификаторы не должны располагаться в зонах № 1 — №3. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов переменного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запрещается их перемещение между рабочими местами. Необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных образцов. Работать только в одноразовых неопудренных перчатках и в спецодежде. Приготовление реакционной смеси и выделение ДНК следует проводить в ПЦР-боксах. Все лабораторное оборудование, в том числе автоматические дозаторы, штативы, лабораторная посуда, халаты и пр., а также растворы реагентов не должны перемещаться из одной зоны в другую. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирующими средствами с последующей утилизацией. 18, Меры индивидуальной защиты Зашита кожи рук Во избежание попадания на кожу используются защитные одноразовые перчатки медицинские, без талька, текстурированные. Bamiaa глаз Во избежание попадания в глаза используются заш»ггные или лабораторные очки. Защита тела Надевайте лабораторный халат и специальную обувь, защищающую от химических веществ Зашита органов дыхания В обычных условиях при использовании изделия зашита органов дыхания не требуется. В случае плохой вентиляции помещения и длительной работы с изделием вопрос о респираторной заш1гге решается квалифицированным специалистом. Средства гигиены Храните вдали от продуктов питания и напитков. При использовании запрещается принимать пишу, напитки или курить Меры зашиты Не допускается попадание компонентов изделия в канализацию и окружающей среды водоемы. Примечание - Набор реагентов не содержит материалов биологического происхождения, веществ, обладающих канцерогенным, мутагенным действием, а также влияющих на репродуктивную функцию человека. При использовании по назначению и соблюдении мер предосторожности является безопасным. 19. Перечень лекарственных средств, материалов животного и (нлн) человеческого пропсхожденнн Лекарственные средства: не используются. Материалы человеческого происхождения: не используются. Материалы животного происхождения: не используются 20. Характеристики изделия 20.1. Технические характеристики изделия Характеристика Вариант исполнения изделия На 24 образца На 96 образцов Масса флакона с контролем внутренним HBV RG/TM 1C, 1000 мкл, г (±5%) 2,581 Масса флакона с водой для ПЦР, 1000 мкл, г (±5 %) 2,581 Масса флакона с реагентом HBV RG/TM Master, 360 мкл, г (±5 %) 1,941 Масса флакона с материалом контрольным HBV RG/TM QS 1, 200 мкл, г (±5 %) 1,781 11 --- стр. 15 --- Масса флакона с материалом контрольным HBV RG/TM QS 2, 200 мкл, г (±5 %) 1,781 Масса флакона с материалом контрольным MBV RG/TM QS 3, 200 мкл, г (±5 %) 1,781 g Масса флакона с материалом контрольным HBV RG/TM QS 4, 200 мкл, г (±5 %) 1,781 g Масса флакона с материалом контрольным HBV RG/TM QS 5, 200 мкл. г (±5 %) 1,781 g Масса пустого флакона, г (±5 %) 1,581 Герметичность флаконов Герметично Внешний вид Реагенты набора artus® HBV RG PCR Kit представляют собой прозрачную бесцветную жидкость, без осадка и взвешенных твердых частиц 20.2. Функциональные характеристики изделия 20.2.1. Испытание сероконверсионных образцов Изделие проявляет одинаковую эффективность при тестировании образцов до и после сероконверсии пациента, инфицированного HBV. Эффективность изделия была проверена на коммерческих панелях конверсии, производства BBI Boston Biomedica Inc. Образцы панелей конверсии были дополнительно протестированы с использованием референтного набора для выявления ДНК HBV COBAS AMPLICOR® HBV MONITOR Test, производства Roche Diagnostics. Результаты ПЦР-анализа показали, что изделие определяет все образцы до и после сероконверсии. Набор реагентов artus HBV RG PCR Kit может быть использован для обнаружения вируса как в образцах, не содержащих антител, т.е. в образцах до сероконверсии. так и в образцах, содержащих антитела к вирусу гепатита В. 20.2.2. Надежность Надежность изделия > 99%. Надёжность изделия была проверена на 100 HBV- отрицательных образцах (ЭДТА- плазма) и 100 HBV- положительных образцах (HBV (код NIBSC: 96/798) разведенный в ЭДТА-плазме с получением вирусной нагрузкой 3.00 Е+01 МЕ/мл). Результаты ПЦР-анализа с использованием изделия показали, что все 100 HBV- отрицательные образцы были определены как отрицательные и все 100 HBV - положительные образцы были определены как положительные. Случаи ингибирования не наблюдались. 20.2.3. Диапазон линейности Для определения диапазона линейности, в качестве образца использовали линейку разведений стандартного материала, содержащего HBV, производства Acrometrix. с начальной вирусной нагрузкой 2,0 х 10^ МЕ/мл. Линейка разведений стандартного материала, охватывает диапазон от 2,0 х 10^ МЕ/мл до 3,6 МЕ/млх 00 МЕ/мл. Для вьщеления вирусной ДНК из образцов использовали набор QIAamp DSP Virus Spin Kit, производства QIAGEN. Испытание каждого разведения проводилось в 8 повторах на приборе Rotor-Gene 6000. Линейный диапазон, полученный на приборе Rotor-Gene 6000, охватывает интервал от 31,6 МЕ/мл до 2,0 х МЕ/мл. Графическое изображение линейного диапазона, полученного на приборе Rotor- Gene 6000 представлено на рисунке ниже. 12 --- стр. 16 --- ft t0t«9v-0»17 •jooe*oo LOG 10 номинальной концентрации (МЕ/мл) I—imw <ммь»»п1) 1 Рис.1 Графическое изображение результатов пробит - анализа (программа PriProbit). Предел обнаружения изделия при анализе образцов на приборе Rotor-Gene 6000. 20.2.4. Предел обнаружения Предел обнаружения изделия составляет 10,22 МЕ/мл с 95% доверительным интервалом 7,21-16,85 МЕ/мл. Для определения предела обнаружения подготавливали линейку разведений М еждународного стандарта HBV ВОЗ*(код; 97/750), добавленных в клинические образцы HBV-отрицательной ЭДТА плазмы. Линейка разведений стандарта, охватывала диапазон от 316 МЕ/мл до 0,1 МЕ/мл. Для выделения вирусной ДНК из образцов, использовати набор QIAamp DSP Virus Spin Kit, производства QIAGEN. Испытание каждого разведения проводилось в четырех запусках в 8 повторностях на приборе Rotor-Gene 6000. Результаты рассчитывались с помощью пробит-анализа. Графическое изображение результатов пробит-анализа, полученных на приборе Rotor-Gene 6000, представлено на рисунке ниже. --- стр. 17 --- Рис. 2 Графическое изображение результатов пробит - анализа (програм.ма PriProbit). Предел обнаружения изделия на приборе Rotor-Gene 6000. 20.2.5. Аналитическая специфичность (кросс-рсактивность) Клинически уместные уровни патогенов в концентрациях, представленных в таблице 2, которые потенциально могут быть обнаружены в образцах плазмы, не провоцируют возникновение ложноположительных результатов при использовании набора реагентов artus'^ HBV RG PCR Kit. Испытания показали, что все образцы содержащие прочие патогены, кроме HBV, не провоцируют ложноположительных результатов и определяются как HBV- отрицательные при использовании изделия. Таблица 2. Контрольная группа патогенов Патоген Концентраиия Вирус герпеса человекаЗ 2.29Е * 06 копий/мл(ЦИТОМЕГАЛОВИРУС) Вирус герпеса человека 1 (Вирус простого герпеса Herpes simplex virus 1)1,60Е + 08 копий/мл Вирус герпеса человека 2 (Вирус простого герпеса Herpes simplex virus 2) 3.40Е + 06 копий/мл Вирус ветряной оспы (Varicella-zoster virus) МОЕ+ 06 копий/мл ВИРУС ГЕПАТИТА С 8.30Е + 05 МЕ/мл ВИРУС ГЕПАТИТА А 2.00Е + 08 копий/мл ВИЧ 1 1.36Е+03 МЕ/мл Т- лимфотропный вирус-1 1.00Е +06 копий/мл Т- лимфотропный вирус-2 1 .ООЕ + 06 копиГ1/мл Парвовирус В 19 1.00Е+08 МЕ/мл Денге, тропическая лихорадка 1 >1.00Е+06 копий/мл Денге, тропическая лихорадка 2 >1.00Е+06 копий/мл Денге, тропическая лихорадка 3 >1.00Е+06 копий/мл Денге, тропическая лихорадка 4 >1.00Е+06 копий/мл Вирус Коксаки ВЗ 2.00Е+06 копий/мл EBV/вирус герпеса 2.00Е+06 копий/мл 14 --- стр. 19 --- ■ Перед началом анализа тщательно разморозьте все компоненты при комнатной температуре (15-25®С) ■ Храните компоненты на льду или в холодильном блоке. ■ Внимательно ознакомьтесь с Rotor-Gene Q перед началом выполнения протокола. См. руководство по эксплуатации аппарата. ■ Убедитесь, что, как минимум, один стандарт количественного определения, а также один отрицательный контроль (вода, пригодная для ПЦР) включены в каждый запуск ПЦР. Чтобы начертить стандартную кривую, используйте все предоставляемые 5 стандартов количественного определения (HBV RG/TM QS 1-5) для каждого запуска ПЦР. Действия, которые необходимо выполнить перед началом процедуры ■ Убедитесь, что охлаждающий блок (вспомогательное оборудование к аппарату Rotor-Gene Q) был предварительно охлажден до 2-8°С. ■ Перед каждым применением все реактивы необходимо полностью разморозить, смешать (многократным перемешиванием в пипетке движениями вверх и вниз или быстрым перемешиванием в вортексе) и центрифугировать в течение короткого времени. Процедура 1. Поместите желаемое количество пробирок для ПЦР в адаптеры охлаждающего блока. 2. Если Вы используете внутренний контроль для наблюдения за процедурой выделения ДНК и проверки на возможное ингибирование ПЦР, выполняйте этап 2а. Если Вы используете внутренний контроль исключительно для проверки на ингибирование ПЦР, выполните этап 2Ь. 2а. Внутренний контроль уже был добавлен в процесс вьщеления (см. раздел «Внутренний контроль»). В этом случае приготовьте мастер-микс в соответствии с Таблицей 3. Таблица 3. Приготовление мастер-микса (внутренний контроль используется для Количество образцов 1 12 HBV RG/TM Master 30 мкл 360 мкл HBV RG/TM IC 0 мкл 0 мкл каждый О.бщий объем 30 мкл 360 мкл каждый 2Ь. Внутренний контроль должен быть добавлен непосредственно в HBV RG/TM Master. В этом случае приготовьте мастер-микс в соответствии с Таблицей 4. Реакционная смесь, как правило, содержит все компоненты, необходимые для ПЦР, кроме образца. Таблица 4. Приготовление мастер-микса (внутренний контроль используется Количество образцов 1 12 HBV RG/TM Master 30 мкл 360 мкл HBV RG/TM IC 2 мкл 24 мкл Общий объем 32 мкл 384 мкл* * Увеличение объема по причине добавления внутреннего контроля не берется во внимание при приготовлении пробы ПЦР. Чувствительность системы обнаружения не снижается. 3. Используя пипетку, внесите 30 мкл в каждую пробирку для ПЦР. Далее добавьте 20 мкл элюированного образца ДНК (см. Таблицу 5). Соответственно, 20 мкл, по крайней мере одного из стандартов количественного определения (HBV RG/TM QS 1-5) необходимо использовать в качестве положительного контроля, и 20 мкл воды для ПЦР (вода, пригодная для ПЦР) в качестве отрицательного контроля. 16 --- стр. 20 --- 1 аблица 5. Приготовление пробы ПЦР Количество образцов 1 12 Мастер-микс 30 мкл 30 мкл каждый Образец 20 мкл 20 мкл каждый Общий объем 50 мкл 50 мкл каждый 4. Закройте пробирки для ПЦР. Убедитесь, что на верхнюю часть ротора помещено стопорное кольцо (вспомогательное оборудование к аппарату Rotor-Gene) для предотвращения случайного открытия пробирок во время запуска. 5. Для выявления ДНК HBV создайте температурный профиль в соответствии со следующими этапами. Настройка общих параметров анализа Рисунки 3, 4, 5 Первичная активация горячего запуска фермента Рисунок 6 Амплификация ДНК Рисунок 7 Корректировка чувствительности канала Рисунок 8 флуоресценции Начало запуска Рисунок 9 Во всех спецификациях >т<азано Программное обеспечение для Rotor-Gene Q версии 1.7.94. ПО для Rotor-Gene 6000 версии 1.7.65. 1.7.87, 1.7.94 и ПО для Rotor-Gene 3000 версии 6.0.23. Дополнительную информацию о программировании аппаратов Rotor-Gene можно найти в руководстве по эксплуатации аппарата. На этих иллюстрациях данные настройки обрамлены в жирную рамку. Представлены иллюстрации для аппаратов Rotor- Gene Q. Если требуются другие значения для. Rotor-Gene 3000, Вы сможете найти описание этих различий в тексте. 6. Вначале откройте диалоговое окно «Мастер нового запуска» («New Run Wizard») (Рисунок 3). Поставьте галочку в поле «Стопорное кольцо установлено» («Locking Ring Wizard») и нажмите «Далее» («Next»), New Run Wizard WeiccHM to the Advsnced Run WuMcfl RoKx Typ« Рисунок 3. Диалоговое окно «Мастер нового запуска». 7. Выберите 50 для объема реакции ПЦР и нажмите «Далее» (Рисунок 4). 17 --- стр. 21 --- New Run Wizard T ha к тв е п d tp le jn rntcetaneou t opbont ie i Ih* u t СоггфМе the M d i. cicfcffig Neset you are leac^ to move to the rw e page. Reacbon V okm e b iL t Sample Layout |1.гз 3 S k y W c a rd I « B e c k ThaboKcfaphyt heip on elem erts n the w e « d For heto on an tom. hover y o u m ouie over the Io n tor hekx You can a lto c ic k on a combo bOK to (fapiay M p about to avaiable ta ttng t Рисунок 4. Установка общих параметров анализа. 8. Нажмите кнопку «Редактировать профиль» («Edit Profile») в следующем диалоговом окне «Мастер нового запуска» (Рисунок 5) и запрограммируйте температурный профиль, как показано на Рисунках 5-7). ;:ewRun^Mzard Tem patalue РгоПе: Chanrwl Se tu p : Name S o u ce Detector G a b 1 Groan 47Drvn SlOrvn 5 Yelo»v UOrvn K 5 n m 5 Orange S e S m GlOnm 5 Red 625nm eeonm 5 Crtm on eSOrvn Л 0 1 Р 7 CreataHow ... £<Л.. E d lfia h ... fiem ove R eset Q efadU G a b Optimisation... ll2J This boK dtplay* h a b on elernenit n the ntzard For help on an item, hover y o u rrwute over the torn for help. You can ab o d c k on a com bo box to dbpiay h e b about ilt avaiable tettngt. S k ip W izard | « f la c k Рисунок 5. Редактирование профиля. 18 --- стр. 22 --- fV Edit Profilo New Open SeveAs He^ The run w i teAe approenale^ 107 minule(*) >o coffipU e The graph below repretent* the n n to be performed 1 below to modiy t l: Ineect after. Irueft before Remove 2 - KoUTtrrperetore: 95 J beg KoidTirrre: 10 ffins 0 j Mct I Ir3 Рисунок 6. Первичная активация горячего запуска фермента. Edit Profile Рисунок 7. Амплификация ДНК. Обратите внимание, что на Rotor-Gene 3000 программное обеспечение обозначает флуоресцентные красители как «FAM/Sybr, JOE». 9. Диапазон определения флуоресцентных каналов следует устанавливать в соответствии с интенсивностью флуоресценции в пробирках ПЦР. Нажмите «Оптимизация усиления» («Gain Optimisation») в диалоговом окне «Мастер нового запуска» (см. Рисунок 5), чтобы открыть диалоговое окно «Настройка автоматической оптимизации усиления» («Auto- Gain Optimisation Setup»). Установите температуру калибровки на 55 в соответствии с температурой отжига программы амплификации (Рисунок 8). 19 --- стр. 25 --- во флуоресцентном канале Cycling Green. NTC: no template control (отрицательный контроль). Рисунок 11. Определение внутреннего контроля (1C) во флуоресцентном канале Cycling Yellow с одновременной амплификацией стандартов количественного определения (HBV RG/TM QS 1-5). NTC: по template control (отрицательный контроль). 22 --- стр. 26 --- 22. Требования к техническому обслуживанию и ремонту Изделие одноразового применения, не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту. В случае порчи, изделие подлежит утилизации в соответствии с требованиями законодательства в стране применения 23. Маркировка На упаковке и этикетках могут присутствовать следующие обозначения:______________ I. <N> с аи IVD REF LOT МАТ (со м р | CONT GT1N Iу © Rn Содержит реагенты, достаточные для тестов <N> Смотрите инструкцию по применению Использовать до Для диагностики In vitro Каталжный номер Номер партии Номер материала Компоненты Содержит Глобальный торговый номер Ограничение по температуре Производитель Важно! Внимание R - версия инструкции, ап- номер пересмотра Приводит к 24. Требование к охране окружающей сред ы. Медицинское изделие при надлежащем использовании, транспортировке и хранении, не оказывает негативного воздействия на человека и окружающую среду. 25. Сведения об утилизации изделия Чтобы избежать возможного загрязнения окружающей среды, изделие с истекшим сроком годности, отходы использованных реагентов, а также, в случае видимых повреждений индивидуальной упаковки, изделие должно утилизироваться местнььми публично-правовыми организациями, в соответствии с требованиями местных нормативно-правовых актов и правилами утилизации в данном регионе. На территории Российской Федерации набор должен утилизироваться в соответствии с нормативными требованиями для отходов класса Б (как 23 --- стр. 27 --- эпидемиологически опасные отходы) в соответствии с действующими санитарными правилами и нормами в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21). 26. Сведения о производителе изделия Производитель: QIAGEN GmbH («КАЙДЖЕН ГмбХ»), Германия Адрес: Qiagen Str. 1, 40724 Hilden, Germany Телефон: +49-2103-29-0 Место производства: QIAGEN GmbH, Qiagen Strasse 1, 40724 Hilden, Germany 27. Гарантийные обязательства Компания КАЙДЖЕН ГмбХ (QIAGEN GmbH) принимает на себя гарантийные обязательства в отношении медицинского изделия по отсутствию дефектов и соответствию заявленным производителем характеристикам в течение срока годности, при соблюдении условий, указанных в инструкции по применению. Производитель не несёт ответственности за повреждения или несчастные случаи в результате неправильного использования, ошибки пользователя или внешних чрезвычайных ситуаций. По вопросам качества продукции обращайтесь к уполномоченному представителю производителя. 28. Претензии по качеству Адрес для приема рекламации: ООО «Кайджен РУС»; Адрес: 123112, г. Москва, Пресненская наб., д.6, стр.2, этаж 50, помещение 5001; Телефон: +7 (499) 703 15 56; e-mail: QiagenRUS@qiagen.com 29. Руководство ио устранению ошибок Настоящее руководство по устранению ошибок может стать полезным при решении любых возможных проблем. Дополнительную информацию также можно получить на странице «Часто задаваемые вопросы» на сайте нашего Центра технической поддержки по ссылке: www.qiagen.com/FAO/FAQList.aspx. Сотрудники службы технической поддержки QIAGEN ответят на любые вопросы, которые могут возникнуть у Вас либо об информации и протоколе, описанных в настоящем руководстве, либо о пробоподготовке и проведении анализа. Комментарии и рекомендации__________________________________________________ Сигнал с положительными контроля.ми (HBV RG/TM QS 1-5) во флуоресцентном а) Выбранный флуоресцентный канал для анализа данных ПЦР не соответствует протоколу Для анализа данных выберите флуоресцентный канал Cycling Green или Cycling A.FAM для аналитической ПЦР на HBV и флуоресцентный канал Cycling Yellow или Cycling A.JOE для ПЦР с внутренним контролем. Ь) Неверное программирование температурного профиля аппарата Rotor-Gene ® Сравните температурный профиль с протоколом. См. «Протокол: ПЦР и анализ данных». с) Неверная конфигурация ПЦР ® Проверьте этапы процедуры по схеме пипетирования и, при необходимости, повторите ПЦР. См. «Протокол: ПЦР и анализ 24 --- стр. 28 --- ¥ d) Условия хранения одного или нескольких компонентов набора не отвечали инструкциям, предусмотренным в разделе «Условия хранения, эксплуатации и транспортирования, стабильность изделия» е) Срок годности набора arlus® HBV RG PCR Kit истек данных». ® Проверьте условия хранения и срок годности (см. на этикетке набора) реагентов и, при необходимости, используйте новый набор. ® Проверьте условия хранения и срок годности (см. на этикетке набора) реагентов и. при необходимости, используйте новый набор.___________________________________________ Комментарии и рекомендации Слабый или отсутствующий сигнал внутреннего контроля отрицательного образца плазмы, прошедшего очистку с помощью набора QIAamp DSP Virus Spin Kit (Cr = 29 ± 3; пороговое значение, 0.03) во флуоресцентном канале Cycling Yellow или Cycling A.JOE и одновременное отсхтствие сигнала в канале Cycling Green или а) Условия ПЦР не отвечают протоколу ® Проверьте условия ПЦР (см. выше) и, при необходимости, повторите ПЦР со скорректированными настройками. Ь) ПЦР была ингибирована Убедитесь, что Вы используете рекомендуемый метод выделения ДНК и строго соблюдаете инструкции изготовителя. с) ДНК была потеряна во время 'вьщеления Если внутренний контроль был добавлен в процесс выделения, отсутстувие сигнала внутреннего контроля может указывать на потерю ДНК во время экстракции. Убедитесь, что Вы используете рекомендуемый метод выделения ДНК (см. раздел «Вьщеление ДНК» и строго соблюдаете инструкции изготовителя. d) Условия хранения одного или нескольких компонентов набора не отвечали инструкциям, предусмотренным в разделе «Условия хранения, эксплуатации и транспортирования, стабильность изделия» ® Проверьте условия хранения и срок годности (см. на этикетке набора) реагентов и, при необходимости, используйте новый набор. е) Срок годности набора artus® HBV Проверьте условия хранения и срок годности (см. на 25