Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий туберкулезного комплекса, лекарственно устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени "Полипроб ЛУ ТБ-1" по ТУ 9398-002-26124018-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для дифференциального выявления ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса, лекарственно
устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду методом
полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
«Полипроб ЛУ ТБ-1»
по ТУ 9398-002-26124018-2015
--- стр. 2 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий туберкулезного
комплекса (МБТК), лекарственно устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Полипроб ЛУ ТБ-1»<цо ТУ
9398-002-26124018-2015 (далее по тексту - Набор реагентов или Набор), предназначен для
определения мутаций устойчивости (или их отсутствия) в ДНК МБТК к противотуберкулезным
препаратам рифампицину и изониазиду в клиническом материале (мокроте) и бактериальных
культурах, содержащих ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени (ПЦР-РВ) с использованием гибридизационных зондов.
Простой и удобный принцип дифференциации групп фенотипически устойчивых (К) и
чувствительных (8) форм микобактерий туберкулезного комплекса к рифампицину и изониазиду
обеспечивает возможность быстрой диагностики множественной лекарственной устойчивости
(МЛУ) туберкулеза и своевременного назначения адекватной антибиотикотерапии.
Внимание!
Набор реагентов не предназначен для скрининга образцов на присутствие микобактерий
туберкулезного комплекса.
Материалом для проведения анализа служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса.
Область применения Набора реагентов - клиническая лабораторная диагностика.
Набор реагентов используется в комплексной диагностике МЛУ туберкулёза всех групп насе
ления.
Потенциальный потребитель - профессиональная квалификационная группа «Средний
медицинский и фармацевтический персонал не ниже 2 квалификационного уровня и
профессиональная квалификационная группа «Врачи и провизоры» всех уровней (Приказ №526
от 06.08.2007 г. «Об утверждении профессиональных квалификационных групп должностей
медицинских и фармацевтических работников»).
1.2 Показания.
Необходимость определения мутаций устойчивости (или их отсутствия) ДНК микобактерий
туберкулезного комплекса (МБТК) в пробах ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции
в режиме реального времени (ПЦР-РВ).
1.3. Противопоказания.
Противопоказаний в рамках установленного производителем назначения не имеет.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Состав.
Внимание! В работе необходимо использовать компоненты строго из одной серии Набора
реагентов. Запрещается использование отдельных компонентов, относящихся к разным сериям
Набора реагентов.
Состав Набора реагентов представлен в таблице 1.
стр. 2 из 23. |УЕК| 1018
--- стр. 3 ---
Таблица 1
Состав Объем Количество Описание
Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий туберкулезного
комплекса, лекарственно устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду методом
полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Полипроб ЛУ ТБ-1»
Пробирка стрипованная - 128 шт (16 стрипов
по 8 лунок)
Стрипованные пробирки.
Объем лунок 0,2 мл
Крышка стрипованная - 128 шт (16 стрипов
по 8 крышек)
Стрипованные крышки
Реагенты для амплификации:
Т ац-полимераза 0,02 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2х смесь ЛУ-К 0,2 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2х смесь ЛУ-Н 0,2 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
Вода 1,0 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
Контроли:
К- 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
К1+ТБ-1 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
К2+ТБ-1 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
Км'|+ТБ-1 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2.2. Число анализируемых проб клинического материала.
Набор реагентов рассчитан на проведение 48 реакций, включая контрольные, и позволяет
осуществить одновременный анализ от 1 до 44 клинических образцов в одной постановке. Каждая
из пробирок с реагентами может быть разморожена только один раз и повторному замораживанию
не подлежит. После размораживания реагенты должны быть использованы в течение 3 суток. Так
как каждая постановка должна включать, помимо клинических образцов, панель контролей (К-,
К1+ТБ-1, К2+ТБ-1, К л у1 ;+тб-1), Набор реагентов позволяет осуществить от одной постановки (44
клинических образца одновременно) до 8 постановок (по 2 клинических образца в каждой, всего 16
клинических образцов). Таким образом, с использованием реагента из каждой пробирки можно
провести не более 2 постановок в течение 3 суток.
2.3. Принцип метода.
Принцип метода основан на повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига
праймеров с комплементарными последовательностями и последующей элонгации
полинуклеотидных цепей с этих праймеров высокоспецифичным термоетабильным ферментом
Т ац-полимеразой.
Амплификация проводится на анализаторе для проведения ПЦР с регистрацией результатов
в режиме реального времени. Комплект Реагентов для амплификации содержит две реакционные
смеси ЛУ-К и ЛУ-Н, позволяющие выявлять формы МБТК, устойчивые к рифампицину и
изониазиду.
На этапе амплификации в одной пробирке с реакционной смесью ЛУ-К проводятся
одновременно 4 реакции, в пробирке с реакционной смесью ЛУ-Н - 3 реакции. Результаты
амплификации регистрируются по 4 различным каналам флуоресцентной детекции для
реакционной смеси ЛУ-К и по 3 различным каналам для реакционной смеси ЛУ-Н.
стр. 3 из 23. |\/^ 1018
--- стр. 4 ---
г
в составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченные олигонуклеотиды
(зонды), еодержащие флуоресцентные метки РАМ, НЕХ, КОХ, Су5, которые гибридизуются с
комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит
нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление
специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного
сигнала и детектировать генетические варианты дикого типа (\у1).
Об отсутетвии генетической мутации {вариант дикого типа, м1;) судят по наличию кривой
накопления флуоресценции с высокой эффективностью прироста флуоресценции (кривая
флуоресценции 8-образной (сигмообразной) формы). Генетический вариант, дикого типа
определяет фенотипическую чувствительность к указанным антибиотикам (8).
Отсутствие кривой накопления флуоресценции либо низкая эффективность прироста
флуоресценции (отсутствует участок характерного экспоненциального подъема, график
предетавляет еобой приблизительно прямую линию) в пробе свидетельствуют о наличии мутации
(ти1), определяющей фенотипическую устойчивость к соответствующим антибиотикам (К).
В реакционную смесь ЛУ-Н включены праймеры и зонд, позволяющие выявлять эндогенный
Внутренний контроль (1С) - видоспецифичный участок ДНК МБТК, детектируемый по каналу
Су5. Эндогенный внутренний контроль служит контролем проведения Г1ЦР и позволяет оценить
качество взятия и хранения исследуемого биологического материала. Наличие сигнала
флуоресценции со значением С1(Ср) в пределах диапазона от 12 до 29 свидетельствует о
содержании в образце ДНК МБТК, достаточном для получения достоверных результатов.
Образцы, не еодержащие, а также имеющие низкое содержание ДНК МБТК (значение С1(Ср)
1С больше граничного), рассматриваются как невалидные.
Образцы, для которых установлено значение С1(Ср) 1С ниже указанного диапазона,
характеризуются избыточным содержанием ДНК МБТК. В этом случае рекомендуется повторить
исследование, используя в качестве матрицы 100-кратное разведение образца
В исследуемой группе ЛУ-К контролем прохождения ПЦР служит одна или несколько кривых
накопления, соответствующих детекции мишени дикого типа. В случае одновременного
отсутствия кривых накопления по всем мишеням в группе ЛУ-К результаты исследования
считаются не валидными.
Характеристика молекулярных мишеней.
Р е а к ц и о н н а я с м е с ь Л У -К
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодоны 531 и 533 гена гроВ, содержит
флуоресцентную метку РАМ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа
от вариантов, несущих мутации в указанных кодонах.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодон 516 гена гроВ, содержит флуоресцентную
метку НЕХ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа от вариантов,
несущих мутации в указанном кодоне.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодоны 526 и 528 гена гроВ, содержит
флуоресцентную метку КОХ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа
от вариантов, несущих мутации в указанных кодонах.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодоны 511 и 512 гена гроВ, содержит
флуоресцентную метку Су5 и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа
от вариантов, несущих мутации в указанных кодонах.
стр. 4 из 23. |\/^ 1018
--- стр. 5 ---
Р е а к ц и о н н а я с м е с ь Л У - Н
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий мишень 8315 каЮ, еодержит флуоресцентную
метку РАМ и позволяет дифференцировать генетический вариант дикого типа от мутации 8315Т.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий мишень с-15 гена тНА, содержит флуоресцентную
метку НЕХ и позволяет дифференцировать генетический вариант дикого типа от мутации с-151
тЬА и с-171 тЬА.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий эндогенный Внутренний контроль 1С, содержит
флуоресцентную метку Су5 и служит для детекции видоспецифичного участка МБТК. ДНК-
мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, должна всегда присутствовать в образце в
достаточном количестве. Результат исследования считается достоверным только в том случае,
если значение С1(Ср) по каналу Су5 для данной мишени определено в пределах рекомендованного
диапазона. Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не только контролировать
этапы ПЦР-анализа, но и оценивать адекватность биологического материала. В случаях, если
биологический материал содержит недостаточное количество ДНК МБТК, кривая накопления по
каналу Су5 будет иметь С1(Ср) выше граничного значения. В случае содержания в реакционной
смеси ингибиторов ПЦР сигнал амплификации 1С будет низким.
В таблицах 2 и 3 приведены характеристики входящих в Набор реагентов олигонуклеотидных
зондов и контролей.
Таблица 2. Характеристика олигонуклеотидных зондов.
Мишень Флуо-
реецент-
ная
метка
Характериетика Кинетика
кривых накопления
Диагности
ческая спе
цифичность
(выявляемая
мутация)
Реакционная емееь ЛУ-Б
8531 гроВ РАМ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
8531Е
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
Е533Р
Н516 гроВ НЕХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флу
оресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
В516У
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
Н516У
Н526 гроВ КОХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Прирост флуоресце
нции относительно
положительного
контроля <10%
Н526У
Н526В
Н526Е
Прирост флуоресцен
ции относительно по-
Н52бд
К528К
стр. 5 из 23. |УЕР| 1018
--- стр. 6 ---
/ Мишень Флуо
ресцент
ная
метка
Характеристика Кинетика
кривых накопления
Диагности
ческая спе
цифичность
(выявляемая
мутация)
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективноеть прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К.).
ложительного кон
троля не более 20%
К.528Н
Ь511 гроВ Су5 Наличие еигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяюгций
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо .
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции отноеительно
положительного
контроля <10%
Е511К
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
Е511Р
85121
Реакционная емесь ЛУ-1
8315 каЮ РАМ Наличие еигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прироет флуоресце
нции относительно
положительного
контроля <10%
8315Т
с-15 1п11А НЕХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетичеекий вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
с-151; тЬА
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
с-1711пЬА
1С Су5 Наличие сигнала флуоресценции со
значением С1(Ср) в пределах указанно
го диапазона указывает на достаточное
содержание в исследуемом образце
ДНК МБТК.
Отсутствие сигнала, либо низкая
эффективность прироста флуоресцен
ции указывают на отеутствие в образце
ДНК МБТК либо ингибирование ПЦР.
Кинетика кривых с
высокой эффектив
ностью прироста флу
оресценции. Результа
ты по Внутреннему
контролю 1С валидны
при значениях С1(Ср)
в диапазоне от 12 до
29
ДНК МБТК
стр. 6 из 23. 1018
--- стр. 7 ---
Таблица 3. Характеристика контролей.
Кон
троль
Диагностическая специфичность
(выявляемая мутация) ДНК
МБТК
(1С)
Характеристику531
гроВ
516
гроВ
526
гроВ
511
гроВ
315
Ка1С
-15/-17
1П6А
к- Не содержит специфических мишеней
Предназначен для контроля кросс
контаминации и отсутствия ложно
положительных результатов
К1+ТБ-1 ши! ти! ши! ти1 \у1 +
Комплексный контроль предназна
чен для контроля'детекции мутций
в генах гроВ и Ш С (формы МБТК,
устойчивые (К) к рифампицину и
устойчивые (К) к изониазиду).
Содержит мишень эндогенного
Внутреннего контроля 1С
К2+ТБ-1 ти( ЛУ! ти1 л у1 л у1 ти( +
Предназначен для контроля детек
ции мутации в генах гроВ и ЫНА
(формы.МБТК, устойчивые (К) к
рифампицину и устойчивые (К) к
изониазиду).
Содержит мишень эндогенного
Внутреннего контроля 1С
К\У(+ТБ-1 л у! л у1 \у1 ; \у1 л у1 +
Предназначен для контроля выяв
ления генетических вариантов ди
кого типа (формы МБТК, чувстви
тельные (8) к рифампицину и чув
ствительные (8) к изониазиду).
Содержит мишень эндогенного
Внутреннего контроля 1С
Контрольные образцы К1, К2, п о м и м о целевых мишеней, содержат эндогенный Внутренний
контроль 1С.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитические характеристики.
3.1.1. Аналитическая чувствительность.
Аналитическая чувствительность Набора реагентов оценивалась с использованием с
использованием референсного штамма Н37 Ку (паспорт выдан ФГБУ «НУЭСМП» Минздрава
России, источник получения АТСС, № штамма 700403 по протоколу ФГБНУ «ЦНИИТ»).
Наименьшее число КОЕ МБТК в образцах, для которых было показано достоверное
определение результатов чувствительности, - 200 КОЕ на 1 мл образца.
3.1.2. Аналитическая специфичность.
Набор реагентов дифференциально выявляет ДНК микобактерий туберкулезного комплекса
(МБТК), лекарственно устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду. Аналитическая
специфичность Набора реагентов исследована при постановке отрицательного контроля К-, не
содержащего микобактерий туберкулезного комплекса. Неспецифических реакций выявлено не
было.
3.2. Диагностические характеристики.
Для определения диагностических характеристик Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-1»
были использованы образцы нативной мокроты и клинических изолятов МБТК, полученные из
стр. 7 из 23. |УЕР| 1018
--- стр. 8 ---
образцов мокроты от больных с верифицированным диагнозом «Туберкулез легких», «МЛУ
туберкулез легких» и «Монорезистентный туберкулез легких».
В исследование было включено 396 образцов от 198 пациентов (94 образца мокроты от
пациентов с диагаозом МЛУ туберкулез, 24 образца мокроты от пациентов с диагнозом
монорезистентный туберкулез, 80 образцов мокроты от пациентов с диагнозом чувствительный
туберкулез, 94 образца клинических изолятов (бактериальных культур) - диагноз МЛУ туберкулез,
24 образца клинических изолятов (бактериальных культурых) - диагноз монорезистентный
туберкулез, 80 образцов клинических изолятов (бактериальных культур) - диагноз чувствительный
туберкулез).
3.2.1. Диагностическая чувствительность.
Диагностическая чувствительность Набора реагентов составила:
для рифампицина при 109 положительных результатах составила 97,3% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для изониазида при 101 положительном результате составила 97,1% - 100% с доверительной
вероятностью 95%.
3.2.2. Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность Набора реагентов составила:
- для рифампицина при 89 отрицательных результатах составила 96,7% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для изониазида при 97 отрицательных результатах составила 97% - 100% с доверительной
вероятностью 95%.
3.3. Воспроизводимость
Результаты дифференциального выявления множественно лекарственно
устойчивых/чувствительных форм с использованием Набора реагентов показали высокую
воспроизводимость между постановками в пределах аналитической чувствительности метода,
коэффициент вариации СУ не более 10%.
Амплификация была проведена на термоциклерах СРХ96 (В1оКас1, США) и «ДТ-96» (НПО
«ДНК-Технология», Россия). Интерпретация результатов проводилась согласно инструкции
изготовителя Набора реагентов.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
4.1. Использовать только для диагностики т VI(го.
4.2. Потенциальный риск применения Набора реагентов — класс 26.
4.3. Работу с использованием Набора реагентов осуществлять согласно МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот
при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности», СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами ПНУ групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
При работе в лабораториях противотуберкулезных учреждений следует дополнительно
руководствоваться требованиями Приказа №109 от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании
противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».
4.4. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные
реагенты и биологические отходы следует утилизировать в соответствии со схемой, принятой в
организации, в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования
к обращению с медицинскими отходами». Класс отходов определяется согласно СанПин
стр. 8 из 23. |УЕР;| 1018
--- стр. 9 ---
/ 2.1.7.2790-10. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности утилизировать
как отходы класса «Г».
Внимание!
- При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недо'пустимо
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к
контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования, и реагентов.
- Применять Набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с Набором только специально обученный персонал.
- Не использовать Набор по истечении срока годности.
- Не использовать Набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реа
гента не соответствует описанию.
- Не использовать Набор реагентов, если не соблюдались условия транспортирования и хранения
согласно инструкции.
Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть
пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ
1. Программируемый амплификатор (термоциклер) для ПЦР СРХ96 (В1оКас1, США), «ДТ-96» (НПО
«ДНК-Технология», Россия) или аналогичные по своим функциональным характеристикам. По во
просу использования амплификаторов обратиться к производителю.
2. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) П класса защиты,
3. Вортекс.
4. Холодильник, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С.
5. Морозильная камера, поддерживающая температуру не выще минус 20 °С.
6. Автоматические или электронные дозаторы переменного объема.
7. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром.
8. Штативы для наконечников.
9. Емкость для сброса наконечников.
10. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки типа Эппендорф объемом
0,5 или 1,5 мл.
11. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
12. Дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания медицин
ских отходов.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦБ1
Основные виды микобактерий, относящихся к МБТК и вызывающих туберкулез у человека:
М 1иЬесгси1ош, М. Ьогг^, М. ЬоУ18 ВСО.
6.1. Материалом для проведения анализа служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса.
6.2. Ограничения по использованию анализируемого материала.
Образцы с высоким содержанием ДНК МБТК (выделенные из культур) рекомендуется
предварительно развести 100-кратно. Для приготовления разведений необходимо использовать
компонент «Вода», входящий в состав Реагентов для амплификации Набора реагентов «Полипроб
ЛУ ТБ-1».
6.3. Условия хранения анализируемых образцов.
стр. 9 из 23. |УЕР| 1018
--- стр. 10 ---
Образцы ДНК можно хранить при температуре не выше минуе 20 °С в течение 6 мееяцев. При
необходимости более длительного хранения - не выше минус 80°С в течение 3 лет.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА ^
Сбор клинических образцов, получение культур МБТК и комплексная лабораторная
диагностика туберкулеза проводятся в соответствии е действующими нормативными и
методическими документами, принятыми на территории Российской Федерации.
Перед проведением анализа на лекарственную устойчивость/чувствительность с помощью
абора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-1» необходимо выделить ДНК МБТК из клинического
обр^ца (части образца), бактериальной культуры и провести анализ на обнаружение ДНК МБТК.
ыделение ДНК МБТК из клинического образца (части образца), бактериальной культуры и
проведение анализа иа обнаружение ДНК МБТК может осуществляться Набором реагентов для
о наружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса методом полимеразной цепной
от реального времени «Полипроб скрин ТБ» (ООО «ЭнДжентикс», Россия) №РЗН
17/6266 от 20.09.2017 г. или любым другим из зарегистрированных на территории Российской
едерации наборов, предназначенных для выделения и обнаружения ДНК МБТК из клинического
материала и культуры МБТК, согласно инструкции к наборам.
Материалом для проведения анализа с помощью Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-1»
служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК микобактерий туберкулезного комплекса
Анализ с помощью Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-1» состоит из следующих этапов:
- приготовление реакционных смесей;
- подготовка к проведению ПЦР-РВ;
- проведение ПЦР-РВ;
- учет результатов анализа.
7.1. Приготовление реакционных смесей.
Внимание! Для каждого клинического образца исследование включает анализ с
использованием двух реакционных смесей ЛУ-К и ЛУ-Н, каждая из которых служит для
выявления мутаций устойчивости к соответствующему антибиотику.
2х смесь Схема анализа
ЛУ-К
Клинические образцы (М)
К-
К1+ТБ-1
К2+ТБ-1
К\\4+тб- 1
ЛУ-Н
Клинические образцы (М)
К-
К1-ЬтБ - 1
К2+ТБ-1
К\\Д+ТБ-1
. Определить по схеме приготовления реакционных смесей (таблица 4) количество каждого
реагента, требующееся для приготовления реакционной смеси. На одну реакцию амплификации
требуется 13 мкл 2х смеси и 0,7 мкл Тац-полимеразы. Смесь готовить на общее число
исследуемых образцов и контролей (четыре контроля; К-, К1 +тб-1 , К2+тб-1, КVVН-тБ-|) плюс запас
на одну реакцию.
стр. 10 из 23. |УЕР!| 1018
--- стр. 19 ---
Рисунок 8.
Анализ результатов в режиме «Иеходные данные» свидетельствует (рисунок 9), что исходная
интенсивность сигнала флуоресценции (фон) в пробе превышает настройки РАМ канала.
Рисунок 9.
Г« УЗ
ф ямтп».<>:в
/
Избыточное содержание ДНК МБТК в анализируемой пробе может стать причиной получения
ложноотрицательного результата, при котором мутация окажется ошибочно не установленной. На
рисунке 10 представлены результаты анализа нескольких образцов носителей мутации гена каЮ.
Два образца (образцы №№14-2731 и 14-2780) характеризуются оптимальным содержанием ДНК
МБТК (значения Ср (1С) составляют 12,3 и 15,0 соответственно), в то время как образец №14-1608
имеет избыточное содержание ДНК МБТК (значение Ср (1С) составляет 9,2). В результате
неправильной обработки данных сигнал фона, соответствуюш,ий лунке 14-1608, преобразуется в не
8-образную кривую. Подобные некорректно обработанные образцы имеют вид довольно прямых
линий, идущих снизу-вверх.
стр. 19 из 23. |УЕК| 1018
--- стр. 20 ---
Рисунок 10.
12.1 Вй
*М 15.1 57
Анализ результатов в режиме «Исходные данные» свидетельствует о том, что результат ложный
(8-образная кривая накопления отсутствует) (рисунок 11).
. Рисунок 11.
. г» в1ытл^^^IЖСв^^з^^7^а 106
Протасов Агама атт 9 9*их1 4 3ивроуп
□сярйтор 1вЬ
Ф Вм1Ткм_Ю!
аап 11С»<Г11^2С15.1702^
С 12 *М
Данная проблема решается корректировкой стандартных параметров анализа. Необходимо
увеличить Критерий достоверности результатов для таких образцов с 30% до 32%. Таким образом,
нежелательный фон будет устранен (см. рис. 12).
Рисунок 12.
>«варой1!1» Псвоом»
стр. 20 из 23. |УЕК| 1018
--- стр. 21 ---
10. КОНТАМИНАЦИЯ
ДНК микобактерий туберкулезного комплекеа не должна выявлятьея в отрицательном
контроле. Приеутетвие ДНК микобактерий туберкулезного комплекеа в отрицательном контроле
указывает на контаминацию другими образцами или ранее амплифицированным продуктом,
произошедшую во время приготовления образцов или во время подготовки к проведению
иееледования.
Для того чтобы избежать контаминации, необходимо произвеети полную обработку
лаборатории в соответетвии е МУ-1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом,' содержащим
микроорганизмы 1-1У групп патогенности»; затем повторно провести анализ.
11. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контроль качества Набора при изготовлении осуществляет ОБТК предприятия-изготовителя
согласно ТУ 9398-002-26124018-2015.
12. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВКИ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ
Информация, об особенностях транспортирования должна учитываться всеми
лицами, участвующими в хранении, перевозке и утилизации (уничтожении) данного изделия.
12.1. Условия хранения.
Набор реагентов хранить при температуре не выше минус 20°С в упаковке производителя до
истечения срока годности. Во избежание возможной кросс-контаминации Реагенты для
амплификации хранить отдельно от Контрол ей.
Хранение изделий ниже минус 20°С должно осуществляться в морозильниках,
обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной регистрацией
температуры.
12.2. Условия транспортировки
Набор реагентов транспортировать при температуре не выше минус 20°С. Транспортирование
Набора реагентов производится всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями
и правилами, установленными на данном виде транспорта, при соблюдении температурного
режима.
Транспортирование изделий при температурах, требующих соблюдения "Холодовой цепи",
обеспечивающей сохранность температурного режима, должно осуществляться в
термоконтейнерах одноразового пользования, содержащих хладоэлементы, или в
термоконтейнерах многократного применения с автоматически поддерживаемой температурой
или в авторефрижераторах с использованием термоиндикаторов.
Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не
подлежат.
12.3. Срок годности Набора реагентов составляет 12 месяцев с даты производства. Набор реагентов
с истекшим сроком годности применению не подлежит.
12.4. Срок годности вскрытых компонентов изделия (реагентов) после размораживания составляет
не более 3 суток при температуре хранения от 2 до 8 °С. Вскрытые реагенты повторному
замораживанию не подлежат.
12.5. Готовая к работе реакционная смесь хранению не подлежит, ее остатки должны быть
утилизированы.
12.6. Условия отпуска.
стр. 21из 23. |УЕР| 1018
--- стр. 24 ---
и скреплено печатью
__23 ( двадцать три ) листа
цифрами прописью
генеральный директор ООО «ЭнДжентикс
ПРОШИТО
В КОЛИЧЕСТВЕ ЛИСТОВ
/
--- стр. 25 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ООО «ЭнДжентикс»
МАКЕТ МАРКИРОВКИ
медицинского изделия для диагностики 1п у 11;г о
Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий
туберкулезного комплекса, лекарственно устойчивых/чувствительных к
рифампицину и изониазиду методом полимеразной цепной реакции в
режиме реального времени
«Полипроб ЛУ ТБ-1»
по ТУ 9398-002-26124018-2015
--- стр. 26 ---
1. Макет маркировки МИ - Набор реагентов для дифференциального
выявления ДНК микобактерий туберкулезного комплекса, лекарственно
устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду методом
полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Полипроб ЛУ
ТБ-1» по ТУ 9398-002-26124018-2015.
« Ю «ЗДжемтекс». 125252. г. Мос1т г1^ ул Авиамиструстора Мйкоя»а, ц. 12
♦7 Ш 741-49-89, М (^П 9еп!та.сот
Полипроб ЛУ ТБ-1 А®СШ
Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса, лекарственно
устойчивых/чувствительных к рифампицину и изониазиду
методом полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени
ТУ 9398-002-26124018-2015
Состав:
Пробирка стрипованнзя - 128 11ГТ {16 стрилов по 8 лунок)
Крышка стрипованнзя - 128 шт (16 стртшов по 8 лунок)
Реагенты дпя амшшфнка1р и
Та^-полимераза 0,02 М П 4 пробирки
2х смесь ЛУ К 0,2 мл 4 пробирки
й ( смесь Л У Н 0,2 ил 4 пробирки
Вода 1,0 мл 4 пробирга
Контрош
К - 0,08 М Л 4 пробирки
К1+ТБ-1 0,08 мл 4 пробир»)
К2+Т&1 0,06 мл 4 пробирки
К1ЙГНТБ-1 0,06 М П 4 пробирки
Полипроб Л У ТБ-1
и
2
Рагисг(В1ронное удостоверение №
--- стр. 27 ---
2. Макет маркировки коробки 1 с компонентами МИ - Реагенты для
амплификации:
000 125252, г. Москва, Авиаконсгруктсфа М 1«ояна, д. 12
+7 495 741-49-89, тй>^гт1^1«к:з.сот
Полипроб ЛУ ТБ-1
Реагенты для амплификации
Состав:
Та^-полимераза 0,02 мл 4 пробирки
2х смесь ЛУ-В 0,2 мл 4 пробирки
2х смесь ЛУ-Н 0,2 мл 4 пробирки
Вода 1,0 МП 4 пробирки
3. Макет маркировки коробки 2 с компонентами МИ - Контроли:
ООО 125252, г. Москва, уя. Авиаконструктора Микояна, д. 12
+7 495 741-49-89, й\^о@пдеяРс5,сот
Полипроб ЛУ ТБ-1
Контроли
Состав:
К- 0,06 мл 4 пробирки
0,06 мл 4 пробирки
0,06 мл 4 пробирки
0,06 мл 4 пробирки
--- стр. 28 ---
3. Макет маркировки компонента МИ - Тар-полимераза:
Полипроб ЛУ ТБ-1
Тар-полимераза
0,02 мл
I
20“ С
ООО «ЭнДжентикс»
4. Макет маркировки компонента МИ - 2х смесь ЛУ-К:
Полипроб ЛУ ТБ-1
2х смесь Л У -К
0,2 мл
ООО «ЭнДжентикс»
5. Макет маркировки компонента МИ - 2х смесь ЛУ-Н:
Полипроб ЛУ ТБ-1
2х смесь ЛУ-Н
0,2 мл
Г
20“С
С Е Н Я Е ^ ООО «ЭнДжентикс»
6. Макет маркировки компонента МИ - Вода:
Полипроб ЛУ ТБ-1
Вода
1 мл
-20“ С
ООО «ЭнДжентикс»
7. Макет маркировки компонента МИ - К-;
Полипроб ЛУ ТБ-1
К-
0,06 мл
Г
20»С
О ОО «ЭнДжентикс»
--- стр. 29 ---
8. Макет маркировки компонента МИ - К 1 +тб-1:
Полипроб ЛУ ТБ-1
К1 +ТБ-1
0,06 мл
О О О «ЭнДжентикс»
9. Макет маркировки компонента МИ - К 2 +тб-ь
Полипроб ЛУ ТБ-1
К2+ТБ-1
0,06 мл
■20-с
ОО О «ЭнДжентикс»
10, Макет маркировки компонента МИ - К л у1 ;+тб-ь
С1
Полипроб ЛУ ТБ-1
К\ЛЛ+ТБ-1
0,06 мл
О ОО «ЭнДжентикс»
11. Макет маркировки компонента МИ - Пробирка стрипованная/ Крышка
стрипованная:
Полипроб ЛУ ТБ-1
П р о би р ка стрипованная
128 шт 0 6 Стрипов по 8 лунок)
Кры ш ка стрипованная
128 1Я Т (16 Стрипов по 8 крышек)
О О О «ЭнДжентикс»
--- стр. 30 ---
и скреплено печатью
листов ) листов