Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий туберкулезного комплекса, лекарственно устойчивых/чувствительных к фторхинолонам, амикацину/канамицину, каприомицину методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени "Полипроб ЛУ ТБ-2" по ТУ 9398-003-26124018-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
&
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК микобактерий туберкулезного
комплекса (МБТК), лекарственно устойчивых/чувствительных к фторхинолонам,
амикацину/канамицину, каприомицину методом полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени «Полипроб ЛУ ТБ-2» по ТУ 9398-003-26124018-2015 (далее по тексту -
Набор реагентов или Набор), предназначен для определения мутаций устойчивости (или их
отсутствия) в ДНК МБТК к противотуберкулезным препаратам фторхинолонам,
амикацину/канамицину, каприомицину в клиническом материале (мокроте) и бактериальных
культурах, содержащих ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени (ПЦР-РВ) с использованием гибридизационных зондов.
Устойчивость МБТК к инъекционным препаратам (канамицину, амикацину и капреомицину)
определяется мутациями в позиции 1401 гена гг8.
Устойчивость МБТК к канамицину и амикацину определяется мутацииями в позициях 514,
517 гена гг8, а также мутациями в позициях -10,
-12 и -37 в промоторной области гена ег$ .
Устойчивость МБТК к фторхинолонам определяется мутациями в кодонах 89-94 гена §угА и
538-540 гена §угВ.
Набор реагентов позволяет проводить быструю дифференциацию групп. Простой и удобный
принцип дифференциации фенотипически устойчивых (К.) и фенотипически чувствительных (8)
форм микобактерий туберкулезного комплекса к фторхинолонам, амикацину/канамицину,
каприомицину обеспечивает возможность быстрой диагностики широкой лекарственной
устойчивости (ШЛУ) туберкулеза и своевременного назначения адекватной
антибиотикотерапии.
Внимание!
Набор реагентов не предназначен для скрининга образцов на присутствие микобактерий
туберкулезного комплекса.
Материалом для проведения анализа служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса.
Область применения Набора реагентов — клиническая лабораторная диагностика.
Набор реагентов используется в комплексной диагностике ШЛУ туберкулёза всех групп
населения.
Потенциальный потребитель - професеиональная квалификационная группа «Средний
медицинский и фармацевтический персонал не ниже 2 квалификационного уровня и
профессиональная квалификационная группа «Врачи и провизоры» всех уровней (Приказ №526
от 06.08.2007 г. «Об утверждении профессиональных квалификационных групп должностей
медицинских и фармацевтических работников»).
1.2. Показания.
Необходимость определения мутаций устойчивости (или их отсутствия) ДНК микобактерий
туберкулезного комплекеа (МБТК) в пробах ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции
в режиме реального времени (ПЦР-РВ).
1.3. Противопоказания.
Противопоказаний в рамках установленного производителем назначения не имеет.
стр. 2из 18. УЕК1118
--- стр. 3 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Состав.
Внимание! В работе необходимо использовать компоненты етрого из одной еерии Набора
реагентов. Запрещается использование отдельных компонентов, отноеящихея к разным сериям
Набора реагентов.
Состав Набора реагентов представлен в таблице 1.
Таблица 1.
Состав Объем Количество Описание
Набор реагентов для дифференциал
комплекеа, лекарственно ус'
амикацину/канамицину, каприомицр
реального в]
ьного выявления ДНК микобактерий туберкулезного
гойчивых/чувствительных к фторхинолонам,
шу методом полимеразной цепной реакции в режиме
эемени «Полипроб ЛУ ТБ-2»
Пробирка етрипованная - 128 шт(16 стрипов
по 8 лунок)
Стрипованные пробирки.
Объем лунок 0,2 мл
Крышка етрипованная - 128 шт(16 етрипов
по 8 крышек)
Стрипованные крышки
Реагенты для амплификации:
Т ац-полимераза 0,02 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2х емесь ЛУ-8Е 0,2 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2х смееь ЛУ-Р^ 0,2 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
Вода 1,0 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
Контроли:
К- 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
К1+ТБ-2 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
К2+ТБ-2 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкоеть.
КЗ+ТБ-2 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкоеть.
Км'1 + Т Б - 2 0,06 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость.
2.2. Чиело анализируемых проб клиничеекого материала.
Набор реагентов раеечитан на проведение 48 реакций амплификации, включая контрольные, и
позволяет осуществить одновременный анализ от 1 до 43 клинических образцов в одной
постановке. Каждая из пробирок с реагентами может быть разморожена только один раз и
повторному замораживанию не подлежит. После размораживания реагенты должны быть
использованы в течение 3 еуток. Так как каждая постановка должна включать, помимо
клинических образцов, панель контролей (К-, К 1 + тб-2, К 2 + тб-2, К З + тб-2, К\\ 1 + тб-2), набор реагентов
позволяет оеуществить от одной поетановки (43 клиничееких образца одновременно) до 8
поетановок (по 1 клиническому образцу в каждой, всего 8 клиничееких образцов). Таким образом,
с иепользованием реагента из каждой пробирки можно провести не более 2 поетановок в течение 3
еуток.
2.3. Принцип метода.
Принцип метода оенован на повторяющихея циклах температурной денатурации ДНК,
отжига праймеров е комплементарными последовательноетями и последующей элонгации
полинуклеотидных цепей с этих праймеров выеокоепецифичным термоетабильным ферментом
Тац-пол имеразой.
Амплификация проводитея на анализаторе для проведения ПЦР е регистрацией
результатов в режиме реального времени. Комплект Реагентов для амплификации еодержит две
стр.Зиз 18. УЕК1118
--- стр. 4 ---
реакционные емеси ЛУ-8Ь и ЛУ-Б’^, позволяющие выявлять формы МБТК, устойчивые к
фторхинолонам, амикацину/канамицину, каприомицину.
На этапе амплификации в одной пробирке с каждой из реакционных смесей ЛУ-8Ь и ЛУ-Р^
проводятся одновременно 4 реакции. Результаты амплификации регистрируются по 4 различным
каналам флуоресцентной детекции.
В составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченные олигонуклеотиды
(зонды), содержащие флуоресцентные метки РАМ, НЕХ, КОХ, Су5, которые гибридизуются с
комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит
нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление
специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного
сигнала и детектировать генетические варианты дикого типа (\\Д).
Об отсутствии генетической мутации {вариант дикого типа, судят по наличию кривой
накопления флуоресценции с высокой эффективностью прироста флуоресценции (кривая
флуоресценции 8-образной (сигмообразной) формы). Генетический вариант дикого типа
определяет фенотипическую чувствительность к указанным антибиотикам (8).
Отсутствие кривой накопления флуорееценции, либо низкая эффективность прироста
флуоресценции (отеутствует участок характерного экепоненциального подъема, график
представляет собой приблизительно прямую линию) в пробе свидетельствуют о наличии
мутации (ти1), определяющей фенотипическую устойчивость к соответствующим антибиотикам
(К).
В реакционную емесь ЛУ-Р^ включены праймеры и зонд, позволяющие выявлять
эндогенный Внутренний контроль (1С) - видоспецифичный участок ДНК МБТК,
детектируемый по каналу Су5. Эндогенный внутренний контроль служит контролем проведения
ПЦР и позволяет оценить качество взятия и хранения исследуемого биологического материала.
Наличие еигнала флуоресценции со значением С1(Ср) в пределах диапазона от 12 до 29
свидетельствует о еодержании в образце ДНК МБТК, достаточном для получения достоверных
результатов.
Образцы, не содержащие, а также имеющие низкое содержание ДНК МБТК (значение С1(Ср)
1С больще граничного), рассматриваются как невалидные.
Образцы, для которых установлено значение С1:(Ср) 1С ниже указанного диапазона,
характеризуются избыточным содержанием ДНК МБТК. В этом случае рекомендуется повторить
исследование, используя в качестве матрицы 100-кратное разведение образца.
В иееледуемой группе ЛУ-8Е контролем прохождения ПЦР служит одна или несколько
кривых накопления, соответствующих детекции мишени дикого типа. В случае одновременного
отеутетвия кривых накопления по всем мишеням в группе ЛУ-8Е результаты исследования
считаютея невалидными.
Характеристика молекулярных мишеней.
Реакционная смесь ЛУ-8Ь
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодон а 1401 гена ггх, содержит флуоресцентную
метку РАМ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа от вариантов,
несущих мутации в указанном кодоне.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий позиции -10/-12 промоторной области гена е 1 $ ,
содержит флуоресцентную метку НЕХ и позволяет дифференцировать генетические варианты
дикого типа от вариантов, несущих мутации в указанных позициях гена ек.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий мишени 514 и 517 гена гг$, содержит
флуореецентную метку КОХ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа
от вариантов, несущих мутации в указанных мишенях.
стр. 4из 18. УЕК1118
--- стр. 5 ---
/ Олигонуклеотидный зонд, детектирующий позицию -37 промоторной облаети гена ей,
/ содержит флуоресцентную метку Су5 и позволяет дифференцировать генетические варианты
/ дикого типа от вариантов, несущих мутацию в указанной позиции.
/ Реакционная смесь ЛУ-Р^
' Олигонуклеотидные зонды, детектирующие мишени §угА94 и §угА90, содержат
флуоресцентные метки РАМ и КОХ соответственно и позволяют дифференцировать
генетические варианты дикого типа от вариантов, несущих мутации в кодонах 89, 90, 91 и 94
гена цугЛ. Дифференциация осуществляется благодаря закономерной кинетике кривых
накопления, в зависимости от мутантного кодона.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий кодоны 539, 540 гена §угВ содержит
флуоресцентную метку НЕХ и позволяет дифференцировать генетические варианты дикого типа
от вариантов, несущих мутацию в указанном кодоне.
Олигонуклеотидный зонд, детектирующий эндогенный Внутренний контроль 1С, содержит
флуоресцентную метку Су5 и служит для детекции видоспецифичного участка МБТК. ДНК-
мишень, выбранная в качестве внутреннего контроля, должна всегда присутствовать в образце в
достаточном количестве. Результат исследования считается достоверным только в том случае,
если значение СДСр) по каналу Су5 для данной мишени определено в пределах
рекомендованного диапазона. Таким образом, эндогенный внутренний контроль позволяет не
только контролировать этапы ПЦР-анализа, но и оценивать адекватность биологического
материала. В случаях, если биологический материал содержит недостаточное количество ДНК
МБТК, кривая накопления по каналу Су5 будет иметь СДСр) выше граничного значения. В
случае содержания в реакционной смеси ингибиторов ПЦР сигнал амплификации 1С будет
низким.
В таблицах 2 и 3 приведены характеристики входящих в Набор реагентов
олигонуклеотидных зондов и контролей.
Таблица 2, Характеристика олигонуклеотидных зондов.
Мишень Флуо
ресцент
ная
метка
Характеристика Кинетика
кривых накопления
Диагности
ческая спе
цифичность
(выявляемая
мутация)
Реакционная смесь ЛУ-8
а1401 Г Г 8 РАМ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
а!401§
-10, -12 е18 НЕХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (Я).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
ё-12а
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
с-101
стр. 5 из 18. УЕК 1118
--- стр. 6 ---
/Г Мишень Флуо
ресцент
ная
метка
Характеристика Кинетика
кривых накопления
Диагности
ческая спе
цифичность
(выявляемая
мутация)
514, 517 г г8 К.ОХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К.).
Прирост флуоресце
нции относительно
положительного
контроля < 10%
с5171
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 20%
а514с
37 С 18 Су5 Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля < 10%
с37а
Реакционная смесь ЛУ-Г^
Прирост флуоресцен
ции по каналу РАМ
относительно поло
жительного контроля
<20% и одновремен
ное присутствие кри
вой накопления по
каналу КОХ с эффек
тивностью прироста
флуоресценции
близкой к 100%.-
0940
094Х
094А
094У
094Н
Кривая накопления
по каналу РАМ с эф
фективностью при
роста флуоресценции
близкой к 100% и од
новременное отсут
ствие кривой накоп
ления по каналу КОХ
0890
Прирост флуоресцен
ции по каналу РАМ
относительно поло
жительного контроля
<35% и одновремен
ное отсутетвие кри
вой накопления по
каналу КОХ
А90У
Одновременное от
сутствие кривых на
копления по каналам
891Р
094 §угА РАМ,
ЯОХ
Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
стр. биз 18. УЕК1118
--- стр. 7 ---
/| Мишень Флуо
ресцент
ная
метка
Характеристика Кинетика
кривых накопления
Диагности
ческая спе
цифичность
(выявляемая
мутация)
РАМ и КОХ
ёУгВ НЕХ Наличие сигнала с высокой эффектив
ностью прироста флуоресценции
указывает на генетический вариант
дикого типа, определяющий
фенотипическую чувствительность (8).
Отсутствие кривой накопления, либо
низкая эффективность прироста флуо
ресценции указывает на генетическую
мутацию, ассоциированную с ЛУ (К).
Прирост флуоресцен
ции относительно
положительного
контроля <10%
Т539Х
Прирост флуоресцен
ции относительно по
ложительного кон
троля не более 30%
Е540Н
1С Су5 Наличие сигнала флуоресценции со
значением С1;(Ср) в пределах указанно
го диапазона указывает на достаточное
содержание в исследуемом образце
ДНК МБТК.
Отсутствие сигнала, либо низкая
эффективность прироста флуоресцен
ции указывают на отсутствие в образце
ДНК МБТК либо ингибирование ПЦР.
Кинетика кривых с
высокой эффектив
ностью прироста
флуоресценции.
Результаты по Внут
реннему контролю 1С
валидны при значе
ниях С1;(Ср) в диапа
зоне от 12 до 29
ДНК МБТК
Таблица 3. Характеристика контролей.
Кон-
троль
Диагностическая специфичность
(выявляемая мутация) ДНК
МБТК
(1С)
Характеристикаа1401§
ГГ8
-10/-12
С 18
а514с,
с5171
ГГ8
37 С 1894§уг
А §угВ 90§уг
А
К- Не содержит специфических мишеней
Предназначен для контроля
кросс-контаминации и отсут
ствия ложнополонсительных
результатов
К1+ТБ-2 ти( ти1 \у1 ; \у1 ти1 ти1 л у1 +
Комплексный контроль предна
значен для контроля детекции
мутаций в позициях 1401 гг8, -10
е18, 94§угА, 539§угВ.
Содержит мишень эндогенно
го Внутреннего контроля 1С
К2-1-ТБ-2 л у! л у1 ти1 ши! ши1
(35%) \у1 ти1 +
Предназначен для контроля де
текции мутации в позициях 514
ГГ8, 37 е18, 90§угА.
Содержат мишень эндогенно
го Внутреннего контроля 1С
КЗ+ТБ-2 ти1 ти1 у у1 у у1 ти1 ти1 +
Предназначен для контроля де
текции мутации в позициях -12
е18, 517 ГГ8, 539§угВ, 89§угА.
Содержат мишень эндогенно
го Внутреннего контроля 1С
Км'Ц-ТБ-2 \у1 л у1 \у1 у ^1 : V V 1 + Предназначен для контроля вы
явления генетических форм ди-
стр. 7 из 18. УЕК 1118
--- стр. 8 ---
Контрольные образцы К1, К2, КЗ, помимо целевых мишеней содержат эндогенный
Внутренний контроль 1С.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Аналитические характеристики.
3.1.1. Аналитическая чувствительность.
Аналитическая чувствительность Набора реагентов оценивалась с использованием
референсного штамма Н37 Ку (паспорт выдан ФГБУ «НУЭСМП» Минздрава России, источник
получения АТСС, № штамма 700403 по протоколу ФГБНУ «ЦНИИТ»).
Наименьшее число КОЕ МБТК в образцах, для которых было показано достоверное
определение результатов чувствительности, - 200 КОЕ на 1 мл образца.
3.1.2. Аналитическая специфичность.
Аналитическая специфичность подтверждена отсутствием ложноположительных
результатов в образцах, не содержащих микроорганизмы рода МусоЬас1ег1ит. Аналитическая
специфичность исследована при постановке отрицательного контроля К-.
Возможно наличие слабых сигналов флуоресценции в образцах, содержащих микобактерии
нетуберкулезного комплекса (МАС) ввиду высокой степени гомологии генов у видов рода
МусоЬас1епит. В этом случае система автоматически определяет образец как сомнительный, так
как алгоритм трансляции результатов предполагает правильную оценку по целому ряду
контрольных точек в отношении всех анализируемых мишеней.
3.2. Диагностические характеристики.
Для определения диагностических характеристик Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-2»
были использованы образцы нативной мокроты и клинических изолятов МБТК, полученные из
образцов мокроты от больных с верифицированным диагнозом «Туберкулез легких», «ИНТУ
туберкулез легких» и «Мультирезистентный туберкулез легких».
В исследование было включено 224 образца от 112 пациентов (50 образцов мокроты от
пациентов с диагнозом ШЛУ туберкулез, 12 образцов мокроты от пациентов с диагнозом
мультирезистентный туберкулез, 50 образцов мокроты от пациентов с диагнозом
чувствительный туберкулез, 50 образцов клинических изолятов (бактериальных культур) -
диагноз ШЛУ туберкулез, 12 образцов клинических изолятов (бактериальных культурых) -
диагноз мультирезистентный туберкулез, 50 образцов клинических изолятов (бактериальных
культур) - диагноз чувствительный туберкулез).
3.2.1. Диагностическая чувствительность.
Диагностическая чувствительность Набора реагентов составила:
- для фторхинолонов при 55 положительных результатах составила 94,7% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для амикацина/канамицина при 49 положительных результатах составила 94,1% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для каприомицина при 43 положительных результатах составила 93,3% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
3.2.2. Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность Набора реагентов составила:
стр. 8из 18. УЕК 1118
--- стр. 9 ---
- для фторхинолонов при 57 положительных результатах составила 94,9% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для амикацина/канамицина при 63 положительных результатах составила 95,4% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
- для каприомицина при 69 положительных результатах составила 95,8% - 100% с
доверительной вероятностью 95%.
3.3. Воспроизводимость.
Результаты дифференциального выявления множественно лекарственно устойчивых /
чувствительных форм с использованием Набора реагентов демонстрируют высокую
воспроизводимость между постановками в пределах аналитической чувствительности метода
коэффициент вариации СУ не более 10%.
Амплификация была проведена на термоциклерах СРХ96 (В1оК.ас1, США) и «ДТ-96» (НПО
«ДНК-Технология», Россия). Интерпретация результатов проводилась согласно инструкции
изготовителя Набора реагентов.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
4.1. Использовать только для диагностики ш V ^^^о .
4.2. Потенциальный риск применения Набора реагентов - класс 26.
4.3. Работу с использованием Набора реагентов осуществлять согласно правилам МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот
при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности», СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
При работе в лабораториях противотуберкулезных учреждений следует дополнительно
руководствоваться требованиями Приказа №109 от 21 марта 2003 г. «О соверщенствовании
противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».
4.4. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекщим сроком годности, а также
использованные реагенты и биологические отходы следует утилизировать в соответствии со
схемой, принятой в организации, в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Класс отходов
определяется согласно СанПин 2.1.7.2790-10. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекщим
сроком годности утилизировать как отходы класса «Г».
Внимание!
- При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР)
недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может
привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
- Применять Набор реагентов строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с Набором реагентов только специально обученный персонал.
- Не использовать Набор реагентов по истечении срока годности.
- Не использовать Набор реагентов, если нарущена внутренняя упаковка или внещний вид реаген
та не соответствует описанию.
- Не использовать Набор реагентов, если не соблюдались условия транспортирования и хранения
согласно инструкции.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть
пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью.
стр. 9из 18. УЕК1118
--- стр. 10 ---
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ
1. Программируемый амплификатор (термоциклер) для ПЦР СРХ96 (ВхоКаё, США), «ДТ-96»
(НПО «ДНК-Технология», Россия) или аналогичные по своим функциональным характеристикам.
По вопросу использования амплификаторов обратиться к производителю.
2. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) II класса защиты.
3. Вортекс.
4. Холодильник, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С.
5. Морозильная камера, поддерживающая температуру не выше минус 20 °С.
6. Автоматические или электронные дозаторы переменного.
7. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема.
8. Штативы для наконечников.
8. Емкость для сброса наконечников.
10. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки типа Эппендорф объемом
0,5 или 1,5 мл.
11. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
12. Дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания
медицинских отходов.
6. АНАЛИЗИРУЕМБ1Е ОБРАЗЦБ1
Основные виды микобактерий, относящихся к МБТК и вызывающих туберкулез у человека:
М ш Ъ есгси1о$18, М. Ъ о V ^ 8 , М. Ъ о V ^$ ВС С.
6.1. Материалом для проведения анализа служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса.
6.2. Ограничения по использованию анализируемого материала.
Образцы с высоким содержанием ДНК МБТК (выделенные из культур) рекомендуется
предварительно развести 100-кратно. Для приготовления разведений необходимо использовать
компонент «Вода», входящий в состав Реагентов для амплификации Набора реагентов
«Полипроб ЛУ ТБ-2».
6.4. Условия хранения анализируемых образцов.
Образцы ДНК можно хранить при температуре не выше минус 20 °С в течение 6 месяцев. При
необходимости более длительного хранения - не выше минус 80°С в течение 3 лет.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Сбор клинических образцов, получение культур МБТК и комплексная лабораторная
диагностика туберкулеза проводятся в соответствии с действующими нормативными и
методическими документами, принятыми на территории Российской Федерации.
Перед проведением анализа на лекарственную устойчивость/чувствительность с помощью
Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-2» необходимо выделить ДНК МБТК из клинического
образца (части образца), бактериальной культуры и провести анализ на обнаружение ДНК
МБТК.
Выделение ДНК МБТК из клинического образца (части образца), бактериальной культуры и
проведение анализа на обнаружение ДНК МБТК может осуществляться Набором реагентов для
обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса методом полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени «Полипроб скрин ТБ» (ООО «ЭнДжентикс», Россия)
№РЗН 2017/6266 от 20.09.2017 г. или любым другим из зарегистрированных на территории
стр. 10 из 18. УЕКШВ
--- стр. 11 ---
Российской Федерации наборов, предназначенных для выделения и обнаружения ДНК МБТК из
клинического материала и культуры МБТК, согласно инструкции к наборам.
Материалом для проведения анализа с помощью Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-2»
служат пробы ДНК, положительные на наличие ДНК микобактерий туберкулезного комплекса.
Анализ с помощью Набора реагентов «Полипроб ЛУ ТБ-2» состоит из следующих этапов:
- приготовление реакционных смесей;
- подготовка к проведению ПЦР-РВ;
- проведение ПЦР-РВ;
- учет результатов анализа.
7.1. Приготовление реакционных смесей.
Внимание! Для каждого клинического образца исследование включает анализ с
использованием двух реакционных смесей ЛУ-8Т и ЛУ-Р^, каждая из которых служит для
выявления мутаций устойчивости к соответствующему антибиотику.
Схема анализа клинических образцов:
2х смесь Схема анализа
ЛУ- 8Ь
Клинические образцы (Н)
К-
К1+ТБ-2
К2+ТБ-2
КЗ+ТБ-2
К \у1+ТБ-2
ЛУ- рд
Клиничеекие образцы (М)
К-
К1+ТБ-2
К2+ТБ-2
КЗ+ТБ-2
К \\4 + тб-2
1. Определить по схеме приготовления реакционных смесей (таблица 4) количество каждого
реагента, требующееся для приготовления реакционной смеси. На одну реакцию амплификации
требуется 13 мкл 2х смеси и 0,7 мкл Тац-полимеразы. Смесь готовить на общее число
исследуемых образцов и контролей (пять контролей: К -, К 1 + тб-2, К 2 + тб-2, К З + тб-2, К \ у1+ тб-2) плюс
запас на одну реакцию.
Внимание! Необходимо приготовить две реакционные смеси - первую с использованием 2х
смеси ЛУ-8Н, и вторую с использованием 2х смеси ЛУ-Р^.
Таюлица 4. Схема приготовления реакционных смесей.
Количеетво
иееледуемых
клиничееких
образов
Количество
исследуемых в
ПЦР-РВ
образцов' для
каждой из 2х
смееей
Количество
реакций
амплификации^
для каждой из
2х емееей
2х емееь,
мкл
Тац-
полимераза,
мкл
Требуемое для
иеследования
количеетво
лунок
етрипованных
пробирок^
1 6 7 91 4,9 12
7 12 13 169 9,1 24
' количество исследуемых клинических образцов + контроли К-, К 1 + тб-ь К 2 + тб-ь К \ у1+ тб-1
^ количество исследуемых образцов + контроли К-, К 1 +тб-ь К2+ т б-1 , К\у1 ; +т б-1+ запас на одну реакцию. В случае иссле
дования одновременно 44 клинических образцов, рекомендуется готовить реакционную смесь с запасом на две реак
ции
^ Для проведения исследования с двумя реакционными смесями (2х смесь ЛУ-К и 2х смесь ЛУ-Н)
стр. 11из18. УЕК1118