Набор реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени "Полипроб скрин ТБ" по ТУ 9398-001-26124018-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ООО «ЭнДжентикс» ИНСТРУКЦИЯ по применению Набора реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Полипроб скрин ТБ» по ТУ 9398-001-26124018-2015. --- стр. 2 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ. Набор реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Полипроб скрин ТБ» (далее по тексту - Набор реагентов), предназначен для обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) в клиническом материале (мокроте) и бактериальных культурах, предположительно содержащих ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Основные виды микобактерий, относящихся к МБТК и вызывающих туберкулез у человека, определяемые Набором реагентов «Полипроб скрин ТБ»: М. tubecrculosis, М. bovis, М. bovis BCG. Простой и удобный метод определения ДНК МБТК обеспечивает возможность быстрой диагностики туберкулеза и своевременного назначения адекватной антибиотикотерапии. 2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА. 2.1. Формы выпуска. Набор реагентов выпускается в 2 формах комплектации: Форма 1 включает комплекты реагентов «Полипроб ДНК Преп», «Скрин ТБ ПЦР» и реагент «СтопАктив МТБ-реагент». Форма 2 включает комплект реагентов «Скрин ТБ ПЦР». Форма комплектации 1 предназначена для проведения полного анализа, включающего пробоподготовку, выделение ДНК из клинического материала и амплификацию ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Форма комплектации 2 предназначена для проведения амплификации ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Для проведения полного анализа необходимо использовать реагенты для пробоподго- товки клинического материала, например, «СтопАктив МТБ-реагент» (ООО «Эн- --- стр. 3 --- Джентикс», Россия), и наборы для выделения ДНК МБТК из ютинического Гр материала и культуры МБТК, например, «Полипроб ДНК Преп» (ООО «ЭнДжен- тикс», Россия). 1.2 Показания. Необходимость обнаружения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) в клиническом материале (мокроте) и бактериальных культурах, предполо жительно содержащих ДНК МБТК, методом полимеразной цепной реакции в режи ме реального времени (ПЦР-РВ). 1.3. Противопоказания. Отсутствуют 2.2. Состав. Внимание! В работе необходимо использовать компоненты строго из одной серии Набора реагентов. Запрещается использование отдельных компонентов, относящихся к разным сериям Набора реагентов. Состав Набора реагентов представлен в таблице 1. Таблица 1. Реагент «СтопАктив МТБ-реагент» включает: Реагент Объем Количество Описание СтопАктив МТБ-реагент 1000 мл 1 флакон Прозрачная бесцветная жидкость Реагент рассчитан на проведение пробоподготовки 100 образцов. Комплект реагентов «Полипроб ДНК Преп» включает: Реагент Объем Количество Описание Лизирзлощий буфер 40 мл 1 флакон Прозрачная бесцветная жидкость Компонент Т 0,1 мл 4 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость ДНК-магнитные частицы 0,8 мл 1 пробирка Суспензия черного цвета Отмывочный буфер (х2) 16 мл 1 флакон Прозрачная бесцветная жидкость Буфер для элюирования ДНК 1,3 мл 8 пробирок Прозрачная бесцветная жидкость Комплект рассчитан на выделение ДНК из 100 образцов. Комплект реагентов «Скрин ТБ ПЦР» включает: --- стр. 5 --- элонгации полинуклеотидных цепей с этих праймеров высокоспецифичным Щ термостабильным ферментом Taq-полимеразой. Выделение ДНК МБТК из клинического образца (части образца) и бактериальной культуры для проведения анализа на обнаружение ДНК МБТК может осуществляться как ручным способом, так и с применением системы автоматизированной пробоподготовки любым из зарегистрированных на территории Российской Федерации наборов, предназначенных для выделения ДНК МБТК из клинического материала и культуры МБТК, например, «Полипроб ДНК Преп» (ООО «ЭнДжентикс», Россия). Внимание! В ходе выделения ДНК к каждому клиническому образцу до начала экстракции необходимо внести внутренний контроль, входящий в состав Реагентов для амплификации из расчета 15 мкл на 1 образец. Мультиплексная ПЦР-РВ проводится на анализаторе для проведения ПЦР с регистрацией результатов в режиме реального времени и состоит из трёх независимых реакций, которые проводятся в одной пробирке одновременно. Результаты амплификации регистрируются по 2 различным каналам флуоресцентной детекции. В составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченные олигонуклеотиды (зонды), содержащие флуоресцентные метки РАМ и HEX, которые гибридизуются с комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного сигнала. Первая реакция позволяет обнаружить специфический фрагмент ДНК мультикопийной вставки IS6110, который присутствует в большинстве штаммов микобактерий туберкулезного комплекса, но может отсутствовать в геноме Mycobacterium tuberculosis. Вторая реакция позволяет обнаружить специфический фрагмент ДНК regX3, представленный в геноме микобактерий туберкулезного комплекса одной копией. Для обнаружения ДНК IS6110 и regX3 используются зонды, меченные красителем РАМ. Наличие флуресцентного сигнала по этому --- стр. 6 --- каналу свидетельствует о наличии в исследуемом образце ДНК МБТК. 0^ Использование двух независимых реакций на различные участки генома микобактерий туберкулезного комплекса позволяет увеличить специфичность и надежность проводимого анализа. Третья реакция позволяет обнаружить специфический фрагмент ДДК внутреннего контроля (1C), тем самым контролировать выполнение процедуры исследования для каждого образца и исключить недостоверные результаты. Для обнаружения ДНК внутреннего контроля используется зонд, меченный красителем HEX. Наличие флуресцентного сигнала по этому каналу свидетельствует о наличии в исследуемом образце ДНК внутреннего контроля. Наличие флуоресцентного сигнала жля внутреннего контроля в случае отсутствия флуоресцентного сигнала по специфическим реакциям подтверждает отсутствие специфических фрагментов ДНК микобактерий туберкулезного комплекса в исследуемой пробе. Отсутствие флуресцентного сигнала по всем трем реакциям свидетельствует об ингибировании ПЦР, что позволяет исключить недостоверный отрицательный результат. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ. 3.1 Аналитическая чувствительность. Аналитическая чувствительность Набора реагентов оценивалась с использованием референсного штамма H37Rv (паспорт выдан ФЕБУ «НУЭСМП» Минздрава России, источник получения АТСС, № штамма 700403 по протоколу ФГБНУ ЦНИИТ). Наименьшее число КОЕ МБТК в образцах, для которых было показано достоверное определение результатов чувствительности - 10 КОЕ на 1 мл образца. 3.2 Аналитическая специфичность. Аналитическая специфичность оценивалась при тестировании референсных штаммов изолятов нетуберкулезных микобактерий (НТМБ), а так же генетически близкородственных МБТК микроорганизмов и микроорганизмов, являюш,ихся наиболее частыми возбудителями бронхолегочной патологии (нетуберкулезной --- стр. 7 --- этиологии), культур микроорганизмов, часто встречающихся в составе нормальной флоры верхних дыхательных путей, культур микроорганизмов, наиболее часто контаминирующих объекты лабораторной и госпитальной среды (44 штамма 37-ми видов микроорганизмов). Кроме того, предметом для исследования аналитической специфичности явилась ДНК человека, выделенная из буккальных соскобов. Перечень референтных штаммов и клинических изолятов: Основные виды микобактерий, относящихся к МБТК и вызывающих туберкулез у человека: М. tubecrculosis, М. bovis, М. bovis BCG. Нетуберкулезные микобактерии: М. avium; М. fortuitum; М. gordonae; М. intracellulare; М. kansasii; М. marinum; М. paratuberculosis; М. phlei; М. scrofulaceum, М. smegmatis; M.xenopi; M.ulcerans М. gastri, М. lentiflavum, М. malmoense, М. hominis, М. liquefaciens и др. Другие микрорганизмы: Нокардии (Nocardia asteroides ВКМ Ас-2718Т, Nocardia brasiliensis ВКМ Ас-863Т, Nocardia brasiliensis ВКМ Ас-864, Nocardia brevicatena ВКМ Ас-936Т, Nocardia camea ВКМ Ас-814Т, Nocardia nova ВКМ Ас-197IT, Nocardia otitidiscaviarum ВКМ Ас-869Т, Nocardia transvalensis ВКМ Ас-867Т), Corynebacterium: Corynebacterium vitaeruminis ВКМ Ac-2189T, Streptococcus Streptococcus pyogenes, STaphylococcus aureus,Escherichi: E. coli K12,Klebsiella pneumonia, Haemophilus influenzae, Moraxella catarhalis. Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus clavatus BKM F-738, Aspergillus flavus BKM F-463, Aspergillus fumigates BKM F-753, Aspergillus niger BKM F-2039, Aspergillus oryzae BKM F-209, Aspergillus terreus BKM F-3687, Aspergillus versicolor BKM F-299, Candida glabrata BKM Y-1481, Candida krusei BKM Y-2595T, Candida rhagii BKM Y-1520, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae BKM Y-375. Исследовано 15 различных образцов ДНК человека, выделенной из буккального эпителия. Исследования показали отсутствие ложноположительных результатов в исследованных образцах видов микроорганизмов и ДНК человека. 3.3. Воспроизводимость. --- стр. 8 --- Результаты выявления ДНК МБТК с использованием Набора реагентов /у демонстрируют высокую воспроизводимость между постановками в пределах аналитической чувствительности метода. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Диагностическая чувствительность Набора реагентов составляет 93,55 %. Диагностическая специфичность Набора реагентов составляет 100 %. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ. Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно биологические (ПНР) исследования клинического материала на наличие возбудите лей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Са нитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, ис пользующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности» При работе в лабораториях противотуберкулезных учреждений следует допол нительно руководствоваться требованиями Приказа №109 от 21 марта 2003 г. «О со вершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». (Приложение №11). При работе всегда следует выполнять следующие требования: - Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». - Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». - Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в --- стр. 9 --- отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадкы процесса. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные реагенты следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790- 10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Класс отходов определяется согласно СанПин 2.1.7.2790- 10. Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности утилизировать как отходы класса «Г». ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. - Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания медицинских отходов. - Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после завершения работ необходимо подвергать ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин. - Набор реагентов предназначен для одноразового применения для проведения ПЦР-исследования указанного количества проб (см. п. «Число анализируемых проб клинического материала»). - Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции. - К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с --- стр. 10 --- микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»). - Не использовать набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента не соответствует описанию. - Не использовать набор реагентов, если не соблюдались условия транспортирования и хранения согласно инструкции. - Не использовать набор реагентов по истечении срока годности. - Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для исключения контакта с организмом человека. - Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ. Предобработка исследуемого материала 1. Реагент «СтопАктив МТБ-реагент» (ООО «ЭнДжентикс», Россия). 2. Микроцентрифуга для пробирок типа Эппендорф (вортекс) до 16 тыс. g. 3. Шейкер (ротатор) для пробирок объемом 50 мл. Выделение ДНК из исследуемого материала 4. Комплект реагентов «Полипроб ДНК Преп» (ООО «ЭнДжентикс», Россия) или другие зарегистрированные на территории Российской Федерации наборы, пред назначенных для выделения ДНК МБТК из клинического материала и культуры МБТК. 5. Дополнительные материалы и оборудование для выделения ДНК - согласно ин струкции к набору для выделения ДНК. При использовании комплекта реагентов «Полипроб ДНК Преп»: 6. Этанол (95-100%). 7. Изопропанол. 10 --- стр. 11 --- 8. Ламинарный бокс (класс биологической безопасности II тип А или тип В). 9. Магнитный штатив для пробирок типа Эппендорф объемом 1,5 мл. 10. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С. 1 ТВортекс. 12. Холодильник, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С. 13. Морозильная камера, поддерживающая температуру не выше минус 20 °С. 14. Автоматические или электронные дозаторы переменного объема. 15. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема. 16. Штативы для пробирок и наконечников. 17. Емкостъ для сброса наконечников. 18. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки типа Эппен дорф объемом 1,5 мл. 19. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09. 20. Дезинфицируюшее средство, которое может быть использовано для обеззаражи вания медицинских отходов. Проведение ПЦР-РВ 21. Программируемый амплификатор (термоциклер) для ПЦР CFX96 (BioRad, США), «ДТ-96» (НПО «ДНК-Технология», Россия) или аналогичные по своим функциональным характеристикам. По вопросу использования амплификаторов обратиться к производителю. 22. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) II класса защиты. 23. Вортекс. 24. Холодильник, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С. 25. Морозильная камера, поддерживающая температуру не выше минус 20 °С. 26. Автоматические или электронные дозаторы переменного объема. 27. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема. 28. Штативы для пробирок и наконечников. 29. Емкость для сброса наконечников. И --- стр. 12 --- // 30. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки типа Эппен- ^ дорф объемом 0,5, 1,5 или 2 мл. 31. Конические градуированные пластиковые пробирки с завинчивающейся крыш кой объемом 50 мл. 32. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09. 33. Дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззаражи вания медицинских отходов. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ. Для проведения исследований используется следующий материал: клинический материал - мокрота, и бактериальные культуры, предположительно содержащие ДНК МБТК. 6.1. Процедура предобработки материала. Сбор клинических образцов, получение культур МБТК и комплексная лабораторная диагностика туберкулеза проводятся в соответствии с действующими нормативными и методическими документами, принятыми на территории Российской Федерации. ПЦР-диагностика с использованием Набора реагентов «Полипроб скрин ТБ» предполагает инактивацию образца (или части образца) перед проведением анализа. Инактивация проводится с помощью добавления реагента «СтопАктив МТБ-реагент» (ООО «ЭнДжентикс», Россия) к нативному образцу (части образца), образцу (части образца), обработанному стандартными методами пробоподготовки при микробиологических исследованиях, к суспензии культуры клеток МБТК. Инактивированный образец (часть образца) пригоден только для исследования методом ПЦР. 6.1.1. Предварительная обработка нативных образцов и их инактивация с помощью Инактивирующего реагента. / 12