--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г. №
УТВЕРЖ,
Гене[^
ОА Корпорэйшн»
Схолль-Энгбертс
2011 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения концентрации глюкозы
в цельной крови энзиматическим колориметрическим методом с депротеинизацией
(ГЛЮКОЗА-ВИТАЛ)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения содержания глюкозы в цельной крови
человека глюкозооксидазным методом с депротеинизацией, в клинико-диагностических и биохимических
лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100, 250 или 500 определений при расходе 2,0 мл рабочего
реагента на один анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
При окислении P-D-глюкозы кислородом воздуха под действием глюкозооксидазы образуется
эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет
хромогенные субстраты в присутствии фенола с образованием окрашенного продукта, интенсивность
окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в пробе и измеряется фотометрически при
длине волны 510 (490-540) нм.
СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят:
- реагент 1 : фосфатный буфер, pH 7,8, 100 ммоль/л, с добавлением фенола, 1 1 ммоль/л - 2 флакона
(по 100 или по 250 мл) или 4 флакона (по 250 мл);
- реагент 2: лиофилизированная смесь (конечная концентрация в рабочем реагенте:
глюкозооксидаза, 3000 ед/л; пероксидаза, 180 ед/л; 4-аминоантипирин, 0,016 ммоль/л, альбумин бычий
сывороточный, 0,005%) - 2 или 4 флакона;
- реагент 3: кислота хлорная, 3,3%, готова к использованию - 1 флакон (50 мл, 125 мл или 250 мл);
- калибратор: калибровочный раствор глюкозы, 10 ммоль/л, в 0,15% растворе бензойной кислоты -
1 флакон (2,0 мл) или 2 флакона (по 2,0 мл).
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейная область определения концентрации глюкозы в диапазоне от 1 до 30 ммоль/л не
превышает 5% .
Чувствительность определения - не более 0,5 ммоль/л.
Коэффициент вариации результатов измерений - не более 5% .
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным материалам
с известным содержанием глюкозы, аттестованным данным методом.
--- стр. 2 ---
Нормальные величины концентрации глюкозы в цельной крови человека составляют; 3,9-5,6
ммоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для
обследуемого контингента.
ОБРАЗЦЫ
Цельная кровь (с депротеинизацией).
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 1 .
Реагент 1 содержит токсичный компонент - фенол. При работе с ним следует соблюдать
осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые. В случае попадания реагента на них следует
промыть пораженное место большим количеством проточной воды.
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г).
При работе с кровью необходимо надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так
как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные
длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной
инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
Спектрофотометр, длина волны 510 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 490 ~ 520
нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;
центрифуга, развивающая ускорение 900 g;
секундомер;
пипетки полуавтоматические одноканальные со сменяемыми наконечниками, позволяющие
отбирать объемы жидкости 0,05; 0,1; 0,5; 1,0 и 2,0 мл;
пробирки вместимостью 5,0 мл;
физиологический раствор (0,9% раствор NaCl);
перчатки резиновые или пластиковые;
вода дистиллированная.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего реагента
Содержимое одного флакона с реагентом 2 растворить в одном флаконе реагента 1 и тщательно
перемешать. Для получения оптимальных результатов рекомендуется после полного растворения
лиофилизата выдержать рабочий реагент в течение 20 мин при комнатной температуре (+18-25 °С).
Полученный рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8 °С не более 6 мес. Допускается
розовая окраска рабочего реагента.
Реагент 3 и калибратор готовы к использованию.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Подготовить по одной пробирке вместимостью 5,0 мл для каждой анализируемой пробы цельной
крови (опытные пробы), одну пробирку для калибратора (калибровочная проба) и одну пробирку для
контрольной (холостой) пробы. Во все пробирки внести по 0,5 мл реагента 3. В пробирки с опытными
пробами добавить по 0,05 мл анализируемой крови; в пробирку с калибровочной пробой - 0,05 мл
калибратора, в пробирку с контрольной (холостой) пробой - 0,05 мл дистиллированной воды. Содержимое
пробирок тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин. После
окончания инкубации центрифугировать только опытные пробы при 900 g в течение 5-10 мин при
комнатной температуре; супернатант отделить.
Внести в пробирки вместимостью 5,0 мл реагенты и анализируемые пробы в количествах,
указанных в таблице 1 .
--- стр. 3 ---
Таблица
Отмерить, мл Опытная проба Калибровочная
проба
Контрольная
(холостая) проба
Супернатант 0,1 - -
Раствор для калибровочной пробы - 0,1 -
Раствор для холостой пробы - - 0,1
Рабочий реагент 2,0 2,0 2,0
Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать в течение 1 5 мин при комнатной
температуре (+18-25°С). Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против
контрольной (холостой) пробы при длине волны 510 (490-520) нм в кювете с длиной оптического пути 1 0
мм. Окраска стабильна в течение 1 часа после окончания инкубации.
РАСЧЕТЫ
Концентрацию глюкозы в цельной крови определить по формуле:
Еоп
С= ---------- X 10
Е кал
где: С - концентрация глюкозы в анализируемой пробе, ммоль/л;
Е o n - оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотн;
Е к а л - оптическая плотность калибратора, ед. опт. плотн;
1 0 - концентрация глюкозы в калибраторе, ммоль/л.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8°С в течение
всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до + 25® С не более 10 сут.
Срок годности набора - 18 мес.
Реагент 3 после вскрытия флакона можно хранить при комнатной температуре в темном месте в
течение срока годности набора при условии достаточной герметичности флакона.
Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2-8 °С не более 3 мес. при
условии достаточной герметичности флакона.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8 °С не более 6 мес.
Если концентрация глюкозы в крови превышает 30 ммоль/л, анализируемую пробу следует
развести физиологическим раствором в 2 раза, повторить определение и полученный результат умножить
на 2 .
Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется использовать
полуавтоматические одноканальные пипетки, аттестованные на точность по значению средней дозы и
сходимости результатов пипетирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ОАО «Витал Девелопмент
Корпорэйшн» по адресу;
194156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, д. 27.
Тел: (812) 326-61-98.
и на кафедру КЛД ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» по адресу;
116000, Москва, 2-й Боткинский пр, д. 5 .
Тел.: (495) 945-82-22.
Генеральный директор
ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн»
Зав. кафедрой клинической лабораторной
диагностики ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава»
доктор мед. наук, профессор