--- стр. 1 ---
ф
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г. №
УТВЕРЖД
Генер
ОАО Дорпорэйшн»
1 гт :1
Е.И.СХОЛЛЬ-Ш ’ .Г ^^Р Т С
2011 г.
• . ч С
о Т о
/;’; - \ / И П . i ^ ИНСТРУКЦИЯ
, ' • 'л 1 / о * " ''-''’■ ' ■ J ^
V ' \ С о:f Применению набора реагентов для определения
^ общей активности креатинкиназы в сыворотке крови
оптимизированным энзиматическим кинетическим методом
(Креатинкиназа-Витал)
Ф
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Креатинкиназа-Витал предназначен для количественного определения общей активности
креатинкиназы в сыворотке крови оптимизированным энзиматическим кинетическим методом в
клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в двух видах - лиофилизированном (вариант I) и жидком (вариант 2) и
рассчитан на проведение 100 или 200 определений при расходе 0,5 мл рабочего реагента на один анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Креатинкиназа катализирует реакцию образования АТФ из креатин фосфата и АДФ. Гексокиназа
в присутствии АТФ фосфорилирует глюкозу с образованием глюкозо-6-фосфата. В реакции
дегидрирования глюкозо-6-фосфата под действием глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы образуется НАДФН.
Скорость восстановления НАДФ в НАДФН, сопровождающаяся увеличением оптической плотности,
пропорциональна активности креатинкиназы (КК) в анализируемом образце и измеряется
фотометрически при длине волны 340 нм.
СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят;
A. Вариант 1 .
- реагент 1 : буфер, pH 6,7, содержащий имидазол, 100 ммоль/л; глюкозу, 20 ммоль/л; магния
ацетат, 10 ммоль/л - 1 флакон (50 мл или 100 мл) или 2 флакона (по 50 мл);
' реагент 2: лиофилизат [конечная концентрация в рабочем реагенте: р -никотинамидаденин-
динуклеотидфосфат ((3-НАДФ), 2 ммоль/л; креатинфосфат, 30 ммоль/л; Н-ацетил-Ь-цистеин, 2 ммоль/л;
диаденозин-5’-пентафосфат, 10 мкмоль/л; АДФ, 2 ммоль/л; АМФ, 5 ммоль/л; глюкозо-6-
фосфатдегидрогеназа, 1500 Е/л; гексокиназа, 2500 Е/л; этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевая
соль, 2 ммоль/л; бычий сывороточный альбумин, 0,08%] - 5 флаконов или 10 флаконов.
B. Вариант 2.
- реагент I: имидазол, 100 ммоль/л; глюкоза, 20 ммоль/л; магния ацетат, 10 ммоль/л; гексокиназа,
2500 Е/л; р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат (р-НАДФ), 2 ммоль/л; этилендиаминтетрауксусной
кислоты натриевая соль, 2 ммоль/л; К-ацетил-Ь-цистеин, 2 ммоль/л; pH 6,7 - 1 флакон (40 мл или 80 мл)
или 2 флакона (по 40 мл);
- реагент 2: креатинфосфат, 30 ммоль/л; АДФ, 2 ммоль/л; АМФ, 5 ммоль/л; диаденозин-5’-пента-
фосфат, 10 мкмоль/л; глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, 1500 Е/л - 1 флакон (10 мл или 20 мл) или 2
флакона (по 10 мл).
--- стр. 2 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейная область определения активности креатинкиназы - в диапазоне от 25 до 1040 Е/л,
отклонение от «линейности» - не более 5 %.
Чувствительность определения - не более 20 Е/л.
Коэффициент вариации результатов определений - не более 5 %.
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины активности креатинкиназы в сыворотке крови у женщин составляют 35-
165 Е/л, у мужчин - 50-190 Е/л при температуре +37® С.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для
обследуемого контингента.
ОБРАЗЦЫ
Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных
элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так
как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные
длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной
инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
- Спектрофотометр, длина волны 340 нм, терм о стати руемая кювета с длиной оптического пути
10 мм; полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор открытого типа;
- термостат, обеспечивающий температуру +37±1°С;
- секундомер;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 мл, 0,5 мл и 10 мл;
- колба коническая вместимостью 100 мл;
- 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор);
- перчатки резиновые или пластиковые.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего реагента
Для варианта 1 : Содержимое одного флакона с регентом 2 растворить в 10 мл реагента 1 ,
тщательно перемешать до полного растворения лиофилизата и выдержать раствор при комнатной
температуре (+18-25®С) в течение 10-20 мин.
Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8®С не более 7
дней.
Для варианта 2: Смешать в колбе конической вместимостью 100 мл необходимое количество
реагента 1 и реагента 2 в соотношении 4:1, Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2
непосредственно после каждого использования.
Полученный рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8°С не более 14 дней или при
комнатной температуре не более 4 дней.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Все определения необходимо проводить при температуре +37°С. Рабочий реагент перед
применением следует прогреть до температуры +37“С в течение 5 мин и в процессе всего определения
хранить при температуре +37°С.
--- стр. 3 ---
в термостатируемую (+37°С) кювету спектрофотометра с длиной оптического пути 10 мм внести
0,5 мл рабочего реагента, подогретого до температуры +37°С, и добавить 0,02 мл сыворотки крови.
Пробу тщательно перемешать, инкубировать в течение 1 мин при температуре +37°С и измерить
оптическую плотность раствора (Ei) при длине волны 340 нм против воздуха. Включить секундомер и
через ] мин (точно!) повторно измерить в аналогичных условиях оптическ>то плотность раствора (Ej).
Рассчитать ДЕ/мин = Ег - Еь
РАСЧЕТЫ
Активность креатинкиназы в сыворотке крови (Е/л) определить по формуле:
А= ДЕ/мин X F
где: А • * активность креатинкиназы, Е/л;
ДЕ/мин - изменение оптической плотности пробы за 1 мин, ед. опт. плотн./мин;
F - фактор пересчета для получения активности в Е/л (указывается в паспорте на набор).
Примечание. 1 Е/л = 16,67 нмоль/(схл).
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке пред приятия-изготовителя при температуре +2-8°С в течение
всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до +25®С не более 5 дней.
Срок годности набора - 12 мес.
Рабочий реагент, приготовленный из реагентов по варианту 1, можно хранить при температуре
+2-8°С не более 7 дней.
Реагент 1 (по варианту 1) после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2-8°С в
темном месте в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флакона.
Рабочий реагент, приготовленный из реагентов по варианту 2, можно хранить при температуре
+2-8°С не более 14 дней или при комнатной температуре не более 4 дней.
Реагенты 1 и 2 (по варианту 2) после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +2-8°С
в темном месте в течение месяца при условии достаточной герметичности флаконов.
Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется
использовать полуавтоматические одноканальные пипетки со сменяемыми наконечниками,
аттестованные на точность по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования.
При активности креатинкиназы в сыворотке крови выше 1000 Е/л пробу следует развести
физиологическим раствором, повторить анализ и результат умножить на разведение.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ОАО “Витал Девелопмент
Корпорэйшн” по адресу:
194 156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, д. 27.
Тел/факс: (812) 326-61-98.
и на кафедру КЛД ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» по адресу;
116 О О О , Москва, 2-й Боткинский пр, д. 5.
Тел.: (495) 945-82-22.
Генеральный директор
ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн» Е.Н, Схолль-Энгбертс
Зав. кафедрой клинической лабораторной
диагностики с курсом молекулярной медицины,
директор НЦ «Институт лабораторной медицины»
ГОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова Росздрава,
Главный специалист-эксперт
по клин. лаб. диагностике Росздравнадзора
по С-ЗФО, д. м. н., профессор