Набор реагентов АмплиСенс® Plasmodium spp./Р.falciparum/P.vivax-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
СОГЛАСОВАНО
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
ЦНИИ
)гии (отребнадзора)
В.Г. Акимкин
20 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 284 «Положительный
контрольный образец, содержащий ДНК Plasmodiuni
vivax»
(СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax)
i t J
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
--- стр. 2 ---
I
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 284 «Положительный контрольный образец, содержащий
ДНК Plasmodium vivax» (СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax), предназначенного для
проведения испытаний набора реагентов АмплиСенс® Plasmodium spp. / Р.
falciparum / Р. WVax-FL методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax
проводят путем внешнего осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax и при постановке ПЦР следует
соблюдать положения МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий,
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе
всегда следует выполнять следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ. РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытуемому набору реагентов.
3.2 Реагенты из испытуемого набора реагентов.
З.ЗТемпература в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП № 284 ПКО
ДНК P.vivax и дать нагреться до комнатной температуры. СОП № 284 ПКО ДНК
P.vivax должен представлять собой прозрачную жидкость, не содержащую каких-
либо включений и посторонних примесей. Оценивают визуально.
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
--- стр. 3 ---
5.1 Содержимое пробирки с СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax перемешивают и
осаждают капли на вортексе. Открывают пробирку и, используя наконечник с
аэрозольным барьером, отбирают необходимый объем (см. следующий пункт),
пробирку закрывают. СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax используется совместно с СОП
№ 275 ПКО ДНК Plasmodium spp и СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum.
5.2 Готовят разведения, указанные в ТУ испытуемого набора реагентов с
использованием ДНК-буфера с ро1у(А), приложенного к СОП. Приготовленные
разведения СОП. имеющие концентрацию не менее 10^копий/мл, можно хранить
при температуре от 2 до 8 °С в течение 12 мес. Приготовленные разведения СОП.
имеющие концентрацию менее 10^ копий/мл, хранению не подлежат и готовятся
заново из разведения СОП с концентрацией 10^ копий/мл.
Разведения готовятся по следующей схеме:
1) исходный препарат, имеющий концентрацию NxlO^, разводится N-кратно до
ближайшего разведения 10"^ с коэффициентом 1 (1x10"^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
Nx10"^/1x10^=N(1)
C/N=A (2)
С-А=В (3), где
NxlO^ - исходная концентрация СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax,
1x10^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
копий/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП. который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10^, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфера с ро1у(А), который необходимо взять для
приготовления С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10^,
ближайшего к исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации 1x10"^.
2) Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10"^ копий/мл разводится
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ испытуемого набора реагентов;
3) Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, готовят
последующие разведения, указанные в ТУ, путем последовательных
двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
Например, из СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. (4,5x10® коп/мл), СОП № 283
ПКО ДНК P.falciparum (2x10® коп/мл) и СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax (1x10® коп/мл)
необходимо приготовить смешанный СОП Plasmodium spp./P.falciparum/P.vivax с
концентрацией каждого компонента 5x10®, 1x10® и 2x10^ коп/мл: ^
-маркируют микропробирки вместимостью 1,5 мл «5x10®» «5x10 », «1x10 » и
«2x10^».
-в микропробирку, маркированную «5x10®», вносят автоматическим дозатором,
используя наконечник с аэрозольным барьером, 14 мкл ДНК-буфера с ро1у(А),
11 мкл СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp., 25 мкл СОП № 283 ПКО ДНК
P.falciparum и и 50 мкл СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax, тщательно перемешивают
и осаждают капли с крышки пробирки на вортексе;
--- стр. 6 ---
СОГЛАСОВАНО
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 275 «Положительный
контрольный образец, содержащий ДНК Plasmodium
spp.»
(СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp.)
td
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
--- стр. 7 ---
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 275 «Положительный контрольный образец, содержащий
ДНК Plasmodium spp.» (СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp.), предназначенного
для проведения испытаний набора реагентов АмплиСенс® Plasmodium spp. / Р.
falciparum / Р. WVax-FL методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП № 275 ПКО ДНК
Plasmodium spp. проводят путем внешнего осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. и при постановке ПЦР
следует соблюдать положения МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При
работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытуемому набору реагентов.
3.2 Реагенты из испытуемого набора реагентов.
З.ЗТемпература в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП № 275 ПКО
ДНК Plasmodium spp. и дать нагреться до комнатной температуры. СОП № 275
ПКО ДНК Plasmodium spp. должен представлять собой прозрачную жидкость, не
содержащую каких-либо включений и посторонних примесей. Оценивают
визуально.
--- стр. 8 ---
5.1 Содержимое пробирки с СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. перемешивают
и осаждают капли на вортексе. Открывают пробирку и, используя наконечник с
аэрозольным барьером, отбирают необходимый объем (см. следуюидий пункт),
пробирку закрывают. СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. используется
совместно с СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum и СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax.
5.2Готовят разведения, указанные в ТУ испытуемого набора реагентов с
использованием ДНК-буфера с ро1у(А), приложенного к СОП. Приготовленные
разведения СОП, имеющие концентрацию не менее 10^ копий/мл, можно хранить
при температуре от 2 до 8 °С в течение 12 мес. Приготовленные разведения СОП.
имеющие концентрацию менее 10^ копий/мл, хранению не подлежат и готовятся
заново из разведения СОП с концентрацией 10^ копий/мл.
Разведения готовятся по следующей схеме:
1) исходный препарат, имеющий концентрацию NxlO'^, разводится N-кратно до
ближайшего разведения Ю'^с коэффициентом 1 (1x10^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
Nx10^/1x10'^=N(1)
C/N=A (2)
С-А=В (3), где
NxlO"^ - исходная концентрация СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp.,
1x10^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
копий/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП. который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10^, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфера с ро1у(А), который необходимо взять для
приготовления С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"^,
ближайшего к исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации IxlO'^.
2) Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10^ копий/мл разводится
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ испытуемого набора реагентов;
3) Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, готовят
последующие разведения, указанные в ТУ, путем последовательных
двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
Например, из СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. (4,5x10® коп/мл), СОП № 283
ПКО ДНК P.falciparum (2x10® коп/мл) и СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax (1x10® коп/мл)
необходимо приготовить смешанный СОП Plasmodium spp./P.falciparum/P.vivax с
концентрацией каждого компонента 5x10^, 1x10^ и 2x10^ коп/мл:
-маркируют микропробирки вместимостью 1,5 мл «5x10®» «5x10®», «1x10®» и
«2x10^>.
-в микропробирку, маркированную «5x10®», вносят автоматическим дозатором,
используя наконечник с аэрозольным барьером, 14 мкл ДНК-буфера с ро1у(А),
11 мкл СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp., 25 мкл СОП № 283 ПКО ДНК
--- стр. 11 ---
СОГЛАСОВАНО
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 283 «Положительный
контрольный образец, содержащий ДНК Plasmodium
falciparum»
(СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum)
td
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
--- стр. 12 ---
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 283 «Положительный контрольный образец, содержащий
ДНК Plasmodium falciparum» (СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum),
предназначенного для проведения испытаний набора реагентов АмплиСенс®
Plasmodium spp. / Р. falciparum / Р. Vivax-FL методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП № 283 ПКО ДНК
P.falciparum проводят путем внешнего осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum и при постановке ПЦР следует
соблюдать положения МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий,
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе
всегда следует выполнять следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
3 МАТЕРИАЛЫ. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытуемому набору реагентов.
3.2Реагенты из испытуемого набора реагентов.
3.3Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 '’С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП № 283 ПКО
ДНК P.falciparum и дать нагреться до комнатной температуры. СОП № 283 ПКО
ДНК P.falciparum должен представлять собой прозрачную жидкость, не
содержащую каких-либо включений и посторонних примесей. Оценивают
визуально.
--- стр. 13 ---
5.1 Содержимое пробирки с СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum перемешивают и
осаждают капли на вортексе. Открывают пробирку и, используя наконечник с
аэрозольным барьером, отбирают необходимый объем (см. следующий пункт),
пробирку закрывают. СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum используется совместно с
СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp и СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax.
5.2Готовят разведения, указанные в ТУ испытуемого набора реагентов с
использованием ДНК-буфера с ро1у(А), приложенного к СОП. Приготовленные
разведения СОП. имеющие концентрацию не менее 10^ копий/мл, можно хранить
при температуре от 2 до 8 °С в течение 12 мес. Приготовленные разведения СОП.
имеющие концентрацию менее 10^ копий/мл, хранению не подлежат и готовятся
заново из разведения СОП с концентрацией 10^ копий/мл.
Разведения готовятся по следующей схеме:
1) исходный препарат, имеющий концентрацию NxlO^, разводится N-кратно до
ближайшего разведения 10^ с коэффициентом 1 (1x10^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
Nx10^/1x10'^=N(1)
C/N=A (2)
С-А=В (3), где
NxlO^ - исходная концентрация СОП № 283 ПКО ДНК P.falciparum,
IxlO'^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
копий/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП, который необходимо взять для приготовления С
СОП в концентрации 1x10"^, ближайшего кмкл раствора, содержащего
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфера с ро1у(А), который необходимо
приготовления С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации
взять для
1x10^.
2)
ближайшего к исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации IxlO"^.
СОП с концентрацией 1x10"^ копий/мл разводится
разведения СОП с
Полученный препарат С011 с концентрацией
последовательно десятикратно до получения первого
концентрацией, указанной в ТУ испытуемого набора реагентов:
3) Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, готовят
последующие разведения, указанные в ТУ, путем последовательных
двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
Например, из СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp. (4,5x10® коп/мл), СОП № 283
ПКО ДНК p.falciparum (2x10® коп/мл) и СОП № 284 ПКО ДНК P.vivax (1x10® коп/мл)
необходимо приготовить смешанный СОП Plasmodium spp./P.falciparum/P.vivax с
концентрацией каждого компонента 5x10®, 1x10® и 2x10^ коп/мл:
-маркируют микропробирки вместимостью 1,5 мл «5x10®» «5x10®», «1x10®» и
«2x10^>.
-в микропробирку, маркированную «5x10®», вносят автоматическим дозатором,
используя наконечник с аэрозольным барьером, 14 мкл ДНК-буфера с ро1у(А),
11 мкл СОП № 275 ПКО ДНК Plasmodium spp., 25 мкл СОП № 283 ПКО ДНК
--- стр. 20 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы по
надзору в сфере защиты прав
потребит§д^^^и благополучия человека
Эгшдемиологии
Рс
1. Акимкин
20^0 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® P la s m o d iu m spp. / P .fa lc ip a r u m I
P .v iv a x -F L
АмплиСенс‘
ы А
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 21 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ......................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ........................................................................7
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.........................................................................................7
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ...........................................................................................9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.............................................10
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 12
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК...........................13
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................14
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................15
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....................................................15
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN)...........................................................17
СОСТАВ.........................................................................................................................17
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..........17
A. Подготовка проб для амплификации................................................................17
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 19
B. Анализ и интерпретация результатов...............................................................20
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)...................................................................24
СОСТАВ.........................................................................................................................24
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..........24
A. Подготовка проб для амплификации...............................................................24
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 25
B. Анализ и интерпретация результатов..............................................................26
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................30
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ..................................................31
СИМВОЛЫ. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................32
ПРИЛОЖЕНИЕ 1...............................................................................................................33
--- стр. 22 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
ТЦПД,о - титр вируса, выраженный в тканевых цитопатических дозах
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® Plasm odium spp. / Р. falciparum /
P.vivax-FL предназначен для качественного определения ДНК
всех видов малярийных плазмодиев {Plasm odium spp.) и
дифференциации ДНК возбудителей тропической {Р. falciparum)
и трехдневной (P.vivax) малярии в биологическом материале
(цельная кровь, комары) методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК,
экстрагированные из исследуемого материала.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на заболевания, вызванные
группой малярийных плазмодиев вне зависимости от формы и
наличия манифестации заболевания.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда забор материала не может быть осуществлен по
медицинским показаниям.
--- стр. 23 ---
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только
медицинские работники, обученные методам молекулярной
диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (BKO-FL) и одновременной
амплификации участков ДНК Plasmodium spp., Р.falciparum,
P.vivax и ДНК BKO-FL с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией. BKO-FL позволяет контролировать все этапы ПЦР-
исследования для каждого образца и оценивать влияние
ингибиторов на результаты ПЦР-исследования.
Амплификация участка ДНК проводится при помощи
специфичных к этому участку праймеров и фермента Taq-
полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, комплементарные
участкам амплифицируемых ДНК-мишеней, что позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с
системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводится амплификация четырех ДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по следующим каналам
флуоресцентной детекции (см. табл. 1):
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX Суб
ДНК-мишень ДНК Plasmodium
spp.
ДНК
P.falciparum
ДНК
Р. vivax ДНК BKO-FL
Область
амплификации
Нетранскриби-
руемая область
между сохЗ и сох1
Сох1 Сох 1
Искусственная
нуклеотидная
последовательность
--- стр. 24 ---
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1 и 2 предназначены для проведения амплификации
ДН1К с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДН1К в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДР1К.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций
амплификации, включая контроли.
Форма 2 рассчитана на проведение 48 реакций
амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий/мл^
Цельная кровь 50 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
2x10^
Цельная кровь 100 «МАГНО-
сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Комары 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДFlK».
Аналитическая специфичность
Fla6op реагентов обнаруживает участки ДFIK заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
^ Количество копий микроорганизма в 1 мл образца исследуемого материала.
--- стр. 25 ---
реагентов доказана при
микроорганизмов/штаммов:
исследовании следующих
Таблица 3
Возбудитель Штамм Концентрация
Japanese encephalitis virus {JEV) Pekin-1 Титр10®ТЦПД50/мл
Rickettsia heilongjiangensis Приморье-25/81 He менее 10^ коп/мл
Dengue virus {DENY) DENV-1/8/Taiand/01/2013 He менее 10^ ГЭ/мл
Leptospira spp. {серогруппа
Icterohaemorrhagiae)
M20 (Copenhageni)
Не менее 10^
микр/мл
Leptospira spp. (серогруппа
Javanica)
Poi
Rickettsia prowazekii Madrid-E
Rickettsia raoultii DnS-14-Шайман
Chikungunya virus (CHIKV) Ross late
Tick-borne encephalitis virus {TBEV) Комарове
Zika virus (ZIKV)
MRS-Opy Martinique-PaPi
2015 10^ и/мл
Rickettsia sibirica subsp. sibirica Баево-105-87
не менее 10® коп/мл
Rickettsia conorii subsp. conorii Ml
Borrelia miyamotoi lzh-4
Yellow fever virus {YFV) 17D
West Nile virus (WNV) Leiv-VLG99-27889 human
При тестировании образцов ДНК вышелеречисленных
микроорганизмов, а также ДНК цельной крови людей, не
бывавших в эндемичных по малярии регионах, ДНК комаров,
неслецифических реакций выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и вослроизводимость исследования были
определены лутем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
представляли собой смесь стандартных образцов предприятия,
содержащих ДНК Plasmodium spp., P.falciparum, P.vivax с
концентрацией 1x10"^ ГЭ/мл каждого, в качестве отрицательного
образца был использован реагент ОКО.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
--- стр. 26 ---
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в разных лабораториях, разными операторами, в
разные дни, на разных приборах, разных серий набора
реагентов.
Результаты представлены в табл. 4.
Таблица 4
АмплиСенс®
Plasm odium
spp./
P .falciparum /
P.v/Vax-FL
Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов,
%
Количество
образцов
Совпадение
результатов,
%
Форма 1 Положительные 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
Форма 2 Положительные 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы следующие образцы (см. табл. 5):
Таблица 5
Вид исследуемого материала Количество
проб
Кровь от пациентов с подозрением на малярию 489
Кровь от пациентов с клиническим диагнозом «Малярия»,
подтвержденным методом микроскопии тонкого мазка крови или
толстой капли крови
88
Всего 577
В качестве референтного метода использовался набор
реагентов «SD Bioline Malaria Ag P.f/Pan (Standart Diagnostics, Inc.
(«Стандарт Диагностике, Инк.»), Корея) (Иммунохроматография
(тест-кассеты))» (РУ № ФСЗ 2009/05702 от 27.02.2014).
Результаты представлены в табл. 6 и 7.
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® Plasmodium spp. / P.falciparum I P.vivax-FL в
сравнении с референтным методом
Таблица 6
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс® H a s m o d iu m
spp. / P .falciparum 1
P.wVax-FL
Результаты применения
референтного метода
пол ожител ьн ыхотрицательных
Цельная кровь
Всего
исследовано
577 образцов
положительных 311 3
отрицательных 1 262
--- стр. 27 ---
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
Вид исследуемого
материала
Диагностическая
чyвcтвитeльнocть^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Цельная кровь 99,7% (98,2-99,9 %) 98,9% (97,6-99,8 %)
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна лроводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические
биологического материала
инфекционных болезней,
эпидемиологических правил
(ПЦР) исследования
на наличие возбудителей
с соблюдением санитарно-
СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами 1II-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового
применения для проведения ПЦР-исследования указанного
количества проб (см. раздел «Состав»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
® Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
--- стр. 28 ---
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно
инструкции.
- Не использовать набор реагентов ло истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные лерчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы. Все операции проводятся только в
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и
слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании ло назначению и соблюдении
вышеперечисленных мер предосторожности набор реагентов
безопасен.
При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и
хранения риски взрыва и возгорания отсутствуют.
Сведения о безопасности набора реагентов доступны по
запросу.
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку'^,
биологический материал, инструменты и предметы,
загрязненные биологическим материалом, следует удалять в
соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с
медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР
лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
--- стр. 30 ---
12. Автоматические дозаторы переменного объема (например,
ООО «Биохит», Россия, или аналогичные).
13. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 °С.
14.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки.
15.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и
инактивации материалов.
Экстракция ДНК из исследуемых образцов
16. Комплект реагентов для экстракции ДНК - «РИБО-преп»
(РУ ФОР 2008/03147), «МАГНО-сорб» (РУ ФОР 2010/07265)
или другие, рекомендованные Изготовителем.
17. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции
ДНК - согласно инструкции к комплекту реагентов для
экстракции ДНК.
При использовании автоматических станций для экстракции
нуклеиновых кислот:
18. Автоматическая станция для экстракции НК (например.
Neon 100 (Xiril AG (Ксирил АГ), Швейцария, Тесап Schweiz
AG («Тикан Швейц АГ»), Швейцария) и другие,
рекомендованные Изготовителем).
19. Комплект реагентов для экстракции ДНК (например,
«МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265)) и набор расходных
материалов к автоматической станции.
Амплификация с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией продуктов амплификации
20.Одноразовые полипропиленовые пробирки при работе с
«ПЦР-комплектом» вариант FRT-50 FN;
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки
объемом 1,5 мл (например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) для приготовления
реакционной смеси;
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой
или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с
прозрачными крышками (например, Ахудеп, Inc.
(«Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) - при
использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
--- стр. 31 ---
плоской крышкой (например. Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) или пробирки для ПЦР к
Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с
крышками (например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»),
Германия, или аналогичные) - при использовании
лрибора роторного типа.
21. Одноразовые наконечники для дозаторов леременного
объема с фильтром до 100 и до 200 мкл (например, Axygen,
Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
22. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл
(налример, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
23. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс)
(налример, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С.», ЗАО «Ламинарные
системы», Россия, или аналогичный).
24. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
25. Автоматические дозаторы леременного объема (налример,
ООО «Биохит», Россия, или аналогичные).
26. Программируемый амллификатор с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»,
имеющий 4 или более независимых каналов
флуоресцентной детекции, (например, Rotor-Gene О
(QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad
Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз, Инк.»), США) и
другие, рекомендованные Изготовителем).
27. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 °С.
28.Отдельный халат, шалочки, обувь и одноразовые лерчатки.
29.Емкость для сброса наконечников.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- цельная кровь,
- комары.
Цельная кровь
Взятие крови следует производить натощак или через 3 часа
после приема пищи одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в
лробирку (слециальная вакуумная система) с ЭДТА или
--- стр. 32 ---
г
цитратом натрия в качестве антикоагулянта. После взятия
крови пробирку следует плавно несколько раз перевернуть
вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась
с антикоагулянтом. (В противном случае кровь свернется, и
экстракция ДНК станет невозможной!). После плавного
перемешивания пробирку поместить в штатив.
Допускается хранение образцов цельной крови до
проведения предобработки:
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 12 часов;
- при температуре не выше 16 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Комары
Собранный материал разбирают в лаборатории по видам,
полу, местам и датам сбора и помещают в сухие чистые
пробирки объемом 2,0 мл. При объединении комаров в пулы
число особей в одном пуле не должно превышать 50.
Допускается хранение материала после разбора и
формирования проб:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 месяца;
- при температуре не выше минус 68 °С или в сосуде Дьюара
с жидким азотом - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ
ДНК
Комары (суспензия)
Комаров, для приготовления суспензии объединить в пулы
не более 50 особей перенести в стерильную фарфоровую
чашу, добавить 0,9% раствор натрия хлорида (стерильный
физиологический раствор) или фосфатный буферный раствор
(PBS) из расчета 1 комар - 30 мкл раствора и гомогенизировать
пробу стерильным пестиком. При наличии автоматического
гомогенизатора применяют следующие параметры для
гомогенизации комаров: диаметр шариков - 5 мм, частота - 50
Гц/с, время гомогенизации 5 мин, объем буфера - 700 мкл (пул
--- стр. 33 ---
из 25 комаров), 1500 мкл (пул из 50 комаров). Наконечником с
фильтром перенести пробу в микроцентрифужную пробирку
объемом 1,5 мл и центрифугировать в течение 1 мин при 10
тыс g (12 тыс об/мин для микроцентрифуги типа «Эппендорф»).
Для экстракции ДНК отобрать 100 мкл надосадочной жидкости.
Допускается хранение предварительно обработанных
комаров до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С или в сосуде Дьюара
с жидким азотом, предварительно разделив на пулы по
50 особей - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Непригодными для исследования являются образцы крови,
взятые в пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта.
Для контроля эффективности экстракции ДНК и реакции
амплификации в наборе реагентов предусмотрено
использование внутреннего контрольного образца (BKO-FL),
который добавляется в каждый биологический образец на
этапе экстракции нуклеиновых кислот. По окончании реакции
амплификации наличие сигнала, свидетельствующего о
накоплении фрагментов ДНК BKO-FL, говорит о достаточной
эффективности экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии
ингибиторов ПЦР.
Потенциально интерферирующие вещества
Для оценки потенциальной интерференции были выбраны
эндогенные и экзогенные вещества, которые могут
присутствовать в биологическом материале (цельная кровь),
используемом для исследования.
Были протестированы модельные образцы цельной крови
без добавления и с добавлением эндогенных и экзогенных
потенциально интерферирующих веществ. Концентрация
каждого потенциально интерферирующего вещества указана в
табл. 8.
Модельные образцы цельной крови содержали ДНК
--- стр. 41 ---
образец считать положительным. При получении
отрицательного результата в ловторной постановке образец
считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие
материала для анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 9 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируе
мый этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (СО
РАМ JOE ROX Су5
ОК Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
опоеделено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
к+ ПЦР
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для лоложительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Ct) ло каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5 отсутствует или
превышает граничное значение. Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых не
обнаружена слецифическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) ло каналу для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX определено
значение лорогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо лредлринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена слецифическая ДНК, начиная с этапа
--- стр. 42 ---
экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
любых флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или КОХ, и/или Су5
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла (Cf), при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 43 ---
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участков ДНК Plasmodium spp. / P.falciparum /
P.vivax с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Plasm odium
spp.-Lyo Порошок белого цвета -
48 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ Plasm odium spp. Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 48 реакций
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для
амплификации с готовой лиофилизированной реакционной
ПЦР-смесью Plasmodium spp.-Lyo для амплификации ДНК
исследуемых и контрольных образцов (количество
контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых
образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с
помощью комплектов реагентов для проведения экстракции
методом магнитной сепарации, необходимо избегать
попадания сорбента в реакционную смесь.
--- стр. 47 ---
образец считать положительным. При получении
отрицательного результата в повторной постановке образец
считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие
материала для анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 16 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 16
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируе
мый этап
ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (СО
FAM JOE ROX Су5
ОК Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
опоелелено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ПЦР
опоелелено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
опоелелено
меньше
граничного
опоелелено
меньше
граничного
Возможные ошибки;
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла {Ct) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5 отсутствует или
превышает граничное значение. Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых не
обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX определено
значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
--- стр. 48 ---
обнаружена специфическая ДНК, начиная с этапа
экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
любых флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение лорогового
цикла (Cf), лри этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экслоненциального лодъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат лолучен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется ловторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 49 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-
буфера-Н и ПЦР-смеси-FL Plasmodium spp.
ПЦР-буфер-Н, ПЦР-смесь-FL Plasmodium spp. хранить в
морозильной камере при температуре от минус 24 до
минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL Plasmodium spp. хранить в
защищенном от света месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь
Plasmodium spp.-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в
защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
--- стр. 50 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять ло
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru^.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций лри его ислользовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников лри применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
^ Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru.
--- стр. 51 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу V
LOT Код партии
IVD Медицинское изделие
для диагностики in vitro c m
VER Дата изменения
1
Температурный диапазон
ы ЛИзготовитель
т
А
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по
применению
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к инструкции по
применению
Не допускать воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги