Набор реагентов для определения соматических мутаций в гене EGFR методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (EGFR) по ТУ 21.20.23-112-46482062-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 5 --- ^>^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 5 EGFR Листов 43 1 ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ 1.1 Полное наименование набора: Набор реагентов для определения соматических мутаций в гене EGFR методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (EGFR), далее по тексту - набор реагентов. 1.2 Назначение: Набор реагентов предназначен для определения соматических мутаций в гене EGFR (делеций и инсерций в 19 экзоне, инсерций в 20 экзоне, мутаций L858R, Т790М, L861Q, S768I и G719X) методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в препаратах ДНК, полученных из фиксированных в формалине парафинизированных образцов опухолей больных немелкоклеточным раком легкого с целью отбора пациентов для назначения таргетной терапии ингибиторами тирозинкиназы. Вариант исполнения EGFR 8 предназначен для определения всех указанных мутаций, вариант исполнения EGFR 4 является сокращённым вариантом исполнения и предназначен для определения делеций и инсерций в 19 экзоне, мутаций L858R, Т790М. 1.3 Функциональное назначение: сопутствующая диагностика. 1.4 Показания к проведению анализа: необходимость подбора препаратов для таргетной терапии опухолей больным немелкоклеточным раком лёгкого. Противопоказаний к применению нет. 1.5 Демографические и популяционные аспекты: применение набора реагентов не зависит от популяционных и демографических аспектов. 1.6 Область применения: Набор реагентов может быть использован в клинико- диагностических лабораториях медицинских учреждений и научно- исследовательской практике. 1.7 Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории. 1.8 Применять набор реагентов строго по назначению согласно данной инструкции по применению. --- стр. 6 --- ^ ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 6 EGFR Листов 43 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 2.1 Состав набора реагентов Набор реагентов EGFR вьтускается в двух вариантах исполнения: EGFR 4 и EGFR 8. Набор реагентов в варианте исполнения EGFR 8 позволяет выявить делеции и инсерции в 19 экзоне, инсерции в 20 экзоне, мутации L858R, Т790М, L861Q, S768I и G719X; Набор реагентов в варианте исполнения EGFR 4 позволяет выявить делеции и инсерции в 19 экзоне, мутации L858R, Т790М. 1 ^ R1-H806-S3/4, EGFR 4, фасовка S Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смеси для амплификации, запечатанные парафином Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под воскообразным белым слоем 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 500 мкл Минеральное масло Прозрачная бесцветная вязкая маслянистая жидкость 2 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 130 мкл Крышки для Стрипов 12 шт. R1-H806-UA/4, EGFR 4, фасовка U Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смесь для амплификации EGFR-4.1 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл Смесь для амплификации EGFR - 4.2 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл ПЦР-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 600 мкл Полимераза TexHoTaq МАХ Прозрачная бесцветная вязкая жидкость 1 пробирка 30 мкл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 130 мкл --- стр. 7 --- ^ ^ ЛНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 7 EGFR Листов 43 l5IEl R1-H807-S3/4, EGFR 8, фасовка S Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смеси для амплификации, запечатанные парафином Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под воскообразным белым слоем 24 стрипа по 8 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 4 пробирки по 500 мкл Минеральное масло Прозрачная бесцветная вязкая маслянистая жидкость 4 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 130 мкл Крышки для стрипов 24 шт. IsM EI R1-H807-UA/4, EGFR 8, фасовка U Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смесь для амплификации EGFR-8.1 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл Смесь для амплификации EGFR-8.2 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл Смесь для амплификации EGFR-8.3 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл Смесь для амплификации EGFR - 8.4 Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 300 мкл ПЦР-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 600 мкл Полимераза TexHoTaq МАХ Прозрачная бесцветная вязкая жидкость 1 пробирка 60 мкл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 130 мкл Все компоненты набора реагентов готовы к применению и не требуют дополнительной подготовки к работе. 2.2 Количество анализируемых проб Набор реагентов предназначен для одноразового применения и рассчитан на 48 определений, включая отрицательные и положительные контроли. --- стр. 8 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ к Инструкция по применению Лист 8 EGFR Листов 43 2.3 Принцип действия набора реагентов Метод: полимеразная цепная реакция в режиме реального времени с полуколичественным определением доли мутантных аллелей. Принцип метода основан на использовании технологии аллель-специфичной амплификации ДНК, заключающейся в повторяющихся циклах: температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройкой полинуклеотидных цепей с этих праймеров Taq-полимеразой. Для повыщения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта. «Горячий» старт для фасовки S обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв, разделённых прослойкой из парафина. Смещение слоёв и превращение их в амплификационную смесь происходит только после плавления парафина. «Горячий» старт для фасовки U обеспечивается использованием полимеразы, активность которой блокирована антителами. Активация фермента происходит только после предварительного прогрева реакционной смееи при 94°С в течение 5 минут. Это исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. В реакционную смесь для проведения ПЦР введены ДНК-зонды, каждый из которых несёт флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведёт к возрастанию уровня флуоресценции. Количество разрушенных зондов, а, следовательно, и уровень флуоресценции пропорциональны количеству образовавшихся специфических ампликонов и измеряются на каждом цикле амплификации в режиме реального времени. Для анализа продуктов ПЦР используют детектирующий амплификатор. Условия реакции и используемые олигонуклеотиды подобраны таким образом, чтобы наиболее эффективно обеспечить амплификацию на матрице мутантного аллеля. Значение порогового цикла Ср на матрице мутантного аллеля значительно опережает фоновую амплификацию на матрице нормального аллеля дикого типа - не менее 6-9 циклов в зависимости от количества матрицы. Помимо аллель-специфичных олигонуклеотидов к мутантным аллелям гена EGFR в пробирки со смесями для амплификации добавлены праймеры и ДНК-зонды для определения фрагмента ДНК 5 экзона гена EGFR (КВМ), который используется для контроля прохождения полимеразной цепной реакции, а также для определения и полуколичественной оценки доли мутантных аллелей. Для определения мутации используется показатель разницы 8 --- стр. 9 --- ^^^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 9 EGFR Листов 43 индикаторных циклов мутантного аллеля и КВМ (dCp): значение dCp менее 6-9 циклов в зависимости от значения КВМ свидетельствует о наличии мутации. ДНК-зонды для детекции продуктов амплификации ДНК мутантных аллелей гена EGFR помечены флуоресцентными метками Fam, Hex и Rox, а для детекции фрагмента ДНК 5 экзона гена EGFR (КВМ) - Су5. Использование нескольких каналов детекции позволяет определять несколько показателей в одной пробирке и сократить количество материала, необходимого для проведения исследования. В определенную пробирку набора реагентов добавлен олигонуклеотид с флуоресцентной меткой Rox - «Маркер». Он используется прибором как маркер определения положения Стрипа в планшете. После прохождения амплификации программное обеспечение детектирующего амплификатора сравнивает заданное оператором расположение пробирок с реальным положением маркера, и, если находит несовпадение, то предупреждает оператора о несоответствии. Для оценки валидности полученных результатов учитывают показатель контроля взятия материала (КВМ). В таблице 1 приведены каналы детекции продуктов амплификации и цветовая кодировка смесей для амплификации. Таблица 1 - Характеристика смесей для амплификации: соответствие каналов детекции выявляемым мутациям и цветовая кодировка смесей для амплификации. EGFR 4, Фасовка S № пробирки Стрипа со смесями для амплификации, запечатанными парафином Канал детекции Цвет смеси/парафинаFam Hex Rox Cy5 1 Т790М L858R маркер KBM Голубой/Белый 2 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный /Белый 3 Т790М L858R маркер KBM Голубой/Белый 4 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный /Белый 5 T790M L858R маркер KBM Г олубой/Белый 6 Dell9ex, Insl9ex - Ins19ex KBM Бесцветный /Белый 7 T790M L858R маркер KBM Голубой/Белый 8 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный /Белый --- стр. 10 --- ^ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 10 EGFR Листов 43 EGFR4, Фасовка U Пробирка со смесью для амплификации Канал детекции Цвет смесиFam Hex Rox Cy5 EGFR-4.1 Т790М L858R маркер KBM Голубой EGFR-4.2 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный EGFR 8,, Фасовка S № пробирки стрипа со смесями для амплификации, запечатанными парафином Канал детекции Цвет смеси/парафинаFam Hex Rox Cy5 1 Т790М L858R маркер KBM Голубой/Белый 2 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный /Белый 3 G719X Ins20ex - KBM Бесцветный /Белый 4 L8610 S768I - KBM Бесцветный /Белый 5 Т790М L858R маркер KBM Г олубой/Белый 6 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный /Белый 7 G719X Ins20ex - KBM Бесцветный /Белый 8 L8610 S768I - KBM Бесцветный /Белый EGFR 8,, Фасовка U Пробирка со смесью для амплификации Канал детекции Цвет смесиFam Hex Rox Cy5 EGFR-8.1 Т790М L858R маркер KBM Голубой EGFR-8.2 Dell9ex, Insl9ex - Insl9ex KBM Бесцветный EGFR-8.3 G719X Ins20ex - KBM Бесцветный EGFR-8.4 L8610 S768I - KBM Бесцветный Дискриминация между делецией и инсерцией в 19 экзоне осуществляется с учетом сигнала по каналу Rox: при наличии сигнала по каналу Fam (Dell9ex, Insl9ex) и отсутствии сигнала по каналу Rox (Insl9ex) делают заключение о делеции в 19 экзоне, при наличии сигнала по каналу Fam (Dell9ex, Insl9ex) и наличии сигнала по каналу Rox (Insl9ex) делают заключение об инсерции в 19 экзоне. Dell9ex, Insl9ex Insl9ex Заключение мутация мутация Инсерция в 19 экзоне мутация норма Деления в 19 экзоне норма норма норма Алгоритм анализа и интерпретации результатов представлен в Приложении А к данной инструкции. 2.4 Время проведения анализа - от 2 ч (без учёта пробоподготовки). 10 --- стр. 11 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 11 EGFR Листов 43 3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 3.1 Специфичность анализа В таблице 2 приведен перечень мутаций гена EGFR, выявляемых с помощью набора реагентов EGFR. Таблица 2.1- Перечень мутаций гена EGFR, выявляемых с помощью набора реагентов Мутация Экзон Нуклеотидные замены, делеции и инсерции NM 005228.5 Cosmic ID или ClinVar RCV Id Р.Т790М 20 С.23690Т COSM6240 P.L858R 21 c.2573T>G COSM6224 С.2573 2574delinsGT COSM12429 Делеции в 19 экзоне del2235<2258 (без дифференцировки) P.L747 T751delinsS С.2240 2251 del COSM6210 P.L747 E749del С.2239 2247del COSM6218 Р.Е746 S752delinsD C.2238 2255del COSM6220 Р.Е746 A750del C.2235 2249del COSM6223 P.E746 A750del C.2236 2250del COSM6225 P.L747 S752del C.2239 2256del COSM6255 P.E746 S752delinsA C.2237 2254del COSM12367 P.L747 T751del C.2240 2254del COSM12369 P.L747 P753delinsS C.2240 2257del COSM12370 P.L747 A750delinsP c.2239 2248delinsC COSM12382 P.L747 T751delinsP c.2239 2251delinsC COSM12383 P.E746 S752delinsV c.2237 2255delinsT COSM12384 P.E746 S752delinsl c.2235 2255delinsAAT COSM12385 P.E746 T751delinsV c.2237 2252delinsT COSM12386 P.L747 P753delinsO c.2239 2258delinsCA COSM12387 P.L747 S752delinsO c.2239 2256delinsCAA COSM12403 P.E746 T751delinsVA c.2237 2253delinsTTGCT COSM12416 P.L747 T751delinsO 19 c.2238 2252delinsGCA COSM12419 P.L747 A750delinsP c.2238 2248delinsGC COSM12422 P.E746 T751delinsA c.2237 2251del COSM12678 P.E746 T751del c.2236 2253del COSM12728 P.E746 A750delinsIP c.2235 2248delinsAATTC COSM13550 P.E746 T751delinsl c.2235 2252delinsAAT COSM13551 P.E746 T751deiinsIP c.2235 2251deiinsAATTC COSM13552 p.E746_A750delinsAP c.2237 2248delinsCAC c.2237 2248delinsCCC COSM144207 RCV000150618 P.E746 T751delinsVP c.2237 2251delinsTTC COSM 18421 P.E746 S752delinsV c.2237 2256delinsTC COSM 18426 P.E746 P753delinsVS c.2237 2257delinsTCT COSM 18427 P.L747 T751delinsP c.2238_2251delinsGC COSM22944 P.K745 E749del C.2233 2247del COSM26038 P.E746 T751delinsl c.2236 2252delinsAT COSM26680 P.L747 A750delinsS c.2240 2248del COSM4170221 P.L747 E749del c.2235 2243del RCVOOO154252 P.L747 P753delinsT c.2239 2257delinsA RCVOOO154456 11 --- стр. 12 --- л7ДНКТЕХН0Л0ГИЯ Инструкция по применению Лист 12 EGFR Листов 43 Мутация Экзон Нуклеотидные замены, делении и инсерции NM 005228.5 Cosmic ID или ClinVar RCV Id P.L747 P753delinsOS С.2239 2257delinsCAAT RCVOOO154485 Р.Е746 E749delinsA С.2237 2246delinsC RCVOOO155025 Инсерции в 19 экзоне (без дифференцировки) p.I744_K745insKIPVAI С.2214 2231dup COSM53176С.2215 2232dup Р.К745 E746insIPVAIK 19 C.2217 2234dup нет данных Р.К745 E746insVPVAIK C.2219 2236 нет данных p.K745_E746insTPVAIK c. 2234 2235ins AACTCCCGTCGCTATCAA COSM53172 P.G719X (без дифференцировки) P.G719A c.2156G>C COSM6239 P.G719S 18 c.2155G>A COSM6252 P.G719C c.2155G>T COSM6253 P.S768I 20 c.2303G>T COSM6241 P.L8610 21 c.2582T>A COSM6213 Инсерции в 20 экзоне (без дифференцировки) Р.А767 V769dup C.2300 2308(dup) COSM12376 p.H773dup 20 C.2317 2319dup COSM12377 P.D770 N771insG C.2310 2311insGGT COSM12378 Таблица 2.2- Перечень выявляемых мутаций в зависимости от варианта исполнения: Выявляемая мутация в гене EGFR Вариант исполнения EGFR 8 Вариант исполнения EGFR 4 Т790М V V L858R (без дифференцировки) V V Инсерции в 19 экзоне (без дифференцировки) V V Делеции в 19 экзоне (без дифференцировки) V V G719X (без дифференцировки) V - Инсерции в 20 экзоне (без дифференцировки) V - L861Q V - S768I V - В образцах биологического материала человека, содержащих ДНК мутантного аллеля гена EGFR, после завершения реакции амплификации программное обеспечение для детектирующих амплификаторов определяет индикаторные циклы (Ср). Для мутаций Т790М, L858R, G719X, S768I, L861Q и инсерций в 20 экзоне возможна фоновая амплификация на матрице нормального аллеля. Поэтому при определении мутации учитывают не только наличие амплификации (Ср), но и разницу индикаторных циклов мутантного аллеля и КВМ (dCp): значение dCp менее 6-9 циклов в зависимости от значения Ср КВМ свидетельствует о наличии мутации (табл.З). 12 --- стр. 13 --- ^^^ДНКТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Лист 13 EGFR Листов 43 в связи с погрешностью метода ПЦР предусмотрено наличие «серой зоны» для показателя dCp: статус мутации не определен, результат выдается, как не достоверный. При значении dCp за пределами «серой зоны» (более 6,5-9,5 циклов в зависимости от значения КВМ) результат выдается, как норма. Алгоритмы определения статуса аллелей и полуколичественной оценки доли мутантных аллелей на основании значений индикаторных циклов (Ср) приведены в Приложении А. Таблица 3 - Пороговые значения dCp мутантный аллель/КВМ для определения мутации Мутация Попоговое значение dCp для определения мутации СрКВМ<28 (фасовка S) CdKB M <27 (фасовка U) 28< CpKBM <31,5 (фасовка S) 27< CpKBM <30,5 (фасовка U) 31.5 < CpKBM <34 (фасовка S) 30.5 < C pK B M <33 (фасовка U) Т790М dCp< 9 dCp< 7 dCp< 6 L858R dCp< 9 dCp< 7 dCp< 6 G719X dCp< 9 dCp< 7 dCp< 6 S768I dCp< 9 dCp< 7 dCp< 6 L861Q dCp< 9 dCp< 7 dCp< 6 Ins20ex dCp< 9 dCp< 7 dCp < 6 3.2 Влияние близкородственных генов Было показано, что наличие ДНК близкородственных генов семейства тирозиновых киназ рецепторов эпидермального фактора роста, в частности ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERBB4/HER4, не влияет на результаты исследования с использованием набора реагентов. Олигонуклеотиды, используемые в наборе, подобраны таким образом, чтобы исключить амплификацию на матрице близкородственных генов. В ходе исследования образцов геномной ДНК из крови 50 условно-здоровых пациентов (отрицательные контрольные образцы) ложно-положительные результаты не получены. 3.3 Влияние легочной микробиоты Добавление культур клеток микроорганизмов, которые могут присутствовать в легочной ткани. Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae в концентрации 10^ КОЕ/мл к образцам, содержащим аллели мутантного и дикого типа на стадии выделения ДНК не повлияло на результаты исследования с использованием набора реагентов. 13 --- стр. 14 --- ^ ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 14 EGFR Листов 43 3.4 Чувствительность анализа Предел обнаружения доли мутантного аллеля определяется, как минимальное количество мутантного аллеля в пуле аллелей (дикий тип и мутация), определение которого возможно с воспроизводимостью 95% с трактовкой результата «мутация». Предел обнаружения доли мутантного аллеля лимитирован количеством ДНК и составляет 0,3% (Т790М, L858R, G719X, S768I, L861Q, инсерций в 20 экзоне) и 0,1% (делеций и инсерций в 19 экзоне) в образце при значении Ср КВМ <27-28 на канале детекции Су5, 1% - при значении 27-28< Ср КВМ <30-31,5, 5% - при значении 30-31,5 < Ср КВМ <33-34 (табл.4). Таблица 4 - Предел обнаружения доли мутантного аллеля в образце Минимальное количество ДНК (копий пула аллелей на амплификационную пробирку) 10'* 10^ 200 Соответствующее значение Ср для КВМ Фасовка S Ср<28 28< Ср<31,5 31,5<Ср<34 Фасовка U Ср<27 27< Ср<30,5 30,5 < Ср<33 Предел обнаружения доли мутантного аллеля в образце 0,1% 0,3% * 1% 5% *0,1% для делеций и инсерций в 19 экзоне, 0,3% для мутаций Т790М, L858R, G719X, S768I, L861Q, инсерций в 20 экзоне При значении Ср КВМ больше 34 для фасовки S или больше 33 для фасовки U количество материала расценивается как недостаточное для корректного заключения, результат регистрируется как не валидный. 3.5 Диагностические характеристики При проведении клинико-лабораторных испытаний набора реагентов EGFR получены следующие диагностические характеристики: Аналит Диагностическая чувствительность Диагностическая специфичность Количество исследованных образцов Dell9ex 100% (93,5-100) 99,2% (97,0-99,2) 179 Insl9ex 100% (65,7-100) 100% (97,1-100) 90 Ins20ex 100% (34,8-100) 99,2% (97,6-99,2) 124 L858R 100% (92,1-100) 99,3% (97,2-99,3) 179 Т790М 83,3% (43,9-83,3) 100% (98,4-100) 158 L861Q 100% (22,7-100) 100% (98,7-100) 124 S768I 100% (22,7-100) 100% (98,7-100) 124 G719X 100% (47,3-100) 100% (98,2-100) 124 Итого 99,1% (95,6-100) 99,7% (99,3-99,8) - 14 --- стр. 15 --- ^*^ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 15 EGFR Листов 43 Диагностическая чувствительность испытываемого набора составляет 99 Д% CI (95% доверительный интервал): 95,6%-100%. Диагностическая специфичность составляет 99,7% CI (95% доверительный интервал): 99,3%-99,8%. 3.6 Интерферирующие вещества Наличие ингибиторов ПЦР в образце биологического материала может быть причиной сомнительных (невалидных) результатов. Признаком ингибирования ПЦР является отсутствие амплификации КВМ по каналу Су5 (Ср КВМ отсутствует). К ингибиторам ПЦР, которые могут присутствовать в образце биоматериала, относится кровь, которая удаляется в ходе пробоподготовки. По результатам анализа рисков ингибиторы ПЦР могут содержаться в образце ДНК, к ним относятся следующие вещества: - гемоглобин, остаточные количества которого могут присутствовать в образце ДНК в результате неполного удаления примесей крови в ходе пробоподготовки, - а также изопропиловый спирт и метилацетат, остаточные количества которых могут присутствовать в образце ДНК в результате неполного удаления промывочных растворов в ходе пробоподготовки. Максимальные концентрации интерферирующих веществ, при которых не наблюдалось ингибирование ПЦР составляют: гемоглобин - 0,35 мг/мл образца ДНК, изопропиловый спирт - 100 мкл/мл образца ДНК, метилацетат - 100 мкл/мл образца ДНК. На результат исследования может оказать влияние наличие в образце больщого количества здоровой и некротизированной ткани. В образцах должно присутствовать не менее 50% опухолевых клеток и не более 20 % некротизированной ткани (оба параметра оцениваются врачом патоморфологом при подготовке срезов при окраске гематоксилин- эозином). 15 --- стр. 16 --- /^ ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 16 EGFR Листов 43 3.7 Воспроизводимость Воспроизводимость исследования определялась для вариантов исполнения EGFR 8, фасовки S и и набора реагентов, в экспериментах, выполненных в одной лаборатории разными операторами, на разных приборах, в различные дни путем тестирования положительных и отрицательных биологических образцов ДНК. Результаты представлены в таблице 5. Таблица 5 - Воспроизводимость исследования Тип образца Повторяемость внутри постановки Внутрилабораторная повторяемость между вариантами фасовки S и U Количество Совпадение результатов Количество Совпадение результатов Делеции в 19 экзоне 8 8 из 8 14 14 из 14 L858R 4 4 из 4 6 6 из 6 Инсерции в 19 экзоне 3 3 из 3 4 4 из 4 Инсерции в 20 экзоне 1 1 Т790М все в сочетании 4 4 L8610 1 G719X 0 0 0 0 S768I 0 0 0 0 Норма 29 29 из 29 28 28 из 28 Итого 46 46 из 46 (100%) 54 54 из 54 (100%) 16 --- стр. 18 --- ^>^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 18 EGFR Листов 43 При использовании набора реагентов в клинико-диагностической лаборатории образуются отходы класса В, которые утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно противоэпидемических (профилактических) мероприятий». Опасные компоненты в наборе реагентов Компонент набора реагентов Содержание вредных веществ Фасовка S Смесь для амплификации, запечатанная парафином Нет опасных веществ Раствор Taq-полимеразы Нет опасных веществ Минеральное масло Нет опасных веществ Положительный контрольный образец Азид натрия менее 0,1% Фасовка U Смесь для амплификации Нет опасных веществ Полимераза ТехноТар МАХ Нет опасных веществ ПЦР-буфер Нет опасных веществ Минеральное масло Нет опасных веществ Положительный контрольный образец Азид натрия менее 0,1% В состав набора реагентов входят реагенты, которые содержат азид натрия — консервант, в концентрации менее 0,1 %, что является безопасным для конечного пользователя. При использовании по назначению и соблюдению мер предосторожности, контакт с организмом человека исключен. При аварийных ситуациях возможно следующее: раздражение кожи и слизистой оболочки глаз у чувствительных лиц, аллергическая реакция. При контакте промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью. Не допускается использовать набор реагентов: - при нарушении условий транспортирования и хранения; - при несоответствии внещнего вида реагентов, указанного в паспорте к набору реагентов; - при нарущении внутренней упаковки компонентов набора реагентов; - по истечению срока годности. Примечание - Набор реагентов не содержит материалов биологического происхождения, веществ в концентрациях, обладающих канцерогенным, мутагенным действием, а также влияющих на репродуктивную функцию человека. При использовании по назначению и соблюдении мер предосторожности является безопасным. 18 --- стр. 19 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 19 EGFR Листов 43 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ При работе с набором реагентов требуется следующее оборудование и материалы: - ПЦР-бокс; - детектирующий амплификатор «ДТпрайм» или «ДТлайт», ООО «НПО ДНК-Технология», - микроцентрифуга-вортекс; - холодильник (для фасовки U - с морозильной камерой); - дозаторы механические или электронные одноканальные с переменным объёмом, позволяющие отбирать объём жидкости 2,0-20 мкл, 20— 200 мкл, 200-1000 мкл; - одноразовые наконечники с фильтром для полуавтоматических дозаторов, свободные от РНКаз и ДНКаз, объёмом 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл; - штатив «рабочее место» для пробирок объёмом 1,5 мл; - штатив «рабочее место» для стрипованных пробирок объёмом 0,2 мл; - одноразовые перчатки медицинские, без талька, текстурированные; - ёмкость для сброса использованных наконечников, пробирок и других расходных материалов; - дезинфицирующее средство; - ini файл с параметрами анализа «EGFR.ini». При работе с набором реагентов в фасовке U с использованием дозирующего устройства ДТстрим дополнительно требуется следующее оборудование и материалы: - дозирующее устройство ДТстрим; - герметизирующее устройство ДТпак; - центрифуга для микропланшет ПЦР; - полимерная термопленка для запечатывания микропланшет ПЦР; - микропланшет ПЦР. Для предобработки материала для исследования и выделения ДНК: - бокс биологической безопасности II класса; - центрифуга для пробирок объёмом 1,5 мл, с RCF не ниже 16 000 х g; - термостат твердотельный программируемый малогабаритный ТТ-1-«ДНК-Техн.» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия или аналогичный, или термостат твердотельный, поддерживающий температуру от 40 °С до 95 °С, и пробирки объёмом 1,5 мл с защёлкивающимися крыщками, например, Eppendorf Safe- Lock Tubes; 19 --- стр. 20 --- ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 20 EGFR Листов 43 - микроцентрифуга-вортекс; - элеюрический лабораторный аспиратор с колбой-ловушкой для удаления надосадочных жидкостей; - одноразовые наконечники без фильтра, свободные от РНКаз и ДНКаз, для электрического лабораторного аспиратора; - дозаторы механические или электронные одноканальные с переменным объёмом, позволяющие отбирать объём жидкости 2,0-20 мкл, 20-200 мкл, 200-1000 мкл; - одноразовые наконечники с фильтром для полуавтоматических дозаторов, свободные от РНКаз и ДНКаз, объёмом 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл; - пробирки одноразовые пластиковые объёмом 1,5 мл; - штатив «рабочее место» для пробирок объёмом 1,5 мл; - комплекты реагентов, предназначенные для выделения ДНК из образцов, фиксированных в формалине парафинизированных тканей (рекомендованы ПРОБА-ПК для предварительной обработки биоматериала и ПРОБА-НК-ПЛЮС для последующего выделения ДНК производства ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Для предобработки образцов фиксированных в формалине парафинизированных тканей дополнительно требуются*: - де-лимонен (в зависимости от способа удаления парафина); - 96% перегнанный этиловый спирт (в зависимости от способа удаления парафина). * При использовании рекомендованных комплектов реагентов для предобработки биоматериала и выделения ДНК дополнительные реагенты не требуются. 20 --- стр. 21 --- ^>^ДНКТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Лист 21 EGFR Листов 43 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Для исследования используют образцы фиксированных в формалине парафинизированных тканей опухолей. Взятие, предобработку и хранение материала проводят в соответствии с инструкциями к комплектам реагентов для выделения ДНК из биологического материала. Взятие образцов и требования к биоматериалу Взятие материала осуществляется только врачом патоморфологом из очага опухоли. В образцах должно присутствовать не менее 50 % опухолевых клеток. Допускается присутствие в образце 10-20 % некротизированной ткани (оба параметра оцениваются врачом патоморфологом при подготовке срезов при окраске гематоксилин-эозином). Фиксация в формалине должна осуществляться в течение 2 часов после получения материала. Время фиксации в формалине зависит от объема препарата и не должно превышать 48-72 часов. Более длительная фиксация приводит к деградации нуклеиновых кислот. При расчете времени фиксации биоматериала необходимо учитывать, что пропитка формалином 1 мм ткани осуществляется в течение 1 часа. Для приготовления срезов используют одноразовое, острое лезвие микротома, отрезают 1-3 участка толщиной 5 мкн из предварительно обрезанного блока ткани, заключенной в парафин (приблизительная площадь среза до 0,5-1,5 см^). Парафиновые срезы помещают в сухие пластиковые пробирки объёмом 1,5 мл. Не следует превышать рекомендуемое количество ткани, т.к. избыток ткани, заключенной в парафин может снизить выход тотальной ДНК. Хранят образцы при температуре от 18 °С до 25 ®С. Транспортировать образцы до начала исследования следует при температуре от 2 °С до 25 °С. Выделение ДНК Вьщеление ДНК из биологического материала проводят в соответствии с инструкцией к используемому комплекту реагентов. Рекомендуемые комплекты: ПРОБА-ПК для предварительной обработки биоматериала протеиназой К и ПРОБА-НК-ПЛЮС для последующего выделения ДНК. ВНИМАНИЕ! При выделении ДНК из биоматериала необходимо подготовить отрицательный контрольный образец, прошедший все этапы пробоподготовки. 21 --- стр. 22 --- ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 22 EGFR Листов 43 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Подготовка и проведение ПЦР (фасовка S) ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия прямых солнечных лучей на пробирки со смесью для амплификации. При использовании набора реагентов строго соблюдать комплектность стрипов и крышек к ним. Не использовать крышки к стрипам из других наборов! 7.1.1 Промаркируйте необходимое количество стрипов или пробирок из стрипа: по 2 пробирки (комплектация EGFR4) или 4 (комплектация EGFR8) с запечатанной парафином смесью для амплификации для каждого исследуемого образца, положительного контрольного образца К+ и отрицательного контрольного образца К- Пр и м е р : Необходимо проанализировать 4 образца. В варианте исполнения EGFR4 необходимо промаркировать 8 пробирок для исследуемых образцов, две пробирки для «К-» и две пробирки для «К+». Общее количество пробирок - 12 или 1,5 стрипа. В варианте исполнения EGFR8 необходимо промаркировать 16 пробирок для исследуемых образцов, четыре пробирки для «К-» и четыре пробирки для «К+». Общее количество пробирок - 24 или 3 стрипа. 7.1.2 Встряхните пробирку с раствором Taq-полимеразы, затем центрифугируйте на микроцентрифуге-вортексе в течение 1-3 с. 7.1.3 Добавьте в каждую пробирку стрипов, не повреждая слой парафина, по Юмкл раствора Taq-полимеразы. 7.1.4 Добавьте в каждую пробирку по одной капле (около 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки стрипов. 7.1.5 Встряхните пробирки с исследуемыми образцами и контрольными образцами в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.1.6 Внесите в соответствующие стрипованные пробирки для исследуемых образцов, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл выделенного из образцов препарата ДНК В пробирки «К-», «К+» ДНК не вносится. ВНИМАНИЕ! Для снижения рисков контаминации следует закрывать каждый стрип после внесения образцов. Препараты ДНК и контрольные образцы следует вносить наконечниками с фильтром. 22 --- стр. 30 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по прим енению Л ист 30 EGFR Листов 43 10.1 10.1.1 10.1.2 10.1.3 10.2 10.2.1 10.2.2 10.2.3 10.3 10.3.1 10.3.2 10 ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, ХРАНЕНИЕ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ Транспортирование Транспортирование набора осуществляют в термоконтейнерах с хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре, соответствующей условиям хранения компонентов, входящих в состав набора. Допускается транспортирование в термоконтейнерах с хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 °С до 25 °С внутри контейнера не более 5 суток. Наборы реагентов, транспортированные с нарущением температурного режима, применению не подлежат. Хранение Компоненты набора реагентов за исключением полимеразы TexHoTaq МАХ, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности набора реагентов. Полимеразу TexHoTaq МАХ следует хранить в морозильной камере при температуре от минус 18 °С до минус 22 °С в течение всего срока годности набора реагентов. Смеси для амплификации и смеси для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищённом от света месте в течение всего срока годности набора реагентов. Указания по эксплуатации Набор реагентов должен применяться согласно действующей версии утвержденной инструкции по применению. После вскрытия упаковки компоненты набора реагентов следует хранить при следующих условиях: компоненты набора реагентов, за исключением полимеразы TexHoTaq МАХ, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С, в течение всего срока годности набора реагентов; смеси для амплификации и смеси для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора реагентов; полимеразу TexHoTaq МАХ следует хранить в морозильной камере при температуре от минус 18 °С до минус 22 °С в течение всего срока годности набора реагентов. 30 --- стр. 31 --- ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по прим енению Л ист 31 EGFR Листов 43 11 УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ 11.1 При использовании набора реагентов в клинико-диагностической лаборатории образуются отходы класса В, которые утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 и МУ 1.3.2569-09. 11.2 Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в связи с истечением срока годности, повреждением упаковки, относятся к классу А и подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. 12 ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ 12.1 Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора реагентов требованиям настоящих технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и эксплуатации, установленных настоящими техническими условиями. 12.2 Срок годности набора реагентов и контрольных образцов - 12 месяцев при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации. 13 РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ Набор реагентов предназначен для одноразового использования и не подлежит техническому обслуживанию и текущему ремонту. 14 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ IVD Только для in vitro диагностики Дата производства i Температурный диапазон с а Содержит инструкцию по применению W Количество определений |REf | Каталожный номер 2 Годен до i J Адрес производителя [LOT] Серия набора реагентов Не допускается воздействие солнечного света А Не стерильно Одноразовое использование 31 --- стр. 32 --- ^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по прим енению Л ист 32 EGFR Листов 43 15 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ 1 ГОСТ 2.105-95 Общие требования к текстовым документам. ГОСТ ISO 14971-2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям. ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности. ГОСТ Р 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство. Испытания и приёмка выпускаемой продукции. Основные положения. ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации. ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального применения. ГОСТ Р ИСО 15223-1-2014 Изделия медицинские. Символы, применяемые при маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной документации. 4.1. Основные требования. ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний. Примечание - Указанные выше стандарты были действующими на момент утверждения инструкции по применению. В дальнейшем, при пользовании документом, целесообразно проверить действие ссылочных нормативных документов на текущий момент. Если ссылочный документ заменён или изменён, то при применении настоящего документа следует пользоваться заменённым (изменённым документом). 32 --- стр. 33 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по прим енению Л ист 33 EGFR Листов 43 16 АДРЕС ДЛЯ ОБРАЩЕНИЯ Производство наборов реагентов имеет сертифицированную систему менеджмента качества и соответствует требованиям стандарта систем менеджмента качества ISO 9001 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для молекулярно генетической диагностики, и другого лабораторного применения, и ENISO 13485 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для медицинской молекулярно-генетической диагностики. Производитель: Общество с ограниченной ответственностью «ДНК-Технология ТС»; ООО «ДНК-Технология ТС», Россия. Адрес производителя: ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 4. Место производства: ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4. Рекламации по вопросам качества набора реагентов EGFR следует направлять по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, г. Москва, Варшавское ш., Д.125Ж, корпус 6, этаж 5, комн.14, тел./факс +7 (495) 640-17-71, www.dna-technology.ru Служба клиентской поддержки: 8-800-200-75-15 (для России, звонок бесплатный), +7 (495) 640-16-93 (для стран СНГ и зарубежья, звонок платный). E-mail: hotline@dna-technology.ru , www.dna-technoln^yш Старший научный сотрудник ООО «НПФ ДНК-Технология», д.б.н. СОГЛАСОВАНО Директор ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России Д.М.Н., проф. О.В. Бурменская « » c>j 2021 г. А.М. Беляев «/^ у> 0 3 2021г. 33 --- стр. 41 --- '’^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по прим енению Лист 41 V --------------------------- EGFR Листов 43 ОБРАЗЕЦ №2 - Пример с одной мутацией Данные ПЦР для ОБРАЗЦА №2 АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ Показатель Ср Показатель Анализ КВМ Расчёт dCp Анализ dCp Интерпретация Т790М 45 Т790М 45-27=18 18 >9,5 Норма L858R 28,9 L858R 28,9-27=1,8 1,8 < 9 МУТАЦИЯ КВМ 27 КВМ Менее 34, ОК Dell9ex,Insl9ex - Dell9ex,Insl9ex НормаInsl9ex - Insl9ex КВМ 26,8 КВМ Менее 34, ОК G719X 39,6 G719X 39,6-26,8=12,8 12,8 >9,5 Норма Ins20ex - Ins20ex Норма КВМ 26,8 КВМ Менее 34, ОК L861Q - L861Q Норма S768I 41,3 S768I 41,3-26,7=14,6 14,6 >9,5 Норма КВМ 26,7 КВМ Менее 34, ОК dCp КВМ=0,3 менее 1,7, ОК Ср КВМ <28 Расчёт доли мутантного аллея L8585R Интерпретация результата (1,97^*/1,97“ '’)*100% = 27,57% 27,57 > 16, соответствует диапазону полуколичественной оценки: 10-100% БЛАНК ОТВЕТА ДЛЯ ОБРАЗЦА №2 Показатель Результат Доля мутантного аллеля Т790М норма - L858R мутация 10-100% Dell9ex норма - Insl9ex норма - G719X норма - Ins20ex норма - L861Q норма - S768I норма - 41 --- стр. 42 --- л7ДНК-ТЕХН0Л0ГИЯ Инструкция по прим енению Л ист 42 EGFR Листов 43 ОБРАЗЕЦ №3 - Пример с показателем Dell9ex,Insl9ex Данные ПЦР для 015РАЗЦА №2 АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ Показатель Ср Показатель Анализ КВМ Расчёт dCp Анализ dCp Интерпретация Т790М 40,3 Т790М 40,3-28,6=11,7 11,.7>7,5 Норма L858R 44,2 L858R 44,2-28,6=15,6 15,6 >7,5 Норма КВМ 28,6 КВМ Менее 34, ОК Dell9ex,Insl9ex 32,9 Dell9ex,Insl9ex • Сигнал по параметру Dell9ex, Insl9ex • Сигнал по параметру Insl9ex МУТАЦИЯ МУТАЦИЯInsl9ex 32,7 Insl9ex КВМ 28,6 КВМ Менее 34, ОК G719X 40,6 G719X 40,6-28,5=12,1 12,1 >7,5 Норма Ins20ex 40,2 Ins20ex 40,2-28,5=11,7 11,7 >7,5 Норма КВМ 28,5 КВМ Менее 34, ОК L861Q 44,4 L861Q 44,4-28,5=15,9 15,9 >7,5 Норма S768I 45,3 S768I 45,3-28,5=16,8 16,8 >7,5 Норма КВМ 28,5 КВМ Менее 34, ОК dCp КВМ=0,1 менее 1,7, ОК 28< Ср КВМ <31,5 Расчёт доли мутантного аллея Insl9ex Интерпретация результата (1,972^*V1,92^2.9)+iqqo/^ = 12,62% 6 <12,62 < 16, соответствует диапазону полуколичественной оценки: 5-20% БЛАНК ОТВЕТА ДЛЯ ОБРАЗЦА №3 Показатель Результат Доля мутантного аллеля Т790М норма L858R норма Dell9ex норма Insl9ex мутация 5-20% G719X норма - Ins20ex норма - L861Q норма - S768I норма - 42 --- стр. 43 --- л i 7ДНКТЕХН0Л0ГИЯ Инструкция по применению Лист 43 EGFR Листов 43 ОБРАЗЕЦ №4 - Пример с двумя мутациями Данные ПЦР для ОБРАЗЦА №2 АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ Показатель Ср Показатель Анализ КВМ Расчёт dCp Анализ dCp Интерпретация Т790М 28,5 Т790М 28,5-29,5=-! - К 7 МУТАЦИЯ L858R 41,7 L858R 41,7-29,5=12,2 12,2 >7,5 Норма КЕМ 29,5 КВМ Менее 34, ОК Dell9ex,Insl9ex 29,4 Dell9ex,Insl9ex • Сигнал по параметру DeI19ex, Insl9ex • Отсутствует сигнал по параметру Insl9ex МУТАЦИЯ Insl9ex - Insl9ex норма КВМ 29,6 КВМ Менее 34, ОК G719X 40,6 G719X 40,6-29,5=11,1 11,1 >7,5 Норма Ins20ex 45,3 Ins20ex 45,3-29,5=15,8 158 >7,5 Норма КВМ 29,5 КВМ Менее 34, ОК L861Q 41,6 L861Q 41,6-29,5=12,1 12,1 >7,5 Норма S768I 41 S768I 41-29,5=11,5 11,5 >7,5 Норма КВМ 29,5 КВМ Менее 34, ОК dCp КВМ=0,1 менее 1,7, ОК 28< Ср КВМ <31,5 Расчёт доли мутантного аллея Интерпретация результата Dell9ex (l,97»-Vl,922’’'')*100% = 243,86% 243, 86 >16, соответствует диапазону полуколичественной оценки: 10-100% Т790М (l,97=9'Vl,9728’5)*i00% = 197% 197 > 16, соответствует диапазону полуколичественной оценки: 10-100% Показатель Результат Доля мутантного аллеля Т790М мутация 10-100% L858R норма _ Dell9ex мутация 10-100% Insl9ex норма G719X норма Ins20ex норма L8610 норма S768I норма - 43 --- стр. 44 ---