Набор реагентов для выделения ДНК из периферической крови и выявления наследственных мутаций 185delAG, 2080delA, 4153delA, 5382insC, c.3700_3704delGTAAA, c.3756_3759delGTCT, T300G в гене человека BRCA1 и 6174delT в гене человека BRCA2 методом ПЦР в режиме реального времени для диагностики in vitro ("ГенТест-М BRCA1, BRCA2") по ТУ 21.20.23-024-11248074-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 5 ---
М одуль 2 для генотипирования
Компонент Объем Ф асовка Внеш ний вид
О лиго-см есь
М B R C A l
с .3 7 5 6 .
3759
deIGTCT
0 .55 мл 1 пр.
!
!
О лиго-см есь
М B R C A 1 1
T300G
0 .55 мл 1 пр.
О лиго-см есь
М B R C A 2
6174delT
0.55 мл 1 пр.
ОКО 185delA G 0 .13 мл 1 пр.
O K0 2 0 8 0 d elA 0 .13 мл 1 пр.
O K0 4 i5 3 d e lA 0 .13 мл . 1 пр.
O K0 5382insC 0 .13 м л .1 пр.
0 К 0 с .3 7 0 0 _
3704
d e lG T A A A
0 .13 мл : 1 пр.
ОКО с.3 7 56
3759
deIGTCT
0.13 мл 1 пр.
0 K 0 T 3 0 0 G 0.13 мл 1 пр.
0 K 0 6174delT 0.13 мл 1 пр.
Ф ункциональное назначение
С одерж ит прайм еры д ля специф и
ческой ам плиф икации участка гена
BRCA1. Содерж ит конкурентны е
аллель-специф ичны е гиролизуем ы е
зонды , меченны е ф луороф ором на
5‘-конце и гасителем ф луоресценции
на З'-конце, детектирую щ ие генотип
rs8 0 3 5 7 8 6 8 (с.375 6 3 759delGTCT).
М одуль 2 д л я генотипирования
Компонент О бъем Ф асовка Внеш ний вид
Ж идкость прозрачная
бледно-розовая
Ж идкость прозрач
ная зеленого цвета
умеренной вязкости.
Допускается вспенива
ние при встряхивании.
Содерж ит прайм еры для специф ической
ам плиф икации участка гена 8RCA1.
Содерж ит конкурентны е ал лель-специ
ф ичные гиролизуемы е зонды, меченные
ф луороф ором на 5'-нонце и гасителем
ф луоресценции на З ’-конце, детектирую
щ ие генотип rs28 89 7 67 2 (T300G).
Содерж ит прайм еры для специф ической
ам плиф икации участка гена BRCA2.
Содерж ит конкурентны е аллель-специ
фичные гиролизуемы е зонды, меченные
ф луороф ором на 5'-нонце и гасителем
ф луоресценции на З'-нонце, детектирую
щ ие генотип rs8 0 3 5 9 5 5 0 l6174delT).
Каж ды й ОКО содерж ит ин ди ви дуаль
ную см есь синтетических м атриц Д Н К ,
содерж ащ их последовательности гено
типов <N>. Контроль прохож дения П Ц Р
и верного определения генотипов «N».
ПКО 185delAG 0.13 мл 1 пр.
ПКО 2 0 8 0 d elA 0.13 мл 1 пр.
n K 0 4 15 3d elA 0.13 мл 1 пр.
ПКО 5382insC 0 .13 мл 1 пр.
ПКО с.3700
3 70 4
d e lG T A A A
0 .13 мл
1
1 пр.
ПКО с.3 7 56
3759delG TC T
0 .13 мл 1 пр.
П К О Т 3 0 0 6 0".13мл 1 пр.
ПКО 6174delT 0 .1 3 м л 1 пр.
В ода д еиони
зированная
12 мл
8 пр. по
1.5 мл
Ж идкость прозрачная
бесцветная ум еренной
вязкости. Д опускается
вспенивание при
встряхивании.
Ж идкость прозрачная
бесцветная.
Ф ункциональное назначение
Каждый ПКО содержит индивидуальную
смесь синтетических матриц Д Н К , содер
жащ их последовательности генотипов «т>
Контроль прохождения П Ц Р и верного
определения генотипов «ш».
Контрольны й обр азец без Д Н К для под
тверж дения отсутствия контаминации.
Д ля приготовления реакционны х смесей
5. Количество анализируемых образцов, кратность применения
Набор рассчитан на 100 реакций. Набор реагентов позволяет проанализировать
от 10 до 41 образцов, каждый в двух повторностях.
Количество образцов определяется форматом постановки и степенью загрузки
96-луночного амплификатора ПЦР-РВ. Максимальное количество анализируемых
образцов достигается при анализе всех образцов одновременно по одному полимор
физму и при полной загрузке 96-луночного амплификатора.
Набор реагентов рассчитан на однократное, в том числе дробное, использование.
6. Принцип действия
Принцип метода (принцип действия) основан на 1) выделении Д НК и 2) полимераз
ной цепной реакции с флуоресцентной детекцией сигнала в режиме реального времени.
Выделение ДНК основано на ферментативной и термической обработке крови в при
сутствии детергентов, ведущей к лизису клеток и клеточных элементов.
--- стр. 6 ---
Полимеразная цепная реакция включает в себя две стадии. На первой стадии
анализа ДНК происходит амплификация целевого фрагмента Д НК с участием спе
цифических праймеров, образуется ампликон («ПЦР-смесь М»; «Олиго-смесь М»),
Амплификация проходит вне зависимости от аллельного варианта. На второй ста
дии анализа ДНК происходит определение генотипа путём температурного плавления
дуплекса: детектирующий зонд - ампликон («ПЦР-смесь М»; «Олиго-смесь М»). Тем
пература плавления дуплекса, образованного зондом и «аллелем N» отличается
оттемпературы плавления дуплекса, образованного зондом и «аллелем т» . ДНК,
содержащая оба аллея, имеет две температуры плавления.
Для контроля качества результатов используются реакции контрольного образца
без Д НК и реакции с ОКО и ПКО.
7. Научная обоснованность аналита
Рак молочной железы (РМ Ж ) и рак яичников (РЯ) занимают лидирующие позиции
среди онкологических заболеваний. В России ежегодно диагностируется более 70000
новых случаев РМЖ (это наиболее частая онкопатология у женщин - 20,9%) и более
14000 новых случаев РЯ (4,2%), при этом количество заболевших увеличиваются год от
года [1]. Одним из факторов риска развития РМ Ж и РЯ является генетическая предрас
положенность: от 5 до 1 0 % случаев РМЖ , от 10 до 1 7 % случаев РЯ [2,3].
Причиной аутосомно-доминантной предрасположенности к развитию РМ Ж и РЯ
часто являются герминальные мутации в генах B R C A 1 и BRC A 2: ими обусловлены
2 0 -5 0 % наследственных форм РМЖ и 9 0 -9 5 % РЯ у женщин, а так же 4 - 4 0 % РМЖ
у мужчин [3]. Средние кумулятивные риски для носителей мутаций в гене B R C A 1
к возрасту 70 лет составляют 5 7 -6 5 % в отношении развития РМ Ж и 3 9 -4 0 % - РЯ.
Для носителей мутаций в гене B R C A 2 риск развития РМ Ж составляет 4 5 -4 9 % , риск
развития РЯ -1 1 -1 8 % [4]. Риски возрастают при отягощенном семейном анамнезе: для
носителей мутаций в гене B R C A 1 до 8 7 % в отношении развития РМЖ и до 4 4 % в отно
шении развития РЯ, для носителей мутаций в гене B R C A 2 - до 84 и 2 7 % соответственно
[3,5].
На настоящий момент выявлено более 1800 вариантов изменений в гене B R C A 1 и
более 2000 в гене B R C A 2 [6]. При этом частота мутаций может различаться в зависимо
сти от популяции и этнической принадлежности [7]. Для российской популяции описан
спектр из 8 наиболее характерных мутаций [3,8] (Таблица 2).
Таблица 2 - мутации в генах B R C A 1 и B R C A 2
10
Ген Мутация Частота встречаемости
IBSdelAG 3.2% !
2080delA 11,1% !
4153delA 11,1%
BRCAl 5382insC 55,6%
T300G i 12,7% ■
c.3700 3704delGTAAA 1,6%
c.3756 3759del6TCT <1,6%
! BRCA2 6174delT 4.8% !
8. Аналитические характеристики
Наименование показателя Характеристика и норма
Технические характеристики
Минимальное количество биоматериала
(периферическая(венозная) кровь)
100 мкл биоматериала
Аналитические характеристики
Предел обнаружения 1.0нг/мкл j
Аналитическая специфичность
(под аналитической специфичностью понимается
способность набора реагентов «ГемТест-М BRCA1,
BRCA2» специфически определять генотипы Мит
мутаций 185delAG, 2080delA, 4153delA, 5382insC,
c.3700 _ 3704delGTAAA, c.3756 _ 3759delGTCT,
T300G в гене человека BRCAl, и 6174delT в
гене человека BRCA2 на фоне всего остального
генома человека, что обеспечивается с помощью
специфически подобранных праймеров и зондов,
проверенных на контрольных образцах*)
Детекция генотипов «т» в реакциях с ПКО j
Детекция генотипов «N » в реакциях с ОКО !
i
j
Генотип не определяется в образцах ОКВ :
и контрольном образце без ДНК
, 1 J
* Для подтверждения специфичности используются; 1) образцы предприятия ПКО: ПНО IBSdelAG, ЛКО 2080delA, ПКО
4l53delA, ПКО 5382insC, ПКО C.3700 _ 370«delGTAAA, ПКО C.3756 _ 3759del6TCT, ПКО T300G, ПКО 6174delT, ОКО:
ОКО IBSdelAG, ОКО 20fiOdelA, ОКО 4l53delA, ОКО 5382insC, ОКО с.3700 _ 3704delGTAAA, ОКО С.3756 _ 3759delGTCT,
ОКО T300G, ОКО 6174delT, верифицированные по Сэнгеру; 2) ОКВ и контрольный образец без ДНК, которые представ
ляют собой деионизированную воду свободную от ДНК.
••Генотипы т; IBSdelAG, 2080delA, 4153delA, S382insC, c.3700 _ 3704delGTAAA, c.3756 _ 3759aelGTCT,
300TT,6174delT.
Генотипы N; 185AG, 2080A, 4153A, 5382-, C.3700 37046ТДАА, c.3756 _ 3759GTCT, 300GG, 6174T, I 11
--- стр. 7 ---
9. Диагностические характеристики
Диагностические характеристики набора реагентов «ГенТест-М BRCA1, BRCA2»
были определены в ходе разработки и клинических испытаниях изделия. Диагностиче
ские характеристики рассчитывались по формулам:
Диагностическая чувствительность (TPR) определялась как доля, выраженная в %,
истинно положительных результатов ко всем положительным, включая ложноотрица
тельные, по формуле:
Для расчета границ интервала использовались следующие формулы:
г Q1-Q2 01 + 02]
100% X , 1 00 % х- ^ '
где:
Q3
Q1 = 2 х ИП-И,96^
Q3
Q2 = 1,96 \1,96^+- 4ХИПХЛ0
ИП -Н ЛО
Q3 = 2(ИП-НЛО 4-1,96^)
Диагностическая специфичность (TNR) определялась как доля, выраженная в %,
истинно отрицательных результатов ко всем отрицательным, включая ложноположитель
ные, по формуле:
Для расчета границ интервала использовались следующие формулы:
где:
12
г Q1-Q2 Q1 + Q2]100%х -~-„^ . 100% X- ^ '<23
<21 = 2 X И0-Н1,962
Q3
Q2 = 1,96 1,962 + 4хЛ П хИ 0
ЛП -Н ИО
<23 = 2(ЛП-НИО-И,96^)
Положительная предсказательная ценность (положительная предиктивная величина,
PPV) рассчитана по формуле:
Для расчета границ интервала использовались следующие формулы:
г <21-<22 <21+ <221100% х^ , 100%х^ ^ '
где:
Q3 '
<21 = 2 X ИП-Н1,96
<23
I , 4ХИПХЛП
Q2 = 1.96jl.96^+
дЗ = 2(ИП + ЛП + 1,9б2)
Отрицательная предсказательная ценность (отрицательная предиктивная величина,
N PV) рассчитана по формуле:
ИОN P V = 1 0 0 % x----------иоч-ло
Для расчета границ интервала использовались следующие формулы:
f 100% X 5 1 - ^ , 100% X
<23
где:
(?2 = 1,96 1,962 + 4ХИ0ХЛ0
ио-нло
Q3 = 2{И0-НЛ0 + 1,962)
Отношение правдоподобия положительного результата (PLR) рассчитывается по
формуле:
TPR
Отношение правдоподобия отрицательного результата (LNR) рассчитывается по
формуле:
LNR* TNR 13
--- стр. 8 ---
Доля истинно отрицательных результатов (FNR) рассчитывается по формуле:
ло
™ '‘ =лоТйп
Доля ложно положительных результатов (FPR) рассчитывается по формуле:
лп
FPR =
лп+ио
Доля ложных отклонений (FDR) рассчитывается по формуле:
лп
ип+лп
Доля ложных пропусков (FOR) рассчитывается по формуле:
ло
FOR =
ло+ио
9.1 Диагностические характеристики, установленные в ходе разработки изделия
Характеристика Значение Г95% СП - . '4 Ш
Диагностическая чувствительность(TPR) 100%, [94,31-100]
Диагностическая специфичность (TNR) 100%, [95,49-100]
Положительная предиктивная величина (PPV) 100%, [94,31-100]
Отрицательная предиктивная величина (NPV) 100%, [95,49-100]
Отношение правдоподобия положительного результата (PLR)* не определено
Отношение правдоподобия отрицательного результата (LNR) 0
*не определено - неопределенное значение (деление на ноль).
Оценка диагностических характеристик набора реагентов «Ген-Тест-М B R C A 1,
B R C A 2» проводилась на выборке остаточных клинических образцов (143 образца).
Правильность определения генотипов подтверж дена референтной методикой - секве-
нированием по Сэнгеру.
ТаблицаЗ - результаты генотипирования клинических образцов набором «ГенТест-М
BRCA1, 6R C A 2» и секвенированием по Сэнгеру.
14
С е кве н и р о ва н и е по С энгеоу
^ X X 0»
* 5X л
CS
<
3 1
g
ё
- 8 <
1
О
Т) 5
О
(
о <
о <
^ < 1-
' нчС оU*! J—
h* О
1
'С
и% к
h- оfA к
1-
1-оо оо
н
•о 1-
Генотип не
олоеаелен
lesaelAG 5
185AG 10
2080tJe/A 6
2080А 10
4253delA 5
4153А 10
5382insC - 21
5382-С 10
C3700_3704
deIG TAAA
9
C.3700 3704
GTAAA - 10
C.3756 3759
deIG TCT - 8
c.3756 3759
G TCT • 10
300TT - 8
300GG - 10
6174delT - 1
6174T 10
Всего 0 143
15
--- стр. 9 ---
9.2 Диагностические характеристики, установленные в ходе оценки эффективности
и безопасности изделия при проведении клинических испытаний
Характеристика Значение [95% CI]
Диагностическая чувствительность (TPR) 100%, С91,24-100]
Диагностическая специфичность (TNR) 100%, [91.24-1001
Положительная предиктивная величина (PPV) 100%. [91,24-1001
Отрицательная предиктивная величина (NPV) 100%, [91,24-1001
Доля истинно отрицательных результатов (FNR) 0
Доля ложноположительных результатов (FPR) 0
Доля ложных отклонений (FOR) 0
Доля ложных пропусков (FOR) 0
Отношение правдоподобия положительного результата (PLR)* не определено
Отношение правдоподобия отрицательного результата (LNR) 0
*не определено - неопределенное значение (деление на но л ь).
Для проведения клинических испытаний в качестве референтной методики были
выбраны зарегистрированные в РФ в установленном порядке медицинские изделия
для диагностики in vitro, являющиеся аналогом набора реагентов «ГенТест-М BRCA1,
BRCA2». Испытания были проведены на выборке 80 клинических образцов: 40 образ
цов от пациентов, у которых нет показаний для проведения анализа по мутациям
185delAG, 2080delA, 4153delA, 5382insC, c.3700_3704delG TAAA, c.3756_3759delGTCT,
T300G в гене человека B R C A l и 6174delT в гене человека B R C A 2 и 40 образцов от
пациентов с показаниями к анализу.
Воспроизводимость результатов исследования с использованием референтного
набора составляет 1 0 0% и подтверждена в ходе проведения клинических испытаний на
разных сериях набора (внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость).
16
10. Ограничения метода. Расчет неопределенности определения
в условиях повторяемости и воспроизводимости
10.1 Показания и противопоказания к применению
Показания к применению набора реагентов «ГенТест-М BRCA1, BRCA2»: опре
деление наследственных мутаций 185delAG, 2080delA, 4253delA, 5382insC,
c.3700_3704delG TA AA , c.3756_3759delG TCT, T300G в гене человека B R C A l и
6274delT в гене человека B R C A 2 для выявления предрасположенности развития
наследственных форм рака молочной железы или рака яичника и прогнозирования
соответствующих наследственных форм рака у родственников первой линии.
Медицинских противопоказаний к применению набора реагентов «ГенТест-М
B R C A l, BRC A 2» нет. Ограничения по применению связаны с интерферирующими
веществами, содержащимися в биоматериале.
10.2 Информация об интерферирующих веществах или ограничениях, связанных с
пробой, которые могут повлиять на результат исследования
Для оценки влияния потенциально интерферирующих веществ на работу набора
реагентов «ГенТест-М B R C A l, BRC A 2» была проведена оценка влияния потенциально
интерферирующих веществ, содержащихся в биоматериале.
Для проведения испытаний использовались контрольные образцы предприятия
(далее КОП), не содержащие потенциально интерферирующие вещества из Таблицы 4.
Для оценки влияния потенциально интерферирующих веществ, содержащихся в
биоматериале, каждое вещество из Таблицы 4 испытывалось в максимальной концен
трации, которая, как ожидается, будет встречаться при нормальном использовании
набора реагентов, а так же в концентрации, превышающей нормальное содержание
этих веществ в биоматериале, с целью установления концентрации, влияющей на
результат работы набора реагентов «ГенТест-М B R C A l, BRCA2».
Результаты приведены в Таблице 4. Каждое вещество в заданной концентра
ции добавлялось к КОП. Такой образец подвергался выделению Д НК (Модуль 1) и
генотипированию (Модуль 2) набором реагентов «ГенТест-М B R C A l, BRCA2». По
результатам сравнения генотипов, полученных при использовании набора реагентов
«ГенТест-М B R C A l, BR C A 2» и генотипов, полученных секвенированием по Сэнгеру,
делался вывод о влиянии потенциально интерферирующих веществ на набор реаген
тов «ГенТест-М B R C A l, B R C A 2».
17
--- стр. 10 ---
Потенциально интерферирующие вещества в концентрациях, которые, как ожида
ется, будут встречаться при нормальном использовании набора реагентов, не влияют
на способность набора реагентов «ГенТест-М BRCA1, BRC A 2» выделять геномную ДНК
человека и определять в ней исследуемый генотип. Влияние потенциально интерфери
рующих веществ на результат работы набора реагентов «ГенТест-М BRCA1, BRCA2»
установлено только при увеличении концентрации веществ до концентраций, превыша
ющих их известную максимальную концентрацию в биоматериале.
Таблица 4 - концентрации потенциально интерферирующих веществ
Интерферирующие вещества
Максимальная концентрация
потенциально интер
ферирующих веществ,
встречающаяся в биоматериале
при нормальном использовании
набора реагентов
Установленные концентрации
потенциально интер
ферирующих веществ,
влияющие на результат работы
набора реагентов «ГенТест-М
BRCA1, BRCA2»
Гемоглобин 220 г/л 400 г/л
Лантоферрин 200 мкг/мл 300 мкг/мл
IgG 17 г/л 60 г/л
Билирубин общий ; 160 мкмоль/л 500 мкмоль/л
Холестерин общий : 12 ммоль/л 40 ммоль/л
Общие триглицериды : 11,3 ммоль/л : 50 ммоль/л
10.3 Оценка неопределенности в условиях повторяемости и воспроизводимости
Для оценки неопределенности в условиях повторяемости были подобраны условия,
при которых независимые результаты испытаний получаются одним и тем же методом
на идентичных объектах испытаний, в одной и той же лаборатории, одним и тем же
оператором, с использованием одного и того же оборудования, в пределах короткого
промежутка времени.
Для оценки неопределенности в условиях воспроизводимости были подобраны
условия, при которых результаты испытаний получают одним и тем же методом, на
идентичных объектах испытаний, в разных лабораториях, разными операторами, с
использованием различного оборудования.
По результатам испытаний рассчитаны значения диагностических характе
ристик и коэффициент вариации порогового цикла в условиях повторяемости и
воспроизводимости.
Характеристика
Значение характеристики в
условиях повторяемости
Значение характеристики в
условиях воспроизводимости
Диагностическая
чувствительность
100% (ДИ 92,60%-100,00%,
ДВ 95%)
100% (ДИ 97,47%-100,00%,
ДВ 95%)
Диагностическая специфичность 100% (ДИ 92,60%-100,00%,
ДВ 95%)
100% (ДИ 97,47%-100,00%,
ДВ 95%)
Положительная предсказательная
ценность
100% (ДИ 92,60%-100,00%,
ДВ 95%)
100% (ДИ 97,47%-100,00%,
ДВ 95%)
Отрицательная предсказательная
ценность
100% (ДИ 92,60%-100,00%,
ДВ 95%)
100% (ДИ 97,47%-100,00%,
ДВ95%)
Отношение правдоподобия поло
жительного результата Расчёт произвести нельзя, т. к. на данной выборке не было
установлено ложноположительных и ложноотрицательных
результатов.Отношение правдоподобия отри
цательного результата
Коэффициент
вариации
порогового
цикла(рассчи
тан для каждого
детектирующего
амплификатора)
CFX96‘ 10% 18%
StepOnePlus* 10% 18%
7500* 12% 19%
* Коэффициент вариации порогового цикла рассчитан поданным, полученным на приборах:
• CFX96-Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, С принадлежностями исполнения; С1000 Touch, в
комплекте 5. Модуль реакционный оптический CFX96 (Optical Reaction Module CFX96);
-StepOnePlus-Система регистрации полимеразной цепной реакции в режиме реального времени StepOne, с принадлеж
ностями: I. Система регистрации полимеразной цепной реакции в режиме реального времени StepOne, исполнения;
StepOnePlus;
- 7500 - Прибор для количественного обнаружения продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР) е режиме реального
времени с принадлежностями: I. Прибор для количественного обнаружения продуктов полимеразной цепной реакции
(ПЦР) в режиме реального времени, вариант исполнения 7500.
18 19
--- стр. 11 ---
11. Меры предосторожности.
Риски применения медицинского изделия
11.1 Общие
■ Потенциальный риск применения Набора - класс 26 (Приказ М инздрава Россий
ской Федерации от № 4н).
• Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять набор
реагентов строго по назначению, только для диагностики in vitro.
• Набор реагентов не содержит факторы инфекционной и микробной опасности.
• Набор содержит факторы токсикологической опасности требующие обеспечение
специальных мер безопасности. Компоненты с такими веществами имеют предупре
дительную маркировку:
11.2 Для оператора
• При проведении исследования необходимо строго придерживаться общих стандар
тов по формированию и поддержанию безопасности рабочей среды в медицинских
лабораториях при манипуляциях с биологическим материалом человека, химиче
скими реактивами и другими объектами потенциальной опасности для здоровья
людей в соответствии с ГОСТ Р 52905-2007.
• При работе с исследуемыми образцами и отходами следует соблюдать меры пре
досторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом,
рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микро
организмами III- IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
• При работе с Набором реагентов необходимо соблюдать МУ 1.3.2569-09 "О рганиза
ция работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот
при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности",
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с
медицинскими отходами».
• Все сотрудники должны выполнять инструкции и правила техники безопасности,
изложенные в технических паспортах к используемым электрическим приборам;
персонал, работающий с реактивами, должен быть обучен обращению с ними.
20
использовать средства персональной защиты, соблюдать правила личной гигиены.
Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится
в отдельных помещениях (зонах). Для предотвращения контаминации этапы
подготовки к амплификации (ПЦР) и проведения ПЦР следует проводить в
раздельных помещениях или изолированных зонах, снабженных комплектами полу
автоматических пипеток, халатами и прочими необходимыми принадлежностями.
Не возвращать образцы, оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
Примечание: Основные принципы работ ы в ПЦР-лаборат ории описаны
в Приложении № 1 данной инст рунции по применению
При работе с Набором соблюдать следующие правила: использовать одноразовые
нитриловые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании работы.
Не допускается использование одних и тех же наконечников при обработке различ
ных образцов клинического материала.
Поверхности рабочих столов, а также рабочих помещений следует обрабатывать
бактерицидными облучателями до и после проведения работ в течение 1 часа.
Химическая посуда и оборудование, которые используются при работе, должны быть
соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
Использованные одноразовые принадлежности (пробирки, наконечники) должны
сбрасываться в специальный контейнер, содержащий дезинфицирующий раствор.
Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использован
ные реагенты, упаковку, биологический материал, включая материалы, инструменты
и предметы, загрязненные биологическим материалом, следует удалять в соответ
ствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
Набор реагентов готов к применению согласно инструкции по применению. Приме
нять набор реагентов строго по назначению.
Удалять отходы с продуктами ПЦР необходимо только в закрытом виде. Не допуска
ется открывать пробирки после амплификации (МУ 1.3.2569-09).
К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный мето
дам молекулярной диагностики и правилам рабо-ты в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III- IV групп патогенности (опасности) и возбудителями парази
тарных болезней»). 1 21
--- стр. 12 ---
• Не использовать Набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или внеш
ний вид реагента не соответствует описанию.
• Не использовать Набор реагентов, если не соблюдались условия транспортирова
ния и хранения согласно инструкции.
• Не использовать Набор реагентов по истечении срока годности.
• Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочной. При контакте немед
ленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью.
• При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер
предосторожности Набор безопасен. При использовании по назначению и соблю
дении вышеперечисленных мер предосторожности контакт с организмом человека
исключен.
12. Необходимые материалы и реагенты, лабораторная посуда и
оборудование, не входящие в комплект поставки
Перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и оборудования, на которых
валидирован набор реагентов «ГенТест-М BRCA1, BRCA2» представлен в таблице 5.
Замена амплифинатора и пробирокдля амплификации на оборудование и материалы
с аналогичными характеристиками не допускается!
Каждая зона ПЦР-лаборатории должна быть снабжена необходимым оборудованием
и расходными материалами. Оборудование не должно перемещаться из одной зоны в
другую и внутри зоны между рабочими местами (см. Приложение №1).
Таблица 5 - перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и оборудования
Перечень необходимых
материалов, реагентов,
лабораторной посуды и Перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и
оборудования необходимых оборудования, на которых валидирован набор реагентов
для проведения исследования «ГенТест-М BRCA1, BRCA2»
ПЦР-бонс для выделения ДНК
ПЦР-бонс для приготовления
реакционной смеси
ПЦР-бонс для внесения ДНК в
пробирки для ПЦР
Боне абактериальной воздушной среды для работы
с ДНК-пробами при проведении ПЦР-диагностики БАВ-
ПЦР-"Ламинар-С." по ТУ 9443-004-51495026-2004.
Производитель: ЗАО «Ламинарные системы», Россия.
ФОР 2010/07114 ОТ 18.03.2010.
Модель: БАВ-ПЦР-’Ламинар-С".
Кат.№: 1R-F.00M0.1/0.06.1
22
Перечень необходимых
материалов, реагентов,
лабораторной посуды и
оборудования необходимых
для проведения исследования
Перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и
оборудования, на которых валидирован набор реагентов
«ГенТест-М BRCA1, BRCA2»
Дозаторы 1
Дозаторы пипеточные однонанальные переменного объема 1
серии Pipetman: 3. Pipetman Р20; 4. Pipetman PlOO;
5. Pipetman P200; 6. Pipetman PIOOO.
Производитель: Gilson Pipetman, Франция.
Модель:
Дозатор 2-20 мкл: точность ±0.2 мкл,
Кат. № Р20 F123600. |
Комплект дозаторов перемен
ного объема и наконечников
с фильтром, позволяющих
отбирать объемы жидкостей
от 2 до 1000 мкл
Дозатор 20-100 мкл: точность ±0.8 мкл,
Кат. № Р100 F123615.
Дозатор 50-200 мкл: точность ±1.6 мкл,
Кат. N* Р200 F123601.
Дозатор 200-1000 мкл: точность ±8.0 мкл,
Кат. № РЮОО F123602.
Нанонечниии
Посуда из полимерных материалов для лабораторных иссле
дований in vitro.
2. Наконечники универсальные с фильтром, для лаборатор
ных дозаторов, объемом от 0,1 мкл до 10 мл, стерильные и
нестерильные, упакованные в пакеты и штативы.
Производитель: SSI, США.
РУ ФСЗ 2011/10287 от 11.04.2017.
Кат.№ SSI-4237NAFS.
Микроцентрифуга
Лабораторная минроцентрифига MiniSpin с принадлеж
ностями: 1. Лабораторные центрифуги MiniSpin, вариант
исполнения: 2. MiniSpin Plus.
Производитель: «Eppendorf Manufacturing Corporation»,
США.
ФСЗ 2012/13316OT05.12.2012.
Модель: MiniSpin plus.
Мини-центрифуга/вортенс Мини-центрифуга-вортекс Минроспин FV-2400.
Производитель: ООО «БИОСАМ», Латвия.
23
--- стр. 13 ---
Перечень необходимых
материалов, реагентов,
лабораторной посуды и
оборудования необходимых
для проведения исследования
Перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и
оборудования, на которых валидирован набор реагентов
«ГенТест-М BRCA1, BRCA2»
1. Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000,
с принадлежностями исполнения: С1000 Touch, в комплекте i
5. Модуль реакционный оптический CFX96 (Optical Reaction i
Module CFX96). '
Производитель: «Bio-Rad Laboratories, Inc.», США.
Py № ФСЗ 2008/03399 от 21.06.2016;
Амплификатор
детектирующий
2. Система регистрации полимеразной цепной реакции в
режиме реального времени StepOne, с принадлежностями:
I. Система регистрации полимеразной цепной реакции в
режиме реального времени StepOne, исполнения: StepOnePlus.
Производитель: «Applied Biosystems, LLC», США. РУ: ФСЗ
2010/06259 от 25.01.2017;
3. Прибор для количественного обнаружения продуктов поли
меразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с
принадлежностями: I. Прибор для количественного обнаруже
ния продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме
реального времени, вариант исполнения 7500.
Производитель: Лайф Текнолоджис Холдинге Пте. Лтд,
Сингапур. РУ: РЗН 2016/3932 от 06.04.2016.
Секундомер Производитель: ОАО "ИНТЕГРАЛ", Республика Беларусь
Модель: Секундомер «Интеграл» С-01
Термостат <2 шт)
Термостат твердотельный с таймером ТТ-2 "Термит" !
по ТУ 9452-004-46482062-2002 i
Производитель; ООО «НПО ДНК-Технология», Россия,
ФСР 2012/14090 от 23.11.2012.
Модель: ТТ-2 "Термит".
Штатив «рабочее место»
Посуда из полимерных материалов для лабораторных иссле
дований in vitro 15. Штативы для хранения и транспортировки
пробирок, криопробирон объемом от 0,2 мл до 50 мл.
Производитель: SSI, США.
1 РУ ФСЗ 2011/10287 от 11.04.2017.
1 Кат.м» RA-9602, Кат.м» SSI-5210-29.
24
Перечень необходимых
материалов, реагентов,
лабораторной посуды и
оборудования необходимых
для проведения исследования
Пробирки для амплификации
объемом 0.1 мл или 0.2 мл
Перечень материалов, реагентов, лабораторной посуды и
оборудования, на которых валидирован набор реагентов
«ГенТест-М BRCA1, BRCA2-
1. Пробирки для амплификаторов С1000 Touch с оптическим
модулем CFX96 и 7500:
Посуда из полимерных материалов для лабораторных иссле
дований 'т vitro А. Пробирки объемом от 0,2 мл до 2,0 мл для
постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР-диагностики),
индивидуальные и в стрипах по 8 и 12 штук, с крышками и без
крышек, стерильные и нестерильные, упакованные в пакеты.
Производитель: SSI, США. РУ ФСЗ 2011/10287 от 11.04.2017.
Кат. № SS1-3247-00.
2. Пробирки для амплификатора StepOnePlus:
Система регистрации полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени StepOne, с принадлежностями:
II. Принадлежности: 24. Пробирки стрипованные реакционные
оптические 8-луночные MicroAmp для скоростной ПЦР.
Кат.№ 4358293.
28. Крышки оптические для реакционных пробирок MicroAmp
для ПЦР. Кат.м* 4323032.
Производитель: «Лайф Текнолоджис Корпорейшн», США.
РУ ФСЗ 2010/06259 от 25.01.2017^ ______________
Микроцентрифужные про
бирки объемом 1.5 и 2.0 мл
Изделия медицинские полимерные лабораторные одноразовые
для взятия и исследования биоматериалов 10. Пробирки {виды:
108710,108740, 108750, 264440, 264460,169800, 169870).
Производитель: «Sarstedt АГ& Ко. КГ»,Германия.
РУ ФСЗ 2009/04699 от 18.10.2017.
Кат.м» 72.690.001, Кат.№ 72.695.500 _______________________
Холодильная и морозильная
камера, поддерживаюш,ие
температуры от +2 до н-15 °С
и от - 28 до - 10 °С
Производитель; Индезит, Италия.
Модель: ES 20.
Кат.м» SB 185.027
Спирт этиловый 96%
Перчатки медицинские
Перчатки медицинские диагностические (смотровые)
стерильные и нестерильные по ТУ 9398-001-53733748-2008.
Производитель: ООО «Ардейл-Импэкс», Россия.
РУ ФСР 2008/03090 отЗО.07.2008.
25
--- стр. 16 ---
ко окв око пко
без ДНК
^ ^ Л f --------------------^
Для каждой анализируемой мутации подготовить соответствующие ПКО и ОКО:
стрип №1
стрип №2
Рисунок 1 - схема расположения пробирок для ПЦР при исследовании 4 образцов. При измене
нии количества исследуемых образцов сохранять расположение пробирокдля ПЦР и порядок
внесения (п. 7-13) исследуемых образцов, ПКО, ОКО, ОКВ и Контрольного образца без ДНК
относительно друг друга.ИО - исследуемый образец, ОКВ - отрицательный контроль выделения,
КО без ДНК- контрольный образец без ДНК. '
7. Внести по 20 мкл реакционной смеси в пробирки для ПЦР.
I М енят ь нанонечнини между разными реанционными смесями!
8. Добавить по 5 мкл «Вода деионизированная», которая использовалась для приго
товления реакционной смеси, в пробирки для ПЦР, соответствующие «Контрольному
образцу без ДНК». Плотно закрыть крышки пробирок.
I М енят ь наконечники после каждого внесения образца в пробирку для П Ц Р!
9. Закрыть крышки других пробирокдля ПЦР. Перенести все пробирки для ПЦР в ПЦР-
боксдля внесения ДНК.
Подготовка контрольных образцов и ДНК. Внесение образцов в пробирки для ПЦР
10. в ПЦР-боксе для внесения Д НК разморозить при температуре от -И 5 до н-ЗО °С
контрольные образцы ОКО и ПКО.
OKO ПК0
BRCA1185delAG OKO 185delAG ПК0 185delAG
RRCA12080delA OK0 2080delA nK0 2080delA
BRCAl 4153delA OKO 4153delA nK0 4153delA
BRCA1 5382insC OKO 5382insC ПКО 5382insC
BRCAl c.3700_
3704 deIGTAAA OKO C.3700 _ 3704 deIGTAAA ПК0 c.3700 _ 3704 deIGTAAA
RRCAl C.3756 3759delGTCT OKO c.3756 3759delGTCT ПК0 c.3756 3759delGTCT
BRCAlT300G OKOT300G пкотзооа
BRCA2 6174delT OKO 6174delT пко 6174delT
Разморозить/прогреть при температуре -t-50 °С исследуемые образцы Д НК и ОКВ.
Все образцы перемешать встряхиванием на вортексе, сбросить капли центрифуги
рованием в течение 5 с.
1 1 . Добавить по 5 мкл ОКВ в соответствующие пробирки для ПЦР. Плотно закрыть
крышку пробирки сразу после внесения образца, выполнить последовательно для всех
образцов.
I М енят ь наконечники после каждого внесения образца в пробирку для П Ц Р!
12. Добавить по 5 мкл ДНК исследуемых образцов в соответствующие пробирки для
ПЦР. Плотно закрыть крышку пробирки сразу после внесения образца, выполнить
последовательно для всех образцов.
М енят ь наконечники после каждого внесения образца в пробирку для П Ц Р!
13. Добавить по 5 мкл контрольных образцов ОКО и ПКО в соответствующие про
бирки для ПЦР. Плотно закрыть крышку пробирки сразу после внесения контрольного
образца, выполнить последовательно для всех образцов.
I М енят ь наконечники после каждого внесения образца в пробирку для П Ц Р!
14. Проверить плотность закрытия крышек пробирок.
15. Перемешать встряхиванием содержимое пробирок для ПЦР, не допуская образо
вания пены.
16. Сбросить капли центрифугированием в течение 10 с.
30 31
--- стр. 17 ---
Проведение ПЦР
17. Установить пробирки для ПЦР в блок амплификатора.
18. Запустить программное обеспечение амплификатора. Открыть созданный ранее
шаблон или ввести параметры:
• программа амплификации (одинакова для каждого прибора)
Этап Температура, *^0 Продолжительность Считывание
флуоресценции
Инкубация 95 3 мин _
Амплификация
10 циклов
95 Юс -
62 30 с -
Амплификация
40 циклов
95 Юс -
62 30 с V
Формирование дуплекса 95 3 мин -
20 2 мин —
Плавление дуплекса От 20 ДО 70 °С с увеличением
температуры на 0.5 ®С каждые 10 с V
создать разметку плашки в соответствии с установленными пробирками в блок
амплификатора:
• Для всех образцов, включая контрольные, выбрать канал детекции РАМ;
ВНИМАНИЕ!
I НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ ГАСИТЕЛЬ И ПАССИВНЫЙ РЕФЕРЕНСНЫЙ КРАСИТЕЛЬ!
• В поле “Target" ввести название исследуемой мутации,
• В поле “ Sample N am e" ввести названия исследуемых и контрольных образцов.
Не вводить одинаковые названия для разных образцов;
запустить программу амплификации.
15. Анализ данных
1. Настройки: Задать параметр «Пороговый уровень» (Threshold); для прибора CFX96 ввести значение 50,
для прибора StepOne Plus ввести значение 2500, для прибора 7500 ввести значение 5000."
----------------------------------1
2. Контроль качества ПЦР:
2.1 Анализ Контрольного образца без ДНК и ОКБ
Сд > 38 или Сд не определяется
и
Графин сигнала флуоресценции
не имеет S-образной формы
Результаты эксперимента признаются
недействительными
ДА
Jr
2.2 Анализ контрольных образцов ОКО и ГКО
Для образцов ОКО и П КО Cq < 26
ДА
J L
Для образцов ОКО и П КО форма пиков и
их температуры плавления соответствуют
значениям, заявленным в таблице 7.
3. Анализ исследуемых образцов;
Определение генотипов исследуемых образцов
£
Значение Сд < 30’*
Форма пиков и их температуры
плавления совпадают с ОКО
Форма пиков и их температуры
плавления совпадают с П КО
Результаты эксперимента признаются
недействительными _______
Результаты эксперимента признаются
недействительными______________
-нЕт> Образец анализировать нельзя
Генотип «N».
Для интерпретации генотипа см. Таблицу 8.
Генотип «т».
Для интерпретации генотипа см. Таблицу i
-м Образец анализировать нельзя
* при необходимости изменить значения Baseline так, чтобы часть графика флуоресценции до начала экспонен
циального роста сигнала стала параллельна оси абсцисс и близка к нулю по оси ординат. .
“ если не выполняется условие Cq< 30, значите исследуемом образце концентрация ДНК меньше, чем предел 33
обнаружения (1 иг/мкл) набора реагентов «ГенТест-М BRCA1, 8RCA 2» и образец анализировать нельзя.
--- стр. 18 ---
Таблица 7 - форма пиков ОКО и ПКО и их температуры плавления
(Целевые пики ОКО и ПКО находятся в диапазоне от +40 до +65 °С ниже оси абсцисс;
графики ОКО выделены черным, графики ПКО - зеленым).
CFX96 StepOne Plus 7500
1 Анализируемая Myrat 1ИЯ: BRCAl T300G ________________________1
34
» « $0 Н 70
Temperature, Celsius
Анализируемая мутация: BRCA2 6174delT
то 30 м so м
Temperature, Celsius
30 40 so so 70
Temperature, Celsius
Melt Curve
30 40 so M 70
Temperature, Celsius
35
--- стр. 21 ---
17. Срок годности
Срок годности указан с даты производства при соблюдении условий транспорти
рования и хранения. Набор реагентов или полученные в ходе использования смеси
растворов с истекшим сроком годности применению не подлежат.
Модуль 1 для выделения ДНК
Срок годности
НЕВСКРЫТЫХ реагентов
Срок годности
вскрытых реагентов
Раствор 1 12 месяцев
Раствор 2 После смешивания
Растворов 2 и 3 срок
годности полученного
реагента- 1 месяцРаствор 3 12 месяцев
Раствор 4
Раствор5 12 месяцев
ОКВ
Модуль 2 для генотипирования
ПЦР-смесь М
Срок годности Срок годности
НЕВСКРЫТЫХ реагентов вскрытых реагентов
Олиго-смесь М BRCA1185delAG
Олиго-смесь М BRCA1 2080delA
Олиго-смесь М BRCA1 4153delA
Олиго-смесь М BRCA1 5382insC
Олиго-смесь М BRCA1 с.3700 3704 deIGTAAA
Олиго-смесь М BRCA1 с.3756 3759delGTCT
Олиго-смесь М BRCA1 T300G
Олиго-смесь М BRCA2 6174delT
ОКО lB5dei^
bK0 2080dei^
^K Q 4153deiX
ОКО 5382in'sC'
ОКО с.37~00~
ОКО С.3756
ОКО T300G"
3704 deIGTAAA
3759delGTCT
12 месяцев 12 месяцев
ОКО 6174delT
ПКО 185delAG
ПКО 2080delA
ПКО 4153delA
ПКО 5382insC
ПКОс.3700 3704delGTAAA
ПКОС.3756 3759delGTCT
ПКОТЗООб
riK0 6174delT
Вода деионизированная
40 41
--- стр. 22 ---
42
18. Критерии непригодности набора реагентов для применения
Не использовать «ГенТест-М B R C A 1, B R CA 2», если верно хотя бы одно утверж дение:
• при первом вскрытии обнаруж ено повреж дение фасовочной тары компонентов;
• нет возмож ности плотно закрыть фасовочную тару компонентов или обнаружены
протечки;
• неполная комплектность, в том числе в результате применения;
• внешний вид компонентов не соответствует описанию;
• нарушены условия хранения;
• истек срок годности;
• компоненты контаминированы ДНК человека;
• изготовитель сообщил об отзыве производственной серии, к которой относится д а н
ный набор реагентов (посредством объявления на сайте w w w .nom otech.ru или иным
способом).
19. Гарантии изготовителя
Предприятие-изготовитель ООО «НОМОТЕК» при соблюдении условий тр ан сп ор
тирования, хранения и использования набор реагентов «ГенТест-М B R C A 1, BR CA2»
гарантирует:
• соответствие набора реагентов требованиям ТУ 2 1.2 0 .2 3 -0 2 4 -112 4 8 0 74 -2 0 18 ;
• гарантийный срок хранения в упаковке - 1 2 месяцев со дня изготовления.
По истечению ср ока годности набор реагентов и все его компоненты применению не
подлежат.
20. Контроль качества, метрологическая прослеживаемость
20.1 Контроль качества набора реагентов осущ ествляется ОТК предприятия-изготови
теля согласно ТУ 2 1.2 0 .23-0 24 -11248 0 74 -20 18 .
Предприятие-изготовитель проводит приемо-сдаточны е испытания для каждой
производственной серии, осущ ествляя контроль основны х аналитических хар актери
стик, внешний вид, комплектность, упаковку, маркировку, а такж е проводит контроль
качества сырья и компонентов.
20.2 М етрологическая пр ослеж и ваем ость компонентов набора ПКО 18 5 delA G ,
ПКО 2080delA , ПКО 4 15 3 d e iA , ПКО 5382insC, ПКО c.3 70 0 _ 3 70 4 d elG T A A A , ПКО
c.375 6 _ 375 9 d elG T C T , ПКО T300G , ПКО 6174delT, ОКО 18 5 delA G , ОКО 2080delA , ОКО
4 15 3 d e lA , ОКО 5382insC, ОКО c.3 70 0 _ 3 70 4 d elG T A A A , ОКО c.375 6_ 375 9d elG T C T , ОКО
T300G, ОКО 6 17 4 d elT обеспечена до контрольных образц ов предприятия, вериф ици
руемы х секвенировани ем по м етоду Сэнгера.
21. Порядок подачи рекламаций
По вопросам , касающ имся качества набора, сл едует обращ аться:
• ООО «НОМОТЕК» 119 4 2 1 г. М осква, Ленинский проспект, д .1 1 1 , корп.1, помещ.34, эт.З;
• m d-support@ nom otech.ru — техническая поддерж ка.
При подаче рекламации необходимо исключить низкое качество биом атериала,
ошибку измерения, ошибку выполнения протокола, наруш ениеуслови й транспортиро
вания и хранения. Если все указанны е факторы исключены, необходимо обратиться в
служ бу технической поддержки.
22. Утилизация
2 2 .1 Наборы реагентов «ГенТест-М B R C A 1, B R CA2», пришедшие в непригодность,
в том числе в связи с истечением срока годности, подлеж ат утилизации.
22.2 Уничтожение наборов реагентов «ГенТест-М B R C A 1, B R C A 2» осущ ествляется
организациями, имеющими соответствую щ ую лицензию, на специально оборудо
ванных площ адках, полигонах и в помещениях в соответствии с требованиями,
предусмотренными сущ ествую щ ими Ф едеральны м законам, и с соблюдением обяза
тельных требований по охране окруж ающ ей среды.
22.3 После проведения тестирования все отходы необходимо утилизировать как
отходы к л асса «Б» согласно СанПиН 2.1.7 .2 79 0 -10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
22.4 Непригодные к использованию наборы «ГенТест-М B R C A 1, B R C A 2» и его
компоненты необходимо утилизировать как отходы класса «Б» согласно СанПиН
2.1.7 .2 79 0 -10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицин
скими отходами».
43
--- стр. 23 ---
23. Н ациональны е стандарты РФ , прим еним ы е к изделию
м едицинского назначения
Набор реагентов «ГенТест-М B R C A 1, B R C A 2» соответствует требованиям сл ед ую
щих стан дар тов и нормативных документов:
• ТУ 2 1.2 0 .2 3 -0 2 4 -112 4 8 0 7 4 -2 0 18 .
• ГОСТ Р ЕН 1 3 6 12 -2 0 10 «Оценка функциональных характеристик медицинских
и здели йдлядиагности ки i n v i t r o » .
• ГОСТ Р 5 1 3 5 2 -2 0 1 3 «М едицинские изделия для диагностики ин витро. Методы
испытаний».
• ГОСТ Р ИСО 1 8 1 1 3 -1 -2 0 1 5 «М едицинские изделия для диагностики i n v i t r o .
Информация, предоставляем ая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины,
определения и общие требования».
• ГОСТ Р ИСО 1 8 1 1 3 -2 -2 0 1 5 «М едицинские изделия для диагностики i n v i t r o . Инфор
мация, предоставляем ая изготовителем(маркировка). Часть 2. Реагенты для
диагностики in vitro для проф ессионального применения».
• ГОСТ Р ИСО 2 3 6 4 0 -2 0 15 «Изделия медицинские для диагностики i n v i t r o . Оценка
стабильности реагентов для диагностики i n v i t r o » .
• ГОСТ Р ИСО 15 2 2 3 -1-2 0 14 «Изделия медицинские. Символы, применяемые при
маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной докум ен
тации. Часть 1. Основные требования».
• ГОСТ Р 5 10 8 8 -2 0 13 «М едицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты,
наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Тр е
бования к изделиям и поддерж иваю щ ей документации».
• ГОСТ ISO 1 4 9 7 1 -2 0 1 1 «Изделия медицинские. Применение м енедж мента риска к
медицинским изделия».
• ГОСТ Р ИСО 1 5 1 9 3 -2 0 1 5 «Изделия медицинские для диагностики i n v i t r o . И зме
рение величин в пробах биологического происхождения. Требования к описанию
референтных методик выполнения измерений».
1Приложение №1
Основные принципы работы в ПЦР-лаборатории и правила ее организации:
• Зонирование.
• Н аправление потока м атериалов и персонала.
• Размещ ение оборудования и уборочного инвентаря.
Основные принципы работ ы в П Ц Р-лаборат ории
• Однонаправленность потока персонала и материалов.
• Технологическая одеж да долж на быть строго индивидуальна.
Всегда использовать перчатки. Не прикасаться к поверхностям, оборудованию , руч
кам дверей, холодильников и т.д. без перчаток.
Не перемещ ать при работе, уборке помещений оборудование даж е в пределах одной
зоны.
Не выходить за пределы зоны в технологической одеж де.
М аркировать используемые реактивы.
Хранить используемые реактивы (вскрытые наборы реагентов) отдельно от не
использовавш ихся.
Хранить материалы, содерж ащ ие ДНК отдельно от реактивов, использующ ихся для
приготовления реакционной смеси.
Выделение ДНК, приготовление реакционной см еси следует проводить в ПЦР-бок-
са х или ламинарны х ш каф ах с выключенным ламинарным потоком.
При работе сд озаторам и использовать наконечники с фильтром. Для каждой о п ера
ции менять наконечник.
Для хранения дозаторов использовать специальную стойку.
После перемещения пробирок всегда осаж дать капли со стенок на мини-центри
фуге. Избегать касания внутренней поверхности пробирок и крышек наконечником.
Перед и после работы проверить исправность оборудования, убрать рабочее место.
Для уборки П Ц Р-бокса в т.ч, использовать ультрафиолет.
После работы утилизировать использованные материалы - наконечники, пробирки
и т.д. согласно регламенту лаборатории.
Пробирки с ПЦР-продуктам не открывать в Зоне №4. Для утилизации проби
рок с ПЦР-продуктом в Зоне №4 поместить пробирки в пакет, пакет закрыть,
утилизировать.
44 45
--- стр. 24 ---
Зонирование
ПЦP-лаборатория для ПЦР-РВ долж на включать минимальный набор рабочих зон:
• Зона №1 - для работы с геномной ДНК (выделение ДНК, подготовка образцов)
• Зона №2 - для приготовления реакционных см есей (изолирована от источника ДНК)
• Зона №3 - д л я внесения ДНК в реакционную см есь
• Зона №4 - для проведения ПЦР (место нахождения амплификаторов)
При необходимости возможно размещ ение зон №2 и №3 в одном помещении при
соблюдении разделения процессов приготовления реакционных см есей и внесения
ДНК в разных ПЦР-боксах.
Для работы с большим потоком биологического м атериала следует создать допол
нительную зону № 1а для его приемки, регистрации, р азбора, первичной обработки.
Для работы с ПЦР-продуктом необходимо создать дополнительную Зону №5
- для манипуляций с ПЦР-продуктом (электрофорез, подготовка образцов перед
секвенированием).
Перед каждой зоной должен быть оборудован са н п р оп уск н и к -д л я смены одежды на
технологическую, хранения уборочного инвентаря.
Направление потока материалов и персонала
В ПЦР-лаборатории долж на соблю даться однонаправленность потока материалов.
В зону №2 не должны попадать материалы из других зон. Для других зон действует
принцип: материалы, побывавш ие в зонах с большим номером, не должны пер ем е
щаться в обратном направлении. Под м атериалами сл едует понимать: пробирки,
штативы, пакеты, документы и т.п.
В ПЦР-лаборатории долж на соблю даться однонаправленность потока персонала, в
т.ч. обслуж иваю щ его персонала. Люди, побывавш ие в зонах с ббльшим номером, могут
перем ещ аться в обратном направлении только при соблюдении порядка подготовки
персонала к работе (мытье рук, см ена комплекта одежды и т.д.). При работе в зоне №5
следует планировать рабочий процесс так, чтобы в этот день не возвращ аться в другие
зоны. Все находящ иеся в лаборатории должны в каждой зоне менять одеж ду на техн о
логическую: обувь, халат, шапочка, м аска, перчатки, нарукавники. Технологическая
одеж да строго не долж на перемещ аться м еж ду зонами.46
Размещение оборудования и уборочного инвентаря
К аж дая зона должна быть снабж ена необходимым оборудованием и расходными
материалами. Оборудование не должно перемещ аться из одной зоны в другую и внутри
зоны м еж ду рабочими местам и. М инимальный список станционарного оборудования
в зонах ПЦР-лаборатории:
• Зона № 1а - центрифуга, штативы, вортекс, комплект дозаторов, комплект инстру
ментов для работы с материалом, место для хранения материала;
• Зона № 1 - ПЦР-бокс для выделения ДНК, комплект дозаторов, вортекс, мини
центрифуга, центрифуга, термостат, штативы, морозильная кам ера, холодильная
камера;
• Зона № 2 - ПЦР-бокс для подготовки реакционной смеси, комплект дозаторов, вор
текс, миницентрифуга, морозильная камера, холодильная кам ера, штативы;
• Зона № 3 - ПЦР-бокс для внесения ДНК в пробирки для ПЦР, комплект дозаторов,
вортекс, миницентрифуга, термостат, морозильная камера, холодильная камера,
штативы;
• Зона № 4 -а м п л и ф и к а то р , центрифуга с ротором для стрипов и плашек;
• Зона № 5 - ПЦР-бокс для работы с ПЦР-продуктом, комплект дозаторов, вортекс,
миницентрифуга, центрифуга, штативы, прибор для проведения электрофореза,
лабораторные весы, микроволновая печь, морозильная камера, холодильная
камера.
К аж дая зона должна быть снабж ена индивидуальным уборочным инвентарем -
ведро для мытья пола, ш вабра, тряпка для мытья пола, емкость и тряпки для мытья
рабочих поверхностей, дезинфицирующие хлор- или перекись- содерж ащ ие ср едства.
Уборочный инвентарь не должен перемещ аться из одной зоны в другую.
47