Набор реагентов для выявления низкоавидных IgG-антител к вирусу краснухи "Краснуха-диагност" по ТУ 9398-006-10839330-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора Генеральный от 200 г. № ЗАО Биоу^ш с Ш г т Шсой компании «Биосе;, ольцов ИНСТРУКЦИЯ по Применению набора реагентов для выявления низкоавидных IgG-антител к вирусу краснухи «Краснуха-диагност» 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «Краснуха-диагност» предназначен для выявления низкоавидных IgG-антител к вирусу краснухи в сыворотке/плазме крови человека методом иммуноферментного анализа с целью диагностики первичной инфекции. Наличие низкоавидных антител является индикатором первичной инфекции в предшествующие 2-3 месяца. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА Для определения индекса авидности антител IgG каждый образец сыворотки или плазмы крови человека исследуют методом иммуноферментного анализа в двух параллельных лунках планшетов с иммобилизованным вирусом краснухи. При этом антитела, специфичные к белкам вируса краснухи, взаимодействуют с адсорбированным вирусом, образуя иммунные комплексы. После однократной отмывки несвязавшихся антител в контрольные лунки (К-лунки), - вносят фосфатный буфер, в опытные (ДР-лунки) - денатурирующий раствор, который вызывает диссоциацию комплексов низкоавидных антител с антигеном. Степень диссоциации зависит от авидности антител в исследуемом образце. После отмывки в лунки добавляют конъюгат - мышиные моноклональные антитела к Fc-фрагменту IgG человека, меченные пероксидазой хрена, - который взаимодействует с комплексом антиген-антитело. Отмыв несвязавшуюся часть конъюгата, в лунки планшета вносят индикаторный раствор, включающий субстрат и хромоген. Содержащийся в конъюгате --- стр. 2 --- фермент катализирует разложение субстрата, что приводит к образованию окрашенного продукта, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию антител IgG к вирусу краснухи в исследуемом образце. По окончании исследования измеряют оптическое поглощение растворов в лунках при длине волны 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм). На присутствие в исследуемом образце низкоавидных антител указывает снижение оптического поглощения в лунке, обработанной денатурирующим раствором, в сравнении с контрольной лункой. 2.2. СОСТАВ НАБОРА Набор выпускается в виде реагентов, упакованных в коробку: Реагент Описание Количество Иммуносорбент Вирус краснухи, адсорбированный в лунках разборного 96-луночного планшета с прозрачным плоским дном лунок. 1 шт. Высокоавидный положительный контрольный образец инактивированный, К'вАТ Сыворотка крови человека, содержащая высокоавидные IgG-антитела к вирусу краснухи, не содержащая антитела к БИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, антиген р24 ВИЧ-1, HBsAg. Инактивирована прогреванием при температуре от 54 до 56 “С в течение 3 ч. Прозрачная или слегка о пале с пирующая жидкость красного цвета. 1,5 мл 1 пробирка Низкоавидный положительный контрольный образец инактивированный, К^НАТ Сыворотка крови человека, содержащая низкоавидные IgG-антитела к вирусу краснухи, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, антиген р24 ВИЧ-1, HBsAg. Инактивирована прогреванием при температуре от 54 до 56 °С в течение 3 ч. Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость красного цвета. 1,5 мл 1 пробирка Отрицательный контрольный образец инактивированный, К~ Сыворотка крови человека, не содержащая IgG-антитела к вирусу краснухи, антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, антиген р24 ВИЧ-1, HBsAg. Инактивирована прогреванием при температуре от 54 до 56 °С в течение 3 ч. Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость синего цвета. 1,5 мл 1 пробирка Конъюгат Моноклональные антитела мыши против IgG человека, связанные с ферментом пероксидазой хрена. Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость красного цвета. 15 мл 1 флакон К он ц ен трат р аствора № 1 для промывания планшетов (х25) 25-кратный концентрат фосфатного буфера с детергентом. Пенящаяся прозрачная или опалесцирующая бесцветная жидкость, при хранении возможно расслоение и выпадение кристаллического осадка, растворяющегося при температуре (35-37) °С в течение 30 мин. 25 мл 2 флакона --- стр. 3 --- Раствор № 2 для разведения сывороток Прозрачная или опалесцирующая пенящаяся жидкость синего цвета, при хранении допускается выпадение рыхлого комкующегося осадка разной интенсивности, легко разбивающегося при встряхивании. 25 мл 1 флакон Денатурирующий раствор Раствор мочевины. Прозрачная бесцветная жидкость, при хранении возможно выпадение кристаллического осадка, растворяющегося при температуре (35-37) в течение 30 мин. 8 мл 1 пробирка Фосфатный буфер Прозрачная бесцветная жидкость. 8 мл 1 пробирка Раствор № 4 для разведения хромогена Буферная смесь с перекисью водорода. Прозрачная бесцветная жидкость. 15 мл 1 флакон Хромоген Раствор 3,3',5,5’ -тетраметилбензидина. Прозрачная бесцветная жидкость. 1,5 мл 1 пробирка Стон-реагент 1М раствор серной кислоты. Прозрачная бесцветная жидкость. 8 мл 1 пробирка Набор рассчитан на проведение 48 анализов, включая контрольные. 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ Со всеми тестируемыми образцами, отработанными растворами, а также с оборудованием и материалами, находящимися с ними в контакте, необходимо обращаться как с потенциально инфицированными объектами: - не пипетировать растворы ртом, при работе использовать индивидуальные средства защиты (резиновые перчатки и защитные очки); - все отработанные растворы и отходы после завершения анализа обрабатывать в соответствии с установленными нормами безопасности (например, в течение 16-18 часов в растворе гипохлорита натрия в конечной концентрации 1 %); - все твердые отходы сбрасывать в специальный контейнер с пломбируемой крышкой и затем автоклавировать в течение 60 мин при 121 °С или сжигать; - инструменты и оборудование до и после работы протирать 70 %-м раствором этилового спирта; - утилизировать отходы, в соответствии с требованиями СП 1.3.2322 - 08 (Санитарно - эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами --- стр. 7 --- Внести по 100 мкл К", К'^ват, К'^нат, в две соседние лунки 2-х вертикальных рядов планшета в соответствии со схемой, представленной на рис.1. Внести по 100 мкл предварительно подготовленных (п. 5.1.) испытуемых образцов сывороток в каждые две соседние лунки 2-х вертикальных рядов планшета в соответствии со схемой, представленной на рис.1. Рис.1. Схема внесения контрольных и испытуемых образцов сывороток. 1 8 9 10 1 1 12 К" К' №6 №6 №14 №14 №22 №22 № 30 № 30 Х о 3 8№38 н г В А Т ВАТ № 7 № 7 №15 №15 №23 №23 № 3 1№ 3 1№ 39 №39 Г H A T К ’ ^ Н А Т№8 №8 № 16 т е №24 № 24 m2 №32 №40 №40 № 1 № 9 т № 17 m i №25 №25 Х а З З№33 №41 № 4 1 №2 №2 №10 №10 № 18 №18 № 26 № 26 № 34 тз4 №42 №42 Х о З№3 № 1 1№11 № 19 № 19 № 27 № 27 № 35 т з №43 №43 Х г 4№ 4 №12 №12 №20 №20 №28 № 28 № 36 Х о З б№44 №44 №5 №5 №13 №13 № 2 1№ 2 1№ 29 №29 № 37 № 37 №45 №45 к- лунки др- лунки к- лунки Д Р - лунки К - лунки др- лунки к- лунки Д р - лунки к- лун ки др- лунки К - лунки др- лунки Планшет заклеить пленкой (или закрыть крышкой) и выдержать в течение (60±2) мин при температуре (37+1) °С. 6.2.3. Промывание. Удалить жидкость из лунок автоматическим или ручным промывателем. Планшет однократно промыть раствором № 1 (см. п. 6.1.1.), внося в лунки по 250 мкл промываюшего раствора и выдерживая раствор в лунках не менее 20 с. После промывания тщательно удалить остатки влаги из планшета, постукивая планшетом по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на полиэтиленовую пленку. ВНИМ АНИЕ! Недостаточное промывание планшетов мож ет привести к получению лож ных результ ат ов! 6.2.4. Во все К-лунки (ряды планшета №№ 1, 3, 5, 7, 9, И ) внести по 150 мкл фосфатного буфера, во все ДР-лунки (ряды планшета №№ 2, 4, 6, 8, 10, 12) - по 150 мкл денатурирующего раствора. Выдержать в течение 10 мин при температуре от 18 °С до 25 °С. 6.2.5. Повторить пятикратно процедуры промывания, описанные в н. 6.2.3. 6.2.6. Во все лунки планшета внести по 100 мкл конъюгата. Планшет заклеить пленкой (или закрыть крышкой) и выдержать в течение (30±2) мин при температуре (37±1)°С. 6.2.7. Повторить пятикратно процедуры промывания, описанные в п. 6.2.3. --- стр. 8 --- 6.2.8. Во все лунки планшета внести 100 мкл индикаторного раствора (п. 6Л.2.). Планшет поместить в защищенное от света место на (15 ± 2) мин при температуре (18-25) °С. Не располагать планшеты стопкой! 6.2.9. Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 50 мкл стоп-реагента и немедленно провести учет результатов. 7. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Измерение оптической плотности (ОП) провести при длине волны 450 нм. Рекомендуемая длина волны сравнения (620-650) нм. Вывести спектрофотометр на нулевой уровень («бланк») по воздуху. 7.1. Результаты измерения, полученные при анализе контрольных образцов, должны удовлетворять следующим требованиям: ОП в К-лунке с К” - не более 0,15 о.е.; ОП в К-лунке с К^ват - не менее 0,80 о.е.; ОП в К-лунке с К^нат - не менее 0,80 о.е. В том случае, если ОП испытуемого образца в контрольной лунке выше 1,9 о.е., провести повторное исследование образца крови в более высоком разведении. В случае, если ОП испытуемого образца в К-лунке ниже 0,5 о.е., провести исследование образца крови, повторно взятого у пациента через 7-10 суток. Вычислить индекс авидности (ИЛ) для контрольных образцов К^ват и К"^нат и испытуемых сывороток по формуле: ИЛ = (ОПдр-лунка/ОПк-лунка) ^ ЮО % где: ОПдр-лунка - ОП образца, обработанного ДР, ОПк-лунка - ОП образца в К-лунке. ИЛ К'^вАТ должен быть не менее 60 % . ИЛ К'^нА Т должен быть не более 40 % . При получении иных показателей исследование повторить. 7.2. Вычислить ИЛ для исследуемых образцов по приведенной формуле (п. 7.1.), По значению индекса авидности определить присутствие в испытуемом образце низкоавидных антител: ИА <40 % указывает на наличие антител с низкой авидностью; И А от 40 % до 60 % свидетельствует о выявлении антител с неопределенной авидностью (пограничный результат); --- стр. 9 --- ИА >60 % указывает на наличие антител с высокой авидностью. Наличие высокоавидных антител не исключает возможность недавней инфекции. Наличие низкоавидных антител является индикатором первичной инфекции в предшествующие 2-3 месяца. В случае неопределенного результата рекомендуется не ранее, чем через 7 сут. повторно взять кровь и провести исследование второго образца одновременно с первым. Примечание: для установления диагноза следует учитывать как данные результатов лабораторных исследований, так и всю сумму клинических проявлений и эпидемиологического анамнеза. 8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА Набор транспортировать и хранить в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 °С до 8 °С. Не допускать замораживания. Допускается транспортирование в течение 3 сут при температуре от 9 °С до 30 °С. Условия отпуска: для диагностики in vitro в лечебно-профилактических и санитарно-противоэпидемиологических учреждениях. Рекламации на качество набора направляйте в ЗАО БТК «Биосервис» по адресу: 115088, г. Москва, а/я 20, тел./факс (495) 674-5605. 9. СРОК ГОДНОСТИ Срок годности набора 12 месяцев. Запрещается применять набор и его компоненты после окончания срока годности набора. Заведующая производством ЗАО Биотехнологической компании «Биосервис» р у ? Е.А. ВОЛЫНСКАЯ Директор ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий» академик РАМН, профессор А.А. КУБАНОВА