--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г. №
копия BEFHA
FiiSi. Д М Й М гЩ '
Е.Н.С)(9№ -9нгбертс
УТВЕРЩЩО_^
Сж0№ Xt^B^o'iifneHT Корпорэйшн»
.. . .
■ ' р ? Е .Н.Схолль-Энг6ертс- л Д /
2011 г.
ИНСТРУКЦИЯ
. Г / . ■...
по применению набора реагентов для определения
активности щелочной (‘ .ос(]кп сыворотке (плазме) крови
oimt%:ii 3iipoc:i;i.ii.,\i i;ini',: i методом
(Щслочиаи фосфа г;иа-Витал )
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Щелочная фосфатаза-Витал предназначен для количественного определения активности
щелочной фосфатазы в сыворотке (плазме) крови оптимизированным кинетическим методом в клинико-
диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 500 или 1000 определений при расходе 0,5 мл рабочего реагента
на один анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Щелочная фосфатаза катализирует реакцию гидролиза п-нитрофенилфосфата с образованием п-
нитрофенола и фосфата. Количество образовавшегося в единицу времени п-нитрофенола
пропорционально активности щелочной фосфатазы в анализируемом образце и измеряется
фотометрически при длине волны 405 нм.
СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят:
реагент 1: АМР-буфер, pH 10,4 (2-амино-2-метил-1-пропанол, 150 ммоль/л; магния хлорид,
10 ммоль/л; цинка сульфат, 5 ммоль/л); тритон X 100, 0,5% - 1 флакон (200 мл) или 2 флакона
(по 100 или по 200 мл);
реагент 2: п-нитрофенилфосфат, 80 ммоль/л - 1 флакон (50 мл) или 2 флакона (по 50 мл).
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейная область определения активности щелочной фосфатазы - в диапазоне от 45 до 830 Е/л,
отклонение от «линейности» - не более 5 %.
Чувствительность определения - не более 40 Е/л.
Коэффициент вариации результатов определений - не более 5 %.
Качество набора может оцениваться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины активности щелочной фосфатазы в сыворотке (плазме) крови составляют;
при температуре 37“С - у женщин 45-132 Е/л, у мужчин - 45-132 Е/л; при температуре 30°С - у женщин
30-100 Е/л, у мужчин 30-90 Е/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин для обследуемого
контингента.
--- стр. 2 ---
ОБРАЗЦЫ
Негемолизированная сыворотка, гепаринизированная плазма крови.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так
как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные
длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной
инфекции,
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
Спектрофотометр, длина волны 405 нм, термостатируемая кювета с длиной оптического пути
10 мм; полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор открытого типа
термостат, поддерживающий температуру +37±1®С;
секундомер;
пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,01 и 0,5 мл;
колба коническая вместимостью 250-500 мл;
физиологический раствор (0,9% NaCl);
перчатки резиновые или пластиковые.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего реагента
Внести в колбу коническую необходимое количество реагента 1 и реагента 2 в соотношении 4:1 и
тщательно перемешать.
Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8°С не более 20
дней или при температуре -20°С не более 3 мес.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Перед началом определения кювету спектрофотометра и рабочий реагент нагреть до температуры
+37“С в течение 5 мин и при измерении оптической плотности постоянно поддерживать температуру
+37°С.
В термостатируемую (+37°С) кювету спектрофотометра с длиной оптического пути 10 мм внести
0,5 мл рабочего реагента, добавить 0,01 мл анализируемой сыворотки (плазмы) крови, тщательно
перемешать, измерить оптическую плотность при длине волны 405 нм против воздуха и одновременно
включить секундомер. Замер повторить три раза с интервалом в 1 мин (точно!).
РАСЧЕТЫ
Рассчитать изменение оптической плотности пробы за 1 мин (АЕ/мин) по формуле:
Д Е п
Д Е/мин = --------------,
t
где: АЕп - изменение оптической плотности пробы, ед, опт. плотн.;
t - интервал времени между определениями, мин.
--- стр. 3 ---
Активность щелочной фосфатазы в анализируемом образце сыворотки (плазмы) крови определить
по формуле:
А = ЛЕ/мин X F ,
f
где: А - активность щелочной фосфатазы. Е/л;
F - фактор пересчета для выражения активности щелочной фосфатазы в Е/л (указывается в
паспорте на набор).
Примечание. 1 Е/л = 16,67 нмоль/(схл).
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в темном месте при температуре
+2-8°С в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до + 25°С не более
5 сут. Замораживание компонентов набора не допускается.
Срок годности набора - 12 мес.
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов можно хранить в темном месте в плотно закрытом виде
при температуре +2-8°С в течение всего срока годности наборов при условии достаточной герметичности
флаконов.
Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8 °С не более 20 сут или при
температуре -20°С не более 3 мес.
Если значение активности щелочной фосфатазы превышает 830 Е/л, анализируемый образец
сыворотки (плазмы) крови следует развести физиологическим раствором в 5 раз, повторить определение
и полученный результат умножить на 5.
Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется использовать
полуавтоматические пипетки со сменяемыми наконечниками, аттестованные на точность по значению
средней дозы и сходимости результатов пипетирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ОАО “Витал Девелопмент
Корпорэйшн” по адресу:
194 156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, д. 27.
Тел/факс: (812) 326-61-98.
и на кафедру КЛД ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» по адресу:
116 О О О , Москва, 2-й Боткинский пр, д. 5.
Тел.: (495) 945-82-22.
Генеральный директор
ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн» г'/ Е.Н. Схолль-Энгбертс
Завкафедрой клинической лабораторной
диаг™ тики с курсом молекулярной медицины,
директор НЦ «Институт лабораторной медицины»
ГОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова Росздрава,
Главный специалист-эксперт
по клин. лаб. диагностике Росздравнадзора
по С-ЗФО, д. м. н., профессор Эмануэль