Набор реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и туляремии «MULTI-FLU сухой» по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор ФБУН ГНЦ ПМБ
Дятлов
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ
Набор реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы,
сибирской язвы и туляремии
«MULTI-FLU сухой» по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018
--- стр. 2 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;
ОКО - отрицательный контрольный образец;
ПКО - положительный контрольный образец;
ПЦР - полимеразная цепная реакция;
РАМ, HEX, ROX, Су5 -флуоресцентные красители для мечения олигонуклеотидов.
1.НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и
туляремии «MULTI-FLU сухой» по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018 (далее набор реагентов
«MULTI-FLU сухой») предназначен для одновременного качеетвенного определения in
vitro ДНК возбудителей чумы {Yersinia pestis), сибирской язвы {Bacillus anthracis) и
туляремии {Francisella tularensis) в биологическом материале методом полимеразной
цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени»
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» используется в клинической лабораторной
диагностике и при эпидемиологическом мониторинге.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА
Набор реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и
туляремии «MULTI-FLU сухой» по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018 состоит из 48
стрипованных микропробирок с сухой реакционной смесью, упакованных в один пакет, и
трёх пробирок с реагентами.
Форма комплектации набора реагентов «MULTI-FLU сухой» предназначена
для проведения полного ПЦР-исследования 48 образцов биологического материала,
включая контроли.
Дополнительно для проведения ПЦР исследования необходимо использовать набор
реагентов для экстракции ДНК (в комплект поставки не входят).
2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА
Обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот возбудителей инфекций основано
на использовании метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. В
основе этого метода лежит изменение сигнала флуоресценции в ходе реакции. Это
изменение происходит благодаря использованию специфического для искомой ДНК
олигонуклеотидного зонда, меченого флуоресцентной меткой, который, подобно праймеру,
в ходе реакции комплементарно связываетея с одной из цепей ампликона.
В одной пробирке проводятся одновременно 4 полимеразных цепных реакции.
Происходит амплификация нуклеотидных последовательностей фрагментов: гена
2
--- стр. 3 ---
метилтрансферазы хромосомы V. pestis (регистрация по каналу ROX), гена элемента
вставки ISFtuS хромосомы F. tularensis (регистрация по каналу HEX), гена sspE
хромосомы В. anthracis (регистрация по каналу FAM) и нуклеотидной последовательности
внутреннего положительного контроля (регистрация по каналу Су5). Присутствие в
образце ДНК одного из исследуемых микроорганизмов вызывает рост интенсивности
флуоресцентного сигнала по соответствующему каналу амплификатора.
2.2.СОСТАВ
Таблица 1 - Комплект набора реагентов «MULTI-FLU сухой»
№ Состав комплекта Описание Объем Кол-во
11. Реакционная смесь сухая
для проведения ПЦР (PC)
6 стрипов по 8
микропробирок с сухим
веществом белого цвета в
каждой;
48 микропробирок
вместимостью 0,2
мл
1 пакет
2. Реакционный буфер (РБ) прозрачная бесцветная
жидкость
1000 мкл в пробирке
из полипропилена
вместимостью
1,5 мл
1 пробирка
3. Положительный
контрольный образец
сухой (ПКО): ДНК
Y. pestis, F. tularensis и
В. anthracis,
сухое вещество белого цвета В пробирке из
полипропилена
вместимостью
0,5 мл
1 пробирка
4. Раствор для разбавления
ПКО, ОКО
прозрачная бесцветная
жидкость
200 мкл в пробирке
из полипропилена
вместимостью
0,5 мл
1 пробирка
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитические характеристики (подлинность, специфическая активность и
чувствительность)
Контроль подлинности, специфической активности и чувствительности проводят
методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом
результатов в режиме реального времени.
3.1.1. Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Набор реагентов выявляет ДНК каждого возбудителя - Y. pestis, В. anthracis и F. tularensis
в концентрации, соответствующей 1 х кл/мл каждого возбудителя.
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении правил по взятию,
транспортированию и хранению исследуемого материала, подготовке исследуемого
материала к экстракции ДНК , указанных в разделах 6 и 7 настоящей Инструкции.
3.1.2. Специфическая активность.
3
--- стр. 4 ---
Набор реагентов дает положительную реакцию во всех пробах,
контаминированных одним из трёх видов возбудителя {Y. pestis, F. tularensis, В. anthracis) с
соответствующими одному микроорганизму праймерами и зондом, и отрицательную с
двумя остальными, гетерологичными данному возбудителю, парами праймеров и зондов,
входящими в набор
Специфическая активность набора реагентов доказана при исследовании следующих
щтаммов микроорганизмов: F. tularensis subsp. novicida В. suis, Y. pseudotuberculosis
Escherichia coli, B. subtilis, B. cereus. При тестировании образцов ДНК выщеперечисленных
микроорганизмов, а также ДНК человека, ДНК клещей неспецифические реакции в редких
случаях наблюдаются только с близкородственными сибиреязвенному микробу
сапрофитными штаммами В. cereus.
Ген элемента вставки ISFtuS присутствует в геномах только эпидемически значимых
подвидов туляремийного микроба - F. tularensis (subsp. tularensis, holarctica, mediasiatica)
и отсутствует у подвида F. tularensis subsp. novicida, поэтому для щтамма F. tularensis subsp.
novicida F 6168 (И-383) результат ПЦР также отрицательный.
3.2. Диагностические характеристики
При проведении клинических испытаний набора реагентов «MULTI-FLU сухой» в
качестве образцов были исследованы растворы ДНК, выделенные из культур штаммов
возбудителей чумы, сибирской язвы и туляремии, различных подвидов биоваров,
содержащих разное количество плазмид, находящихся в коллекции патогенных
микроорганизмов (ГКПМ-Оболенск). Также были исследованы имитанты проб крови,
мокроты, пунктата бубона и промывных вод бронхов (имитатор - 0,9 % раствор хлорида
натрия), искусственно контаминированных штаммами микроорганизмов различной
концентрации.
В каждом из образцов, контаминированных одним из трёх видов возбудителя набор
показал положительную реакцию во всех пробах с соответствующими одному
микроорганизму праймерами и зондом и отрицательную с двумя остальными,
гетерологичными данному возбудителю, парами праймеров и зондов, входящими в набор.
Используя графики оценки статистической достоверности результатов испытаний в
зависимости от числа независимых опытов (75) при доверительной вероятности 90 %,
определен показатель эффективности - диагностическая чувствительность (доля
правильных положительных результатов) набора на уровне 94 %, диагностическая
специфичность (доля правильных отрицательных результатов) - не менее 90 %.
Результаты исследования во всех случаях подтверждены использованием препарата
сравнения - Набора реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и
--- стр. 5 ---
5 ^
туляремии методом ПЦР в режиме реального времени «MULTI-FLU» - ТУ 9398-157-
78095326-2012, Per. № РЗН 2013/1359, дата регистрации 23.01.2014.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора реагентов - класс 3
Все работы с материалом, подозрительным на заражение возбудителями чумы,
сибирской язвы и туляремии, включая забор, транспортировку и подготовку материала для
исследований, проводятся в соответствии с действующими нормативными актами,
регламентирующими деятельность с возбудителями I-II групп патогенности (Методические
указания «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп
патогенности». МУ 1.3.2569-09).
При работе с набором необходимо всегда выполнять следующие требования:
Температура в помещении лаборатории должна быть от 20 до 28°С, относительная
влажность - от 15 до 75 %.
Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
работу и хранение в соответствии с (СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с
микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие
средства в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Работы, связанные с
высоким риском образования аэрозоля (центрифугирование, гомогенизация, измельчение,
интенсивное встряхивание, вскрытие объектов с зараженным материалом и другие),
проводят в отдельных боксовых помещениях или боксах биологической безопасности III
класса. После первичной обработки и обеззараживания материал в маркированных
одноразовых микроцентрифужных пробирках объемом 1,5-2 мл с закрытой крышкой
передается в зону экстракции ДНК, а затем в зону амплификации и детекции.
Не возвращ ат ь образцы, оборудование и реагент ы в зону, в которой была
проведена предыдущ ая стадия процесса!
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» готов к применению.
Применять набор строго по назначению.
К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке (СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II
групп патогенности (опасности)».
5
--- стр. 7 ---
комплект средств для обработки рабочего места.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Показания и противопоказания к применению набора реагентов «MULTI-FLU
сухой».
О бразцам и для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированной из
исследуемого биологического материала.
М ат ериалом для исследования служат:
- суспензии чистых культур исследуемых микробов или подозрительных изолятов;
бактериологический материал (кровь, мокрота, пунктат бубона и другие виды образцов
биологического материала от больных с диагнозом, не исключающим по клиническим
проявлениям чуму, сибирскую язву или туляремию: различные пневмонии, лимфадениты с
повышенной температурой, сепсис различной этиологии). Противопоказания для забора
мат ериала отсутствуют, за исключением случаев, коеда забор материала не мож ет
быть осущ ествлён по медицинским показаниям.
Материал для исследования забирают в стерильные емкости с герметично
завинчивающимися крышками в соответствии с требованиями (СП 1.3.3118-13
«Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», МУ
4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические
лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности», СП 1.2.036 — 95 «Порядок учета, хранения,
передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности».
Транспортирование материала в лабораторию для иеследований проводят при температуре
от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036 - 95 «Порядок учета,
хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов TIV групп патогенности».
После проведения предварительной обработки проб допускается их транспортировка при
температуре до минус 20 °С в течение 7 суток или в сосуде Дьюара с жидким азотом —
длительно.
6.1. Чистые культуры микроорганизмов
Из культур чумного, сибиреязвенного, туляремийного микроба или подозрительных
изолятов готовят еуспензии в 2 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР) (0,15
М натрия хлорида, 0,01 М однозамещённого калия фосфата, 0,015 М двузамещённого
натрия фосфата, pH 7.6) до оптической плотности, соответствующей 10 ЕД стандарта
мутности (ОСО 42-28-85-2012 ФЕБУ НЦЭСМП), что соответствует lxl0^ м.к./мл для Y.
pestis, 5x10* м.к./мл В. anthracis и 5xl0^ м.к./мл - для Е'. Затем проводят 10-
7
--- стр. 8 ---
кратные разведения подготовленных суспензий в 0,9 % растворе натрия хлористого до
конечной концентрации 1x10^ - 1x10^ м.к./мл. ДНК выделяют из 100 мкл суспензии.
6.2. Кровь
Кровь у людей берут из локтевой вены в количестве 4,5 мл с помощью одноразовой
иглы (диаметр 0,8-1,1 мм) и специальной вакуумной системы типа «Vacuett» с ЭДТА или
цитратом натрия, или стерильным шприцем в стерильные стеклянные или пластиковые
пробирки с цитратом натрия (3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9).
Непригодными для исследования являются образцы крови, взятые в пробирки с гепарином
в качестве антикоагулянта.
Аккуратно перемешивают покачиванием до полного смешивания с
антикоагулянтом. Вносят 1,5 мл в микропробирку и центрифугируют при 800 об/мин (380
g при диаметре ротора 50 мм) в течение 10 мин; затем верхний слой плазмы (500-600 мкл)
с лейкоцитами переносят в другую микропробирку и центрифугируют при 8000 об/мин в
течение 5 минут. Надосадочную жидкость (за исключением 200 мкл жидкости над осадком
клеток) удаляют, а осадок клеток и 200 мкл надосадочной жидкости используют для
обеззараживания материала и выделения ДНК.
6.3. Мокрота
Мокроту забирают в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые градуированные
стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее
50 мл. Для разжижения мокроты применяют либо приготовленную ех tem pore смесь NALC
(N-aneTHH-L-pHCTCHHa 0,25 г, 25 мл 4 % раствора NaOH, 25 мл 0,1 моль тризамещенного
натрия цитрата), либо раствор «Муколизин» (Na 2HP 0 4 0,0774 моль, НаНгР 0 4 0,0226 моль,
(3-меркаптоэтанол 0,094 моль, 5 % азид натрия в конечной концентрации 0,05 %). Пробу
объемом 1-2 мл смешивают либо с равным объемом смеси NALC, либо с пятикратным
объемом раствора «Муколизин». Пробы со смесью NALC перемешивают покачиванием в
течение 20-30 с и инкубируют в течение 15 мин, периодически встряхивая. Затем разводят
фосфатным буфером 0,067 моль (pH 6,8) до конечного объема 50 мл. Пробу
центрифугируют в течение 10 мин при 9000 об/мин. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 0,9
% раствора натрия хлористого. Пробы с раствором «Муколизин» перемешивают
покачиванием в течение 20-30 с и инкубируют в течение 20-30 мин, периодически
встряхивая. Затем отбирают 1 мл разжиженной мокроты, помещают в микроцентрифужную
пробирку объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой и центрифугируют при 9000 об/мин
в течение 10 мин. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 0,9 % раствора натрия хлористого.
Затем выполняют этапы обеззараживания материала и выделения ДНК.
--- стр. 9 ---
6.4. Промывные воды бронхов
Для получения промывных вод бронхов при бронхоскопии вводят до 7 мл
стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. После чего 2-3 мл лаважной жидкости
отбирают в стерильную пробирку. Из пробы отбирают 1 мл и помещают в
микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой,
центрифугируют при 12000 об/мин в течение 10 мин. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 0,9
/о раствора натрия хлористого. Затем выполняют этапы обеззараживания материала и
выделения ДНК.
6.5. Мазок из носоглотки
Взятие мазка из носоглотки проводят натощак или не ранее, чем через 2-4 часа после
еды. Корень языка придавливают шпателем, материал берут стерильным зондом, не касаясь
языка, слизистой полости рта, зубов, и помещают в пробирку с транспортной средой или
0,9 ^ раствором натрия хлористого объемом 100 мкл. Затем выполняют этапы
обеззараживания материала и выделения ДНК.
6.6. Пунктаты бубона, детрит язв
Забор материала язвы или бубона производят стерильным шприцем. Если бубон
имеет сохранившуюся кожу (невскрывшийся бубон), то ее протирают предварительно
спиртом. Пункцию бубона производят как в его центре, так и на периферии. Из
вскрывшегося бубона материал забирают в местах с сохраненной тканью, а также берут
отделяемое бубона. Исследуемый материал в количестве не менее 100 мкл помещают в
микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл с транспортной средой или 0,9 % раствором
натрия хлористого объемом 100 мкл. Затем выполняют этапы обеззараживания материала
и выделения ДНК.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
К работе с набором реагентов «MULTI-FLU сухой» допускаются медицинские
специалисты, обученные методам молекулярной диагностики и правилам работы в
клинико-диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.3118-13
«Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)»).
7.1. ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК
Подготовленные для исследования пробы обеззараживают в соответствии с МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп
патогенности».
К исследуемым образцам добавляют раствор 0,1% мертиолята натрия до
концентрации 0,01 % с последующим прогреванием их при (56±1) °С в течение 30 минут.
9
--- стр. 11 ---
7.3. ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Для контроля и возможного ингибирования ПЦР в наборе реагентов «MULTI-FLU
сухой» предусмотрено использование внутреннего контрольного образца, который
находится в реакционной смеси. По окончании реакции амплификации наличие сигнала,
свидетельствующего о накоплении фрагментов нуклеотидной последовательности
внутреннего контрольного образца, говорит о достаточной эффективности экстракции
нуклеиновых кислот и отсутствии ингибиторов ПЦР.
Непригодными для исследования являются образцы крови, взятые в пробирки с
гепарином в качестве антикоагулянта. Добавление антикоагулянтов может вызывать
интерференцию с некоторыми аналитическими методами лабораторного анализа
(ингибирование метаболических или каталитических реакций гепарином, например, Taq -
полимеразы в полимеразной цепной реакции), поэтому использовать гепарин в качестве
антикоагулянта при ПЦР-исследованиях не допускается!
7.4. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- подготовка пробирок для амплификации;
- проведение ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»;
- анализ и интерпретация результатов.
В каждую постановку обязательно включают положительный (ПКО),
отрицательный (ОКО) контрольные образцы.
7.4.1. Подготовка пробирок для амплификации
В пробирку с сухим содержимым ПКО добавляют 100 мкл раствора для
растворения ПКО, перемешивают на вортексе до полного растворения, центрифугируют 5
секунд при 3000 об/мин для сброса капель. После вскрытия, разведения и отбора
необходимого количества ПКО, оставшийся раствор ПКО тщательно закрывают,
замораживают и хранят при температуре минус 20 °С. При необходимости раствор ПКО
многократно размораживают в течение срока годности
Отбирают необходимое количество стрипованных пробирок с сухой реакционной
смесью. Оставшееся количество стрипованных пробирок в пакете тщательно закрывают.
Стрипованные микропробирки помещают в штатив и маркируют в соответствии с
протоколом исследования на боковой стенке пробирок.
В каждую стрипованную микропробирку вносят по 20 мкл разбавителя (РБ).
Оставшуюся часть разбавителя в пробирке закрывают крышкой и хранят при температуре
от 2 °С до 8 °С до конца срока годности.
11
--- стр. 12 ---
Используя наконечники с аэрозольным барьером, последовательно вносят в
отобранные и подписанные стрипованные микропробирки, соответственно порядку
исследования образцов, по 5 мкл ОКО, ПКО и исследуемых образцов, закрывают крышки
микропробирок.
Рабочее количество стрипованных микропробирок перемешивают на встряхивателе
и центрифугируют 3-5 секунд для сброса капель.
Подготовленные стрипованные микропробирки помещают в амплификатор
(например Real-Time CFX96 Touch (Bio-Rad Laboratories Inc., США, РУ ФЗС 2008/03399
от 21.06.2016 г)
7.4.2. Проведение ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»
Для работы с прибором «СРХ96» BIO-RAD используют программу Bio-Rad CFX
Manager.
• В открывшемся окне программы выбирают меню «File»/«OaMn». Нажимают кнопку
«Ме\¥»/«Новый».
• Далее нажимают кнопку «Ехрептеп1»/«Эксперимент». Открывается окно, « E x p e rim e n t
setup/« Установка эксперимента». На данном графическом интерфейсе, вьщелено три кнопки
« P ro to co l» / « n p o T O K o n » , «Plate»/«Bклaдкa» «Start Вип»/«Старт». Далее открывают вкладку
« P r o to c o l»/ «Протокол ».
• Задают параметры эксперимента.
• Указывают объем реакционной смеси.
• Hold/Удерж, температуры 95 °С - 5 мин
• Cycling/Циклирование 62 °С - 40 с
95 °С-15с
Cycle repeats/Цикл повторить - 45 раз.
• Флюоресценцию измеряют по каналам ROX, HEX, FAM, Су5.
• Нажимают кнопку «ОК»/«Да».
• Нажимают кнопку «Next»/«Дaлee».
• Далее открывают вкладку«Р1а1е»/«Вкладка»
Задают параметры расположения пробирок в меню «Plate», выбирают канал
детекции ROX, HEX, FAM, Су5, тип пробирок. Все пробы и контроли обозначают в меню
Plate как Unknown/Неизвестный.
• Нажимают кнопку «Next»/«Дaлee».
• Запускают амплификацию кнопкой «Start гип»/«Старт».
Регистрация результатов
• Дают название эксперимента и сохраняют его на диске (в этом файле будут
12
--- стр. 13 ---
f
автоматически сохранены результаты данного эксперимента).
• Регистрация результатов амплификации по каналам РАМ, HEX, ROX, Су5.
• Нажимают в меню кнопку «Р11е»/«Файл», далее кнопку «Ореп»/Открыть, далее
кнопку «Data file» выбирают протокол анализа.
• В таблице результатов регистрируют значения Ct.
8. УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 года № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является одним из
мет одов всестороннего обследования пациента, на основании которых лечащий врач
устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению пациента.
Результаты анализа не подлеж ат учету в случае;
-регистрации прибором ОКО по каналам FAM, HEX и ROX;
— отсутствия регистрации прибором ОКО по каналу Су5;
Результаты анализа подлеж ат учету в случае:
-отсутствия регистрации прибором ОКО по каналам FAM, HEX и ROX;
-регистрации прибором ОКО по каналу Су5;
-регистрации прибором ПКО по каналам FAM, HEX и ROX .
Нуклеотидная последовательность внутреннего положительного контроля
присутствует во всех образцах и должна регистрироваться всех пробах по каналу Су5.
Регистрация ОКО по каналу Су5 свидетельствует об отсутствии ингибиторов ПЦР.
Образец считается положительным на присутствие специфических фрагментов геномной
ДНК В. anthracis , если зарегистрирован рост флуоресценции по каналу FAM (зонда,
специфичного для фрагмента ДНК гена sspE хромосомы В. anthracis), а значение
порогового цикла меньше 45, и отрицательным, если автоматически значение порогового
цикла не определено.
Образец считается положительным на присутствие специфических фрагментов
геномной ДНК F. tularensis, если зарегистрирован рост флуоресценции по каналу HEX
(зонда, специфичного для фрагмента ДНК гена элемента вставки ISFtu5 F. tularensis), а
значение порогового цикла меньше 45, и отрицательным, если автоматически значение
порогового цикла не определено.
Образец считается положительным на присутствие специфических фрагментов
геномной ДНК К pestis, если зарегистрирован рост флуоресценции по каналу ROX (зонда,
специфичного для фрагмента ДНК гена метилтрансферазы Y. pestis), а значение порогового
цикла меньше 45, и отрицательным, если автоматически значение порогового цикла не
определено.
13
--- стр. 15 ---
9.УТИЛИЗАЦИЯ
Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковки, биологический материал, включая материалы,
инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, следует
утилизировать в соответствии с требованиями СанПиН 2.1 .7.2790-10 «Санитарно-
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Уничтожение наборов реагентов после проведения исследования осуществляется
по СанПиН 2.1.7.2790-10 как отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным
предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 ч при
температуре (126±1) °С.
Уничтожение наборов реагентов, пришедших в негодность (нарушение целостности
упаковки), а также в связи с истекшим сроком годности, утилизируются в соответствии с
СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «А» -
эпидемиологически безопасные отходы, любым способом, предотвращающим повторное
использование, например, сжиганием.
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов. Использовать и менять при каждой операции одноразовые
наконечники для автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий
дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания
медицинских отходов. Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится
постановка ПЦР, до начала и после завершения работ необходимо подвергать
ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин.
10. СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» в упаковке изготовителя должен храниться на
складах в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 °С до 8 °С.
После первого вскрытия пробирки с сухим ПКО, его разведения и отбора
необходимого количества, оставшийся раствор ПКО тщательно закрывают, замораживают
и хранят при температуре от минус 18 до минус 20 ° С. При необходимости раствор ПКО
многократно размораживают в течение срока годности.
После первого вскрытия пакета со стрипованными микропробирками с сухой
реакционной смесью отбирают необходимое количество микропробирок для проведения
анализа. Оставшееся количество стрипованных пробирок с сухой реакционной смесью в
пакете тщательно закрывают и хранят при температуре от 2 °С до 8 °С.
15
--- стр. 16 ---
Оставшуюся часть разбавителя и ОКО в пробирках тщательно закрывают
крышками и хранят при температуре от 2 °С до 8 °С до конца срока годности.
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой», хранившийся с нарушением регламентированного
режима, применению не подлежит!
СРОК годности 18 месяцев.
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» с истекшим сроком годности и в
поврежденной упаковке применению не подлежит.
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» транспортируют при температуре от 2 до 8
°С в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных
средств. Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 °С не более 3 суток.
Набор реагентов «MULTI-FLU сухой» транспортируемый с нарушением температурного
режима, применению не подлежит!
Изготовитель гарантирует соответствие медицинского изделия Набор реагентов
для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и туляремии «MULTI-FLU
сухой» по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018 соответствует заявленным требованиям и
функциональным характеристикам с начала использования в течение всего срока годности
при соблюдении условий хранения, транспортирования и применения.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей
Инструкции по применению.
По всем вопросам, касающимся качества медицинского изделия Набор реагентов
для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и туляремии «MULTI-FLU сухой»
по ТУ 21.20.23-296-78095326-2018 обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279,
Московская область, Серпуховский район, пос. Оболенск, ФБУН «Государственный
научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-03; факс
(4967) 36-00-10; тел/факс (4967) 36-01-16.
Зам. директора ФБУН ГНЦ ПМБ М.В. Храмов
«СОГЛАСОВАНО
Г енеральный
ООО «ВЫ
019 г.
16
--- стр. 17 ---