--- стр. 1 ---
УТВЕРЖ Д ЕН А
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г. №
КОЙИа ВЕРЯ А
РТС
V
1 1 !: ^Ж.Н.Схолль-Энгбертс
!^ т Корпорэйшн»
7 2011 г.
И Н С Т РУ К Ц И Я
\i / /
■... по применению набора реагентов для определения
активности а-амилазы в сыворотке (плазме) крови и моче
энзиматическим кинетическим методом.
(ал ьфа-Ам и лаза-В итал)
Н А ЗН А Ч ЕН И Е
Набор альфа-Амилаза-Витал предназначен для количественного определения активности а-
амилазы в сыворотке (плазме) крови и моче энзиматическим кинетическим методом в клинико-
диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в двух видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведение 120
или 240 определений при расходе 0,5 мл рабочего реагента на один анализ.
П РИ Н Ц И П М ЕТО Д А
Под действием а- амилазы синтетический субстрат EPS [ 4 ,6 -этилиден(0 7)-п-
нитрофенил(С1)-а,0 -мальтогептаозид] гидролизуется с образованием неокрашенных
нитрофенилмальтозидов. Под действием а-глюкозидазы нитрофенилмальтозиды гидролизуются до
глюкозы и окрашенного п-нитро фенола, скорость нарастания концентрации которого
пропорциональна активности а-амилазы и измеряется фотометрически при длине волны 405 нм,
СО С ТА В Н А БО РА
В состав набора входят:
■ реагент 1 : буферный раствор, pH 7,1, содержащий H EPES, 100 ммоль/л; натрий
хлористый, 50 ммоль/л; магний хлористый, 10 ммоль/л; а-глюкозидазу, 2500 Е/л -
1 флакон (48 мл), 2 флакона (по 48 мл), или 1 флакон (96 мл)
■ реагент 2: субстрат, содержащий EPS, 5 ммоль/л - 1 флакон (12 мл), 2 флакона (по 12 мл),
или 1 флакон (24 мл).
А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е Х А Р А К Т ЕР И С Т И К И
Набор обеспечивает линейную область определения активности а-амилазы в диапазоне от
50 до 1320 Е/л, отклонение от «линейности» не превышает 5 % . Чувствительность - не более 40 Е/л,
коэффициент вариации результатов определений - не более 5 % .
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины активности а-амилазы в сыворотке (плазме) крови - до 110 Е/л, в
моче - до 900 Е/сут.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для
обследуемого контингента людей.
О БРА ЗЦ Ы
Негемолизированная сыворотка (плазма) крови и моча. Сыворотку (плазму) крови следует
отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 час после забора крови.
--- стр. 2 ---
€
С
М Е Р Ы П РЕД О С ТО РО Ж Н О С ТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Следует избегать контакта реагентов с кожей и слюной, которые содержат а-амилазу, что
может исказить результаты определений. В связи с этим необходимо для отбора реагентов и
анализируемых проб использовать полуавтоматические пипетки.
При работе с сывороткой или плазмой крови следует надевать одноразовые резиновые или
пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или
любой другой возбудитель вирусной инфекции.
О БО РУД О ВА Н И Е И Р Е А Г Е Н Т Ы :
■ Спектрофотометр, длина волны 405 нм, термостатируемая кювета с длиной оптического
пути 10 мм, программируемый фотометр или биохимический анализатор открытого типа;
■ термостат, обеспечивающий температуру +37±0,5°С;
■ секундомер;
■ пипетки полуавтоматические одноканальные со сменяемыми наконечниками,
позволяющие отбирать объемы жидкости 10, 20 и 500 мкл;
■ колба коническая вместимостью 100 мл;
■ 0,9 % раствор NaCl (физиологический раствор);
■ вода дистиллированная.
П О Д ГО Т О ВКА К А Н А Л И ЗУ
П Р И ГО Т О В Л ЕН И Е Р А Б О Ч Е ГО Р Е А Г Е Н Т А
Смешать в колбе конической вместимостью 100 мл необходимое количество реагента 1 и
реагента 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно
после каждого использования.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8°С не более 10 дней или при
комнатной температуре (+18-25°С) не более 6 часов.
П РО В ЕД ЕН И Е АН АЛИ ЗА
Перед проведением анализа рабочий реагент следует нагреть до температуры +37±0,5°С в
течение 5 минут. При проведении анализа постоянно поддерживать температуру рабочего раствора
и в кювете спектрофотометра +37°С.
Компоненты реакционной смеси отобрать в количествах, указанных в таблице.
Таблица
Отмерить, мкл Опытная проба
Сыворотка (плазма) крови 20
Моча 10
Рабочий реагент 500
Примечание. При использовании полуавтоматических или автоматических биохимических
анализаторов открытого типа количество реагентов и анализируемых образцов в зависимости от
объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение сыворотки или
плазмы крови к рабочему реагенту составляет 1:25, мочи - 1:50).
Пробы тш;ательно перемешать и инкубировать в кювете спектрофотометра с длиной
оптического пути 10 мм при температуре +37°С в течение 2 минут. Измерить оптическую
плотность опытной пробы при температуре +37°С против рабочего реагента или дистиллированной
воды при длине волны 405 нм. Измерение оптической плотности повторить три раза с интервалом в
одну минуту (точно!).
РА С Ч ЕТ Ы
Изменение оптической плотности анализируемой пробы за I минуту (АЕ/мин) определить
по формуле:
Л£/ 3 ,
/ мин ( ’
где: АЕк - изменение оптической плотности пробы, ед.опт.плотн.;
t- интервал времени между определениями, мин.
--- стр. 3 ---
А = X F ,/мин ’’
где; А - активность а-амилазы, Е/л;
ДЕ/мин - изменение оптической плотности пробы за одну минуту, ед.опт. плотн.;
F] - фактор пересчета для выражения активности а-амилазы в Е/л (указывается в
паспорте на набор).
Примечание. 1Е/л=16,67 нмоль/(схл).
А к т и в н о с т ь а - а м и л а з ы в с ы в о р о т к е и п л а зм е к р о в и о п р е д е л я е тс я п о ф о р м у л е :
Активность а-амилазы в моче определить по формуле:
где: А - активность а-амилазы, Е/сут;
ЛЕ/мин - изменение оптической плотности пробы за одну минуту, ед.опт. плотн.;
р2 - фактор пересчета для выражения активности а-амилазы в Е/сут (указьгвается в
паспорте на набор);
К - количество суточной мочи, мл.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Хранение наборов должно производиться в темном месте при температуре +2-8®С в
упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов
при температуре до +25°С не более 2 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
Срок годности набора - 1 8 месяцев.
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +2-8''С не более
90 дней при условии достаточной герметизации флаконов.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8®С не более 1 0 суток или при
комнатной температуре (+18-25®С) не более 6 часов.
В том случае, когда величина АЕ/мин превышает 0,20, анализируемый образец следует
развести физиологическим раствором в 10 раз и полученный результат умножить на 10.
Набор позволяет провести определение активности а-амилазы в сыворотке (плазме) крови и
моче также при температуре инкубации +25°С или +30®С; ход проведения анализа при этом такой
же, как и при температуре +37°С, равно как и необходимость постоянного термостатирования при
выбранной температуре при измерении оптической плотности проб.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ОАО «Витал Девелопмент
Корпорэйшн» по адресу:
194 156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, д. 27.
Телефон / факс: (812) 326-61-98.
и на кафедру КЛД ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» по адресу;
116 О О О , Москва, 2-й Боткинский пр, д. 5.
Тел.: (495) 945-82-22.
Генеральный директор
ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн» Е.Н. Схолль-Энгбертс
Зав. кафедрой клинической лабораторной
диагностики с курсом молекулярной медицины,
директор НЦ «Институт лабораторной медицины»
ГОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова Росздрава, .
Главный специалист-эксперт
по клин. лаб. диагностике Росздравнадзора
по С-ЗФО, д. м. н., профессор / \ / , I ]