--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г. №
УТВЕРЖДАЮ
Ген
ОА
£ . й 9Н'Г u Е р г с
- n 'V a ИНСТРУКЦИЯ
нт Корпорэйшн»
олль-Энгбертс
2011 г.
,-^по^рименению набора реагентов для определения концентрации
мочевой кислоты в сыворотке (плазме) крови и моче
энзиматическим колориметрическим методом
(Мочевая кислота-Витал)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Мочевая кислота-Витал предназначен для количественного определения концентрации
мочевой кислоты в сыворотке (плазме) крови и моче человека в клинико-диагностических и
биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 50 определений при расходе 2,0 мл рабочего реагента на один
анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Мочевая кислота, содержащаяся в анализируемой пробе, окисляется под действием фермента
уриказы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. В присутствии пероксидазы
перекись водорода окисляет хромогены с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски
которого пропорциональна концентрации мочевой кислоты в пробе и регистрируется фотометрически
при длине волны 520 нм (490-540) нм.
Ф СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят:
- реагент 1: буфер, pH 7,7, состоящий из фосфата калия, 150 ммоль/л; 3,5-дихлоро-2-
фенолсульфоната, 2,5 ммоль/л; тритона Х-100, 1,2 г/л; ЭДТА, 1,0 г/л - 2 флакона (по 50 мл);
- реагент 2; лиофилизированная смесь (конечная концентрация в рабочем реагенте: уриказа, 300
Е/л; аскорбатоксидаза, 250 Е/л; пероксидаза, 250 Е/л; 4-аминоантипирин, 0,25 ммоль/л; бычий
сывороточный альбумин, 0,08%) - 2 флакона;
- калибратор; калибровочный раствор мочевой кислоты, 357 мкмоль/л, содержащий карбонат
натрия, 1,13 ммоль/л; бычий сывороточный альбумин, 5%; готов к применению - I флакон (1,5 мл).
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейная область определения концентрации мочевой кислоты - в диапазоне от 80 до 1200
мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5 %.
Чувствительность определения концентрации мочевой кислоты не превышает 40 мкмоль/л.
Коэффициент вариации результатов измерений - не более 5 %.
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам с известной концентрацией мочевой кислоты, аттестованным энзиматическим методом.
Калибратор в наборе восходит к стандартным материалам NIST.
--- стр. 2 ---
Нормальные величины: сыворотка (плазма) крови - у женщин: 142-339 мкмоль/л; у мужчин:
202 - 416 мкмоль/л; моча: 1,49 - 4,46 ммоль/сут.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для
обследуемого контингента.
ОБРАЗЦЫ
Негемолизированная сыворотка (плазма) крови, моча.
Перед проведением анализа свежую мочу следует развести физиологическим раствором в 10 раз.
Аскорбиновая кислота до концентрации 570 мкмоль/л и билирубин до концентрации 260
мкмоль/л не влияют на правильность определения мочевой кислоты.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
При работе с кровью необходимо надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки,
так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные
длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной
инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ;
Спектрофотометр, длина волны 520 нм, полуавтоматический или автоматический биохими
ческий анализатор открытого типа или фотоэлектроколориметр, длина волны 490-540 нм,
кювета с длиной оптического пути 10 мм;
секундомер;
пипетки полуавтоматические одноканальные со сменяемыми наконечниками, позволяющие
отбирать объемы жидкости 0,05 мл и 2,0 мл;
пробирки вместимостью 10-15 мл;
физиологический раствор (0,09 % раствор NaCl);
перчатки резиновые или пластиковые;
вода дистиллированная.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА
Содержимое одного флакона с реагентом 2 растворить в одном флаконе с реагентом 1 и после
полного растворения лиофилизата выдержать при комнатной температуре (+18 - 25 °С) в течение 5-10
мин.
Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8°С не более 30
дней. Допускается розовая окраска рабочего реагента.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Внести в пробирки реагенты и анализируемые пробы в количествах, указанных в таблице.
Таблица
Отмерить, мл Опытная проба Калибровочная проба Контрольная (холостая)
проба.
Рабочий реагент 2,0 2,0 ’ 2,0
Калибратор • - 0,05 -
Сыворотка (плазма) крови
или разведенная моча
0,05 - -
Вода дистиллированная - - 0,05
Содержимое пробирок перемешать и инкубировать в течение 10 мин при комнатной температуре,
после чего измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной
(холостой) пробы при длине волны 520 (490-540) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
Оптическая плотность стабильна 15 мин после окончания инкубации.
Оптическая плотность контрольной (холостой) пробы не должна превышать 0,2 ед. опт.
плотности (кювета 10 мм, против воды).
--- стр. 3 ---
где: С
Е
Е кал
357
РАСЧЕТЫ
Концентрацию мочевой кислоты в сыворотке (плазме) крови определить по формуле:
Е оп
с= ------ X 357.
Е^ кал
концентрация мочевой кислоты в анализируемой пробе, мкмоль/л;
оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. плотн;
оптическая плотность калибратора, ед, опт, плотн;
концентрация мочевой кислоты в калибраторе, мкмоль/л.
Содержание мочевой кислоты в моче определить по формуле:
Е о п
С= ---------х 357 х10хК,
F^ кал
где: С - содержание мочевой кислоты, мкмоль/сут;
Е о п _ оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт, плотн;
Е к а л - оптическая плотность калибратора, ед. опт. плотн;
357 - концентрация мочевой кислоты в калибраторе, мкмоль/л;
К - количество суточной мочи, мл;
10 - коэффициент разбавления мочи.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в темном месте при температуре +2-8°С в упаковке предприятия-
изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до + 25®С
не более 5 дней.
Срок годности набора - 12 мес.
Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8 °С не более 30 дней.
Калибратор после вскрытия флакона можно хранить в темном месте при температуре +2-8 °С не
более 30 дней при условии достаточной герметичности флакона.
Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется
использовать полуавтоматические одноканальные пипетки, аттестованные на точность по значению
средней дозы и сходимости результатов пипетирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ОАО “Витал Девелопмент
Корпорэйшн” по адресу:
194 156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, д. 27.
Тел/факс: (812) 326-61-98.
и на кафедру КЛД ГОУ ДПС «РМАПО Росздрава» по адресу:
116 О О О , Москва, 2“й Боткинский пр, д. 5,
Тел.: (495) 945-82-22.
Генеральный директор
ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн»
-г
Е.Н. Схолль-Энгбертс
Зав. кафедрой клинической лабораторной
диагностики с курсом молекулярной медицины,
директор НЦ «Институт лабораторной медицины» 7^
ГОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова Росздрав^,/
Главный специалист-эксперт
по клин. лаб. диагностике Росздравнадзора
по С-ЗФО, д. м. н., профессор .Эмануэль
^Urfc/.