Набор реагентов Тест-система иммуноферментная для выявления антигена ортопоксвирусов по ТУ 9388-148-14237183-10 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора
от 201 г. №
. . .
а : ^ '
щектора
кроген»
тия России
П,В, Смачков
2 0 1 / г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
Тест-система иммуноферментная для выявления антигена ортопоксвирусов
Комплект № 1
Набор реагентов Тест-система иммуноферментная для выявления антигена ортопок
свирусов включает следующие реагенты для проведения иммуноферментного анализа:
1. и г е - иммуноглобулин G против вируса осповакцины, выделенный из гипе-
риммунной сыворотки крови кроликов, иммунизированных вирусом осповакцины.
Аморфный порошок или пористая масса белого цвета или со светло-желтым оттенком.
2. и г - иммуноглобулин - иммуноглобулиновая фракция, полученная из гиперим-
мунной сыворотки крови кроликов, иммунизированных вирусом осповакцины. Аморф
ный порошок или пористая масса белого цвета или со светло-желтым оттенком.
3. - антиген вируса осповакцины - вакцина оспенная живая. Пористая масса
бело-серого или светло-желтого цвета.
4. К (конъюгат) - ИГО против вируса осповакцины, выделенный из иммуноглобу
линовой фракции гипериммунной сыворотки крови кроликов, иммунизированных виру
сом осповакцины, конъюгированный с пероксидазой хрена. Аморфный порошок или по
ристая масса белого цвета или со светло-желтым оттенком.
5. ТМБ - концентрат тетраметилбензидина - хромоген. Прозрачная бесцветная
жидкость.
6. БСА (бычий сывороточный альбумин) - стабилизатор. Аморфный порошок бе
лого или светло-серого, или светло-желтого цвета, гигроскопичен.
7. КББк - концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора - для
приготовления рабочего раствора КББ для разведения ИГО. Прозрачная бесцветная жид
кость,
8. ФСБ-Ту2 5 “ концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с Твином-20 -
для приготовления рабочих растворов. Прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная
жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов солей, растворимых в течение
20-30 мин при температуре раствора (37±1) °С.
9. ЦБР - цитратный буферный раствор с добавлением водорода перекиси - для
приготовления раствора хромогена. Прозрачная бесцветная жидкость.
--- стр. 2 ---
10. Стоп-реагент - 2,2 М раствор серной кислоты. Прозрачная бесцветная жид
кость.
11. Планшеты монолитные нолнстироловые 96-луночные - для ИФА с высокой
сорбционной способностью.
Принцип метода: набор должен давать в ИФА положительную реакцию с при
использовании реагентов набора в их рабочих разведениях.
Набор рассчитан на исследование 88 проб с учетом проведения положительного кон
трольного опыта (подтверждение титра антигена вируса вакцины) и контроля коньюгата.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная для выявления антигена орто-
поксвирусов» предназначен для выявления антигена ортопоксвирусов (вирусов натураль
ной оспы, оспы обезьян, оспы коров, вакцины) в материалах кожных поражений (везику
лярной и пустулезной жидкостей, суспензии корок и др.) от людей и животных, в культу
ральной жидкости инфицированных клеточных культур методом иммуноферментного ана
лиза (ИФА).
Область применения - лабораторная диагностика, эпидемиологические исследования.
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
1. Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора),
необходимые для проведения анализа:
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные):
8- или 12-канальные с объемом дозирования от 5 до 50 мкл и 1- канальные с объемом до
зирования от 10 (20) до 100 (200) мкл, от 100 до 1000 мкл и от 1 до 5 (10) мкл;
- наконечники, соответствующие дозаторам;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 100 мл;
- прибор для учета результатов реакции (фотометр);
- пипетки стеклянные градуированные 2-го класса точности вместимостью 10; 5; 2;
1 мл;
- холодильник бытовой (любого типа);
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ”С;
- часы (любого типа);
- груша резиновая;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- вода очищенная;
- дезинфицирующий раствор: 3 % раствор водорода перекиси, 3 % раствор хлорами
на.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна бьггь химически чистой и
не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с
2
--- стр. 3 ---
с
хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления раствора ТМБ.
Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать
автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реаген
тов следует производить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.
2. Меры предосторожности
В состав набора входит реагент (антиген вируса осповакцины), содержащий вирус
осповакцины, который относится к IV группе патогенности и может инфицировать персо
нал в процессе анализа. Кроме того, представляет опасность исследуемый материал кож
ных поражений от людей и животных (везикулярной и пустулезной жидкостей, суспензии
корок и др.), культуральная жидкость инфицированных клеточных культур, которые со
держат или могут содержать ортопоксвирусы. Поэтому, в целях предупреждения распро
странения инфекции внутри лаборатории, необходимо соблюдение санитарно-
гигиенических правил безопасной работы в соответствии с СП 1.3,2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями пара
зитарных болезней», СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности (опасности)»:
- работать в резиновых перчатках;
- использовать автоматические пипетки (дозаторы) с одноразовыми пластиковыми
наконечниками;
- все использованные материалы, сточные растворы, одноразовую лабораторную по
суду перед утилизацией подвергать обработке дезинфицирующим раствором (3 % раствор
перекиси водорода или 3 % раствор хлорамина в течение 4 ч) или автоклавированием при
давлении пара 0,2 МПа и температуре (132±2) °С в течение 45 мин;
- оборудование, находившееся в контакте с исследуемыми образцами, следует де
зинфицировать 70 % этиловым спиртом.
При попадании на кожу стоп-реагента или ТМБ следует немедленно смыть их
обильным количеством воды и вымыть с мылом место контакта.
Утилизацию антигена вируса осповакцины из наборов реагентов серий с истекшим
сроком годности проводят после обеззараживания автоклавированием при давлении пара
0,2 МПа, температуре (132±2) °С в течение 45 мин согласно СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями пара
зитарных болезней».
3. Подготовка исследуемого материала
Для анализа пригодны материалы кожных поражений (везикулярной и пустулезной
жидкостей, суспензии корок и др.) от людей и животных, культуральная жидкость инфи
цированных клеточных культур.
3
--- стр. 4 ---
Для выявления антигенов ортопоквирусов возможно использование, как свежепри
готовленного материала, так и хранившегося при температуре от 2 до 8 °С не более 1 сут
или при минус 20 °С не более 3 мес.
3.1. Подготовка материала кожных поражений
Для исследования в ИФА необходима проба в количестве не менее 200 мкл.
Исследованию в ИФА подвергают клинический материал, полученный в соответст
вии с «Инструкцией по лабораторной диагностике натуральной оспы» (1972 г.). Корки и
соскоб растирают в ступке, добавляя раствор натрия хлорида 0,9 % для инъекций или бу
ферный раствор Мак-Ильвейна pH от 7,2 до 7,4 в количестве 200 мкл. Везикулярную или
пустулезную жидкость разводят теми же растворами до получения 200 мкл материала или
используют для исследования в неразведенном виде, если объем клинического материала
не менее 200 мкл.
3.2. Подготовка мозговой суспензии
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани, взятой в
случае летального исхода от людей) необходимо приготовить 1 % суспензию на растворе
натрия хлорида 0,9 % для инъекций. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в
течение 20-30 мин; надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркиру
ют и хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 сут или при минус 20 °С не более
3 мес. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и более,
3.3. Подготовка культуральной жидкости
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА
центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как нераз-
веденные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
3.4. Использование проб
Приготовленные пробы используют свежеприготовленными, либо маркируют и хра
нят до исследования при температуре от 2 до 8 не более 1 суток или при температуре
не выше минус 20 °С не более 3 мес.
100 мкл подготовленной пробы используют для реакции «гашения», для чего пробу
соединяют с равным объемом раствора ИГ в рабочем разведении. Смесь исследуемой
пробы с ИГ (реакция «гашения») выдерживают в течение 1 ч при температуре (37±1) °С.
4. Подготовка растворов и реагентов
Набор перед проведением ИФА необходимо выдержать не менее 30 мин при темпе
ратуре 18-25 ® С .
4.1. Промывающий раствор ФСБ-Т
Смешивают 25 мл ФСБ-Тх 25 и 600 мл воды очищенной (далее воды).
Раствор хранят не более 2 сут при температуре от 2 до 8 °С или не более 7 сут при
температуре минус 10 °С.
4
--- стр. 5 ---
4.2. Рабочий раствор ФСБ-Т-БСА
Содержимое флакона с БСА растворяют в течение 20 мин при перемешивании в 100
мл промывающего раствора ФСБ-Т.
Раствор хранению не подлежит.
4.3. Рабочий раствор КББ для разведения ИГО
Содержимое ампулы с КББк доводят водой до 20 мл.
Раствор хранят не более 1 сут при температуре от 2 до 8 °С и не более 7 сут при тем
пературе не выше минус 10 °С.
4.4. Рабочий раствор ИГО
Содержимое ампулы (флакона) с ИГО растворяют в течение 10 мин в воде, в объе
ме, указанном на этикетке, затем разбавляют до рабочего разведения КББ.
Раствор хранят не более 1 сут при температуре от 2 до 8 °С и не более 7 сут при тем
пературе не выше минус 10 °С.
4.5. Рабочий раствор ИГ
Содержимое ампулы (флакона) с ИГ растворяют в течение 10 мин в объёме воды,
указанном на этикетке. Растворенный в воде ИГ допускается хранить не более 6 мес при
температуре не выше минус 20 °С. До рабочего разведения растворенный ИГ разводят
раствором ФСБ-Т-БСА. Полученный раствор хранению не подлежит.
4.6. Рабочий раствор (антиген вируса осповакцины)
Содержимое ампулы (флакона) с растворяют в течение 1 мин, в воде, в объеме,
указанном на этикетке. Растворенный в воде А "^ допускается хранить не более 6 мес при
температуре не выше минус 20 °С. Полученный раствор А "^ разводят раствором ФСБ-Т-
БСА до получения рабочего разведения, указанного на этикетке. Полученный раствор
хранению не подлежит.
4.7 . Раствор реакции «гашения» (А^ л - ИГ)
^ 0,5 мл рабочего разведения А "^ соединяют с 0,5 мл рабочего раствора ИГ. Смесь вы
держивают в течение 1 ч при температуре (37±1) °С. Смесь хранению не подлежит.
4.8. Рабочее разведение К (конъюгата)
Конъюгат (К) растворяют в течение 10 мин в воде, в объеме, указанном на этикетке.
Полученный раствор К допускается хранить не более 6 мес при температуре не выше ми
нус 20 °С. Раствор К разводят раствором ФСБ-Т-БСА до рабочего разведения. Рабочий
раствор К хранению не подлежит.
4.9. Раствор ТМБ (хромогена)
Раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием: содержимое
флакона с ТМБ растворяют в 20 мл ЦБР. Полученный раствор беречь от света. Рас
твор хранению не подлежит.
5. Проведение иммуноферментного анализа
5.1. Сорбция ИГО на поверхности лунок планшета для ИФА
5
--- стр. 6 ---
Во все лунки планшета (кроме 12А, которую используют для выведения фотометра
на нулевую отметку при учете результатов) вносят по 100 мкл рабочего раствора ИГО.
Планшет закрьгоают крьппкой и выдерживают в течение 2-2,5 ч при температуре
(37±1) °С, а затем в течение 18-20 ч при температуре от 2 до 8 °С.
Планшет, с иммобилизованным на поверхности лунок ИГО, отмывают ФСБ-Т при
помощи автоматического или ручного промывающего устройства, В процессе отмывания
в каждую лунку планшета заливают промьшаюшдй раствор не менее % ее объема с экспозищ1ей
1-3 мин. Промывающий раствор удаляют. Операцию проводят трижды. По окончании про
мывки лунки тщательно осушают, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в
несколько слоев фильтровальной бумаге (фильтровальную бумагу для осушения планше
тов меняют на каждом этапе ИФА).
Внимание! Планшеты, на поверхности лунок которых иммобилизован ИГО, допус
кается хранить в закрытых полиэтиленовых пакетах при температуре не выше минус 10 °С
не более 14 сут, перед использованием однократно отмывают ФСБ-Т.
5.2. Внесение растворов исследуемых проб
Положительный контроль
В лунку 12А вносят 100 мкл раствора ФСБ-Т-БСА.
Пару лунок, например 11-12 ряда D используют для исследования раствора А "^ . В
лунки 11D вносят 100 мкл исследуемого раствора А "^ в рабочем разведении, в лунку 12D
вносят 100 мкл смеси реакции «гашения» (А"^+ИГ).
Контроль конъюгата
5 лунок, например 11 А, 11В, 12В, 11C и 12С используют для контроля конъюгата, на
первом этапе реакции в них вносят по 100 мкл раствора ФСБ-Т-БСА.
Во всех остальных лунках планшета проводят исследование проб. Для каждой про
бы используют пару лунок, В лунку нечетного ряда (например 1Н) вносят 100 мкл иссле-
^ дуемой пробы, в парную лунку четного ряда (2Н) вносят смесь реакции «гашения» данной
исследуемой пробы (исследуемая проба+ИГ).
С целью исследования различных разведений одной пробы допускается проводить
титрование в параллельных рядах планшета с помощью многоканальной пипетки. Для ис
следования разведений пробы используют лунки двух парных рядов, в один ряд вносят
разведения исследуемой пробы, в парные лунки другого ряда - разведения «реакции га
шения» данной пробы (исследуемая проба + ИГ). В выбранные ряды (например 3 и 4)
вносят по 100 мкл раствора ФСБ-Т-БСА, в лунку ЗН вносят 100 мкл исследуемой пробы, в
лунку 4Н вносят 100 мкл смеси реакции «гашения» (исследуемая проба + ИГ). Затем со
держимое лунок ЗН и 4Н перемешивают 6-8 раз при помощи многоканальной пипетки,
используя индивидуальные наконечники, и переносят по 100 мкл раствора в парные лунки
следующего ряда (из 3-4Н в 3-4 О, из 3-4 О в 3-4F, из 3-4F в 3-4Е и т.д. до 3-4 А). Из лунок
3-4 А по 100 мкл раствора удаляют. В результате в парных лунках двух параллельных
6
--- стр. 7 ---
€
Планшеты закрывают крышками или фольгой и выдерживают в течение 1 ч при
температуре (37±1) °С.
Затем планшеты отмывают и осушают, как указано в п. 5.1.
5.5. Внесение хромогена и стоп-реагента
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора хромогена, и инкубируют в тече
ние 5-7 минут при комнатной температуре 20-25 °С в зашищенном от света месте.
Затем в каждую лунку планшета вносят по 50 мкл стоп-реагента.
6. Учет результатов
6.1. Результат реакции учитывают спектрофотометрически. Учет проводят при дли
не волны 450 нм. Прибор выводят на нулевую отметку, используя лунку 12А. Реакцию
учитывают, если среднее арифметическое значение оптической плотности (МОП) в лун
ках для контроля конъюгата не превышает 0,1.
6.2. Подсчитывают разность ОП в лунках нечетного ряда, куда был внесен раствор
и в соответствующей парной лунке четного ряда, куда был внесен раствор реакции
«гашения» данного разведения А^. Разница в значениях ОП должна составлять не менее
0,05 и превышать МОП контроля конъюгата.
6.3. Подсчитывают разность ОП между лунками нечетного ряда, куда был внесен
раствор исследуемой пробы и соответствующей парной лунки четного ряда, куда был
внесен раствор реакции «гашения» данной исследуемой пробы.
6.4. За титр исследуемой пробы принимают её наивысшее разведение, при котором
разница в значениях ОП составляет не менее 0,05 и превышает МОП контроля конъюгата.
Если МОП контроля конъюгата составляет от 0,051 до 0,1 за титр исследуемой пробы
принимают ее максимальное разведение, при котором разница значений ОП в лунках не
четного и четного ряда равна или более значения МОП контроля конъюгата.
ФОРМА ВЫПУСКА
7
Иммуносорбент -2 планшета
А" -1 амп. или 1 фл., 0,2 мл
ИГ -1 амп. или 1 фл., 0,2 мл
К - 1 амп. или 1 фл., 0,2 мл
ТМБ -1 фл., 5 мл
БСА - 1 фл., 1 г
ФСБ-Тх2 5 - 1 фл., 25 мл
ЦБР - 1 фл., 20 мл
Стоп-реагент - 1 фл., 12 мл
В коробку с набором вкладывают инструкцию по применению, нож или скарифика-
--- стр. 8 ---
к
т м ь
к к \ - > и
ьслл
Ь- I 2 ;;
ЦЬР
('го и-реагент
lljianiiicT iio.nicгиролоиыи для МФЛ
- I амм. или 1 фл.. 0.2 мл
- 1 фл.. 5 мл
“ 1 ами.. L2 мл
- I фл.. 1 г
- 1 фл., 25 мл
- I фл.. 20 мл
- I фл.Л2 мл
- 2 М П
В коробку с набором 1ич:1адыиа 1 01 ипс 1рукник> но примспсипю. нож млн ска|>и(|)нка
гор aM iiyjH>m;.iH (при упаковке амн>л. не нмеюн1н\ kojii.iui ичлома или точки для ncK'pi.i-
1ИЯ).
С Р О К г о д н о с т и . У С Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я и Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Я
Срок 1одн(»егн 1 год. Набор peai emoH е истекшим сроком годиосги исмол!. ioiuiHiiio
не нодлелсн г.
XpamiTi, и cooii^erciiuHi с СИ 3.3.2.1248-03 ири температуре от 2 до < S '^аморажи-
naiHie не допускается.
Транснортироиам. и cooi i^cictbhh с СП 3.3.2.1248-03 ири гемиерагуре от 2 до 8 'W
Лоиускаегся кратковременное (до 4 < S ч) тра[ 1сиортирова!И 1е ири темиера'суре от 9 до 25
^амоI'ta /К 'и I’ .а и ие не ;ю 11у с е гся.
1^екламании на качество набора ианравлять и адрес иреднрия гия-и иогови геля
<-1)Г'\Ч ] «11П{) иМикроген» Мнн ;дравсоирачвигия России. 115088. i . Москва, ул. 1-я jl,v6-
ровск’ ая. д. 15. 1сл. (495) 710-37-87,
Адрес нрои З В0ДС1 ва: 1\)ссия, (i34040. Томская область, г. 1'омск. ул. Ивановскою, д.
8. T C .1 . (38221 63-37-34.
( )тветс Г В С И1И Л М ча нро!тии>дство:
Д нрекю р филиала
Ф 1 У11 «НПО Микроген),'
М и нд, ра t iC t> ц I'la' U 51 гг н я Р ос с и и
в г. Томск
« »
в .п . Моро 5ов
v / r 2 0 1 / ^ .
«(Ч)ГЛЛ(Х)ВАП()»
Ь к к " а ( I )С ; 1р() 11 i\J1 и и 1 • ) чес 1ч О 1 i л аоо рато 11 о i i ; ui
lOV Д1 Ю «РМ,'\ПС) Рос {Дра 1Ш »
Д.М .Н.. профессор
,
^ '« е я к ц и и с н * а « а д е и и я \% ^ ,
п о с г« д *1 1 1 1 о н м го
^ т ^ н ш Ф е д в р а л к н о г в ']® _ ^ е н т с ш м /о $ г i ш а л е к и ю § § : ^ А
ш ш '
в.в. ДолIX)в
2 0 1 ^ I.
--- стр. 9 ---
П ЕРВЫ Й ЗА М ЕС ТИ ТЕЛ Ь
П рош ито, пропумереВВйАзЛЬЙОГО Д И РЕКТО РА
скреплено псчать 1о д а й Щ ^ ^ ^ * Й И К Р0ГЕН >
^ рог
тгиил.
--- стр. 10 ---
Приказом Росздравнадзора
от 201 г. № ора
оген»
тия России
П.В. Смачков
2 0 1 j ^ r .
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
Тест-система иммуноферментная для выявления антигена ортопоксвирусов
Комплект № 2
Н абор реагентов Т ест-систем а им м уноф ерм ентная для вы явления антигена ортонок-
свирусов вклю чает следую щ ие реагенты для проведения им м уноф ерм ентного анализа:
1. Иммуносорбент - иммуноглобулин G против вируса осповакцины , вы деленный
из гиперимм унной сы воротки крови кроликов, им м унизированны х вирусом осповакцины ,
сорбированны й в лун ках планш етов полистироловы х 96-луночны х для И Ф А с высокой
сорбционной способностью .
2. ИГ - иммуноглобулин - им муноглобулиновая ф ракция, полученная из гиперим
мунной сы воротки крови кроликов, им м унизированны х вирусом осповакцины . А м орф
ный порош ок или пористая м асса белого цвета, или со светло-ж елты м оттенком.
3. - антиген вируса осповакцины - вакцина оспенная живая. П ористая масса
бело'серого или светло-ж елтого цвета.
4. К (конъюгат) - И ГО против вируса осповакцины , вы деленны й из иммуноглобу
линовой ф ракции гиперимм унной сы воротки крови кроликов, им м унизированны х виру
сом вакцины , конъю гированны й с пероксидазой хрена. А м орф ны й порош ок или пористая
м асса белого цвета или со светло-ж елты м оттенком,
5. ТМБ - концентрат тетраметилбензидина - хром оген. П розрачная бесцветная
ж идкость.
6. БСА (бычий сывороточный альбумин) - стабилизатор. А м орф ны й порош ок бе
лого или светло-серого, или светло-ж елтого цвета, гигроскопичен.
7. ФСБ-Тх2 5 - концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с Твином-20 -
для приготовления рабочих растворов. П розрачная или слабо опалесцирую щ ая бесцветная
ж идкость, в которой допускается вы падение кристаллов солей, растворим ы х в течение
20-30 мин при тем пературе раствора (37±1) °С.
8. ЦБР - нитратный буферный раствор с добавлением водорода перекиси - для
приготовления раствора хромогена. П розрачная бесцветная ж идкость.
--- стр. 11 ---
9. Стоп-реагент - 2,2 М раствор серной кислоты . П розрачная бесцветная ж идкость.
Принцип метода: набор долж ен давать в И Ф А полож ительную реакцию с при
использовании реагентов набора в их рабочих разведениях.
Набор рассчитан на исследование 88 проб с учетом проведения полож ительного кон^
трольного опы та (подтверж дение титра антигена вируса вакцины ) и контроля конъю гата.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Т ест-систем а им м уноф ерм ентная для вы явления антигена орто-
поксвирусов» предназначен для вы явления антигена ортопоксвирусов (вирусов натураль
ной оспы, оспы обезьян, оспы коров, вакцины) в м атериалах кож ны х поражений (везику
лярной и пустулезной ж идкостей, суспензии корок и др.) от лю дей и ж ивотных, в культу
ральной ж идкости инф ицированны х клеточных культур методом иммуноферментного ана
лиза (ИФА).
Область применения - лабораторная диагностика, эпидемиологические исследования.
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
1. Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора),
необходимые для проведения анализа:
- дозаторы (пипетки) переменного объем а (м еханические или электронные):
8- или 12-канальны е с объем ом дозирования от 5 до 50 м кл и 1- канальны е с объемом д о
зирования от 10 (20) до 100 (200) м кл, от 100 до 1000 м кл и от 1 до 5 (10) мкл;
- наконечники, соответствую щ ие дозаторам;
- стаканы хим ические м ерны е или колбы м ерны е вм естим остью 100 мл;
- прибор для учета результатов реакции (ф отометр);
- пипетки стеклянны е градуированны е 2-го класса точности вм естим остью 10; 5; 2;
1 мл;
- холодильник бы товой (лю бого типа);
- терм остат, поддерж иваю щ ий тем пературу (37±1) ®С;
- часы (лю бого типа);
- груш а резиновая;
- перчатки резиновы е хирургические;
- бумага ф ильтровальная лабораторная;
- вода очищ енная;
- дезинф ицирую щ ий раствор: 3 % раствор водорода перекиси, 3 % раствор хлорам и
на.
Вся посуда, используем ая для постановки реакции, долж на бы ть хим ически чистой и
не содерж ать ионов тяж елы х м еталлов. С ледует избегать непосредственной близости с
хлорсодерж ащ им и дезинф ектантам и, особенно на этапах приготовления ТМ Б. Для отбора
2
--- стр. 12 ---
с
исследуемы х образцов и реагентов тест-систем ы необходим о использовать автоматиче
ские пипетки с погреш ностью изм ерения объёмов не более 5 % . О тбор реагентов следует
производить чисты м и наконечникам и для автом атических пипеток.
2. Меры предосторожности
В состав набора входит реагент (антиген вируса вакцины ), содерж ащ ий вирус оспо-
вакцины , которы й относится к IV группе патогенности и м ож ет инф ицировать персонал в
процессе анализа. Кром е того, представляет опасность исследуем ы й м атериал кож ны х по
раж ений от лю дей и ж ивотны х (везикулярной и пустулезной ж идкостей, суспензии корок
и др.), культуральная ж идкость инф ицированны х клеточны х культур, которы е содерж ат
или м огут содерж ать ортопоксвирусы . П оэтому, в целях предупреж дения распростране
ния инф екции внутри лаборатории, необходим о соблю дение санитарно-гигиенических
правил безопасной работы в соответствии с СП 1,3.2322-08 «Безопасность работы с м ик
роорганизмам и III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителям и паразитарны х бо
лезней», СП 1.3Л 285-03 «Безопасность работы с м икроорганизм ам и I-II групп патогенно
сти (опасности)»:
- работать в резиновы х перчатках;
- использовать автом атические пипетки (дозаторы ) с одноразовы м и пластиковы ми
наконечниками;
- все использованны е материалы , сточны е растворы , одноразовую лабораторную по
суду перед утилизацией подвергать обработке дезинф ицирую щ им раствором (3 % раствор
перекиси водорода или 3 % раствор хлорам ина в течение 4 ч) или автоклавированием при
давлении пара 0,2 М П а и тем пературе (132±2) °С в течение 45 мин;
- оборудование, находивш ееся в контакте с исследуем ы м и образцам и, следует де
зинф ицировать 70 % этиловы м спиртом.
При попадании на кож у стоп-реагента или Т М Б следует немедленно смы ть их
обильным количеством воды и вы мы ть с м ы лом место контакта.
У тилизацию антигена вируса осповакцины из наборов реагентов серий с истекш им
сроком годности проводят после обеззараж ивания автоклавированием при давлении пара
0,2 М Па, тем пературе (132±2) °С в течение 45 мин согласно СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с м икроорганизм ам и III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителям и пара
зитарны х болезней».
3. Подготовка исследуемого материала
Д ля анализа пригодны м атериалы кож ны х пораж ений (везикулярной и пустулезной
ж идкостей, суспензии корок и др.) от лю дей и ж ивотны х, культуральная ж идкость инф и
цированны х клеточны х культур.
3
--- стр. 13 ---
Д ля вы явления антигенов ортопоквирусов возм ож но использование, как свеж епри
готовленного м атериала, так и хранивш егося при тем пературе от 2 до 8 ‘ ’С не более 1 сут
или при м инус 20 °С не более 3 мес.
3J. Подготовка материала кожных пораэ(сений
Д ля исследования в И Ф А необходим а проба в количестве не м енее 200 мкл.
И сследованию в И Ф А подвергаю т клинический м атериал, полученны й в соответст
вии с «И нструкцией по лабораторной диагностике натуральной оспы » (1972 г.). Корки и
соскоб растираю т в ступке, добавляя раствор натрия хлорида 0,9 % для инъекций или бу
ферный раствор М ак-И львейна pH от 7,2 до 7,4 в количестве 200 мкл. В езикулярную или
пустулезную ж идкость разводят тем и же растворам и до получения 200 м кл м атериала или
использую т для исследования в неразведенном виде, если объем клинического м атериала
не менее 200 мкл.
3.2. Подготовка мозговой суспензии
Д ля исследования м озга инф ицированны х ж ивотны х (или м озговой ткани, взятой в
случае летального исхода от лю дей) необходим о приготовить 1 % суспензию на растворе
натрия хлорида 0,9 % для инъекций. С успензию центриф угирую т при 3000-6000 об/мин в
течение 20-30 м ин, надосадочную ж идкость переносят в стерильную пробирку, м аркиру
ю т и и хранят при тем пературе от 2 до 8 °С не более 1 сут или при м инус 20 °С не более
3 мес. В И Ф А проверяю т как неразведенную суспензию , так и в разведении 1:10 и более.
3.3. Подготовка культуральной жидкости
К ультуральную ж идкость зараж енны х клеточны х культур перед испы танием в ИФ А
центриф угирую т при 3000-6000 об/м ин в течение 20-30 мин. В И Ф А исследую т как нераз-
веденные пробы , так и в разведении 1:2 и более.
3.4. Использование проб
П риготовленны е пробы использую т свеж еприготовленны м и, либо м аркирую т и хра
нят до исследования при тем пературе от 2 до 8 ‘ ^С в течении 1 суток или при тем пературе
не вы ш е м инус 20 не более 3 мес.
100 м кл подготовленной пробы использую т для реакции «гаш ения», для чего пробу
соединяю т с равны м объем ом раствора И Г в рабочем разведении. Смесь исследуемой
пробы с И Г (реакция «гаш ения») вы держ иваю т в течение 1 ч при тем пературе (37±1) °С.
4. Подготовка растворов и реагентов
Набор перед проведением И Ф А необходим о вы держ ать не м енее 30 мин при тем пе
ратуре 18-25 °С.
4.J. Промывающий раствор ФСБ-Т
С м еш иваю т 25 м л Ф СБ-Тх25 и 600 мл воды очищ енной (далее воды).
4
--- стр. 14 ---
с
с
Раствор хран ят не более 2 сут при тем пературе от 2 до 8 или не более 7 сут при
температуре м инус 10 °С,
4.2. Рабочий раствор ФСБ-Т-БСА
С одерж им ое ф лакона с БС А растворяю т в течение 20 м ин при перемеш ивании в
100 мл пром ы ваю щ его раствора Ф СБ-Т.
Раствор хранению не подлеж ит.
4.3. Рабочий раствор ИГ
С одерж им ое ам пулы (флакона) с И Г растворяю т в течение 10 мин в воде, в объеме,
указанном на этикетке. Растворенны й в воде И Г допускается хранить не более 6 мес при
температуре не вы ш е м инус 20 °С. До рабочего разведения растворенны й И Г разводят
раствором Ф С Б-Т-БС А . П олученны й раствор хранению не подлеж ит.
4.4. Рабочий раствор (антиген вируса осповакцины)
С одерж им ое ам пулы (ф лакона) с растворяю т в течение 1 мин в воде, в объеме,
указанном на этикетке. Растворенны й в воде А^ допускается хранить не более 6 мес при
тем пературе не вы ш е м инус 20 °С. П олученны й раствор А^ разводят раствором Ф СБ-Т-
БСА до получения рабочего разведения, указанного на этикетке. П олученны й раствор
хранению не подлеж ит.
4.5. Раствор реакции «гашения» (А '^ ИГ)
0,5 мл рабочего разведения А "^ соединяю т с 0,5 м л рабочего раствора ИГ. Смесь вы
держ иваю т в течение 1 ч при тем пературе (37±1) °С. Смесь хранению не подлеж ит.
4.6. Рабочее разведение К (конъюгата)
К онъю гат (К) растворяю т в течение 10 м ин в воде, в объем е, указанном на этикетке.
П олученны й раствор К допускается хранить не более 6 м ес при тем пературе не вы ш е м и
нус 20 °С. Раствор К разводят раствором Ф С Б-Т -БС А до рабочего разведения. Рабочий
раствор К хранению не подлеж ит.
4.7 . Раствор ТМБ (хромогена)
Раствор хром огена готовят непосредственно перед использованием : со д ер ж и м о е
ф л ак о н а с Т М Б р а с т в о р я ю т в 20 м л Ц Б Р . П о л у ч ен н ы й раствор беречь от света. Рас
твор хранению не подлеж ит.
5, Проведение иммуноферментного анализа
5.1. П ланш ет, с им м обилизованны м н а поверхности лун ок И ГО , отм ы ваю т Ф СБ-Т
при пом ощ и автом атического или ручного пром ы ваю щ его устройства. В процессе отм ы
вания в каждую лунку планшета заливают промьшающий раствор не менее У з ее объема с экспо
зицией 1-3 мин. Промывающий раствор удаляют. О перацию проводят однократно. По окон
чании пром ы вки лунки тщ ательно осуш аю т, постукивая перевернуты м планш етом по
5
--- стр. 15 ---
слож енной в несколько слоев ф ильтровальной бумаге (ф ильтровальную бумагу для осу
ш ения планш етов м еняю т на каж дом этане ИФ А ).
5.2. Внесение растворов исследуемых проб
Положительный контроль
В лунку 12А вносят 100 м кл раствора Ф С Б-Т-БС А .
П ару лунок, наприм ер 11-12 ряда D использую т для исследования раствора Л"^. В
лунки 11D вносят 100 м кл исследуемого раствора в рабочем разведении, в лунку 12D
вносят 100 м кл смеси реакции «гаш ения» (А'^+ИГ).
Контроль конъюгата
5 лунок, наприм ер П А , 11В, 12В, П С и 12С использую т для контроля конью гата, на
первом этапе реакции в них вносят по 100 м кл раствора Ф С Б-Т-БС А .
Во всех остальных лунках планшета проводят исследование проб. Д ля каж дой про
бы использую т пару лунок. В лунку нечетного ряд а (наприм ер 1Н) вносят 100 мкл иссле
дуемой пробы , в парную лунку четного ряда (2Н) вносят см есь реакции «гаш ения» данной
исследуемой пробы (исследуем ая проба+И Г).
С целью исследования различны х разведений одной пробы допускается проводить
титрование в параллельны х рядах планш ета с пом ощ ью м ногоканальной пипетки. Д ля ис
следования разведений пробы использую т лунки двух парны х рядов, в один ряд вносят
разведения исследуем ой пробы , в парны е лунки другого ряда - разведения реакции «га
ш ения» данной пробы (исследуем ая проба + ИГ). В вы бранны е ряды (например 3 и 4)
вносят по 100 м кл раствора Ф С Б-Т-БС А , в лунку ЗН вносят 100 м кл исследуемой пробы, в
лунку 4Н вносят 100 м кл смеси реакции «гаш ения» (исследуем ая проба + ИГ). Затем со
держ имое лун ок ЗН и 4Н перем еш иваю т 6-8 раз при пом ощ и м ногоканальной пипетки,
используя индивидуальны е наконечники, и переносят по 100 м кл раствора в парные лунки
следую щ его ряда (из 3-4Н в 3-4 G, из 3-4 G в 3-4F, из 3-4F в 3-4Е и т.д. до 3-4 А). Из лунок
3-4 А по 100 м кл раствора удаляю т. В результате в парны х лунках двух параллельны х ря
дов планш ета остается по 100 м кл двукратны х разведений проб с 1:2 до 1:128 (если иссле
дуемый м атериал не им ел исходного разведения), из последних лун ок по 100 мкл раствора
удаляю т.
5.5. П ланш еты закры ваю т кры ш кам и или ф ольгой и вы держ иваю т в течение 1 ч при
тем пературе (37±1) °С. С одерж им ое лунок удаляю т, планш еты ом ы ваю т и осуш иваю т, как
указано в п.5.1.
5.4. Внесение коньюгата
В каж дую лунку (кром е 12А) вносят по 100 м кл раствора К (конъю гата) в рабочем
разведении. В лунку 12А вносят 100 м кл раствора Ф С Б-Т-БС А .
6
--- стр. 16 ---
П ланш еты закры ваю т кры ш кам и или ф ольгой и вьщ ерж иваю т в течение 1 ч при
тем пературе (37±1) °С.
Затем планш еты отм ы ваю т и осуш аю т, как указано в п. 5.1.
5.5. Внесение хромогена и стоп-реагента
Во все лунки планш ета вносят по 100 м кл раствора хром огена, и инкубирую т в тече
ние 5-7 м инут при ком натной тем пературе 20-25 °С в защ ищ енном от света месте.
Затем в каж дую лунку планш ета вносят по 50 м кл стоп-реагента.
6. Учет результатов
6.1. Результат реакции учиты ваю т спектроф отом етрически. У чет проводят при дли
не волны 450 нм. П рибор вы водят н а нулевую отм етку, используя лунку 12А. Реакцию
учитываю т, если среднее ариф м етическое значение оптической плотности (М О П) в лун
ках для контроля конью гата не превы ш ает 0,1.
6.2. П одсчиты ваю т разность ОП в лунках нечетного ряда, куда бы л внесен раствор
и в соответствую щ ей парной лунке четного ряда, куда бы л внесен раствор реакции
«гаш ения» данного разведения А'^. Р азница в значениях ОП долж на составлять не менее
0,05 и превы ш ать М О П контроля конъю гата.
6.3. П одсчиты ваю т разность ОП м еж ду лункам и нечетного ряда, куда был внесен
раствор исследуем ой пробы и соответствую щ ей парной лунки четного ряда, куда был
внесен раствор реакции «гаш ения» данной исследуем ой пробы.
6.4. За титр исследуем ой пробы приним аю т её наивы сш ее разведение, при котором
разница в значениях ОП составляет не менее 0,05 и превы ш ает М О П контроля конъю гата.
Если М О П контроля конъю гата составляет от 0,051 до 0,1 за титр исследуемой пробы
приним аю т ее м аксим альное разведение, при котором разница значений ОП в лунках не
четного и четного ряда равн а или более значения М О П контроля конъю гата.
ФОРМА ВЫПУСКА
7
И м м уносорбент -2 планш ета
А" -1 амп. или 1 фл., 0,2 мл
ИГ -1 амп, или 1 фл., 0,2 мл
К - 1 амп. или 1 фл., 0,2 мл
ТМ Б -1 фл., 5 мл
БСА -1 фл., 1 г
ФСБ-Тх2 5 - 1 фл., 25 мл
ЦБР - 1 фл., 20 мл
Стоп-реагент - 1 фл., 12 мл
В коробку с набором вклады ваю т инструкцию по прим енению , нож или скарифика-
--- стр. 17 ---
€
юр ампульный (при упакоикс avmyji. пс имеющих кольца и^чома м;т ю чки для ьскры-
гня).
СГОК г о д н о е I И, УС Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я И Т РЛ И С П О Р1 И Р О В А И И Я
Срок ю лпосги 6 мсс. Набор peai cm on е ис гскптм сроком юлпосчи испол!. u>iui-
IIИ Ю мс 1 юл.Iсжит.
Храпим^ и ci>oi исгстьии с С'Г! 3.^.2.1248-03 при гемпсрагурс o r 2 до Н ''С ,', '^аморажп-
пание не допускается.
Tpniic!!opriipoiiai 1. и соогис'гс'гиип с ('! [ 3.3,2.1248-03 при [CMnepaiype o r 2 до 8 ' X ' .
Лопх скасчся кра гковремсппое (до 48 ч} гранспор гпроиапис при -гемиерагуре о г до 25 Ч'.
Чаморажмваппе не допускасгся.
Рекламации па качеегио набора напра|{ЛЯ 1 ь и адрес нредирпяi пя-и'их)гоиигеля
ФГ'УП «НПО «Микрогси» Мни 5драиеоцрачвития 1Ччссии. 115088, i. Мое к па. ул. 1-я ,Д\б-
рогюкая. д. 15. тел. (4^^)5) 710-37-87.
Адрес ироп аюдс 1 ва; Россия. 634040. Томская oojtacib, г. Томск, ул. Ииа[[оискою-д. 8.
тел. (3822) 63-37-34.
( )'| пе 1'СIиеипыГ[ ui проп ню депю ;
Л.прек 1ор (j)iL:ina:ia
ФГА’П /< | |П () М икрогеп»
М ппчдравсоцрачпп i И Я 14>есип
\\ I'. f О М С К И.1 [. Моро ин;
« Я л > у > 20! / I .
НХ)ГЛАС0!ЗА11()>^
■ ^ а ь . кафед1хн4 клинической .чабюрагорной,
1 ON' ДНО «РМ ЛНО 1Чк'-5драва>
Д .М .П .. профессор
--- стр. 18 ---
n
П рош ито, пронумер^ова
скреплено печатыо,
I л иста(
И ТЕЛЬ
Р Е К Т О РА
К РО ГЕ Н »
РО С С И И