Набор реагентов Тест-система иммуноферментная для определения антител к ортопоксвирусам по ТУ 9388-149-14237183-10 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2010/09671 от 30.12.2010 · класс риска 2б

Производитель: АО "НПО "Микроген" (Россия)

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора 
от 201 г. №
,титель
ора 
роген» 
ития России
П.В. Смачков 
г.
€
И Н С Т Р У К Ц И Я 
по п р и м е н е н и ю 
набора реагентов
Тест-си стем а и м м ун о ф ер м еп тн ая д л я определения а н ти те л  к  ортопоксвирусам
Набор реагентов Тест-система иммуноферментная для определения антител к орто­
поксвирусам включает следующие реагенты для проведения иммуноферментного анализа:
1, И м м уносорбент -  монолитный полистироловый 96-луночный планшет для ИФА с 
прозрачными бесцветными лунками, на поверхности которых сорбированы антигены: в лун­
ках нечетных рядов планшета -  вирусный антиген (лизат клеточных культур, инфицирован­
ных вирусом осповакцины, А^), в лунках четных рядов планшета -  контрольный антиген 
(лизат тех же клеточных культур, не инфицированных вирусом осповакцины, А ).
2. - п о л о ж и тел ьн ы й  ко н тр о л ьн ы й  образец -  сыворотка донорской крови челове­
ка, инактивированная, содержащая антитела к вирусу осповакцины, сухая. Не содержит 
HBsAg и антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, к возбудителю сифилиса. Лиофили- 
зированная масса белого, светло-кремового или светло-желтого цвета.
3» К  - о тр и ц ател ьн ы й  ко н тр о л ьн ы й  образец -  сыворотка донорской крови человека, 
инактивированная, не содержащая антитела к вирусу осповакцины, сухая. Не содержит 
HBsAg и антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, к возбудителю сифилиса. Лиофили- 
зированная масса белого, светло-кремового или светло-желтого цвета.
4. К  - к о н ъ ю га т - антитела диагностические против иммуноглобулинов человека, ме­
ченные пероксидазой хрена. Лиофилизированная масса белого, светло-кремового или свет­
ло-желтого цвета.
5. Т М Б  - к о н ц е н тр ат тетр ам ети лбен зи д и н а -  хромоген. Прозрачная бесцветная 
жидкость.
6. Б С А  (б ы ч и й  сы в о р о то ч н ы й  а л ьб у м и н ) -  стабилизатор. Аморфный порошок бе­
лого или светло-серого, или светло-желтого цвета, гигроскопичен.


--- стр. 2 ---
7. ФСБ-Тх 2 5 - концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с Твином-20
-  для приготовления рабочих растворов. Прозрачная или слабо оналесцирующая бесцвет­
ная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов солей, растворимых в течение 
20-30 мин при температуре раствора (37±1) °С.
8. ЦБР -  цнтратный буферный раствор с добавлением водорода перекиси -  для 
приготовления раствора хромогена. Прозрачная бесцветная жидкость.
9. Стон-реагент -  2,2 М  раствор кислоты серной. Прозрачная бесцветная жидкость
Принцип метода:  набор должен давать в ИФА положительную реакцию с и от­
рицательную - с К~~при использовании реагентов набора в их рабочих разведениях и зна­
чении оптической плотности (ОП) в лунках контроля конъюгата не выше 0,2.
Набор рассчитан на исследование 86 проб (86 анализов) и проведение контрольных 
опытов с К "^ , К , К.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная для определения антител к орто- 
поксвирусам» предназначен для определения антител к ортопоксвирусам в сыворотках кро­
ви человека методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Область применения -  лабораторная диагностика ортопоксвирусов, эпидемиологиче­
ские исследования.
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
1. Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), не­
обходимые для проведения анализа:
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 
8- или 12-канальные с объемом дозирования от 5 до 200 мкл и 1- канальные с объемом до­
зирования от 10 (20) до 100 (200) мкл, от 100 до 1000 мкл и от 1  до 5 (10) мкл;
- наконечники, соответствующие дозаторам;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 100 мл;
- пипетки стеклянные градуированные 2-го класса точности вместимостью 10; 5; 2;
1  мл;
- груша резиновая;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С;
- холодильник бытовой (любого типа);
- часы (любого типа);
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- вода очищенная;
- прибор для учета результатов реакции (фотометр);
2


--- стр. 3 ---
- дезинфицирующий раствор: 3 % раствор водорода перекиси или 3 % раствор хло- 
]ашшна.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и 
не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с 
хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ, Для отбора 
исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматиче­
ские пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует 
производить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.
2. Меры предосторожности
В состав набора входит реагент (иммуносорбент), содержащий вирус осповакцины, 
который относится к IV группе патогенности и может инфицировать персонал в процессе 
анализа. Кроме того, опасность представляет исследуемый материал (сыворотка крови че­
ловека), который может содержать ортопоксвирусы, а также возможно присутствие виру­
сов инфекционных гепатитов В и С, вирусов иммунодефицита человека. Поэтому, в целях 
предупреждения распространения инфекции внутри лаборатории, необходимо соблюдать 
санитарно-гигиенические правила безопасной работы в соответствии с СП 1.3.2322-08 
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и воз­
будителями паразитарных болезней», СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорга­
низмами I-II групп патогенности (опасности)», «Инструкции по противоэпидемическому 
режиму в лабораториях диагностики СПИД» № 42-28/38-90 от 5 июля 1990 г., 
Приказом № 408 от 12.07.1989 г «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепа­
титами в стране»:
- работать в резиновых перчатках;
- использовать автоматические пипетки (дозаторы) с одноразовыми пластиковыми 
наконечниками;
- все использованные материалы, сточные растворы, одноразовую лабораторную по­
суду перед утилизацией подвергать обработке дезинфицирующим раствором (3 % раствор 
водорода перекиси или 3 % раствор хлорамина в течение 4 ч) или автоклавированием при 
давлении пара 0,2 МПа, температуре 132 °С в течение 45 мин;
- оборудование, находившееся в контакте с исследуемыми образцами, следует де­
зинфицировать 70 % этиловым спиртом.
При попадании на кожу стоп-реагента или ТМБ следует немедленно смыть их 
обильным количеством воды и вымыть с мылом место контакта.
3


--- стр. 4 ---
€
Утилизацию иммуносорбента из наборов с истекшим сроком годности проводят 
после обеззараживания согласно СП 1,3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганиз­
мами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» ав- 
токлавированием при давлении пара 0,2 МПа, температуре (132±2) °С в течение 45 мин.
3, Подготовка исследуемого материала
3.1. Получение сыворотки для исследований
Взятую в пробирки кровь доноров выдерживают при температуре (37±1) °С в тече­
ние 30 мин; отделяют сгусток фибрина от стенок пробирки и центрифугируют при 
2000 об/мин в течение 20 мин. Сыворотку осторожно отделяют пипеткой и переносят в 
чистую пробирку. Полученные пробы используют свежеприготовленными, либо марки­
руют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 '^С  не более 1  суток или при 
температуре не выше минус 20 ‘ ^С  не более 6 мес.
3.2. Разведения исследуемых сывороток
Исследуемые сыворотки разводят рабочим раствором ФСБ-Т-БСА до разведения 
1:100. Полученные растворы сывороток допускается хранить при температуре минус 
20 °С не более 6 мес или с добавлением мертиолята натрия до конечного разведения 
1:10000 при температуре от 2 до 8 °С не более 1  мес.
4. Подготовка растворов и реагентов
Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при темпера­
туре от 18 до 25 °С.
4 .J. Промывающий раствор ФСБ-Т
Смешивают 25 мл ФСБ-Тх 2 5 и 600 мл воды очищенной (далее воды).
Раствор хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 2 сут или при температуре ми­
нус 10 °С не более 7 сут.
4.2. Рабочий раствор ФСБ-Т-БСА
Содержимое флакона с БСА растворяют в течение 20 мин при перемешивании в 
100 мл промывающего раствора ФСБ-Т.
Раствор хранению не подлежит.
4.3. Рабочие растворы К^, К
Содержимое ампул (флаконов) с и К~ растворяют в течение 10 мин в воде, в объ­
еме, указанном на этикетке. Полученные растворы допускается хранить при температуре 
не выше минус 20 °С не более 6 мес или с добавлением мертиолята натрия 1:10000 при 
температуре от 2 до 8 °С не более 1  мес.
Для получения рабочих разведений и К~, указанных на этикетках, объем раство­
ров и К , доводят до необходимого ФСБ-Т-БСА. Рабочие растворы К "^ , К хранению не 
подлежат.
4


--- стр. 5 ---
4.4. Рабочее разведение К  (конъюгата)
Конъюгат (К) растворяют в течение 10 мин в воде, в объеме, указанном на этикетке. 
Полученный раствор К допускается хранить при температуре не выше минус 20 °С не бо­
лее 6 мес. Полученный раствор разводят до рабочего разведения раствором ФСБ-Т-БСА. 
Рабочий раствор К хранению не подлежит.
4.5. Раствор ТМБ (хромогена)
Содержимое флакона с ТМБ растворяют в 20 мл ЦБР.
Раствор готовят непосредственно перед использованием. Полученный раствор необ­
ходимо беречь от света. Раствор хранению не подлежит.
5. П ровед ение им м уноф ерм ентного ан ал и за
5.1. Подготовка планшетов
Планшеты однократно отмывают ФСБ-Т при помош;и автоматического или ручного 
промывающего устройства, заливая в каждую лунку промывающий раствор не менее чем на Vi 
ее объема с экспозицией 1-3 мин. После чего промывающий раствор удаляют. Планшеты тща­
тельно осушают постукиванием по фильтровальной бумаге, сложенной в несколько слоев.
5.2. Внесение растворов
В 6 лунок (11-12А, И-12В и П-12С) вносят по 100 мкл раствора ФСБ-Т-БСА. Лунка 
12А служит для выведения фотометра на нулевую отметку при учете результатов. Лунки
11 А, 11-12В и 11-12С служат для контроля конъюгата.
5.5. Внесение рабочих растворов i t ,  К
В пару лунок нечетного и четного рядов планшета (например: 11-12D, 11-12Е) вносят 
по 100 мкл приготовленных растворов и К~ в рабочих разведениях.
5.4. Внесение растворов исследуемых сывороток
В парные лунки нечетного и четного рядов планшета (например: 1-2А, 3-4А и т.д.) 
вносят по 100 мкл раствора исследуемого материала.
При исследовании различных разведений анализируемого материала допускается тит­
рование в лунках планшета. Для этого в каждую пустую лунку планшета вносят по 100 мкл 
раствора ФСБ-Т-БСА. Для каждой анализируемой пробы используют одну пару лунок (на­
пример: 1-2Н), в которые вносят по 100 мкл приготовленного раствора пробы в разведении 
1:100, Последующие пары лунок параллельного ряда (в нашем примере: 1-2G, 1-2F и т.д.) 
используют для титрования данной пробы. Титрование проводят с помощью многоканаль­
ной пипетки: из каждой пары лунок переносят по 100 мкл раствора в следующие пары лу­
нок, каждый раз перемешивая содержимое лунок 6-8 раз, при этом, в каждой лунке ряда тит­
рования должно оставаться по 100 мкл раствора, из последней пары лунок ряда титрования 
100 мкл раствора удаляют. Таким образом, на планшете в парных лунках 1-2 рядов от Н до А


--- стр. 6 ---
с
получают ряд двукратных разведений пробы от 1:100 до 1:12800. При необходимости ис­
следования меньшего количества различных разведений одной пробы, в последующие пары 
лунок вносят растворы новых проб.
5.5. Планшеты закрывают крышками или фольгой и выдерживают при температуре 
(37±1) °С в течение 1  ч. Содержимое лунок удаляют. Планшеты трижды отмывают ФСБ-Т 
при помощи автоматического или ручного промывающего устройства, заливая в каждую 
лунку промывающий раствор не менее чем на % ее объема с экспозицией 1-3 мин. После чего 
промьшающий раствор удаляю. Планшеты тщательно осушают постукиванием по фильтроваль­
ной бумаге, сложенной в несколько слоев.
5.6. Внесение раствора конъюгата (К)
В каждую лунку (кроме 12А) заливают по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем раз­
ведении. В лунку 12А вносят 100 мкл раствора ФСБ-Т-БСА. Планшеты закрывают крышка­
ми или фольгой и вьщерживают при температуре (37±1) °С в течение 1  ч. Затем планшеты 
отмьгоают и осушают, как указано вьшхе (п.5.5).
5.7 . Внесение раствора ТМБ (хромогена) и стоп-реагента
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл приготовленного раствора хромогена и ин­
кубируют в течение 5-7 мин при комнатной температуре 20-25 в защищенном от света 
месте.
Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл стоп-реагента.
5.8. При проведении ИФА предусматривают следующие контроли:
1. Исследование контрольных образцов сывороток и К для определения специ­
фической активности набора. Реакцию считают подлежащей учету, если:
- разница ОП в лунках отрицательного контрольного образца (К ) нечетного и чет­
ного рядов < 0,05 (< МОП контроля конъюгата) и среднее значение ОП отрицательного 
контрольного образца < 0,250;
- разница ОП в лунках положительного контрольного образца (К^) нечетного и чет­
ного ряда > 0,05 (> МОП контроля конъюгата).
2. Контроль специфической активности конъюгата, который характеризует взаимо­
действие иммобилизованных А "^  и А с конъюгатом. Среднее арифметическое оптических 
плотностей (МОП) в лунках контроля конъюгата не должно превышать 0,2.
6. У ч е т  р е зу л ьта то в
6.1. Результаты реакции учитывают спектрофотометрически при длине волны 
450 нм. Для каждого исследуемого разведения и К подсчитывают разницу оптиче­
ских плотностей (ОП) в парных лунках нечетных и четных рядов, затем определяют
6


--- стр. 7 ---
€
среднее арифметическое оптических плотностей (МОП) в лунках для контроля конью- 
гата.
6.2. Положительный результат. Считают, что исследуемая сыворотка содержит ан­
титела (IgG) к ортопоксвирусам, если разница значений ОП в реакциях с вирусным 
(лунка нечетного ряда) и контрольным (лунка четного ряда) антигенами, полученных в 
ИФА исследуемой пробы, составляет > 0,05 (МОП контроля конъюгата в данном случае 
должен быть < 0,05). Если МОП контроля конъюгата составляет от 0,051 до 0,2 положи­
тельным результатом считают, если разница значений ОП в лунках нечетного и четного 
ряда в ИФА исследуемой пробы > МОП контроля конъюгата.
6.3. Интерпретация результатов.
При исследовании сывороток крови здоровых людей с целью изучения иммуност­
руктуры населения и проведения сероэпидемиологических исследований выявление IgG 
к ортопоксвирусам в однократно взятых пробах, как правило, отражает иммунологиче­
ский эффект от предшествующей специфической вакцинации.
При тестировании проб, взятых однократно, даже высокое значение ОП не являет­
ся доказательством острой инфекции.
При обследовании больных с подозрением на оспенную инфекцию нужно взять 
парные пробы крови. Первую пробу берут в начале заболевания: не позднее, чем через 
5-7 дней после появления симптомов заболевания. Вторую пробу берут через 14-21 день 
после первой пробы. Исследование парных сывороток должно проводиться в одном и 
том же опыте. Положительным результатом считают, если в парных пробах при иссле­
довании в разведениях 1:200 и более выявлены титры или титры проб различаются в 2 и 
более раза.
ФОРМА ВЫПУСКА
7
Иммуносорбент - 2 планшета
Г - 1  амп. или 1
- I амп. или 1
К - 1  амп. или 1
ТМБ - 1  фл,, 5 мл
БСА -1 фл., 1  г
ФСБ-Т.25 - 1  фл., 25 мл
ЦБР - 1  фл., 20 мл
Стоп-реагент - 1  фл., 12 мл
Набор реагентов упаковывают в коробку из картона. В коробку с набором реагентов 
вкладывают инструкцию по применению, нож или скарификатор ампульный (при упаков­
ке ампул, не имеющих кольца излома или точки для вскрытия).


--- стр. 8 ---
С  РОК г о д н о е  г  II. У С  ЛОВИЯ ХРЛНГ.НИЯ и ТРЛМСПОРТИРОВАИИЯ
ср о к ю д ш кч и  -  О  мсс. 1  laoop pcaicmoB с м сгоктим  сроком юлносги исмолк:ома- 
imio ис поллс/КИ I .
Х р а !1и т1, navlop в yiiaKOf^Kc ирслирия i ия-ичго говию ля в г с ч с т ю  всею  срока голиости 
мри геммсрагх рс от 2 л о 8 '^С. Замораживание ие лоиускаегся.
1 раис[ 1оргир^и 1ат[> i! со о гве гсгв и и  с СИ 3.2.  i 248-03 всеми видами Kpi.noco траис- 
iio p i a Ирм ге\и1ера1лре от 2 8 /и т у с к а с г с я  краткч»времеииое (л<' 48 ч )  i paiiciiop i и-
роваиие при тсмпе[Х 1 1 \ ре tvi ло 20 °С. '-{аморалсиваиие ие лоиуекае'!ся.
Рекламации па ка че еню  набора peai enroB. е ооячаге.'и.имм у к а и и т е м  номера cepiHi н 
лап.] ич 1чу[0 вде 1и 1я. наиравлягь в алрес ирел нрия 1и я -и {1 0[ 0 в и1еля -Ф1УП  cd lH O  «M ih \- 
рогси» М иизлравсоцрачнигия 1\)ссии. 115088. г. М осква, ул. 1-я Ду(1ро1кч<ам. л. 1>. 
l e. i. (4^^^ )  7 1  0-37-87.
Л.чрее произволе гиа: Россия. 634040. Томская обласгь. i .  Т о м ск. у:\.  11вано1^ского. л. 8. 
■гел. (3822) 63-37-34,
8
(>! ветс [  BeiHH.n'i ’ .а нр(ЧГ!Волс1 во:
Д иректор (]и 1.шала 
и>ГУ11  (4 1 1  К ) У1икро1’ен»
У Ь т  ’ .’цхик'оцрачви гим Poccm i 
в I  .  TONfCK B4 I. У1орочов
_ 20 1/  I.
ДЧ)ГЛ,\('0ИЛ110»
Зав. )а1(1)елрон клниическон лаГ)ора1'орнау,дицшос1'ики 
I  ON’ Д! К ) «РМЛ1 К ) 1 Ч ^ ч л р : 1 И л о ^ ^ Ж ^
;I.м.и.. н[’кх[)ессор *% ,' М.И. До.и ов 
201


--- стр. 9 ---
в
Прошито, п р о н ^ щ д ^ |щ ^ и т Е Л Ь  
скреплено д и р е к т о р а
_ _ _ |_ _ _ л и ф р ? < № )Н Ш  ................
М ИНЗДРА
п о д о в
с и и
JA A 4 K 0 B