--- стр. 1 ---
IVD• •
АмплиПрайм /
**•••••*
Набор реагентов для экстракции ДНК из биологического материала
«МагноПрайм ВПЧ» по ТУ 21.20.23-060-09286667-2019
«МагноПрайм ВПЧ»
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
у
ООО «НекстБио», Россия, 111394,
г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2,
тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru
--- стр. 2 ---
f
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ .................................................................................3
1. НАЗНАЧЕНИЕ........................................................................................................................................ 4
1.1. Область применения....................................................................................................................4
1.2. Показания к применению...........................................................................................................4
1.3. Противопоказания к применению...........................................................................................4
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ Н АБО РА..........................................................................................................4
2.1. Состав и комплектность..............................................................................................................4
2.2. Принцип метода..............................................................................................................................5
2.3. Функциональные характеристики............................................................................................6
3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА...................................................................................................................... 7
3.1. Отрицательный и положительный контроли экстракции ДНК ....................................7
3.2. Контроль ингибирования........................................................................................................... 7
3.3. Мониторинг лаборатории на наличие контаминации......... ...........................................7
4. ОГРАНИЧЕНИЯ М ЕТО ДА............................................................................................. 8
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ .....................................................8
6. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ..................................................12
6.1. Взятие исследуемого материала......................................................................................... 12
6.2. Предварительная подготовка исследуемого материала............................................12
6.3. При использовании набора совместно с автоматическими станциями для
экстракции Н К ........................................................................................................................................13
6.4. При использовании набора в случае ручной методики экстракции НК .............13
7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ.........................................................................................................14
7.1. Мазки со слизистой оболочки влагалищ а........................................................................15
7.2. Соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала ........................15
7.3. Соскобы эпителия со слизистой оболочки уретры .......................................................15
7.4. Соскобы эпителия со слизистой оболочки лрямой кишки .................................... 16
7.5. Предварительная подготовка исследуемого материала взятого в
транспортную среду для жидкостной цитологии ....................................................................16
8. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА ....................................................18
8.1. Автоматическая методика экстракции ...............................................................................18
8.2. Ручная методика экстракции с использованием магнитного штатива ................20
8.3. Ручная методика экстракции с использованием центрифугирования ................22
8.4. Хранение очищенной Д Н К...................................................................................................... 24
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА ........24
9.1. Срок годности...............................................................................................................................24
9.2. Транспортирование....................................................................................................................24
9.3. Хранение.........................................................................................................................................25
10. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ..................................................................................................25
11. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ................26
--- стр. 3 ---
t список СОКРАЩЕНИИ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
В КО - внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДНКаза - дезоксирибонуклеаза
НК - нуклеиновые кислоты
ОК - отрицательный контроль
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПК - положительный контроль
ПКО - положительный контрольный образец
--- стр. 4 ---
. /
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Предназначен для экстракции ДНК исследуемых возбудителей и ДНК человека из
биологического материала (соскобный материал или отделяемое слизистых
оболочек урогенитального тракта (мазки со слизистой оболочки влагалища, соскоб
эпителия со слизистой оболочки цервикального канала (эктоцервикса и
эндоцервикса, в том числе взятых в транспортную среду для жидкостной цитологии),
соскоб эпителия со слизистой оболочки уретры), прямой кишки) для последующего
исследования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Набор может использоваться для ручной методики выделения НК, или совместно
с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот, при условии, что
запрограммирована последовательность действий, изложенная в инструкции по
применению набора.
1.1. Область применения
Набор используется в клинической лабораторной диагностике для экстракции ДНК
исследуемых возбудителей и ДНК человека из биологического материала для
дальнейшего исследования методом полимеразной цепной реакции для выявления
возбудителей инфекционных заболеваний.
1.2. Показания к применению
Набор используется в комплексном анализе, направленном на выявление
возбудителей инфекционных заболеваний в биологическом материале, полученном
в ходе скрининговых исследований, подтверждения диагноза, мониторинге лечения,
с последующим исследованием экстрагированных образцов методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР).
1.3. Противопоказания к применению
Нарушение целостности упаковки, истекший срок годности, несоблюдение
требований инструкции.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Состав и комплектность
Состав набора и комплектность поставки указаны в таблице 1 и 2 соответственно.
Набор рассчитан на выделение ДНК из 96 образцов, включая контроли.
--- стр. 5 ---
i Таблица 1
Состав набора
Реагент Объем, мл Количество Описание
М-лизин''
Опасно
106,0 1 флакон Раствор для удаления слизи.
Прозрачная жидкость.
Ц-лизин 11,0 1 флакон
Раствор для разрушения
клеточных мембран. Прозрачная
жидкость.
Ф-буфер 106,0 1 флакон Раствор для отмывки клеток.
Прозрачная жидкость.
Опасно
24,0 1 флакон Лизирующий раствор.
Прозрачная жидкость^.
Буфер Е 77,0 1 флакон Раствор для отмывки и элюции.
Прозрачная жидкость.
МГС 1,10 1 пробирка Магнетизированная силика.
Суспензия.
ОКО 1,10 1 пробирка Отрицательный контрольный
образец. Прозрачная жидкость.
BKO-FL 1,10 1 пробирка Внутренний контрольный образец.
Прозрачная жидкость.
Таблица 2
Комплектность набора
Компонент Формат Количество
Набор реагентов - 1
Инструкция по применению набора
в электронном виде на официальном
сайте Производителя по адресу:
http://www.nextbio.ru/reagents/
1
Краткое руководство по применению набора в бумажном виде 1
Паспорт качества
в электронном виде на официальном
сайте Производителя по адресу:
http://www. nextbio. ru/passport/
1
2.2. Принцип метода
Исследуемые образцы, взятые в транслортную среду для жидкостной цитологии,
обрабатываются муколитиком для растворения слизи цервикального канала. Далее
производится отмывка клеток от транспортной среды с помощью буферного раствора
и деструкция клеточных мембран путем их лизиса протеазой, в результате чего
повышается эффективность дальнейшей экстракции ДНК.
Исследуемый образец^ в объеме 100 мкл обрабатывается лизирующим раствором
в присутствии частиц магнетизированной силики - магнитного сорбента. В результате
' Реагенты содержат опасные вещества. Информацию по опасным веществам и мерам
предосторожности при работе с реагентами см. в разделе инструкции «Меры предосторожности и
предупреждения ».
2 При хранении Буфера L возможно образование осадка в виде кристаллов.
^ Для некоторых видов биологического материала требуется помещение материала в транспортную
среду и/или этап предварительной обработки. См. раздел инструкции «Исследуемый материал».
--- стр. 6 ---
происходит деструкция клеточных мембран, вирусных оболочек и других
биополимерных комплексов и высвобождение ДНК. Растворенная ДНК связывается с
частицами сорбента, в то время как другие компоненты лизированного
биологического материала остаются в растворе и удаляются при осаждении сорбента
на магнитном штативе/стержне или с использованием центрифуги и с последующей
отмывкой сорбента. При добавлении буфера для элюции ДНК к магнитному сорбенту
происходит переход ДНК с поверхности силики в раствор, который затем отделяется
от частиц сорбента магнитной силой либо центрифугированием.
2.3. Функциональные характеристики
Чистота выделения ДНК составляет не менее 1,6 при соотношении поглощения при
длинах волн 260 и 280 нм (260/280).
Влияние интерферирующих веществ, потенциально содержащихся или
присутствующих в исследуемом биоматериале, на эффективность экстракции ДНК при
использовании набора «МагноПрайм ВПЧ» отсутствует. Это было показано при
добавлении к образцам биоматериала интерферирующих веществ, представленных в
таблице 18, в максимально возможной концентрации для используемых видов
биоматериала.
Таблица 18
Вид биоматериала Интерферент ; Концентрация
интерферента в образце
соскоб эпителия со слизистой оболочки
цервикального канала (эктоцервикса и
эндоцервикса) в транспортной среде
для жидкостной цитологии
муцин 0,23 мг/100 мкл
гемоглобин 0,20 ммоль/100 мкл
отделяемое слизистой оболочки
урогенитального тракта в транспортной
среде для мазков
мочевина 0,033 ммоль/100 мкл
лубриканты 5 мкг/100 мкл
семенная
жидкость 5 мкг/100 мкл
мирамистин 0,001 % действующего
вещества в 100 мкл
итраконазол 6,5 мкг/100 мкл
метронидазол 5 мкг/100 мкл
дидрогестерон 5 мкг/100 мкл
прогестерон 5 мкг/100 мкл
соскоб эпителия со слизистой оболочки
прямой кишки
гликохолат натрия 11,1 нг/100 мкл
натрий таурохолат
гидрат 3,8 нг/100 мкл
хлорофилл 0,26 мкг/100 мкл
Также при использовании набора «МагноПрайм ВПЧ» не выявлено влияние ДНК
человека на эффективность экстракции ДНК при добавлении к образцам отделяемого
слизистой оболочки влагалища искусственно-синтезированной ДНК человека в
--- стр. 7 ---
максимально возможной концентрации (3,0x10^ копий/100 мкл) для данного вида
биоматериала.
3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контроль этапа экстракции ДНК осуществляется одновременно с оценкой
достоверности результатов этапа амплификации.
3.1. Отрицательный и положительный контроли экстракции ДНК
Для оценки качества получаемых результатов каждая группа экстрагируемых
образцов должна включать контрольные образцы:
отрицательный контроль (ОК) для подтверждения отсутствия
ложноположительных результатов и контроля контаминации. В качестве ОК
используют реагент, входящий в состав набора реагентов для проведения
амплификации;
- положительный контроль (ПК), если он предусмотрен для проведения ПЦР-
исследования. В качестве ПК используют реагент, входящий в состав набора
реагентов для проведения амплификации.
Результаты для контролей должны соответствовать заданным критериям
валидности, указанным в инструкции по применению набора реагентов для
проведения амплификации.
3.2. Контроль ингибирования
Для оценки влияния ингибиторов на результаты амплификации в ПЦР-
исследовании может использоваться экзогенный'* и эндогенный^ ВКО. Экзогенный
ВКО необходимо добавить в каждый исследуемый и контрольный образец согласно
инструкции по применению набора реагентов для проведения амплификации. ВКО
проходит все стадии экстракции совместно с анализируемыми образцами.
Результаты исследования ВКО должны соответствовать заданным критериям
валидности, указанным в инструкции по применению набора для проведения
амплификации.
3.3. Мониторинг лаборатории на наличие контаминации
Рекомендуется раз в месяц проводить мониторинг лаборатории на контаминацию
продуктами амплификации, исследуемыми образцами, положительными
контрольными образцами. Оценка наличия/отсутствия контаминации проводится
'* BKO-FL из набора «МагноПрайм ВПЧ» или ВКО, входящий в состав набора реагентов для проведения
амплификации.
5 В качестве эндогенного ВКО ислользуются мишени, предусмотренные набором реагентов для
проведения амплификации.
--- стр. 24 ---
8.3.2.2. Поместить пробирки в термостат с температурой 60 °С на 10 мин.
8.3.2.3. Перемешать содержимое пробирок на вортексе.
8.3.2.4. Центрифугировать в течение 1 мин при 10 000 д.
8.3.2.5. По внутренней стенке пробирки осторожно отобрать надосадочную
жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник без фильтра
на 200 мкл для каждой пробы.
8.3.2.6. Добавить в пробирки по 500 мкл Буфера Е.
ВНИМАНИЕ! После добавления Буфера Е содержимое пробирок не перемешивать.
8.3.2.7. Центрифугировать в течение 1 мин при 10 000 д.
8.3.2.8. Отобрать надосадочную жидкость аналогично п. 8.3.2.5.
8.3.2.9. Добавить в пробирки от 100 до 250 мкл Буфера-Е (см. инструкцию к
используемому набору реагентов для проведения амплификации), перемешать на
вортексе.
8.3.2.10. Поместить пробирки в термостат с температурой 60 °С на 5 мин,
перемешивая каждые 2 мин.
8.3.2. 11. Центрифугировать в течение 1 мин при 10 000 д.
8.3.2.12. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК. Пробы готовы к
постановке реакции амплификации.
ВНИМАНИЕ! Внесение ДНК в реакцию необходимо провести незамедлительно после
центрифугирования. Если в течение 3 мин после центрифугирования проба не
внесена в реакцию, необходимо провести повторное центрифугирование.
8.4. Хранение очищенной ДНК
Очищенная ДНК может храниться при температуре от 2 до 8 °С в течение недели,
при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 6 месяцев и при температуре
не выше минус 68 °С в течение года. Для этого необходимо, не захватывая
магнетизированную силику, перенести надосадочную жидкость в новую пробирку.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Срок годности
Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После
вскрытия реагенты использовать до истечения срока годности набора. Набор с
истекшим сроком годности применению не подлежит.
9.2. Транспортирование
Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С всеми видами крытых
транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в
авторефрижераторах. Не допускается замораживание реагентов.
--- стр. 25 ---
Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 °С не более 3 суток.
Набор, транспортированный с нарушением указанного температурного режима,
применению не подлежит.
9.3. Хранение
Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение всего срока годности
набора. Не допускается замораживание реагентов.
Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия.
Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на
этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Смесь, приготовленную из
Буфера L, BKO-FL и МГС, хранить при температуре от 2 до 8 °С не более 2 месяцев.
Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не
подлежит.
10. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного
срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и
применения.
Рекламации на качество набора реагентов «МагноПрайм ВПЧ» направлять в адрес
производителя ООО «НекстБио»: 111394 г. Москва, ул. Полимерная, 8 стр. 2, тел.
(495) 620-08-73, e-mail:
info@ nextbio.ru .
При выявлении нежелательных реакций при использовании набора, фактов и
обстоятельств, создаюгцих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при обращении и эксплуатации набора, рекомендуется направить
сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную
регулирующую организацию (в Российской Федерации - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Консультацию по работе с набором, а также по вопросам, касающимся качества
набора, можно получить по контактам, указанным на официальном сайте
Производителя; www.nextbio.ru .
--- стр. 26 ---
11. символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ в ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
REF Номер по каталогу
«J
Изготовитель
LOT Код партии ^лллГ Дата изготовления
IVD
Медицинское изделие для
диагностики i n v i t r o Использовать до
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
Температурный диапазон
т
Обратитесь к инструкции
по применению Символы опасности
А
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по применению