Реагенты in vitro для определения хромосомных перестроек методом флюоресцентной гибридизации (FISH) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- w «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ИНСТРУКЦИЯ по применению Реагентов in vitro для определения хромосомных перестроек методом флюоресцентной гибридизации (FISH) производства: «Цитоселл Лтд»« Великобритания (Cytocell Ltd) 1.НАЗНАЧЕНИЕ 2.ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип действия 2.2. Состав набора 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 5 . ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ 7 . ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 8 . РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ К). УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА --- стр. 2 --- 1.Назначение Реагенты CytocelF'^ производства ЦитоСелл Лтд. используются для выявления соответствующих ДНК последовательностей в интерфазных хромосомах или на метафазных пластинках в исследуемых клеточных образцах для определения хромосомных перестроек методом флюоресцентной гибридизации (FISH). 2. Характеристика реагента 2.1 Принцип действия Флюоресцентная in situ гибридизация (FISH) позволяет определить хромосомные перестройки в образцах клеток с использованием специфичного ДНК-фрагмента. Флюоресцентно меченый ДНК-фрагмент представляет собой нуклеотидную последовательность ограниченного размера, комплементарн>то определенному участку ядерной ДНК. Связываясь с соответствующими последовательностями ДНК в исследуемом образце, ДНК- фрагмент позволяет выявить локализацию этих последовательностей. Результаты исследования наблюдают и регистрируют с использованием флюоресцентного микроскопа. 2.2 Состав набора Peai eH T содержит смесь меченных флюоресцентным красителем фрагментов ДНК в гибридизационном буфере, а также краситель для хромосом DAPI. 3. Аналитические и диагностические характеристики Данные реагенты необходимы для определения специфичных хромосомных пересгроек, играющих важную роль в развитии ряда онкогематологических заболеваний. Выявление хромосомных перестроек играет значительную роль диагностике и выборе необходимой терапии для пациента. 4. Меры предосторожности • Продукт предназначен для диагностики in vitro. • Используйте перчатки при работе с реагентом. • Раствор пробы содержит формамид, обладающий тератогенным эффектом; не вдыхайте пары, избегайте контакта с кожей. При работе используйте перчатки, лабораторный халат, используйте для работы вытяжной щкаф. При попадании реагента на кожу смыть большим количеством воды. • Краситель DAPI является потенциальным канцерогеном. Работайте с соблюдением методов предосторожности: используйте перчатки и лабораторную одежду. При попадании реагента на кожу смыть большим количеством воды. • Соблюдайте инструкции по работе с опасными материалами; нормативные документы по утилизации опасных отходов. 5. Оборудование и материалы Для приготовления цитогенетических препаратов необходимы следующее оборудование и материалы: 1) нагревательный столик с контролем температуры на 80^С 2) лабораторная посуда 3) микропипетки объемом 1-200 мкл 4) водяная баня с контролем температуры 5) пробирки для центрифугирования объемом 0,5мл 6) флюоресцентный микроскоп i --- стр. 3 --- 7) стаканчики для отмывки стекол 8) пинцет 9) иммерсионное масло для флюоресцентного микроскопа 10) настольная центрифуга 6. Анализируемые образцы Образцы клеток периферической крови, костного мозга, культивируемых клеток 7. Проведение анализа: подготовка образцов 1) Для приготовления образцов клеток периферической крови человека и костного мозга клетки необходимо фиксировать с помощью жидкости Карнуа в соответствии с протоколом подготовки стандартных цитогенетических препаратов, нанести на предметные стекла, высушить образцы. 2) Промыть подготовленные образцы в цитратном буфере (2х SSC). 3) Дегидратировать препарат проведением через серию спиртов (70%, 85%, 100% по 2 минуты при комнатной температуре). Высушить. пре-деиатура ц ия 4) реагент, хранящейся при температуре -20^С, разморозить при комнатной температуре, перемещать пипетированием. 5) 10 мкл реагента нанести в пробирку для микроцентрифугированиия и прогреть при температуре 37^ С 10 минут 6) нанести 10 мкл пробы на образец и аккуратно закрыть покровным стеклом. Нанести по краю покровного стекло изолирующий клей, денатурация I) Денатурировать образец и пробу нагреванием на столике при температуре 7 5 * ^ С 2 минуты. гибридизация 8) Поместить образцы во влажную темную камеру при температуре 37^ С на 12 часов. отмывки 9) Осторожно удалить клей и покровное стекло с препарата 10) промыть стекла с образцами в 0,4х SSC (pH 7,0) при температуре 72 С в течение двух минут. II) промыть буфером (2х SSC, 0,05%Tween-20 (pH 7,0)) при комнатной температуре в течение 30 секунд. 12) Высушить стекла с образцами, нанести 10 мкл раствора для заключения. 13) Закрыть образец покровным стеклом, поместить в темное место. 8 . Регистрация результатов Готовые препараты анализируются с помощью флюоресцентного микроскопа, с использованием соответствующих фильтров для регистрации флюоресцентных сигналов. Оценивается цвет, количество и расположение флюоресцентного сигнала, указывающее на наличие хромосомной перестройки. 9 . Учет результатов реакции В состав каждого реагента входят ДНК-фрагменты к регионам возможной хромосомной перестройки, а так же фрагмент ДНК маркирующий соответствую хромосому. Таким образом каждая проба содерл<ит внутренний контроль. Регистрация всех необходимых флюоресцентных сигналов свидетельствует о достоверности результатов исследования,