Набор реагентов для выявления антител к основному предраннему белку цитомегаловируса "БиоСет-актив-ЦМВ" по ТУ 9398-010-10839330-2011 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«У Т В Е РЖ Д Е Н А » h
Приказом Р осздравн адзора f < ьн Ж 'ди рек тор
осорвис»
Океания А .С .
о т___________2 0 1_г. № ________ ____201 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по прим енению набора реагентов
для в ы я в л ен и я ан ти тел к основному предраннем у белку ци том егаловируса
«Б иоС ет-актив-Ц М В »
1. Н А ЗН А Ч Е Н И Е
Набор реагентов «БиоСет-актив-ЦМ В» предназначен для выявления антител к
основному предраннему белку ЦМВ в активной стадии инфекции в сыворотке или плазме
крови человека методом иммуноферментного анализа.
2. Х А Р А К Т Е РИ С Т И К А Н А БО РА
2.1. ПРИНЦИП М ЕТОДА
На поверхности лунок разборных полистироловых планшетов иммобилизованы
рекомбинантный полипептид - аналог основного предраннего белка цитомегаловируса
(«АгЦМВ») и р-галактозидаза Е. соИ в качестве контрольного антигена («Кдг»).
П о ло ж и тел ьн ы й к о н тр о л ьн ы й образец и н ак ти в и р о в ан н ы й К^ представляет
собой сыворотку крови человека, содержащую антитела IgG к основному предраннему
белку цитомегаловируса и не содержащую антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С,
антигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg. Инактивирован прогреванием при температуре от +54 до
+56 °С в течение 3 ч.
О тр и ц ател ьн ы й к о н тр о л ьн ы й образец и н ак ти в и р о в ан н ы й КГ представляет
собой сыворотку крови человека, не содержащую антител IgG к основному предраннему
белку цитомегаловируса, не содержащую антител к белкам возбудителя сифилиса
T re p o n e m a p a llid u m , к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, антигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg.
Инактивирован прогреванием при температуре от +54 до +56 ° С в течение 3 ч.
К онъ ю гат представляет собой моноклональные антитела мыщи против IgG
человека, связанные с ферментом пероксидазой хрена. Поставляется в виде концентрата.
Раствор № 4 д л я разведения хром огена содержит субстрат ферментативной
реакции.
Х ром огеном является 3,3',5,5'-тетраметилбензидин.
1
--- стр. 2 ---
С топ-реагспт представляет собой 1 М раствор серной кислоты.
Исследуем 1лс сыворотки тестируются одновремеппо в двух параллельных лунках, в
которых раздельно иммобилизованы рекомбинантный белок ЦМВ и контрольный
антиген. При инкубации образцов сыворотки в лунках планшета специфические к
основному иредраннему белку цитомегаловируса антитела связываются с
рекомбинантным антигеном на твердой фазе, образуя иммунные комплексы
ан гиген-антитезю, и не взаимодействуют с контрольным антигеном, иммобилизованным в
наралле;п,ной лунке. После удаления несвязавшихся антител в лунки добавляют конъюгаг
- мышиные моноклональные антигела к Fc-фрагменту IgG человека, меченные
нероксидазой хрена, - который взаимодействует с комплексом антиген-антитело. После
удаления несвязавшегося конъюгата в лунки планшета добавляют индикаторный раствор,
включающий субстрат и хромоген 3,3',5,5'-теграметилбензидин. Ферментативная реакция
пероксидазы с хромогеном приводит к образованию окрашенного продукта,
интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации антител к основному
предраннему белку ЦМВ в исследуемом образце. После остановки реакции стон-
реагентом интенсивность окрашивания раствора измеряют на спектрофотометре по
он тическому попю щ ению при Д]шне волны 450 нм (длина bojhibi сравнения 620-650 нм).
2.2. СОС ГАВ НАБОРА
В состав набора входят следующие компоненты, упакованные в коробку;
Компонент
Иммуносорбент
Положительиый контрольный
образец инактивированный К
Отрицательный контрольный
образец инактивированный
Конъю гат
Конпеитрат
раствора № 1 для промывания
планшетов {'^25)
Раствор № 2
для разведения сывороток
Рас твор № 3
для разведения конъю гата
Описание
Разборный 96-луночный планшет для
иммунологических реакций с прозрачным
плоским дном лумок.______________________
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость розового цвета.
________________
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость синего цвета.
Опалесцирую щ ая ж идкость светло-жс]ттого
цвета.
Пенящаяся прозрачная или опалесцирующая
бесцветная жидкость, при хранении возможно
расслоение и выпадение кристаллического
осадка, растворяющегося при температуре о т +35
°С до +37 °С в течение 30 м инут. ___________
Пенящаяся опалесцируюпщя бесцветная
жидкость, при хранении допускается выпадение
рыхлого комкую щ егося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося при
встряхивании. _______________ __________________
Прозрачная или опалесцирую щ ая бесцветная
пенящаяся жидкость, при хранении допускается
выпадение р ьш ю го комкуюгцегося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося при
встряхивании._____________________________________
Количество
шт.
0,2 мл
1 пробирка
0,2 мл
1 пробирка
от 0,5 до 1,5
мл
1 пробирка
25 мл
1 флакон
13 мл
1 флакон
13 мл
1 флакон
--- стр. 3 ---
Раствор № 4 для разведения Прозрачная бесцветная жидкость.
хромогена
Хромоген Прозрачная бесцветная жидкость.
Стоп-реагент Прозрачная бесцветная жидкость.
13 м л
_ 1 флакон
1 ,3 м л
_ 1 iyw бирка
8 м л
флакон
флакономНо запросу клиента набор дополнительно укомплектовывается
концеп'грага раствора № 1 для проведения анализа на автоматическом ИФА-анализагорс.
(Здин набор рассчитан на проведение 48 анализов сыворотки (плазмы), включая
кон'грольиыс.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.
Чувствительность набора составляет 100 % для положительных сывороток
стандартной панели предприятия СПИ «БиоСо-актив-ЦМВ», содержанщх и не
содержащих ашитела IgG к основному предраннему белку цитомс 1аловируса.
Максимальное разведение сгандаргного образца предприятия СОИ К \ при котором
регистрируется положительный результат анализа, составляет не менее 1:40.
Специфичность набора составляет 100 % для огрицательн 1лх сывороток
стаидаргной панели предприятия СПП «БиоСет-актив-ЦМВ», содержащих и не
содержащих антитела IgG к основному предраннему белку цитомегаловируса. Среднее
значение оптической нлогносги при 450 пм для стандартного образца предприятия СОП
К' по трем лупкам с АгЦМВ не превышает 0,20 о.е.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Со всеми тестируемыми образцами, сточными растворами, а также с
оборудованием и материалами, находящимися с ними в контакте, следует
о5раща1ься как с потенциально инфицированными объектами:
“ не пинетировать растворы ртом, при работе использовать индивидуальные средс гва
защиты (резиновые перчатки и защитные очки);
- все отрабоганпые растворы и отходы после заверше1Н1Я анализа обрабагывагь в
соотвегс гвии с усгановленными нормами безопасности (например, в течение 16-18 часов в
растворе гинохлорита натрия в конечной концентрации 1 %);
- все твердые отходы сбрасывать в специальный контейнер с пломбируемой крьпакой
и затем подвергать автоклавированию в течение 60 мин при +121 °С или сжигать;
- инструменты и оборудование до и после работы протирать 70 %-м раствором
этилового спирта;
- у тилизировать отходы, соблюдая законодательство по охране окружающей среды.
3
--- стр. 4 ---
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ
АНАЛИЗА
- дисч иллированная или деионизированная вода;
- дезинфицирующие растворы, соответствующие санитарным требованиям;
- резиновые нерчатки;
- снирт этиJЮвый;
- ииноки о/щоканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие
отбирагь объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные но значению средней
доз 1 > 1 и сходимости результатов нинетирования (погрешность не более 3 %);
- пинетки 8- или 12-канальные автоматические со сменными наконечниками,
позволяющие отбирать объемы жидкостей от 10 мкл до 100 мкл, агтестованные но
значению средней дозы и сходимости результатов нинетирования (ногренп 10сть не более
3 %);
- ценгрифуга настольная на (3-10) тыс. об/мин для получения и осветления образцов
сыворотки/плазмы крови в микронробах;
- микронробирки полипропиленовые чистые или планшеты для микротитрования (не
использованные ранее!) для предварительного отбора испытуемых образцов;
- пробирки центрифужные полипропиленовые вместимостью (1,5-2,2) мл для хранения
и осве пюния образцов сыворо гки/нлазмы;
- мерный стакан или цилиндр вместимостью (250-500) мл;
- мерная носуда вместимостью до 25 мл;
- ванночки для peai cH TO B или сгеклянные чашки Петри;
- воздушный термостат на +37 °С;
- крьиики для планшетов или липкая пленка для закрывания планшетов при инкубации;
- аппарат для промывания планшетов;
- спектрофотометр для измерения оптического поглощения в лунках планшета при
Ajmne B O jn n .i 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм);
- контейнер для сброса твердых отходов;
- контейнер для слива использованных жидкостей;
- контейнер для инактивации отходов;
- вата гигроскопическая;
- филь тровальная бумага;
- пленка нoлиэтиJюнoвaя.
--- стр. 5 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для проведения анализа используются образцы сыворотки или плазмы крови
человека в объеме 50 мкл.
Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готови ть и
хранить в условиях, нредотвращаюищх бактерисшьный пророст. Следует осветлять
образцы, содержащие агрегаты и осадок, центрифугированием (10±1) мин при (2500-3000)
об/мии. Собранные образцы сыворотки/нлазмы хранить при температуре от 14 °С до
+6 °С. Если образцы невозможно протестировать в течение 72 ч, то их следует хранить
при температуре не выше -15 °С. При этом рекомендуется замораживать и оттаиват]>
образцы не более одного раза.
Исследование образцов с выраженным гемолизом. гиперлинидемией,
бактериальным проростом, а также длительно хранившихся без замораживания, может
привести к получению ложных результатов.
6.1. С целью одновременного внесения испытуемых образцов в рабочий планшет с
иммупосорбе 1тгом следует предварительно внести по 50 мкл образцов сывороток в лунки
дополнит ельного планнюта, не содержащего иммуносорбента.
Каждый исследуемый образец njm буферный раствор необходимо отбирать новым
наконечником.
ВНИМАНИЕ!
Нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их в
процессе нриготовления растворов!
При инкубациях не располагать планшеты стопкой!
Анализ проб следует проводить так, чтобы в случае огсутствня
автоматического анализатора па одного оператора одновременно приходилось не
более четырех планшетов.
7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ.
Условия и сроки хранения компонентов набора после вскрытия индивидyaJПJHoй
упаковки приведены в таблице № I;
Таблица № 1.
Компонен т набора Условия хранения Срок хранения
Иммуносорбент от +2 °С до +8 °С в
плотно закрытом
пакете
8 недель
--- стр. 8 ---
в
с
D
Е
F
G
Н
№1
№13
№13
№25
№25
№37
№37
№2
№14
№14
№26
№26
№38
№38
№3
№15
№15
№27
№27
№39
№39
№4
№16
№16
№28
№28
№40
№40
№5
№17
№17
№29
№29
№41
№41
№6
№18
№18
№30
№30
№42
№42
№7
№19
№19
№31
№31
№43
№43
№8
№20
№20
№32
№32
№44
№44
№9
№21
№21
№33
№33
№45
№45
№10
№22
№22
№34
№34
К"
К "
№11
№23
№23
№35
№35
К
К
№12
№24
№24
№36
№36
КК
к к
К ' л [
A rU M ll
К л ,
л,цмв|
К л ,
л,цмв
К л ,
8.2.2. В случае использования отдельных модулей из трех стринов планшета.
По 10 мкл каждой испытуемой сыворотки внести в две лунки вертикшнлюго ряда,
как показано на рис. 2. В лунки G1, Н1 внести но 10 мкл контрольной сыворотки в
лунки 0 2 , Ы 2 внести но 10 мкл К"; в лунки G3, ИЗ сывороток не вносить (коитрол 1>
конъюгата).
Перемешать содержимое лунок нипетированием или на встряхивателе.
Рис. 2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
А № 1 №2 №3 №10 №11 №12 №19 №20 №21 №28 №29 №30
В № 1 №2 №3 №10 №11 №12 №19 №20 №21 Хо28 №29 №30
С №4 Х у5 №6 №13 №14 №15 №22 №23 №24 №31 №32 №33
D №4 №5 №6 №13 №14 №15 №22 №23 №24 №31 №32 №33
Е №7 №8 №9 №16 №17 №18 №25 №26 №27 №34 №35 №36
F №7 №8 №9 №16 №17 №18 №25 №26 №27 №34 №35 №36
К" К К К К^ К^ К К Г К К К К" К К К
1 1 К" К К К К" К К К К" К* К К к Т К кк
л.цмв
К л ,
л.цмв
К л ,
л.цмв
К ' л 1
л,цмв
К 'л г
Планшет накрыть чистой сухой крышкой или заклеить пленкой и выдержать в
гечение 30 минут при температуре (-+37±1) °С.
Полезно поместить каждый планшет в полиэтиленовый пакет. Это обеспечит
одинаковую влажность и позволит избежать краевых эффектов.
8.3. Промывание.
--- стр. 9 ---
Удалить жидкость из лунок с помощью промывателя. Промыть лунки планшета 5-
кратно рабочим раствором № 1 (см. п. 7.1.), внося в лунки по 250 m k j[ раствора и
выдерживая его в лунках не менсс 20 секунд. Elocjte промывания тщательно удалигь влагу
из планн 1ета, как описано в п. 8,1.
ВНИМАНИЕ! Недостаточное промывание планшетов моэкхт привести к
получению лож ных результатов.
8.4. Во все лунки планшета внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата (п.
7.2.), Планшет закрыть сухой крышкой или заклеить новым листом пленки и выдержать в
течение 30 мин при температуре (+37+1) °С,
8.5. Промывание. Повторите процедуры, описанные в п. 8.1.
8.6. В каждую лунку планшета внссти по 100 мкл индикаторного раствора (п. 7.3.).
Планнют поместить в защищенное от света место на 15 мин при темнерагуре от ^-l 5 °С до
+25 °С.
8.7. Остановить пероксидазпую реакцию путем внесения во все лунки по 50 мкл
с'1'оп-рсагента и немедленно провести учет результатов,
9. РЕГ ИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерение оптической плотности (011) проводить при длине Bojnibi 450 нм.
Рекомендуемая длина волны сравнения (620-650) пм. Выведение спектрофогометра на
пулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.
9.1, Учег результатов исследования проводить при соблюдении слсдуюпщх условий:
ОПсрК'* по Кдг не более 0,30
ОПсрК^ по АгЦМВ не менее 0,80
ОПсрК" по АгЦМВ не более 0,30
ОПсрК по Кдг не более 0,30
ОПсрКК по двум лункам не более 0 ,15
При получении иных показателей исследование повторить,
9.2, Для каждого исследуемого образца определить «величину превышения» (Л)
разницу между 011 по АгЦМВ и ОП по Кдг:
А = ОП АгЦМВ ^ ОП Кл 1
Pc3yjtbraT исследования считается п о л о ж и т е л ь н ы м , если «величина превышения» для