Набор реагентов для выявления антигенов вируса Западного Нила и антител к нему методом иммуноферментного анализа "БиоСкрин-ВЗН" по ТУ 9398-012-10839330-2011 в составе — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА»
Приказом Росздравнадзора
от « » 201 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ЗАО Б^ЗйьЁйасебвис»
Океании А.С.
201 /г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления
антигенов вируса Западного Нила и антител к нему
методом иммуноферментного анализа
«БиоСкрин-ВЗН»,
комплект «АС»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Комплект «АО» набора реагентов «БиоС крин-В ЗН » предназначен для выявления антигенов
вируса Западного Н ила (ВЗН ) в полевы х и клинических м атериалах: ком арах, органах погибш их
лю дей, органах позвоночны х ж ивотны х.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. П РИН ЦИП М ЕТО Д А
На поверхности лунок полистиролового планш ета им м обилизованы поликлональные
мыш иные им м уноглобулины класса G против ВЗН (С -лунки) и им муноглобулины , полученные от
неимм унизированны х м ы ш ей (К -лунки). К аж дый образец тестируется в двух параллельных
лунках. Если в исследуемом образце присутствую т вирусны е антигены , то при инкубации
произойдет их связы вание с lgG -антителам и против ВЗН в С -лунках, в К-лунках связывания
специфических антител не происходит. После отм ы вания вносят конъю гат, представляю щ ий
собой мыш иные поликлональны е антитела к ВЗН, м еченны е пероксидазой хрена. После удаления
несвязанных молекул конъю гата в лунки планш ета добавляю т индикаторны й раствор,
вклю чаю щ ий субстрат и хром оген 3,3',5,5'-тетрам етилбензидин. Ф ерментативная реакция
пероксидазы с хром огеном приводит к образованию окраш енного продукта, интенсивность
окраски которого п ропорциональна концентрации антигенов ВЗН в образце. После остановки
реакции стоп-реагентом интенсивность окраш ивания раствора изм еряю т на спектроф отометре по
оптическому поглощ ению при длине волны 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм).
--- стр. 2 ---
2.2. СО СТА В Н А БО РА
В состав набора входят следую щ ие ком поненты , упакованны е в коробку:
Компонент Описапие Количество
Иммуносорбент Разборный полистироловый 96-луночный
планшет для иммунологических реакций с
прозрачным плоским дном лунок.
2 шт.
Положительный контрольный
образец инактивированный К^АС
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость розового цвета или бесцветная.
0,3 мл
1 пробирка
Отрицательный контрольный
образец инактивированный ITAG
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость синего цвета или бесцветная.
0,3 мл
1 пробирка
Конъюгат Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
от 0,25 до 1,5 мл
1 пробирка
Концентрат раствора № 1
для промывания планшетов (х25)
Пенящаяся прозрачная или опалесцирующая
бесцветная жидкость, при хранении
возможно расслоение и выпадение
кристаллического осадка, растворяющегося
при температуре от +35 °С до +37 °С в
течение 30 минут.
25 мл
2 флакона
Раствор № 2
для разведения образцов
Прозрачная или опалесцирующая
бесцветная пенящаяся жидкость, при
хранении допускается выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной
интенсивности, легко разбиваю 1цегося при
встряхивании.
26 мл
2 флакона
Раствор № 3
для разведения конъюгата
Прозрачная или опалесцирующая
бесцветная пенящаяся жидкость, при
хранении допускается выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося при
встряхивании.
26 мл
1 флакон
Раствор № 4
для разведения хромогена
Прозрачная бесцветная жидкость. 25 мл 1 флакон
или
13 мл 2 флакона
Хромоген Прозрачная бесцветная жидкость. 2,5 мл
1 пробирка
Стон-реагент Прозрачная бесцветная жидкость. 15 мл
1 флакон
Планшет
для предварительного разведения
образцов
Цельный или разборный полистироловый
96-луночный планшет с прозрачными
бесцветными лунками с плоским дном.
1 шт.
Ванночка
для разведения реагентов
Ванночка из поливинилхлорида для 8-ми
канального дозатора.
2 шт.
Пленка
для заклеивания планшета
Самоклеющаяся влагонепроницаемая
пленка.
2 шт.
Один набор рассчитан на проведение 96 анализов полевы х м атериалов (комары, клещ и),
вклю чая контрольные.
--- стр. 3 ---
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА. МЕРЫ
ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Ч увствительность набора по образцам стандартной панели предприятия, содерж ащ им
антигены ВЗН, составляет 100 %.
С пециф ичность набора по образцам стандартной панели предприятия, не содерж ащ им
антигенов ВЗН, составляет 100 %.
Специфический антигеиный компонент набора pcai енгов полностью инактивирован и
не содержит инфекционного вируса, однако нри обследовании нолевых или клинических
материалов необходимо соблюдать меры нредосторожности и обращаться с образцами,
сточными растворами, а также с оборудованием и материалами, находящимися с ними в
контакте, как с потенциально инфекционными в соответствии Санитарными правилами
(СП 1.2.011-94) «Безопасность работы с микроорганизмами 1-П групп патогенности»:
- работать в резиновы х перчатках, за защ итны м экраном;
- не пипетировать растворы ртом, при работе использовать индивидуальны е средства защ иты
(резиновые перчатки и заищ тны е очки);
- все отработанны е растворы и отходы после заверш ения анализа обрабаты вать в
соответствии с установленны м и норм ам и безопасности (наприм ер, в течение 16-18 часов в
растворе гипохлорита натрия в конечной концентрации 1 %);
- все тверды е отходы сбрасы вать в специальны й контейнер с пломбируемой крыщ кой и
затем подвергать автоклавированию в течение 60 мин при +121 °С или сж игать;
- инструм енты и оборудование до и после работы протирать 70 % -м раствором этилового
спирта;
- утилизировать отходы , соблю дая законодательство по охране окруж аю щ ей среды.
4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
- дистиллированная или деионизированная вода;
- дезинф ицирую щ ие растворы , соответствую щ ие санитарны м требованиям ;
- резиновы е перчатки;
- спирт этиловы й;
- пипетки одноканальны е автом атические со см енны м и наконечникам и, позволяю щ ие
отбирать объем ы ж идкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аггестованны е по значению средней дозы и
сходимости результатов пипетирования (погреш ность не более 3 % );
--- стр. 4 ---
- пипетки 8- или 12-канальны е автом атические со см енны м и наконечникам и позволяю щ ие
отбирать объем ы ж идкостей от 10 мкл до 100 мкл, аттестованны е по значению средней дозы и
сходимости результатов нипетирования (погреш ность не более 3 % );
- центриф уга настольная на (3-10) тыс. об/мин для получения и осветления образцов;
-п р о б и р к и центриф уж ны е полипропиленовы е вм естим остью (1,5-2,2) мл для получения,
хранения, осветления образцов;
- мерны й стакан или цилиндр вм естим остью (250-500) мл;
- мерная посуда вм естим остью до 25 мл;
- воздуш ны й терм остат на +37 ° С;
- аппарат для пром ы вания планп 1етов;
- спектроф отом етр для изм ерения оптического гю глош ения в лунках планш ета при длине
волны 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм);
- контейнер для сброса тверды х отходов;
- контейнер для сли ва использованны х ж идкостей;
- автоклав для инактивации отходов;
- вата гигроскопическая;
- ф ильтровальная бумага.
5. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
5.1. П риготовление суспензии комаров.
Комаров исследовать в пробах, содерж ащ их, в зависим ости от целей исследования, от 1 до
20 экземпляров. Д ля приготовления суспензии тщ ательно растереть комаров пестиком в
фарфоровой ступке, добави ть к гом огенату ф изиологический раствор из расчета 0,4 мл на 20
комаров. П олученную суспензию развести равны м объем ом раствора № 2. Для исследования в
ИФА использовать надосадочную ж идкость (после отстаивания суспензии в течение 2-5 часов при
температуре +4 С или центриф угирования при 3000 об/м ин в течение 5-7 мин).
5.2. П риготовление суспензий из органов ж ивотны х и лю дей.
Кусочки органов ж ивотны х и лю дей растереть в ф арф оровой ступке. К гомогенату добавить
ф изиологический раствор из расчета 0,2 мл на 1 г биологического материала. П олученную
суспензию развести равны м объем ом раствора № 2. В И Ф А использовать надосадочную ж идкость
(после отстаивания суспензии в течение 2-5 часов при тем пературе +4 С).
Пробы, подготовленны е для анализа, в случае необходим ости, мож но хранить при
температуре не вы ш е - 2 0 С.
--- стр. 5 ---
Каждый исследуем ы й образец или буферны й раствор необходим о отбирать новым
наконечником.
ВНИМАНИЕ!
Нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их в
процессе приготовления растворов!
При инкубациях не располагать планшеты стопкой!
Анализ проб следует проводить так, чтобы в случае отсутствия автоматического
анализатора на одного оператора одновременно приходилось не более четырех планшетов.
6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ (для проведения 16 анализов).
У словия и сроки хранения ком понентов набора после вскры тия индивидуальной упаковки
приведены в таблице № 1:
Табл. № 1
Компонент набора Условия хранения Срок хранения
Иммуносорбент от +2 °С до +8 °С в плотно
закрытом пакете______________
8 недель
K‘AG, К AG, конъюгат, концентрат
раствора № 1, растворы № 2, № 3, № 4,
хромоген _______________________________
от +2 °С до +8 °С 8 недель
Стоп-реагент от +2 °С до +8 °С до окончания срока
годности набора
П еред началом работы набор необходим о вы держ ать при ком натной тем пературе 30 минут.
Растворы № 2, № 3, стоп-реагент поставляю тся в готовом виде. П еред использованием
флаконы с растворам и № 1, № 2, № 3 интенсивно встряхнуть.
6.1. П риготовление рабочего раствора № 1 для пром ы вания планш етов.
С одерж им ое ф лакона с концентратом раствора № 1 интенсивно встряхнуть. При выпадении
в концентрате кристаллов, его следует прогреть при тем пературе от +35 °С до +37 °С до полного
растворения. 2 мл концентрата раствора № 1 перенести в м ерную ем кость, довести объем до метки
50 мл дистиллированной водой и тщ ательно перемеш ать.
Готовый раствор хранить не более 24 ч при тем пературе от +4 °С до +12 °С или 4 часа при
температуре от +18 °С до +24 °С.
6.2. П одготовка рабочих разведений контрольны х образцов (K^AG, K 'A G ).
Из пробирки с каж ды м контрольны м образцом отобрать 0,05 мл, перенести в чистую
пробирку и добавить 0,45 мл раствора № 2.
6.3. П риготовление рабочего разведения конъю гата.
Из пробирки с конъю гатом отобрать 40 мкл в чистую ем кость и добавить 4 мл раствора № 3.
Тщ ательно перемеш ать.
--- стр. 6 ---
Готовый раствор рабочего разведения конъю гата хранить не более 15 мин при температуре
от +9 °С до +25 °С в защ ищ енном от света месте.
6.4. П риготовление индикаторного раствора.
О тобрать 4,0 мл раствора № 4, пом естить в чистую ем кость и добавить 0,4 мл хромогена.
Тщ ательно перемещ ать.
Готовы й раствор хранению не подлеж ит.
ВНИМАНИЕ! Посуду и наконечники пипеток, контактирующие с раствором хромогена,
буферной смесью с гидроперитом и индикаторньш раствором, нельзя отмывать с применением
синтетических мою щ их средств, поскольку даж е их следы приводят к неконтролируемому
разлож ению хромогена в ходе пероксидазной реакции. Избегать такж е контакта раствора
хромогена с металлом.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
О свободить планш ет из упаковки и оставить в каретке необходим ое количество стрипов.
О стальны е стрипы пом естить обратно в пакет и хранить в соответствии с условиями, указанными
в таблице № 1.
7.1. Внесение контрольных и испытуемых образцов
Для каждого исследуемого образца использовать две параллельные лунки, обозначаемые в
дальнейщем как С-лунка и К-лунка (см. табл. № 2).
В две С-лунки и в две К-лунки внеста по 100 мкл каждого контрольного образца (К^ и I Q в рабочем
разведении.
В свободные лунки внести приготовленные исследуемые образцы.
Табл. № 2.
Реком ендуем ая схем а внесения
контрольны х и испы туем ы х образцов.
1 2 3 4
А
В
С
D
Е
F
G
Н
K"AG К AG № 5 № 5
К 'AG K"AG № 6 № 6
к Ч о k 4 g № 7 № 7
K^AG K^AG № 8 № 8
№ 1 № 1 № 9 № 9
№ 2 № 2 № 10 № 10
№ 3 № 3 № 11 № 11
№ 4 № 4 № 12 № 12
С-лупки К-лунки С-лунки К-лунки
--- стр. 7 ---
Планшет заклеить листом пленки и вьщержать в течение 60 мин при температуре (+37±1) °С.
7.2. Промывание.
Удалить жидкость из лунок с помощью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет трехкратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося в лунки по 250 мкл раствора и
выдерживая раствор в лунках не менее 20 с.
7.3. Во все лунки планшета внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата (п. 6.3.).
Планшет заклеить новым листом пленки и выдержать в течение 60 мин при температуре (+37±1)
°С.
7.4. Промывание.
Удалить жидкость из лунок с помошью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет шестикратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося в лунки по 250 мкл раствора и
выдерживая раствор в лунках не менее 20 с.
ВНИМАНИЕ! Недостаточное промывание планшетов может привести к получению
ложных результатов.
7.5. В каждую лунку планшета внести по 100 мкл индикаторного раствора (п. 6.4.). Планшет
поместить в защишенное от света место на 15 мин при температуре от +15 °С до +25 °С.
7.6. Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 50 мкл стоп-
реагента и немедленно провести учет результатов.
8. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерение оптической плотности (ОП) проводить при длине волны 450 нм. Рекомендуемая
длина волны сравнения (620-650) нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк»)
осуществлять по воздуху.
8.1. Результаты измерения, полученные на контрольных образцах должны удовлетворять
следующим требованиям:
среднее значение ОП в С-лунках с положительным контролем не менее 0,60
среднее значение ОП в К-лунках с положительным контролем не более 0,20
среднее значение ОП в С-лунках с отрицательным контролем не более 0,20
среднее значение ОП в К-лунках с отрицательным контролем не более 0,20
При получении ины х показателей исследование повторить.
8.2. Рассчитать среднее арифметическое значение ОПсрК”AG для K'AG по двум С-лункам.
Исследуемый образец считается положительным, если:
1. ОП в С-лунке > 0,35 о.е.
2. ОП в С-лунке > ЗхОПсрК'АО
3. ОП в С-лунке > ЗхОП в К-лунке
4. ОП в К-лунке < 0,3 о.е.
--- стр. 8 ---
1{сли oil для исследусмот обрапщ в К-луике iipeBi.iiiiaei 0,3 о.с.. то гакой рсчулыаг ис
учигывастся.
9. УСЛОВИЯ ХРАНКЛИЯ И ЗК( 11ЛУЛ ГЛЦИИ ПЛЬОРА
Набор трансиоргируюг и храня! в соогвегствии с С ’П 3.3.2.1248-03 ири гсмисратурс
0 1 12 °С до 18 °С'. Замораживание ие допускается. Допускается rpancnopmpoBainic в
гечепие 3 су ток при icMneparype от i 9 °С до 125 °С\
Условия отпуска: для диагностики in vitro в лечебпо-иро(|)илакгических и сани гарпо-
нро] ивоэнидемиоло 1 ических учреждениях.
Рекламации на качество набора необходимо направлять в ЗЛО НТК «Ьиосервис» по
адресу: 115088, г. Москва, а/я 20, гел./факс (495) 674-5605.
1 0 . СРОК I одиости
С'рок rojuiocrn набора 12 месяпев. Набор с исчекитм сроком годное! и нримененню не
!!О Д ]!С Ж И !.
Зан. ирои^иодс! вом ЗАО НЗ’К «Ьноссринс»
Памалытк (|>ГУЗ «Причсрпоморскаи il'^IC»
Росногрсбиад}ора
И.10. Кабаргина
.М. !Малай
•S p.- ’ SS'I• g C J Г
'••V
--- стр. 9 ---
Пронумеровано, иропп 1уш)иано
и скренлсно нсча 1ы<> 1ИСТ0К
О Ы ’К «Ьиоссриис»
Оксапич Л.С.
--- стр. 10 ---
«УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ»
Гр^щв 1^ы й директор
Приказом Росздравнадзора ./.1о^^?Зй5^5|^^иор^вис»
„ ___у Океании А.С.
*1Ио т « » 201 г.№ 2 0 l/r .
ИНСТРУКЦИЯ
по применении) набора реагентов для выявления антигенов вируса
Западного Нила и антител к нему методом иммуноферментного анализа
«БиоСкрин-ВЗН»,
комплект «С»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Комплект «G» набора реагентов «БиоСкрин-ВЗН» предназначен для выявления
иммуноглобулинов класса G к вирусу Западного Нила (ВЗН) в сыворотке/плазме крови
человека методом иммуноферментного анализа при проведении сероэпидемиологических и
диагностических исследований.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА
На поверхности лунок полистиролового планшета иммобилизованы поликлональные
мышиные lgG-антитела против вируса Западного Нила (ВЗН). В параллельные лунки
планшета вносятся специфический антиген ВЗН (С-лунка) и контрольный антиген (К-лунка).
При инкубации в С-лунке вирусный антиген специфически связывается с антителами на
твердой фазе с образованием комплекса антиген-антитело, в К-лунке связывания не
происходит. После отмывания вносят исследуемые образцы, каждый образец тестируется в
двух параллельных С- и К-лунках. При наличии в образце антител к ВЗН происходит их
связывание с вирусным антигеном в С-лунке. На следующей стадии вносят конъюгат,
представляющий собой мышиные моноклональные антитела к Fc-фрагменту
иммуноглобулинов класса О человека, меченные пероксидазой хрена, который
взаимодействует с комплексом антиген-антитело. После удаления несвязанных молекул
конъюгата в лунки планшета добавляют индикаторный раствор, включающий субстрат и
хромоген 3,3',5,5'-тетраметилбензидин. Ферментативная реакция пероксидазы с хромогеном
приводит к образованию окрашенного продукта, интенсивность окраски которого
пропорциональна концентрации специфических к ВЗН IgG-антител в образце. После
остановки реакции стоп-реагентом интенсивность окрашивания раствора измеряют на
спектрофотометре по оптическому поглощению при длине волны 450 нм (длина волны
сравнения 620-650 нм).
--- стр. 11 ---
2.2. СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят следующие компоненты, упакованные в коробку:
Компонент Он пеан П С Количество
Иммуносорбент Разборный полистироловый 96-луночный
планшет для иммунологических реакций с
прозрачным плоским дном лунок.
2 шт.
Положительный контрольный
образец ннактивированный K ^G
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость розового цвета.
0,3 мл
1 пробирка
Отрицательный контрольный
образец инактивированный K ~G
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость синего цвета
0,3 мл
1 пробирка
Специфический антиген Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
0,2 мл
1 пробирка
Контрольный антиген Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
0,2 мл
1 пробирка
Конъюгат Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
от 0,25 до 1,5 мл
1 пробирка
Концентрат раствора № 1
для промывания планшетов (х 25)
Пенящаяся прозрачная или опалесцирующая
бесцветная жидкость, при хранении
возможно расслоение и выпадение
кристаллического осадка, растворяющегося
при температуре от +35 °С до +37 °С в
течение 30 минут.
25 мл
2 флакона
Раствор для предварительного
разведения сывороток
Пенящаяся прозрачная или слегка
опалесцирующая жидкость синего цвета,
возможно выпадение рыхлого комкующегося
осадка разной интенсивности, легко
разбивающегося при встряхивании
15 мл
1 флакон
Раствор № 2
для разведения сывороток и
антигена
11розрачная или опалесцирующая бесцветная
пенящаяся жидкость, при хранении
допускается выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной интенсивности,
легко разбивающегося при встряхивании.
26 мл
2 флакона
Раствор № 3
для разведения конъюгата
Прозрачная или опалесцирующая бесцветная
пенящаяся жидкость, при хранении
допускается выпадение рыхлого
комкуюп 1егося осадка разной интенсивности,
легко разбиваюп 1егося при встряхивании.
26 мл
1 флакон
Раствор № 4
для разведения хромогена
Прозрачная бесцветная жидкость. 25 мл 1 флакон или
13 мл 2 флакона
Хромоген 11розрачная бесцветная жидкость. 2,5 мл
1 пробирка
Стон-реагент Прозрачная бесцветная жидкость. 15 мл
1 флакон
Планшет для предварительного
разведения образцов
Цельный или разборный полистироловый 96-
лупочный планшет с прозрачными
бесцветными лупками с плоским дном.
1 шт.
Ванночка
для разведения реагентов
Ванночка из пластика для 8-ми канального
дозатора.
2 шт.
Пленка для заклеивания планшета Самоклеющаяся влагонепроницаемая пленка. 2 шт.
Один набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
--- стр. 12 ---
Чувствительность набора по сывороткам стандартной панели предприятия,
содержащим IgG-антитела к B3II, составляет 100 %.
Специфичность набора по сывороткам стандартной панели предприятия, не
содержащим IgG-антител к ВЗН, составляет 100 %.
Со всеми тестируемыми образцами, сточными растворами, а также с
оборудованием и материалами, иахо;(ящимися с ними в контакте, следует обращаться
как с потенциально инфицированными объектами:
- не пипетировать растворы ртом, при работе использовать индивидуальные средства
защиты (резиновые перчатки и защитные очки);
- все отработанные растворы и отходы после завершения анализа обрабатывать в
соответствии с установленными нормами безопасности (например, в течение 16-18 часов в
растворе гипохлорита натрия в конечной концентрации 1 %);
- все твердые отходы сбрасывать в специальный контейнер с пломбируемой крышкой и
затем подвергать автоклавированию в течение 60 мин при +121 °С или сжигать;
- инструменты и оборудование до и после работы протирать 70 %-м раствором
этилового спирта;
- утилизировать отходы, соблюдая законодательство но охране окружающей среды.
4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ
АНАЛИЗА
- дистиллированная или деионизированная вода;
- дезинфицирующие растворы, соответствующие санитарным требованиям;
- резиновые перчатки;
- спирт этиловый;
- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие
отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и
сходимости результатов пипетировапия (погрешность не более 3 %);
- пипетки 8- или 12-капальпые автоматические со сменными наконечниками
позволяющие отбирать объемы жидкостей от 10 мкл до 100 мкл, аттестованные по значению
средней дозы и сходимости результатов пипетировапия (погрешность не более 3 %);
- центрифуга настольная на (3-10) тыс. об/мин для получения и осветления образцов;
- пробирки центрифужные полипропиленовые вместимостью (1,5-2,2) мл для получения,
хранения, осветления образцов;
- мерный стакан идш цилиндр вместимостью (250-500) мл;
- мерная посуда вместимостью до 25 мл;
- воздушный термостат на +37 °С;
- аппарат для промывания планшетов;
3
--- стр. 13 ---
- спектрофотометр для измерения оптического поглощения в лунках планшета при
длине волны 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм);
- контейнер для сброса твердых отходов;
- контейнер для слива использованных жидкостей;
- автоклав для инактивации отходов;
- вата гигроскопическая;
- фильтровальная бумага.
5. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для проведения анализа используются образцы сыворотки крови человека в объеме 20
мкл.
Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и
хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Следует осветлять образцы,
содержащие агрегаты и осадок, центрифугированием (10±1) мин при (2500-3000) об/мин.
Собранные образцы хранить при температуре от +4 °С до +6 °С. Если образцы невозможно
протестировать в течение 7 сут, то их следует хранить при температуре не выще -20 °С. При
этом рекомендуется замораживать и оттаивать образцы не более одного раза.
Исследование образцов с выраженным гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным
проростом, а также длительно хранившихся без замораживания, может привести к получению
ложных результатов.
Каждый исследуемый образец и;ш буферный раствор необходимо отбирать новым
наконечником.
ВНИМАНИЕ!
Нельзя использовать компоненты пз наборов разных серий пли смешивать их в
процессе приготовления растворов!
При инкубациях не располагать планшеты стопкой!
Анализ проб следует проводить так, чтобы в случае отсутствия автоматического
анализатора на одного оператора одновременно приходилось не более четырех планшетов.
6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ (для проведения 16 анализов).
Условия и сроки хранения компонентов набора после вскрытия индивидуальной
упаковки приведены в таблице № 1 :
--- стр. 14 ---
Табл. № 1 .
Компонент набора Условия хранения Срок хранения
Иммуносорбент от +2 °С до +8 °С в
плотно закрытом пакете
8 недель
Специфический и контрольный
антигены
от +2 °С до +8 °С 8 недель
K^G, К G, конъюгат, концентрат
раствора № 1, раствор для
предварительного разведения
сывороток, растворы № 2, № 3, №
4, хромоген
от +2 °С до +8 °С 8 недель
Стоп-реагент от+2 °С до +8 °С до окончания срока
годности набора
______
Перед началом работы набор необходимо выдержать при комнатной температуре 30
минут.
Раствор для предварительного разведения сывороток, растворы № 2, № 3, стоп-реагент
поставляются в готовом виде. Перед использованием флаконы с растворами № 1, № 2, № 3
интенсивно встряхнуть.
6.1. Приготовление рабочего раствора № 1 для промывания планшетов.
Содержимое флакона с концентратом раствора № 1 интенсивно встряхнуть. При
выпадении в концентрате кристаллов, его следует прогреть при температуре от +35 °С до +37
°С до полного растворения. 6 мл концентрата раствора № 1 перенести в мерную емкость,
довести объем до метки 150 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать.
Готовый раствор хранить не более 24 ч при температуре от +4 °С до +12 °С или 4 часа
при температуре от +18 °С до +24 °С.
6.2. Подготовка рабочих разведений контрольных образцов (K *^G , K”G).
Из пробирки с каждым контрольным образцом отобрать 0,05 мл, перенести в чистую
пробирку и добавить 0,45 мл раствора № 2.
6.3. Подготовка испытуемых образцов.
6.3.1. Для нроведения сероэпидемиологических исследований.
Испытуемые сыворотки развести в 10 раз раствором для предварительного разведения
сывороток в планшете для предварительного разведения, перемешать пипетированием или с
помощью встряхивателя. При внесении сывороток цвет раствора для предварительного
разведения изменяется с синего на голубой.
6.3.2. Для проведения диагностических исследований.
Для лабораторного подтверждения диагноза лихорадки Западного Нила рекомендуется
исследовать парные сыворотки, полученные с интерва;юм от 7 до 14 сут. Каждый образец
сыворотки следует титровать с двукратным шагом, начиная от 1:100. Для этого приготовить
--- стр. 16 ---
Удалить жидкость из лунок с помощью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет трехкратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося его в лунки по 250 мкл и
выдерживая в лунках не менее 20 с.
ВНИМАНИЕ! Недостаточное промывание планшетов может привести к получению
ложных результатов.
1.Ъ . Внесение контрольных и испьпуемых образцов сьгоороток.
Для каждого исследуемого образца использовать две параллельные лунки, обозначаемые в
дальнейшем как С-лунка и К-лунка (см. табл. № 2).
В две С-лунки и в две К-лунки внесга по 100 мкл каждого контрольного образца (K^G и IT G) в
рабочем разведении.
В свободные лунки внесги по 90 мю 1 раствора № 2 и по 10 мкл 10-кратно разведенных
исследуемых образцов из планшета для предварительного разведения (см. п. 6.3.).
12. Промывание.
Табл. № 2
Рекомендуемая схема внесения контрольных и
испытуемых образцов.
1 2 3 4
Л
В
с
I)
Е
F
G
Н
К G К G № 5 № 5
К G К G № 6 № 6
K G K G № 7 № 7
K'G K G № 8 № 8
№ 1 № 1 № 9 № 9
№ 2 № 2 № 10 № 10
№ 3 № 3 № 1! № 1 1
№ 4 № 4 № 12 № 12
С-лунки К-лупки С-лунки К-лунки
Планшет заклеить новым листом пленки и вьщержагь в гечение 60 мин. При температуре
(+37±1)°С.
7.4. Промывание. Повторите процедуры, описанные в п. 7.2.
7.5. Во все лунки планпгета внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата (п. 6.6.).
Планшет заклеить новым листом пленки и вьщержагь в течение 60 мин при температуре
(+37±1)°С.
7.6. Промывание.
Удалить жидкость из лунок с помощью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет ш естикратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося его в лунки по 250 мкл и
выдерживая в лунках не менее 20 с.
7.7. В каждую лупку планшета внести по 100 мкл индикаторного раствора (п. 6.7.).
Планшет поместить в защищенное от света место на 15 мин при температуре от +15 °С до
+25 °С.
7.8. Остановить пероксидазпую реакцию путем внесения во все лунки по 50 мкл стоп-
--- стр. 17 ---
8. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерение оптической плопюсти (ОП) проводить при длине волны 450 нм.
Рекомендуемая длина волны сравнения (620-650) нм. Выведение спектрофотометра на
нулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.
8.1. Результаты измерения, полученные па контрольных образцах должны удовлетворять
следующим требованиям:
среднее значение 0 1 1 в С-лунках с положительным контролем не менее 0,60
среднее значение ОП в К-луиках с положительным контролем не более 0.20
среднее значение ОП в С-лунках с отрицательным контролем не более 0.20
среднее значение ОП в К-лунках с отрицательным контролем не более 0.20
При получении иных показателей исследование повторить.
8.2. Рассчитать среднее арифметическое значение OlIc pFCG для К G по двум С-лункам
Исследуемый образец считается положительным, если:
1. ОП в С-лунке > 0,35
2. ОП в С-лунке > Зх ОПсрК О
3. ОП в С-лунке > Зх ОП в К-лупке
4. ОП в К-лунке < 0,3 о.е.
Если ОП для исследуемого образца в К-лунке превышает 0,3 о.е., то такой результат
рассматривается как неопределепн 1,1й и рекомендуется исследовать образец, повторно взятый
у того же пациента. Оценку результатов следует проводить на основании сравнения
исследования сывороток от одного пациента на одном рабочем плапщете. При повторном
получении сомнительного результага рекомендуется тестировать эти образцы другими
методами.
При исследовании парных с 1>1вороток определить для каждой из них титр IgG-антител.
Титром антител является последнее разведение сыворотки, при котором результат анализа
является положительным. Оценку результатов диагностических исследований следует
проводить на основании сравнения титров парных сывороток от одного пациента,
определенных на одном рабочем планшете. Выявленная сероконверсия может
свидетельствовать о наличии первичной инфекции. В таком случае образцы необходимо
обследовать на IgM-антитела.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
реагента и немедленно провести учет результатов.
--- стр. 18 ---
Набор транспортируют и хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре
от +2 °С до +8 °С. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование в
течение 3 суток при температуре от +9 °С до +25 °С.
Условия отпуска: для диагностики in vitro в лечебно-профилактических и санитарно-
противоэпидемиологических учреждениях.
Рекламации на качество набора необходимо направлять в ЗАО БТК «Биосервис» по
адресу: 115088, г. Москва, а/я 20, тел./факс (495) 674-5605.
1 0 . СРОК годности
Срок годности набора 12 месяцев. Набор с истекшим сроком годности применению
не подлежит.
Зав. производством ЗАО БТК «Бносервис»
Главный врач ФБУЗ
«Центр гигиены и эпидемиологии
в Астраханской области»
Ф Б У З
«Цэнтр гигиены
и эпидемиологии
е Астраханской
области»
^ И Н Н 3017042340/^/
В.Ю. Кабаргина
Г.Л. Шендо
10
--- стр. 19 ---
Пронумеровано, про .....уровано
I I скреплено листов
)ек гоп-ЗЛО ЬТК «Биоеервис»
Океании А.С.
Ж %V \ ол —- А /«у /
--- стр. 20 ---
«УТВЕРЖДЕНА»
Приказом Росздравнадзора
от 2 0 1 г.№
Ю»
иректор
с е р ш с »
/ ' Океании А.С.
2 0 1/ г .
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления антигенов вируса
Западного Нила и антител к нему методом иммуноферментного анализа
«БиоСкрин-ВЗН»,
комплект «М»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Комплект «М» набора реагентов «БиоСкрин-ВЗН» предназначен для выявления
иммуноглобулинов класса М к вирусу Западного Нила (ВЗН) в сыворотке/плазме крови
человека методом иммуноферментного анализа при проведении диагностических
исследований.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА
На поверхности лунок полистиролового планшета иммобилизованы мышиные
моноклональные антитела против иммуноглобулинов человека класса М.
Каждый образец исследуется в двух параллельных лунках, обозначаемых в дальнейшем
как С-лунка и К-лунка. При инкубации образцов сывороточные антитела IgM связываются с
антителами, иммобилизованными в лунках планшета. На следующей стадии в лунки
добавляют специфический антиген ВЗН (С-лунка) и контрольный антиген (К-лунка). Если в
исследуемом образце присутствуют IgM-антитела к ВЗН, то в процессе инкубации вирусный
антиген специфически связывается с сывороточными антителами класса М, в лунке с
контрольным антигеном связывания не происходит. После отмывки вносят конъюгат,
представляющий собой мышиные поликлональные антитела к ВЗН, меченные пероксидазой
хрена. После удаления несвязанных молекул конъюгата в лунки планшета добавляют
индикаторный раствор, включающий субстрат и хромоген 3,3',5,5'-тетраметилбензидин.
Ферментативная реакция пероксидазы с хромогеном приводит к образованию окрашенного
продукта, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации IgM-антител к
ВЗН в образце. После остановки реакции стоп-реагентом интенсивность окрашивания
--- стр. 21 ---
раствора измеряют на спектрофотометре по оптическому поглощению при длине волны 450
нм (длина волны сравнения 620-650 нм).
2.2. СОСТАВ НАБОРА
В состав набора входят следующие компоненты, упакованные в коробку:
К ом пон ен т О п и сан и е К оличество
И м м ун осорбен т Разборный полистироловый 96-луночный
планшет для иммунологических реакций с
прозрачным плоским дном лунок.
2 шт.
П олож ител ьн ый к онтрол ьн ы й
образец и н ак ти в и р ов ан н ы й К^М
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость розового цвета.
0,3 мл
1 пробирка
О тр иц ательн ы й к онтр ол ьн ы й
образец и н ак ти в и р ов ан н ы й К~М
Прозрачная или слегка опалесцирующая
жидкость синего цвета
0,3 мл
1 пробирка
С пец и ф ич еск и й антиген Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
0,2 мл
1 пробирка
К онтрольны й ан ти ген Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
0,2 мл
1 пробирка
К онъю гат Опалесцирующая жидкость светло-желтого
цвета.
от 0,25 до 1,5мл
1 пробирка
К о н ц е н т р а т р а с т в о р а № 1
для пром ы вани я п л ап п1етов (ж 2 5 )
Пенящаяся прозрачная или опалесцирующая
бесцветная жидкость, при хранении
возможно расслоение и выпадение
кристаллического осадка, растворяющегося
при температуре от +35 °С до +37 °С в
течение 30 минут.
25 мл
2 флакона
Р аствор для п р едв ар и тел ьн ого
разведения сы в ор оток
Пенящаяся прозрачная или слегка
опалесцирующая жидкость синего цвета,
возможно выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося
при встряхивании
15 мл
1 флакон
Раствор № 2
для разведения сы в ор оток и
антигена
Прозрачная или опалесцирующая бесцветная
пенящаяся жидкость, при хранении
допускается выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося при
встряхивании.
26 мл
2 флакона
Р аствор № 3
для разведения к он ъ ю гата
Прозрачная или опалесцирующая бесцветная
пенящаяся жидкость, при хранении
допускается выпадение рыхлого
комкующегося осадка разной
интенсивности, легко разбивающегося при
встряхивании.
26 мл
1 флакон
Р аствор № 4
для разведения хр ом оген а
11розрачная бесцветная жидкость. 25 мл 1 флакон или
1 3 мл 2 флакона
Х ром оген 11розрачная бесцветная жидкость 2,5 мл
1 пробирка
С тон -реагент Прозрачная бесцветная жидкость. 15мл
1 флакон
П лан ш ет для п р едв ар и тел ь н ого
разведения обр азц ов
Цельный или разборный полистироловый
96-луночный планшет с прозрачными
бесцветными лунками с плоским дном.
1 шт.
В анночка
для разведения р еагентов
Ванночка из пластика для 8-ми канального
дозатора.
2 шт.
П ленка для зак л еи ван и я п л анн1сга Самоклеющаяся влагонепроницаемая пленка. 2 шт.
--- стр. 22 ---
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Чувствительность набора по сывороткам стандартной панели предприятия,
содержащим IgM-антитела к ВЗН, составляет 100 %.
Специфичность набора по сывороткам стандартной панели предприятия, не
содержащим IgM-антител к ВЗН, составляет 100 %.
Специфический антигенный компонент набора реагентов полностью
инактнвироваи и не содержит инфекционного вируса, однако при обследовании
нолевых или клинических материалов необходимо соблюдать меры предосторожности
и обращаться с образцами, сточными растворами, а также с оборудованием и
материалами, находящимися с ними в контакте, как с нотенциальпо ипфекциоппыми в
соответствии Санитарпыми правилами (СП 1.2.011-94) «Безопасность работы с
микроорганизмами 1-Н групп патогенностн»:
- работать в резиновых перчатках, за защитным экраном;
- не пипетировать растворы ртом, при работе использовать индивидуальные средства
защиты (резиновые перчатки и защитные очки);
- все отработанные растворы и отходы после завершения анализа обрабатывать в
соответствии с установленными нормами безопасности (например, в течение 16-18 часов в
растворе гипохлорита натрия в конечной концентрации 1 %);
- все твердые отходы сбрасывать в специальный контейнер с пломбируемой крышкой и
затем подвергать автоклавированию в течение 60 мин при +121 °С или сжигать;
- инструменты и оборудование до и после работы протирать 70 %-м раствором
этилового спирта;
- утилизировать отходы, соблюдая законодательство по охране окружающей среды.
4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ
АНАЛИЗА
- дистиллированная или деионизированная вода;
- дезинфицирующие растворы, соответствующие санитарным требованиям;
- резиновые перчатки;
- спирт этиловый;
- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие
отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и
сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
Один набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные.
--- стр. 23 ---
- пипетки 8- или 12-канальные автоматические со сменными наконечниками
позволяющие отбирать объемы жидкостей от 10 мкл до 100 мкл, аттестованные по значению
средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
- центрифуга настольная на (3-10) тыс. об/мин для получения и осветления образцов;
- пробирки центрифужные полипропилерювые вместимостью (1,5-2,2) мл для
получения, хранения, осветления образцов;
- мерный стакан или цилиндр вместимостью (250-500) мл;
- мерная посуда вместимостью до 25 мл;
- воздушный термостат на +37 °С;
- аппарат для промывания планшетов;
- спектрофотометр для измерения оптического поглощения в лунках планшета при
длине волны 450 нм (длина волны сравнения 620-650 нм);
- контейнер для сброса твердых отходов;
- контейнер для слива использованных жидкостей;
- автоклав для инактивации отходов;
- вата гигроскопическая;
- фильтровальная бумага.
5. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для проведения анализа используются образцы сыворотки крови человека в объеме 20
мкл.
Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и
хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Следует осветлять образцы,
содержащие агрегаты и осадок, центрифугированием (10±1) мин при (2500-3000) об/мин.
Допускается хранение собранных образцов сыворотки при температуре от +4 °С до +6 °С в
течение 7 сут. Для более длительного хранения образцы следует замораживать. При этом
рекомендуется замораживать и оггаивать образцы не более одного раза.
Исследование образцов с выраженным гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным
проростом, а также длительно хранившихся без замораживания, может привести к
получению ложных результатов.
Каждый исследуемый образец и;ш буферный раствор необходимо отбирать новым
наконечником.
--- стр. 24 ---
ВНИМАНИЕ!
Нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их в
процессе приготовления растворов!
При инкубациях не располагать планшеты стопкой!
Анализ проб следует проводить так, чтобы в случае отсутствия автоматического
анализатора на одного оператора одновременно приходилось не более четырех
планшетов.
6. П РИ ГО ТО ВЛЕН И Е РЕА ГЕН ТО В (для проведения 16 анализов)
Условия и сроки хранения компонентов набора после вскрытия индивидуальной
упаковки приведены в таблице № 1;
Табл. № 1
Компонент набора У словия хранения Срок хранения
Иммуносорбент от +2 °С до +8 °С в плотно
закрытом пакете
8 недель
Специфический и контрольный
антигены
от +2 °С до +8 °С 8 недель
К " ^ М , К М, конъюгат, концентрат
раствора № 1, раствор для
предварительного разведения
сывороток, растворы № 2, № 3, № 4,
хромоген ___________________________
от +2 °С до +8 °С 8 недель
Стоп-реагент от +2 °С до +8 °С до окончания срока
годности набора
Перед началом работы набор необходимо выдержать при комнатной температуре 30
минут.
Раствор для предварительного разведения сывороток, растворы № 2, № 3, стоп-реагент
поставляются в готовом виде. Перед использованием флаконы с растворами № 1, № 2, № 3,
интенсивно встряхнуть.
6.1. Приготовление рабочего раствора № 1 для промывания планшетов.
Содержимое флакона с концентратом раствора № 1 интенсивно встряхнуть. При
выпадении в концентрате кристаллов, его следует прогреть при температуре от +35 °С до +37
°С до полного растворения. 6 мл концентрата раствора № 1 перенести в мерную емкость,
довести объем до метки 150 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать.
Готовый раствор хранить не более 24 ч при температуре от +4 °С до +12 °С или 4 часа
при температуре от +18 °С до +24 °С.
6.2. Подготовка рабочих разведений контрольных образцов (К^М, К М).
Из пробирки с каждым контрольным образцом отобрать 0,05 мл, перенести в чистую
пробирку и добавить 0,45 мл раствора № 2.
--- стр. 26 ---
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Освободить планшет из упаковки и оставить в каретке необходимое количество
стрипов. Остальные стрипы поместить обратно в пакет и хранить в соответствии с
условиями, указанными в таблице № 1 .
7.1. Внесение контрольных и испьпуемых образцов сывороток.
Для каждого исследуемого образца использовать две параллельные лунки, обозначаемые в
дальнейшем как С-лунка и К-лунка (см. рис. № 2).
В две С-лунки и в две К-лунки внести по 100 мю 1 каждого контрольного образца (KIVI и К М) в
рабочем разведении.
В свободные лупки внести по 90 мкл раствора № 2 и но 10 мкл 10-кратно разведенных
исследуемых образцов из планшета для предвари гельного разведения, (см. п. 6.3.)
При первичном скрипшп'е исследовать образцы в 100-кратных разведеьшях.
При подтверждающем исследовании образец необходимо тигровать, внося каждое его
разведение в С- и К-лунки napajuiejrbHbix рядов (п. 6.3.2.).
Рис. № 2
Рекомендуемая схема внесения контрольных и
испытуемых образцов,
1 2 3 4
А
В
С
I)
Е
F
G
И
К м К М №5 №5
к м К м №6 №6
К’ М К'М № 7 № 7
K 1 V 1 K T V 1 № 8 № 8
№ 1 № 1 № 9 № 9
№ 2 № 2 № 1 0 № 1 0
№ 3 №3 № 1 1 № 1 1
№ 4 № 4 № 1 2 № 1 2
С -л уп к и К -лун ки С -лупки К -луик и
Планшет заклеить листом пленки и выдержать в течение 60 мин при температуре (+37±1)
Т .
7.2. Промывание.
Удалить жидкость из лунок с помощью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет трехкратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося в лунки по 250 мкл раствора
и выдерживая в лунках не менее 20 с.
7.3 Внесение специфического и контрольного антигенов.
Во все С-лунки плаппюта внести по 100 мкл специфического антигена в рабочем
разведении (п. 6.4.).
Во все К-лунки планшета внести по 100 мкл контрольного антигена в рабочем
разведении (п. 6.5.).
--- стр. 27 ---
Планшет заклеить новым листом пленки и выдержать в течение 60 мин при
температуре (+37±1) °С.
7.4. Промывание. Повторите процедуры, описанные в п. 7.2.
7.5. Во все лунки планшета внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата (п. 6.6.).
Планшет заклеить новым листом пленки и выдержать в течение 60 мин при температуре
(+37±1)°С.
7.6. Промывание.
Удалить жидкость из лунок с помощью аппарата для промывания планшетов. Промыть
планшет шестикратно рабочим раствором № 1 (см. п. 6.1.), внося в лунки по 250 мкл
раствора и выдерживая в лунках не менее 20 с.
ВНИМАНИЕ! Недостаточное промывание планшетов может привести к получению
ложных результатов.
7.7. В каждую лунку планшета внести по 100 мкл индикаторного раствора (п. 6.7.).
Планшет поместить в запущ енное от света место на 15 мин при температуре от +15 °С до
+25 °С.
7.8. Остановить пероксидазпую реакцию путем внесения во все лунки по 50 мкл стоп-
реагента и немедленно провести учет результатов.
8. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерение оптической плотности (011) проводить при длине волны 450 нм.
Рекомендуемая длина волны сравнения (620-650) нм. Выведение спектрофотометра на
нулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.
8.1. Результаты измерения, полученные на контрольных образцах должны
удовлетворять следующим требованиям:
среднее значение 011 в С-лунках с положительным контролем не менее 0,60
среднее значение ОП в К-лунках с положительным контролем не более 0,20
среднее значение ОП в С-лунках с отрицательным контролем не более 0,20
среднее значение ОП в К-лунках с отрицательным контролем не более 0,20
При получении иных показателей исследование повторить.
8.2. Рассчитать среднее арифметическое значение ОПсрК“М для К”М по двум С-
лункам.
Исследуемый образец считается положительным при выполнении следующих условий:
1. 011 в С-лунке > 0,35
2. О П в С-лунке > Зх ОПсрК'М
3. О П в С-лунке > Зх ОП в К-лунке
4. ОП в К-лунке < 0,3 о.е.
--- стр. 28 ---
Исследуемый образец рассматривается как неопределенный, если:
1. ОП в С-лунке от 0,25 о.е. до 0,34 о.е.
2. ОП в К-лунке < 0,1 о.е.
В случае неопределенного результата рекомендуется исследовать образец,
повторно взятый у того же пациента. Оценку результатов следует проводить на
основании сравнения исследования парных сывороток от одного пациента на одном
рабочем планшете. При повторном получении сомнительного результата при
исследовании парных сывороток рекомендуется тестировать эти образцы другими
методами.
Результат анализа рассматривается как ложноположительный, если ОП в К-лунке
превышает 0,3 о.е. В этом случае образец необходимо исследовать повторно.
8.3. Для образцов, выявленных при первичном скрининге как положительные,
рекомендуется с целью подтверждения положительного результата анализа определить
титр IgM-антител к вирусу.
Важно помнить, что IgM-антитела к ВЗН появляются, как правило, на 3-4 день
болезни и являются маркерами острой инфекции.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор транспортируют и хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при
температуре от +2 °С до +8 °С. Замораживание не допускается. Допускается
транспортирование в течение 3 суток при температуре от +9 °С до +25 °С.
Условия отпуска: для диагностики in vitro в лечебно-профилактических и
санитарно-противоэпидемиологических учреждениях.
Рекламации на качество набора необходимо направлять в ЗАО БТК «Биосервис»
по адресу: 115088, г. Москва, а/я 20, тел./факс (495) 674-5605.
10. СРОК ГОДНОСТИ
Срок годности набора 12 месяцев. Набор с истекшим сроком годности
применению не подлежит.
Зав. производством ЗАО БТК «Биосервнс»
главнын врач ФБУЗ «Центр гигиены /^ /м г и ен ^ ^ л )
. ” г и и зпйдемиопогиг'
и энидемнологии в Астраханской област^а g дстраханско?г ‘
В.Ю. Кабаргина
Г.Л. Шендо