Набор реагентов для выявления РНК коронавируса 2019-nCoV методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "Вектор-ПЦРрв-2019-nCoV-RG" по ТУ 21.20.23-088-05664012-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
1 11ЛИ1ЛЧЕНИК
1.1 Полное наименование набора
Набор pcaienTOEi для выявления Р\\К короиавируса 2019-nCoV методом ПЦР с
I ибриди шнионно-флуоресцентной детекцией «Вектор-11ЦР|>и-2019-пСоУ RG» по ГУ
21.20.23-088-05664012-2020.
1.2 Предназначение набора н ею ;iiiai ноетчеекая роль
Набор реагентов «Вектор-Г1ЦР|>в-2019-пСЧ)У RG» предиазиачеп для выявления
РНК короиавируса SARS-CoV-2' методом, основанным на амплификации кДНК в
полимеразной ценной реакции (ПЦР) и гибридизационно-флуореснентной дсч'екции
продуктов амплификации в режиме реа.чыюго времени в образцах биоматериала,
полученного при взятии мазка из носоглотки и/или ро гоЕ ЛОтки у амбу.заЕорЕЕых паЕшентов.
,мокротЕ>Е и/или эндотрахеазЕЛЕОго аспирата или броЕЕхоаЕьвсолярЕЕОЕ О смЕЛва у изеш сеетов с
более Еяже.ЕЕлми респираторЕЕЫми заболеваЕЕиями. в образцах кроЕш (сыЕюротки крови),
мочи. avEOEi Еатов легких, трахеи и селезенки.
Набор примсЕЕястся с ЕЕрибора.ми Rotor Gene 6000 (Corbett Research. ЛвсЕраЕИя),
('!'X 96 (BioRad. С1НЛ). ДГЕЕрай.м 4M1 (ООО «НПО ДНК-Г схееолоеия». 1* оссия ).
QuantStudioTM5 (Applied Biosystems. С’инЕ'аЕЕур).
ДиаЕ ЕЕостическая роль набора реаЕеЕЕтов «Вектор-11ЦР[>1г2019-пСоУ-КО» заюЕЕочается
в ЕЮЗМОЖНОСТИ CEO ИСЕЕОЛЬЗОВЗНИЯ /ЦЕЯ рЗНЕЕСЙ ДИЗЕНОСТИКИ КОрСЕЕЗВИруСЗ SARS-CoV-2. ;ПЕЯ
ЭНИДеМИОЛОЕ ИЧеСКОГО МОНИТОрИЕЕЕ З.
1.3 Об. 1асть применении набора
Облаегь нримсЕЕсния набора к;ЕИЕЕИческая лаборазорЕЕзя диаЕТЕостика коронаЕшруса
SARS-CoV-2. эпидемиологический моЕЕИгориЕЕГ.
Набор рСаЕСЕЕЕОВ МОЖСЕ 6 е»ЕЕЬ ИСПОЛЬЗОВЗЕЕ в уЧреЖДСЕЕИЯХ МеДИЦИНЕ>Е и
ЗДраВООХраЕЕСНИЯ. ВИруСОЛОЕИЧеСКИХ лабораториях ЦСЕЕЗрОВ ЕИЕИеЕЕЕ>Е и TEEH/ICMHOJEOE’HH
1Ч^сЕЕогребна;ззора (без иакоЕЕлсЕЕия возбуди ecjeh вирусолоЕИческими мечодами). к
ЭЕЕИДеМИОЛОЕ'ИЧССКИХ CJEyжбaX. ИМеЕОЕЕШХ ЛИЕЕСЕЕЗИЕО ЕЕа ДеЯТе:ЕЬЕЕОСТЬ в области ИСЕЕОЛЬЗОВаНИЯ
возбудителей ИЕеФсКЦИОННЕ>ЕХ ЗабОЛСЕШЕЕИЙ ЧСЛОЕК'Ка и ЖИЕЮТНЫХ II-IV ЕруЕЕЕЕ ПаТОГеЕПЮСТИ.
д;ея дифференцироЕШЕЕЕЕой дизе ееостики короиавируса SARS-CoV-2. а также в стаЕЕИОЕЕарЕЕЫх и
МОбИ]ЕЬЕЕЬЕХ ЛаборЗ'Е ОрИЯХ. ИМСЕОЩИХ СЗЕЕИТарНО-ЗЕЕИДеМИОЛОЕИЧеСКОС ЗаКЛЕОЧСЕЕИе ЕЕЗ
ЕЕроведсЕЕие рабоЕ с микроорЕ анизмами I-1V E pyiiii ееззое сн н о ст и".
2 ХЛРЛК ГК1Ч1С I ИКА ПЛЬОРЛ
КОМЕЕОЕЕСЕЕТЕЛ ИЗборЗ ЯВЛЯЮТСЯ ОДНОраЗОВЫМИ.
11абор peat'ciri'OB «ВекЕор-1 1ЦРр|е-2019-пСоУ RG» еес Еребуст ЕсхническоЕо
обс]ЕуЖИВаЕЕИЯ и K3JEH6pOBKH.
2.1 CociHB набора
1абор рсаЕ СЕЕТОв с о се о ит из 4 резЕхн е ов.__
3.
Coeian набора
РеЗЕ СЕЕ Е-1
РеаЕСЕЕЕ-2
11оложи ес;еьееелй
КОЕЕТрОЛЬЕЕЕЛЙ обраЗСЕЕ,
нко
Описание
ЕЕрОЗраЧЕЕаЯ беСЕШеТЕЕЗЯ
ж и дко сть
ПрОЗраЧЕЕЗЯ бсСЕШС Е ЕЕЗЯ
ЖИДКОСЕЬ
ЕЕрОЗраЧЕЕЗЯ беСЕЕЕ^СЕ ЕЕЗЯ
ЖИДКОСГЕ>
Объем (мл)
0,70
1.20
0,20
Кол-во
1 ЕЕробирКа
1 ЕЕробирКа
1 Пробирка
Ранее до 11 02.2020 ирсмсжю использовалось название короиавируса 2019-nCoV.Э
Ei соошегствим с н.2 Е 6 СЕ I Е 3.3 Е Е 8-Е 3. лиа1 нос гика молску-лярпо-генетческимм мего.чами (бел након;1ення Boioyaine ih) iui детекции в
клиническом материале B 0j6y;une-ieii иифскцио 1И1 1.1х oo.ieiiieii moi\i проводиться в лаборалориях, имеющих саншарно-
>гшлсмио.'1 0 1'Ичсское чаключоние о вочможмоечи нроведемия работ с микроортаничмамн 111 группы iiaTOi'ciiiiocin в cooibcictbhi ! с
трсбоваииями саитариых ripaRii.i СП I 3 2322-08 "Bcioiiaeiiocib рабочы с \и 1крооргачиима.мн III-IV групп naioreimucni и гельминтами",
утверж-чеипых 1шсгаиов.1сиием Е лавиого rocyviapciBcmioro врача 1 ’оссийской Федерации от 28.01.2008 N 4 (чарег исфировано Минюсюм
России 21 феврюш 2008 г. N 11197). Исследования но .четскции иук-чениовых кислот проводятся в боксироваиных иомсшеииях.
оборудованных системами 1 1ри10чиоГ| и вычяжиой bchiii.ihiuih иди боксах М 1 1кробио.чогичсско1 1 бсчоиасиосчи II класса Мачориа .1 .гчи
исслеловаиий иодлежт предварительной обрабо 1ке в соо'твсчсшии меюдичсскими укачаниями МУ 1.3.2569-09 «Opiаничация рабты
лабораторий, исиольчуюших меюды амп-чификации иук.чсииовых кмс.ют при раболс е малериа.лом. содержащим микроор! анилмы I IV
■ руин iiaiorcmiocm».
--- стр. 3 ---
4.
С)трицатс][Ы 1ый
контрольный образен.
ОКО
прозрачная бссниспшя
ЖИДКОС1 ь 0.20 пробирка
В состав набора входиз TKciuiyai анионная документания: инструкция но
применению, iiaciiopi.
Реаген1-1 расфасован но 700 мкл в микронробирку вместимостью от 0.5 до 2.0 мл. с
завинчивающейся крышкой. Состав: олиюнуююогидныс праймеры, флуоресцентный зонд.
Рсагсн'г-2 расфасован но 1200 мкл в микронробирку вместимостью 0.5 до 2.0 мл. с
завинчивающейся крышкой. Сосгав: 1 IS-Taq Д11К-нолимераза в буферном растворе.
Положительный контрольный образец ПКО расфасован по 200 мкл в микронробирку
объемом 1.0-2.о мл. с завинчивающейся кр 1>инкой. Сосзав: раезвор рекомбинанз ной
бактериальной плазмиды в Г1>бу(|)ере, содержащей везавку ДНК. комнлемензарную участку
генома коронавируса SARS-CoV-2.
Отрицательный конгрольный образец расфасован но 200 мкл в микронробирку
объемом 1.0-2.о мл. с завинчивающейся крышкой. Сосзав: очищенная вода.
Набор реагентов упаковывают в нолиттиленовый пакет с застежкой. Взоричной
упаковкой может быть пакез' с заезежкой или пакет, вложенный в коробку. В лзом случае
пакет и инструкцию но применению вкладываю! в коробку.
Примечание- Иш релиензами. козорые могут влиять на измерения, являюзея праймеры и
флуоресцентные зонды, оснотгой .чаракзериегикой которы.ч для конечного но:гьзовазеля являегся
земнература озжига. сосзавляютая 56 °С'. Дан!гая характеристика реализуезся с иомотыо
зсмперазурно-врсменного режима амплификации, следовательно, ею соблюдение являезся сзрою
обязазельным.
2.2 Количссгво анализируемых проб
Набор реагензов рассчи ган на проведение 100 определений. вклЕочая контроли.
2.3 Меюд исслсдонаипа
Обнаружение фраЕМСитов нуюЕснЕювых кислое коронавируса SARS-CoV-2 ocieoewieo
ЕЕа HcnojEb3oiiaiiHH метода 11ЦР с i ибридизационно-флуорссцензной дезскцией. Мсзод
ОСЕЕОВаН на МНОЕ ОКраЗЗЮ.М уЕЮДИЧСЕШИ 4HCJEa КОЕЕИЙ фраЕ мента ВИруСЕЕЕЛХ НуЮЕСИНОВ1»1Х КИСЛОЕ
(КОМЕЕЛС.МСНТарЕЕОЙ ДНК кДНК). что 1ЕОЗЕЮЗЕЯСТ обнаруж ить СЕЕСНИфиЧНЫЙ учаСЕОК ГСЕЕОМа
возбудизеля с нед|>ЕО его идензнф икации.
2.4 Ограиимеиин меюда
В ИЕЕфицированном материале РНК вирусов может б 1>Езъ нс обнаружена еео нрнчиЕЕС
иш ИбИрОЕШЕЕИЯ ОбраТНОЙ ТраНСКрИЕЕЕЩИ. 1ЩР и/или ЕЕСДОСТаТОЧЕЕОЙ эффеКТИВЕЕОСЗТЕ
вЕэЕде.ЕСЕЕия ЕЕуклсиновЕ>Ех KHCJEOT. Для достижсния ноказатслей ана:ЕНЕической
чувствительности используемый набор для выделения должсее обесЕЕсчивазь тффсктивЕЕосзь
выделения НК на уровне еес менее 20 %.
НричиЕюй Еюдучения лoжнoEEo:EoжизcJEьнol'o результаза яЕПЕястся контамиЕЕания на
зтаЕЕС выделения НК либо нрОЕ^сдсния реакции ПЦР- Ложноиодожитедьиый рсзу;ЕьзаЕ
выявдяезся с ПОМОЕЕЦЛО 01рИИаТСЛЕ>ЕЕ1»ЕХ КОИЕрОЛЬИЫХ образцов выделения и НЦР (ЕЕ, 8.3
НаСТОЯЕЕЕСЙ НЕЕСТруКЦИИ).
НрИЧИЕЕОЙ получения ЛОЖЕЮОТрИЕ1аТСЛ1>Е10ЕО результата ЯВЗЕЯСТСЯ ИН1 ибироваЕЕис НЦ1*
h/hjeh нсдосзаточЕЕая эффективпоезь вьедслспия НК. ЛожноозрицатедьнЕлй резузЕЕГЕаз
выявляется с иомоецыо 1еоложизслыее>ех коееерольных образцов НЦР ( ее. 8.3 настояЕЕЕсй
ИНезруКЕЩИ).
L
3 ЛИЛЛНТИЧЕСКНК И ДИ Л ПЮ П НЧКСКНК ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 .\iia.iii iii4CCKiie xapaKicpiici iiKii
Исследования ана.чи 1ичеекнх характсриез ик набора ЕЕроЕзсдсиЕл на базе ФЬУН ГНЦ ВЬ
«Вскз'ор» PocEioTpc6na;i30pa (р.ЕЕ. KojEbEioEio. Новосибирской облаези) в ра.мках еессзесдоешееия
зффекзивности набора.
3.1.1 Аиа.ш Iичсская чувс 1В1пс. 1ышсгь
ЧувстЕштслызость в|р 1ЯЕЗ;ЕС1Еия РНК коронавируса SARS-(’oV-2. онредс.чяемая ею
стандартному образцу иредЕЕриязня (СОИ ПКО 2019-nCoV). составляет 5 копий в III l,P-iEpo6e
--- стр. 4 ---
(что соответствует IxlO'* копий/мл исходного образца) при использовапни ;и!Я вьщеления
комплекта реагентов для выделения РПК/ДИК из клиничсское о материа. 1а «РИБО-нреп».
3.1.2 Спсчшфичнос гь
Для оценки аналитической специфичности были проведены проверки с гютенциа:н>но
перекрестно-реактивными вирусами (грипп Л и В. парагрипп, аденовирусная инфекция,
респираторно-синцитиальная инфекция, метапневмовирусная инфекция, риновирусная
инфекция и коронавирусная инфекция человека, вызванная hCov NL63. hCov ОС43. hC'ov
2291-'. hC'ov HKUI) и микроорганизмами {Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae.
Streptococcus pyogenes. Staphylococcus aureu.s). вирус денге 1). Перекрестно реагир\к)|ци\
вирусов и микроорганизмов обнаружено не было.
3.2 Дна! !10С1нчсск11с xapaK i cpiicniKii
3.2.1 Днагносгнчсская чувств 1 1 1е.1Ы10сгь
Диагностическая чувствительность выявления РНК коронавируса человека SARS-CoV-
2: клинические испытания, проведенные на 200 положительных образцах, ноказшш 100%
чувствительность (интервал 98.1 % - 100 %. с доверител 1>ной вероятностью 95 %).
3.2.2 Диа 1110С1ическаи С11сч11|ф1141юе1ь
Диапюстическая специфичность выявления РНК коронавируса человека SARS-CoV-2:
клинические испытания, нроведентле на 100 отрицательных образцах, показали 100%
специфичность (интервал 97.0 % - 100 %. с доверительной вероятностью 95 %).
3.3 Восироизводимоегь рсзу. 1ы а 1ов: клинические испытания, проведенные на 200
ноложизельных и 100 отрицательЕ!Е>1х образЕ!ах с нсееользоввееисм двух серий набора
pcaieEE'EOB. показа.Е!Е 100 % мсжсерийную восЕЕроизводимость pe3yjEE>iaTOB: исследовашЕс
модсльноЕо образЕ 1а. содержаЕнсЕ'о IMIK SARS-CoV-2 (вируса 2019-nCov (SARS-CoV-2)
ЕЕЕтамм n('oV/Victoria/l/2020 koje. № V-974) в коЕЕЕ1ентрации 1x10'^ коееий/мл, в 40 новЕорах
ДЕ^умя разЕЕЕлми оЕЕсраторами ЕЕа ;xiwx сериях ЕЕабора ЕЕа 4-х приборах ноказаю 100 %
ВЕЕуТрИСерИЙЕЕуЮ, МСЖЕЕОС Е аНОЕЮЧЕЕЧ ЕО И МСЖССрИЙНуЕО ЕЮСНрОИЗЕЮДИМОСТЬ рСЗуЛЕД аТОВ.
4 МЕРЫ ПРЕДОСЮ РОЖ ПОС! Н ПРИ РЛЬОТЕ С НЛЬОРОМ
Короиавирус SARS-CoV-2 отеесссн к 1 1 Ерупие пазогешЕости. Рабоза с вирусом
до.Ежна ЕЕроЕЮдиться в лаборазории. выЕЕОЛНЯЕОЕЕ!ей мо;Еекулярно-биологические (ПЦР)
исс;Еедования биологического материала на EEajEH4He возбудителей инфекЕЕионных бо]Еезней,
с соблЕОдением требований СП 1.3.3118-13 «Ьсзоешсность рабозы с микроорЕ анизмами 1-11
групп ЕЕатогеЕЕНости (онасЕЕОсти)», СП 1.2.036-95 «Порядок учеза. храЕЕСЕЕИя. ЕЕСредачи и
ТраНСЕЕОрТИрОЕШНИЯ МИКрООрЕ'аНИЗМОВ I'lV EpyillE ЕЕаТОЕСННОСТИ». МУ 1.3.2569-09
«ОрЕ'анизация работы лабораторий. исполЕ>зуюЕЕ1ИХ методЕЛ aмEEJEификaElии ееуюесиееовелх
KHCJEOT ЕЕри работе с .материазом. содержащим микроорЕ анизмЕЛ I - IV E pyiEiE ЕЕатОЕенности».
С'аЕЕПиЕЕ 2.1.7.2790-10 «CaHHTapEio-OEEHjiCMHOJEOE ические зребования к обратдсЕЕИЕО с
мсдиЕШЕЕСкими отходами».
Все работы еео отбору Eipo6 от 6 ольееелх, зраЕЕСЕГортировке и все тзаЕЕЫ jEa6oparopEEOEo
исс]ЕСДОваЕЕИя ЕЕроводятся В стрОЕ’Ом соотЕЕСтствии С трсбованиями ('111.3.3118-13
«ЬезоЕЕасЕЕОсть работы с микроорЕанизмами 1-11 ЕруЕЕЕЕ патоЕСЕЕЕЕОсзи (ОЕЕасЕЕОсзи)». СП
1.2.036-95 «Порядок учеза. храЕЕСния. ЕЕередачи и трансЕЕортироваЕЕИЯ микроорЕанизмов 1-
IV Е'руЕЕЕЕ ЕЕаТОЕСНЕЕОСТИ И ВреМСЕЕЕЕЕЛМИ МСТОДИЧеСКИМИ реКОМеЕЕДаЕЩЯМИ ЕЕО JEaбopaTOpEEOЙ
диагностике ееоееое о короЕЕавируса 2019 (2019-nCoV) методом ЕЕОЕГИмеразЕЕОй ееоееной реакЕщи
(ПЦВ). уззЕСрждеЕЕЕЕЕЛ.ми ГлавЕЕЕЛм ЕосударстЕЕСЕЕНЫМ саЕЕИ 3 арЕЕЕЛм ЕЕрачом Российской
ФедсраЕЕии 21.01.2020 е .
МатсриаЕ для иccJEeдoEiaEEИй ееодлсжие ЕЕрсдварите]Еьной обработке в соответствии
мезодическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «ОрЕанизация работЕЛ JEaбopaтopий.
ИСЕЕО]ЕЬЗуЕОЕЕЕИХ МСЕОДЕЛ aMEEJEИфиKaElИИ Е ЕуКЛСИЕЮВЕЛХ KHCJEOT ЕЕрИ рабоТС С МаЗСрИШЕОМ.
СОДержаЕЕЕИМ МИКрООрЕДЕЕИЗМЕЛ I IV Е руЗЕН ЕЕаЗ'ОЕ СЕЕЕЕОСТИ».
11ри рабозе ЕЕСобходимо е^ссе да велпо]еееязь cjEc/iyEOEEiHC трсбоваЕЕия:
рассматриЕШЕ ь исходееелс иссЕЕСдуемЕлс образЕнл биолоЕичсскоЕ о матсриа;Еа как
ИЕЕфсКЕЩОЕЕЕЕО-ОЕЕаСЕЕЕЛС;
иЕЕактиЕшровазь исходееелс исслсдуемЕлс образЕнл 6 иоееоеичсскоео .мазсриаЕЕа в
--- стр. 7 ---
i
i
- ;и[я посмертной диагностики иснольчую! аутон гаты легких, трахеи и селезенки.
Каждый образец материала иомелцакУ! а отдельную транспортную емкость.
Сразу после взятия пробы пробирки .маркируют, указывая фамилию и и} 1ициалы
больного, возраст, день болезни, вид материала, дату и время его взятия. Остальные сведения
о болыю.м {предполагаемый диапюз, дату поступления, клинические симптомы и
соответствующий анамнез пациента (включая терапию, полученные эпидемиологические
данные, в т.ч. зарубежные поездки в течение 21 суток до появления признаков заболевания,
фак торы риска) и пр. указывают в сопроводи тел 1>пой докумеш ации).
После завершения сбора образцов от больного (больных) все инструменты и
подсобные материалы, а также использованные средства индивидуальной защиты (перчатки,
халат и пр.) дезинфицируют согласно требованиям СИ 1.3.3118-13 «Ьезопасность работы с
микроорганизмами I-I1 групп патогенности (опасности)».
Выделение РНК из клинических образцов осуществляют при соблюдении требований
МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганиз.мы 1-IV групп
патогенности» и С11 1.3.3118-13 «Ьезопасность работы с микроорганизмами 1-11 ipyiiii
патогенности (опасности)». Работа но выполнению стадии выделения РИК проводится в
помещениях с классом биозащиты I5SL-3 с использованием наборов реагепюв для
выделения РИК вируса из клинических образцов и секционного материала «РИЬО-преи» в
соответствии с инструкцией производи теля набора.
Очищенные РИК можно храни ть до 8 ч при температуре от 2 С до 8 (' или в течение
месяца при температуре не выше минус 16 С.\ допускается более длительное хранеЕ 1ие при
температуре не выше минус 68 ('.
Для получения кДИК на матрице РИК используют набор рсаюнтов "Pl^Bl-^P ГЛ-1." в
соответствии с инструкцией производителя набора. Полученную кДИК иснол 1>зуют для
проведения анализас помонпио набора реагентов «Вектор-1ЩР)>в-2019-пСоУ КО».
6.3 ()| раииченпи но использонапию ана.тишрусмо! о Maicpiia.ia
Для выделения РИК используют зарегистрированные наборы реагентов. Д.зя
достижения показателей аназитической чувствите;11>нос1И об'1>ем аликвоты исходного
материала (пробы) должен составлять не менее 100 мкл.
Ии терфсрпруютис вещее i на п ограни‘leiiiisi но ненользованию проб
нселслуемо! о .матсриа.ш
При сборе клинического материала необходимо учитывать влияние
шперферирующих веществ (эндогенных и экзогенных). котор 1>1С могут встречагъся и
клинических образцах и ингибировать выделение РИК. тем самглм снижая эффективность
реакции обратной транскрипции (Kovarova М.. Draber Р. New specillcity and yield enhancer of
polymerase chain reactions. Nucleic Acids Res 2000 Jul 1; 28( 13)).
')нд0 1снныс факторы: гемоглобин (концентрация в крови ~ 160 мг/мл). при
проведении ИЦР уменынает выход при концентрации в реакционной смеси >1 мг/м.л.
мочевина (в моче -350 мМ). в среднем, начинает ингибировать при >20 мМ.
Экзогенные факторы: г епарин (ингибирует ИЦ1^ ггрн когщетрации более 0.15 Нд./мл.
не устраняется орг аническими растворителями и нерсосаждением).
Иенриг'одтлми для nccj[c;ioBaiiHB являются:
образцг.г цельной крови, взяляс в пробирки с гепарином гт качестве агпикоагулян га:
образпг.г целыюй крови, содержащие крогтяной сг усток или ггодверг гггиеся заморозке.
- ггязкая мокрота (ггязкую гго коггсистегщии мокрогу перед исследоваггисм разбавлягот
физраствором).
6.4 Условия гранспортирокапин и возможного хранения ана.тизируемых
образцов
Транеггортирование материала в лабораториго ;игя исс:гедований ггроводят ггри
гемнературе от 2 °С до 8 °С в течеггие 1 суток в соотггстстгши с С'И 1.2.036-95 «Порядок
учета, хранения, ггередачи и гранснортироваггия микроорганизмов I-IV групп налогеггности».
Исслсдуе.мгле ггробгл хранят ггрн темггературе от 2 до 8 °С' не 6ojree 2 суюк. ггри
темггературе ог минус 16 °С iio минус 20 нс 6ojree одног о .месяца, ггри гемггсраглре миггус
70 °С HJTH в жидком азоте в течеггие 1 года, не доггуская его оглаивания до ггроведения
--- стр. 8 ---
исследования.
При замораживании клинического материала его транспортировка также должна
проводиться в замороженном состоянии. Допускается только однокрагиос замораживание-
опаивание образцов.
6.5 Меры нрсдосюрожпосги к Maiepiia.iy песлсдования
Учет, хранение, передача и транспортирование биологического материала,
нодозри тельного на наличие корона 1шруса SARS-('oV-2. должны осуществляться п
соответствии с действующими СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-
1 1 групп патогенности (опасности)», санитарными правилами СП 1.2.036-95 «Порядок учета,
хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-1V групп патогенности» и
Временными методическими рекомендациями по лабораторной диагностике нового
коронавируса 2019 (2019-nCoV) методом полимеразной пенной реакции (ПЦР).
утверждетпями Главным государственным санитаршлм врачом Российской Федерации
21.01.2020 г.
Клинический мазериал утилизируют по классу В. как чрезвычайно
тнидемиологически опасные озходы в соогвететвии с Санигарно-эниде.миологическими
зребованиями к обращению с медицинскими отхоххами (СанПиП 2.1.7.2790-10) и
С11 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 групп ( 1агогсш 1ости
(опасности)».
7 110Д1 ОТОИКЛ р к л г к т о в ЛИЛЛИ 5Л
Внимание! При работе с Р Н К и kJ I I I K необходимо исно: 1ыовать то.чько
одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
«RNase-free», «DNase-free».
7.1 Процедура iipiiroTOB.ieiiiiH реакционной смеси
Приготовление реакционной смеси; в отдельной микронробиркс объемом 1.5 мл
I отовяз смесь комнонентов следующего состава (из расчета на одну пробу):
Реагент-1 7 мкл
Peai eHT-2 12 мкл
Смесь перемешивают нинетированием. Все реакционные компоненты добавляют
03дельными наконечниками с помощью дозаторов переменного объёма: 0.5-10, 2-20 и 20-
200 мкл.
8 ИРОВЕДКИИЕ ЛИЛЛШЛ
8.1 Расход каж, 10го реагеи га (минималы 1ый)
Па одно определение расходуюгея:
Реагент-1 7 мкл
Реаге}1т-2 12 .мкл
На каждый анализ расходуютея:
- 5 мкл ПКО;
- 5 мкл ОКО;
8.2 Иоследовагелыюсгь проведения панов анализа
8.2.1 ИЦР-ам 1 1.т1|ф1 1каи 1 1и
Вш ш ание! Перед проведением 1ЩР-амплификации требуется предварительно
получить к Д П К с использованием набора реагентов « Р Е В Е Р Т А -L» в соответствии с
инструкцией производителя набора.
Включают прибор, запускают программу в соответезвии с инезрукцией по
'женлуазации.
Реактивы для проведения ПЦР извлекают из холодильника, размораживают. Перед
использованием встряхивают пробирки с реагензами на микроценз рифугс-ворзекс и
осаждают капли на дно пробирки кратковременным нензрифуз ированием в зечение 5 секуЕ1д
при 3000 об-мип’'.
Для проведения ам|[лификации используют прозрачные микропробирки обз>смом 0.2
мл в соответствии с количеством исследуемых образцов.
По.мсщаюг микронробирки в штатив и .маркируют в соозвегствии с протоколом
исследования на боковой езенке пробирки.
--- стр. 9 ---
Готовяг реакционную смесь на ЕЕужЕюс количество реакЕЕий. для чего смешивают \ \
отдельной ЕЕробиркс (и'^ расчета на одну пробу):
PeaE eiET-1 7 mkje
PcaieHT-2 12 mkje
ОткрЕЛВаЕОТ крышки микропробирок и ЕМЮСЯТ в ЕЕИХ по 19 МКЛ реаКЕШОЕЕЕЕОЙ смеси.
ИсЕЕользуя ЕЕаконсчпики с аэрозольным барЕ.ером, в микроЕЕробирки ЕЕоследовательЕЕО
вносят соответственно маркировке образцов 5 мкл ОКО. и затем но 5 мкл распюров к/^ПЬС
исследуемЕ>ЕХ образцов. ЗакрЬНШЮТ крышки ДаНЕЕЫХ МИКрОЕЕробирОК. 1^ЕЕ0СЯТ (в ElOCJEejUHOlO
очередь) 5 мкл ИКО и закрЕЛвают крЕЛЕПки данных микроЕЕробирок.
ОбЕний (коЕЕСчньЕЙ) обьсм реакциоЕЕНой смеси в каждой ЕЕробиркс должен состави ЕЬ
24 мкл.
11сремеЕЕЕИЕШЕот содержимое микроЕЕробирок на вортсксе и ЕюптрифуЕ ируют 5 секуЕЕд
ЕЕри 3000 об’мин''.
Внимание! После смешивания компонентов мнкронробнркн сразу устанавливают
в амплнфнкатор и запускают реакцию.
а) При исЕЕо:Еьзовании ЕЕрибора Rotor Gene 6000/3000 (Corbett Research. Австра.ЕИя)
задаЕОЕ' cjECjiyioEiiHC нарамегрьЕ Ei соотвегствуЕотих ДЕЕалоЕ 01и>Ех океевх:
- ротор 36-JEyнoчшлй:
- объем реакЕЕионной смеси 24 мкл;
- темисратурЕЕо-врсмснные режимы:
'смиераз'ура
(“о
Время
(мИЕЕуТЫ :СеКУЕЕДЕЛ)
95 05:00
94 00:10
56 00:30
72 00:25
94 00:10
56 00:30
72 00:25
ИзмсрсЕше
флуорссценЕщи
КЛМ
Количество
EIHKJEOB
1
40
HocjEc чсЕ'о заЕЕускают программу амЕЕлификации и фиксируют в рабочем журЕЕа;ЕС название
фaЙJEa с резулЕл азом работы ЕЕрибора.
б) При исЕЕо;ЕьзоваЕЕии прибора планпЕетЕЕОЕО тиЕЕа (ЕЕаЕЕример. CFX 96 (liioRad. С1ИЛ).
Д ГЕЕрай.м 4М1 (ООО «НПО ДНК- Гсхнолоеия ». Россия)) задаЕот слсдуюЕЕЕуЕО проЕрамму
амЕЕЛификаЕЕии:
BuiLuanue! Следует избегать нанесение маркировки на крышки микропробирок,
помещенных в амплнфнкатор.
емЕЕсратура Время Измерение К(НЕИЧССГВО
(ОС) (минутьЕ:секуид1л) флуоресЕюнЕши ЕЕИКЛОВ
95 05:00 1
94 00:10
56 00:30 5
72 00:25
94 00:10
56 00:30 РАМ 40
72 ^ 00:25
в) При исЕЕользоЕШЕИи прибора EEJEaEEEiEeTHOE о типз QuantStiadioS (Applied Biosystems.
СиЕЕЕ'апур):
1. на Е'лавЕЕОм экраЕЕС еезжмизе «Создав ь ееовелй эксЕЕеримент» (Create New
lixpcriEiient);
2. BO BKJEajtKC «Свойства» (Properties) введизе двееееелс эксЕЕерименза:
• З ИП эксЕЕсри.мсита СзаЕЕдартЕЕая крЕншя/Standard Curve.
• химический состав I'aqMan:
--- стр. 10 ---
3. но вкладке «Ирогокол» (Method) укажите объем реакции 24 мкл и задате
следующую программу амплификации;
ГемЕЕсратура Время ИзмерСЕЕие КоЛИЧеСЧЕЕО
(ОС) (мицучЕл:сскунды) ф]ЕуоресЕ1еЕЕЕШи циклов
95 05:00 1
94 00:10
56 00:30 5
72 00:25
94 00:10 1
56 00:30 Г'АМ 40
72 00:25
4. но нкла; 1ке «Планшет» (Plate) в настройках убрать детекцию пассивного красителя
и далее перейти в распгирениые настройки, во вкла; 1кс «Мишсеи,» ( I'arget) выбрать реноргер
]'ЛМ и со'ъчать схему nHainiieia;
5. нажать кнопку Запуск/Run.
8.3 Процедура и:)мсрспш 1 и оценки рсзулыаюв анализа
ИЦ1^ в режиме реального времени и регистрацию результатов проводят в приборе
Rotor Gene 6000 (Corbett Research. Лвстрашя). CFX 96 (BioRad. США). Д Гпрайм 4М1 (ООО
«НПО ДПК-'1'схноло1'ия». Россия). QuantStudio"'5 (Applied Biosystems. Сингапур) но каначу
]’АМ.
а) Для приборов Rotor Gene 6000
Анализ результатов амплификации К/Д1К коронавируса SARS-CoV-2 проводят по
каналу РАМ. для ттого;
1) нажать в меЕНО кноЕЕку «Analysis»/ «Анализ», выбрать режи.м анализа
«Quantitatioп»/«Koличec'l‘E^eцнIлй». ЕЕажать кнопку соотЕ^етствующеЕ о каЕЕала:
2) отмсиигЕ) аЕТЕомагический выбор rhreshold/Порог;
3) в меню основного окна (Quantitation analysis/KonnHCCE iiCiEEiijih анализ) должны 6е>еть
Е1ажатЕ>1 две кнопки «Dynamic tube»/ «Динамич. фоЕЕ» и «Slope Correct»/«KoppeK. Уклона»:
4) в меню осЕювного окна «More setting»/ «Outlier Removal»/ «Устранение ВЕлбросов»
устаноЕшт значение NTC thrcshold/Ilopor Фона 11Ф (N ГС) 15 %;
5) в меню «СТ Calculation»/ «Bi,i4HCJECHHe (”Г» (в правой части OKiEa) в 1>ЕставитЕ.
riireshold/11орог""0.02;
б) в таблиЕЕе резу]Е1латов (окно «Quant. Results»/ КоличесЕЕЮЕЕЕЕЕЛС РезулЕдатЕл»)
появятся зЕЕачения Ct.
PeiyjEbEaTbE интерпреЕируются на oceeoejueehh eebjehhhb ( и:еи отсуЕствия) нересечсЕЕия
кривой фJEyopecElCEIции с устаЕЕОЕПгсЕЕЕЕой нз соотвстстЕ^уюЕЕЕем vpoBEic ЕЮроЕ'овой ;еиееисй (ч ео
СООТВСЕСЕВуеТ EEaJEHHHIO (HJEH ОТСуТСТВИЕО) ЗЕЕачения ЕЕОрОЕОВОЕО цикла "СЧ" в
соотвстствуЕОЕцей Е рафе в габлиЕЕе резу;Еьтатов).
6) Для приборов C F X 96
Резу;[ЕэтатЕ>Е интерЕЕретируЕОтся еез осЕЕОвании ЕЕа;Еичия (или ОЕсучетвия) ЕЕересечсЕЕия
кривой флуОрССЕЮЕЕЕЩИ С уСТаЕЮВЛСЕЕНОЙ EI3 СООТВСТСТЕ^уЕОЩСМ урОВНС ЕЕОрОЕ ОЕЮЙ ]ЕИНИеЙ (Ч'ЕО
соответствует еевличию ( или отсутствиЕо) ЗЕЕачения ЕЕороговоЕ’о Ещкла "Ct" в
еоответс гвуЕОЕЕЕСЙ 1 рафе в Е аблицс рсзул1>татов).
в) Для приборов ДТпраИм 4M I
А еЕЗЛИЗ pCiyJEbraTOB ЕЕрОВОДЯТ с ЕЕОМОЕЕЕЬЕО ЕЕрОЕ'раММЕЕОЕО обССЕЕСЧСЕЕИЯ ЕЕрибора
ДТЕЕрайм 4М1 ЕЮ каналу РАМ. для отое о:
1. 1 !ажать в меню КЕЕопку «1 IpocMOip архива» и о 1КрЕ>пь сохраЕЕСЕЕный файл;
2. Указать Тип анализа: Ct ;пея всех каначЕов;
3. Указать Метод; ИорОЕОвый Ct;
РезулЕлаты иЕЕтерЕЕрстируются ЕЕа осЕЕОвании ЕЕа;Еичия (шеи отсучетвия) ЕЕереССЧСЕЕИЯ
КрИЕЮЙ фJEyOpeCE^eEEE^ИИ с yCTailOBJECEEHOh на СООТВСТСТЕЕуЕОЩеМ уровне ПОрОЕ ОВОЙ линией (ччо
соответечвует EEajEH4HEO (или ОТСуТСТВИЕО) ЗЕЕачеЕЕИЯ ЕЮрОГОВОЕО ElHKJEa "Ct" в
соответсч ЕЕуЕОЕЕЕсй Е'рзфе в чаблице резу;Еьтач'ов).
--- стр. 11 ---
I
г) Для приборов QuantStudioS
1. /1ля анали за рсзулЕ>татов необходимо выбрать;
• График: График амилификаиии/ЛтрИАсабоп Plot:
• Тип I рафика: ЛКп/ никл (ARn vs Cycle):
• Тин кривой: Линейная/rinear:
2. Установить авюмагическое оиредслспис порогового значения/Thrcshold. При
необходимости скорректировать пороговое значение, перейти в логарифмический тип
кривой/Log. нажать и перетащить окно iioporoBoi o значения в середину экспоненциальной
фазы кривой.
3. Далее нажать на кнопку AHajiH3/Analysis.
4. В таблице лунок/ Well Table пояе^ягся ЗЕЕачеЕЕИя C't.
Результаты интернретируютея на осиоешееии наличия (или отсутствия) пересечения
кривой флуоресценции с устаноЕПЕенЕЮЙ на сооЕт'тс'п^уюЕцем уровне Еюроговой линией (что
соотЕ^стствует наличию (или огсутствию) значения пороговоЕо цикла "Cl" в
соо'Е ветствующей графе в таблице pe3yjEE>EaroB).
Результат подлежит учету в случае:
а) появления ЕЕересечепия кривых флуоресценции с ЕЕороговой линией па KanajEC ГАМ
в пробах с ноложителынлми кон rpojEbiibiMH обрдщами (IIKO):
б) отсутствия положительною cnniajEa на каначе 1-АМ в пробе с отрицательными
коЕЕ Ерольными образцами (ОКО).
Результат считать ноложителыЕ1>1м в случае, если кривая накопления флуоресцсЕщии
для соотвсЕСгвующсго образца имеет харакЕерную «сигмовидную» форму и цсресекаеч
ЕЕороговую ЛИ1ЕИЮ. При ЭТОМ значение (4 для данноЕо образца должеео 6i>iib менее 35.
Амплитуда cni EEajEa при этом не имеет значения.
Результач счи гач ь очрицатслып.Ем, ccjeh значение Cl на канате ГАМ очсучсчччусч. 1:сли
значение Cl 6ojEbEne 35. чо ИЦР-PIi ЕЕеобходимо повторичь и считать ноложиче.чьным в
случае повторсЕЕИя резульчача или при значении Cl меньше 35.
9 РЛСЧК ГЫ
9.1 Испо.тьзуемыс компьштерные iipoi раммы
Для прове/тения амплификации. Еибридизации и учета рсзулыачов исполе/пюе
специализированное программное обеспечение, поставляемое производителями приборов.
Работу с ЕЕрограммшлм обеспечением осуЕцесчччляЕот соЕласно руководству еео эксЕЕлуатации
прибора.
10 УСЛОВИЯ ХРЛИКШ1Я, ТРЛИСИОРТИРОВЛИИЯ и ЛКГ11ЛУЛГЛ1иП1
ПЛЬОРЛ
10.1 Усмовпя храиеннн набора
Набор реаЕСЕЕЧов «Всктор-11Ц1^>в-2019-пСоУ RG» хранить в угЕаковке ЕЕредЕЕрнячия-
HTEOTOBHECJEa в соответствии с ГУ 21.20.23-088-05664012-2020 при темЕЕературе от миЕЕус
15°С до минус 25 °С. ХрансЕЕие ЕЕабора реагентов должно осуЕЕ 1ссччшячЕ>ся в холодильных
камерах или в холодилЕшиках. обссЕЕечиЕШЕощих регламентироваЕЕЕЕый чемЕЕерачурЕЕЕЛЙ режим
с ежедЕЕсвЕЕой рсЕ'истрацисй тсм1Еерачур|>1.
10.2 Ус: 10ви) 1 i paiiciiopi HpoBaiiiiH набора
ГрапсЕЕорчироЕшнис ЕЕабора peaieiiTOB «13екчор-11ЦР|>н-2019-пСоУ RG» /цнежно
производит]>ся кр1>ттьЕм чрансЕЕОрчом (авчомобильным, жслсзЕЮДорожЕЕЕ>Ем либо воздуппплм)
в соответсЕччии с ГУ 21.20.23-088-05664012-2020 ЕЕри чемЕЕературе от минус 15 °С до миЕЕус
25 ° С в термоконтеЙЕЕсре. ДоЕЕускается траЕЕспортироЕчаЕЕие ЕЕри темЕЕсрачуре от 2 °С до 8 ° С в
тсрмокопчсйнсре в чечение еес 6 ojecc 3 суток. Набор рсаЕСЕГЕов чрансЕЕОртирусмый с
ЕЕар\чЕЕСЕЕием температурноЕ о режима ееримсеесееиео еес еео;песжит .
10.3 Срок годное I II набора
Срок Е'одпости ЕЕабора pcai'ciiTOB cocчaвJEяeт 12 мссяеесег^ со дня изеочоепесееия
предприячием-изЕ Отовитслем. ('ерии ЕЕаборов реагентов с исескеееим сроком е одности
Н е 11С |)И |))И11И|ю тто .ш нны м и нсс;1е;10вам и я » рса.ичс рсячьи ого врем ен и
--- стр. 12 ---
применению не подлежат. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов.
10.4 Информация но безопасной утилизации
Использованные пробирки с ампликонами, наконечники, перчатки, ветошь для
обработки поверхностей в ПЦР-боксе, собирают в пластиковые закрывающиеся емкости,
выносят с целью последующей инактивации согласно требованиям СанПиН 2.1.7.2790-10 и
МУ 1.3.2569-09.
Наборы с истекшим сроком годности, вскрытые, но не использованные наборы, а
также наборы с поврежденной упаковкой, утилизируют по классу Л, как эпидемиолошчески
безопасные отходы, по составу приближенные к ТБО (СанПнН 2.1.7.2790-10).
10.5 Гарантийные обязательства производителя
Предприятие-производитель гарантирует соответствие фушкииональных
характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение установленного срока годности (12 месяцев) при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов «Вектор-П1ДРрв-2019-пСоУ-КО» в течение
срока годности направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»
Роспотребнадзора (630559, Россия, Новосибирская область, рабочий поселок Кольцово, тел.
(383) 336-60-10, факс(383) 336-74-09 e-mail: vector@.vector.nsc.ruy
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении
набора реагентов, рекомендуется направить сообщение на предприятие-изготовитель ФБУП
ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора по адресу, указанному выше, и в уполномоченную
государственную регулирующую организацию в соответствии с действующим
законодательством.
И.о. зав. лабораторией молекулярной
эпидемиологии
особо опасных инфекций,
ведущий научный сотрудник
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»
Роспотребнадзора»
Зав. отделом - начальник
экспериментального участка
производства и разработки средств
диагностики
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»
Роспотребнадзора»
В. А Терновой
Е.В. Чуб
Зав. ОБТК
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»
Роспотребнадзора»
М.П. Богрянцева
СОГЛАСОВАНО
Генеральный директор
ООО «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР»
--- стр. 13 ---
В данном
прошнуровано,
пронумерова^!^ скреплено
печатью листов
iipoiiHCliK)
_ S.