Реагенты и расходные материалы к оборудованию для электрофореза в наборах и отдельных упаковках — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2010/08378 · класс риска 1

Производитель: "ХЕЛЕНА ЛЭБОРАТОРИС (СК) Лтд., торгующая как ХЕЛЕНА БАЙОСАЙЕНСЕС ЕВРОП" (Соединенное Королевство)

Вид изделия: Моющий/чистящий раствор ИВД, для автоматических/полуавтоматических систем · Электрофорез белков ИВД, реагент · Электрофорез белков ИВД, набор, электрофоретический анализ

В госконтрактах 44-ФЗ: 31 контракт, медианная цена за единицу 65 357 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
е р а л ь н ы й  д и р е к т о р 
О О  « Э к о -м е д -с  М »
У Т В Е Р Ж Д А Ю
В о р о ш и л о в  Н .А . 
«10» июля 2010 г
#
И Н СТРУ К Ц И Я
п о  ПРИМЕНЕНИЮ
Р е а ге н т ы  и расходны е м а те р и а л ы  к  оборудованию
дл я электроф ореза  
в н аб о р ах и о тд ел ь ны х у п а к о в к а х
1. НАЗНАЧЕНИЕ
2. ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
4. ПОДГОТОВКА К РАБОТЕ ИЗДЕЛИЯ
5. ПОРЯДОК РАБОТЫ ИЗДЕЛИЯ
6 ПРАВИЛА ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
2010


--- стр. 2 ---
Helena
Агароза для молекулярной биологии - Molecular Biology Grade Agarose
НАЗНАЧЕНИЕ
i
Агароза для молекулярной биологии предназначена длл молекулярного скрининга с 
улучшенным разрешением ДНК фрагментов размером 500 и менее п.о. Особенно подходит 
для разделения фрагментов размером сопоставимым с размерами праймеров. 3 %-ый 
агарозный гель, выполненный из агарозы, даёт разрешение фрагментов аналогичное 8%
1 полиакриламидному гелю. 
СВОЙСТВА
J Характеристики Значение
? Мутность 1,5% (NTU) < 4
j Электроэндоосмотичность (EEC) < 4
• Содержание серы в виде SO 4 0 , 12 %
■ 1 Температура гелеобразования (1,5%) 24 - 28 С
Температура плавления (1,5%) > 65,5 С i
Плотность геля (1 %) >500  г/см"*
i Плотность геля (1,5 %) > 500 г/см^ 1
i Наличие ДНКаз отсутствует
Наличие РНКаз отсутствует
I ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И М ЕРЫ  ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
i Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Необходимо надевать перчатки при работе со всеми компонентами набора. См.
паспорт безопасности химического вещества, положения о рисках и обеспечении 
безопасности, а также информацию об утилизации.
СОСТАВ
1. Агароза
Пакеты по 50 или 100 грамм.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И СРОК ГОДНОСТИ
хранить в сухом прохладном месте при температуре 15-25 ""С , в этом случае она сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке.
ПРИМЕНЕНИЕ
Применяется для приготовления гелей, обладает высоким разрешением маленьких 
продуктов ПЦР и ДНК фрагментов благодаря повышенной прозрачности геля, 
обеспечивает плотную пластичную структуру гелю. Шансы растрескивания или поломки 
такого геля минимальны даже при низких концентрациях. Идеально подходит для 
проведения иммуноблоттинга. Низкое связывание ДНК позволяет быстро высвобождаться 
из геля.
С€
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@he[ena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 3 ---
ле1епа
НАЗНАЧЕНИЕ
Антисыворотка GAM предназначена для скрининга образцов сыворотки и мочи на 
моноклональные гаммопатии методом электрофореза в агарозном геле и иммунофиксации. 
Электрофорез с иммунофиксацией (IFE) -  это двухступенчатая процедура, использующая 
электрофорез высокого разрешения в агарозном геле на первом этапе и иммунофиксацию 
на втором этапе.
Наибольшая потребность в IFE присутствует в клинических лабораториях, где метод 
используется в первую очередь для определения моноклональных гаммопатий. 
Моноклональная гаммопатия - это первичное состояние заболевания, при котором один 
клон клеток плазмы производит повышенные уровни иммуноглобулина определенного 
класса и типа. Такие иммуноглобулины называют моноклональными белками, М-белками 
или парапротеинами. Их присутствие может носить неопасный характер или иметь 
сомнительное значение. В некоторых случаях они указывают на злокачественное развитие 
заболевания, например множественная миелома или макроглобулинемия Вальденстрема. 
Следует дифференцировать поликлональную и моноклональную гаммопатию, так как 
поликлональные гаммопатии представляют собой вторую стадию заболевания, 
обусловленную клиническими нарушениями, такими как хроническое заболевание печени, 
коллагеновые нарушения, ревматический артрит и хроническая инфекция.
Белки мочи образуются в первую очередь на основе белков плазмы, которые фильтруются 
почками. Присутствие аномальных белков плазмы в моче имеет важнейшее значение при 
оценке почечной функции. Соответствующее исследование протеинурии должно включать 
'К оличественную  и к а ч е с тв е н н у ю  о ц ен к и  ти п о в  и количества в ьщ ел яе м ы х  б елков.
А н т и с ы в о р о т к а  G A M  -  G A M  A n t i s e r u m .
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И М ЕРЫ  ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при 
работе со всеми компонентами набора. См. паспорт безопасности химического вещества, 
положения о рисках и обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации. 
СОСТАВ
1. Антисыворотка GAM
Состав: в набор входит 1  флакон содержащий 2 ml трехвалентной сыворотки, которая 
содержит антитела к тяжелым цепям человеческих иммуноглобулинов - IgG, IgM, IgA. 
Сыворотки были приготовлены из биологического материала (кровь козы) и содержат 
стабилизаторы и азид натрия в качестве консерванта.
2. Другие компоненты набора
Каждый набор содержит инструкцию по применению.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И СРОК ГОДНОСТИ
Антисыворотку GAM следует хранить при 2-6°С, и она стабильна до истечения срока 
годности, указанного на этикетке. Открытые флаконы, стабильные в течение 4 недель. 
ПРИМЕНЕНИЕ
Антисыворотка используется только с оборудованием и гелями производства компании 
Helena. Пошаговая инструкция приведена в руководстве к анализаторам.
С€
Тел . +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdonn
1


--- стр. 76 ---
ПРИМЕЧАНИЕ: Для анализа мочи следует извлечь блоки геля перед сушкой.
7. По завершении электрофореза (Пользователи SAS-1 Plus: снять крышку), снять 
;?лектроды с поверхности геля. ПРИМЕЧАНИЕ: После сушки гель может быть окрашен с 
целью визуализации всех белков, присутствующих в образце (см. протокол окрашивания) 
или гель может быть инкубирован со специальной антисывороткой с целью визуализации 
отдельных белков, представляющих интерес (см. протокол иммунофиксации).
ПРОТОКОЛ ОКРАШИВАНИЯ
8. Пользователи SAS-1 и SAS-1 Plus: Удалить оба блока геля с использованием средства 
для удаления блоков геля.
9. Установить гель в держатель камеры для окрашивания.
10. Выбрать программу для анализа мочи на устройстве для окрашивания и, следуя 
указаниям программы, фиксировать, окрашивать обесцвечивать, промывать и  сушить гель.
а) SAS-2 (Прибор для автоматического окрашивания)
Шаг Раствор Время
(мин:сек)
Порт Температура
ГС)
Фиксация Фиксирующий
раствор
05:00 4
Сушка — 15.00 65
Окрашивание Кислотный
фиолетовый
краситель
10:00 5
Промывка Очищенная вода 00:10 1
Промывка Очищенная вода 00:10 1
Обесцвечивание Обесцвечивающий
раствор
02:00 2
Обесцвечивание Обесцвечивающий
раствор
02:00 2
Промывка Очищенная вода 01:00 1
Сушка — 05:00 65
б) SAS-4 (Прибор для автоматического окрашивания)
Шаг Время (мин:сек) Температура (°С) Другое
Окрашивание 04:00 Рециркуляция ВКЛ
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
Сушка 12:00 64
в) Вручную
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@he[ena- 
biosciences.com
W W W , iieie na-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 77 ---
л е 1 е п ав  0 '1 .; нгк'н , Е о (о р > ;
Следовать последовательности действий, указанной для прибора для автоматического 
окрашивания SAS-2, используя кювету для шагов фиксации, окрашивания, обесцвечивания 
и  промывки, и сушильную печь с рециркуляцией воздуха и нагревом до 60-70°С для шагов 
сушки.
11. По окончании цикла окрашивания извлечь гель из камеры для окрашивания. Теперь 
гель готов для исследования.
ПРОТОКОЛ ИММУНОФИКСАЦИИ
8. Ввести в прибор следующие параметры:
i) Пользователи SAS-1 Plus:
•Инкубация, шаг 1:10 минут, 37°С (инкубировать)
Инкубация, шаг 2: 8 минут, 40°С (промокательная бумага D)
ii) Пользователи SAS-3:
Шаг Время (мин:сек) Температура (°С)
Нанести антисыворотку 10:00 2 1
Установить гребенки 02:00 2 1
Промокательная бумага D 05:00 40
Сушка 08:00 54
9. (Пользователи SAS-3: снять направляющую). Разместить шаблон для нанесения 
антисыворотки на поверхности геля. ПРИМЕЧАНИЕ: каналы антисыворотки следует 
выровнять по центру и  наложить на квадрат, отмеченный на геле, на который наносят 
образцы.
‘10. Нанести 2 капли (или 50рл) соответствующей антисыворотки/фиксирующего раствора в  
отверстие иммуноглобиновых дорожек. Следует убедиться, что антисыворотка полностью 
заполнила каналы.
11. Пользователи SAS-1: Инкубировать гель: 15-30°С, 10 минут.
Пользователи SAS-1 Plus: Инкубировать гель.
12. По завершении инкубации поместить гребенку-блоттер в отверстия шаблона 
антисыворотки. Оставить на 2 минуты для впитывания излишков антисыворотки, затем 
удалить гребенку и  шаблон с поверхности геля.
13. i) Пользователи SAS-1: Удалить блоки геля с применением средства для удаления 
блоков геля и промыть гель промывочным раствором в течение 5 минут.
ii) Пользователи SAS-1 Plus и SAS-3: Поместить промокательную бумагу D  (гладкой 
стороной вниз) на гелевую поверхность, оставить на 10 минут и удалить.
14. i) Пользователи SAS-1: Поместить гель на промокательную бумагу D  стороной с 
агарозой вверх и положить промокательную бумагу В (смоченную промывочным 
раствором) на гелевую поверхность, затем положить две промокательные бумаги X . 
Оставить гель под прессом на 10 минут.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 78 ---
л е 1 е п а
il) Пользователи SAS-1 Plus и SAS-3: Поместить промокательную бумагу D  (гладкой 
стороной вниз) на гелевую поверхность и  снова положить шаблон антисыворотки, чтобы 
обеспечить горизонтальное положение промокательной бумаги. Выполнить абсорбцию 
геля.
15. i) Пользователи SAS-1: Удалить всю промокательную бумагу и поместить гель в  
промывочный раствор на 4 минуты при легком помешивании.
li) Пользователи SAS-1 Plus и SAS-3: Удалить промокательную бумагу D  и  высушить 
гель.
16. i) Пользователи SAS-1; Извлечь гель из промывочного раствора и  поместить на 
промокательную бумагу D стороной с агарозой вверх. Положить промокательную бумагу В  
(смоченную промывочным раствором) на гелевую поверхность, затем положить 
лромокательную бумагу D . Оставить гель под прессом на 3 минуты.
ii) Пользователи SAS-1 Plus и SAS-3: Удалить блоки геля с использованием средства для 
удаления блоков геля. Перейти к шагу 18.
17. i) Пользователи SAS-1: Удалить всю промокательную бумагу.
18. Установить гель в держатель камеры для окрашивания.
ПРИМЕЧАНИЕ: Сразу после использования необходимо очистить шаблон антисыворотки с 
применением мягкого биоцидного моющего средства. Если возможно, потрите дно 
шаблона зубной щеткой или маленькой щеткой для пробирок. Не допускайте высыхания 
антисыворотки на шаблоне. Отложения антисыворотки на поверхности шаблона приведут 
к образованию пузырьков воздуха во время нанесения антисыворотки. Необходимо 
тщательно высушить шаблон антисыворотки. Вода, оставшаяся в отверстиях, будет 
препятствовать нанесению антисыворотки в следующий раз. Хранить шаблон следует 
перевернутым вверх дном в целях улучшения циркуляции воздуха, и, тем самым, 
способствуя сушке аппликатора.
.1 9 . Выбрать программу теста Urine IFE на приборе для окрашивания и, следуя указаниям 
программы, выполнить промывку, окрашивание, обесцвечивание и  сушку геля.
а) SAS-2 (Прибор для автоматического окрашивания)
Шаг Раствор Время
(минхек)
Порт Температура
(°С)
Сушка — 10:00 55
Промывка Промывочный
раствор
07:00 4
Окрашивание Кислотный синий 
краситель
03:00 5
Обесцвечивание Обесцвечивающий
раствор
02:00 2
Сушка — 05:00 65
Промывка Промывочный
раствор
03:00 4
Промывка Промывочный 03:00 4
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл, почта info@helena- 
biosciences.com
W W W , helena-bioscien ces. com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 79 ---
л е 1 е п а
раствор
Сушка — 05:00 65
б) SAS-4 (Прибор для автоматического o k jрашивания)
Шаг Время (мин:сек) Температура (°С) Другое
Промывка 00:03 Рециркуляция ВКЛ
Промывка 10:00 Рециркуляция ВКЛ
Окрашивание 04:00 Рециркуляция ВКЛ
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
Сушка 12:00 63
в) Вручную
Следовать последовательности действий, указанной для прибора для автоматического 
окрашивания SAS-2, используя кювету для шагов фиксации, окрашивания, обесцвечивания 
и промывки, и сушильную печь с рециркуляцией воздуха и нагревом до 60-70°С для этапов 
сушки.
20. По окончании цикла окрашивания извлечь гель из камеры для окрашивания. Теперь 
гель готов для исследования.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
При электрофорезе белков большая часть моноклональных белков мигрирует в катодный 
гамма-регион шаблона белков, однако вследствие аномальности их природы они могут 
мигрировать в любое место в рамках зоны глобулинов. В  таком случае анормальный белок 
следует идентифицировать с использованием иммунофиксации.
При наличии низких концентраций анормального белка анормальная полоса может 
появиться в рамках нормального поликлонального иммуноглобулина. Полосу также можно 
будет увидеть на поликлональном фоне, где также присутствует значительное количество 
поликлонального иммуноглобулина.
Публикация“1ттипоЛха11оп for the Identification of Monoclonal Gammopathies” доступна в 
Helena BioSciences no запросу.
Визуальная интерпретация полос, присутствующих на геле, методом иммунофиксации:
Тип протеинурии Полосы, наблюдаемые на 
геле
Присутствующие белки
Нормальная моча Небольшая полоса 
альбумина
альбумин
Гломерулярная Альбумин, альфа-1, бета, 
гамма
альбумин, альфа-1, 
антитрипсин, трансферрин, 
гаммаглобулины
Тубулярная альфа-1, альфа-2, бета ретинол-связывающий 
белок, бета2- 
микроглобулин, альфа2-
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.heiena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 80 ---
J O
l e l e n a
микроглоблин
Обильное выделение гамма или различные имунноглобулины, 
свободные легкие цепи
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Излишек антигена
Излишек антигена происходит в случае отсутствия небольшого излишка антител или 
равенства антигена/антител на стадии осаждения. Излишек антигена при иммунофиксации 
обычно обусловлен излишком иммуноглобулина в образце пациента. Излишек антигена 
характеризуется прозоной (неокрашенными участками в центре иммунофиксированной 
полосы белка, с окраской по краям). В таком случае следует использовать более высокую 
степень разведения образца с целью оптимизации концентрации иммуноглобулина.
2. Полоса в катодом конце гамма-участка показывает отсутствие реакции с 
антисывороткой IFE.
С-реактивный белок (CRP) может быть обнаружен у пациентов с острым воспалительным 
Процессом. CRP появляется в виде широкой полосы в катодном конце шаблона белков 
сыворотки. Повышенные уровни альфа-1 -  антитрипсин и гаптоглобина являются 
вспомогательными свидетельствами присутствия CRP. У пациентов с полосой CRP, 
возможно, будет выявлен повышенный уровень при тестировании на CPR,
3. Отсутствие реакции с каппа и лямбда антисывороткой.
Иногда образец может вступать в реакцию с тяжелой цепью антисыворотки, при этом не 
наблюдается реакции с легкой цепью. В  такой ситуации необходимо исключить 
следующее: а) заболевание, связанное с тяжелыми цепями, б) очень большие 
концентрации легких цепей, что приводит к излишку антигена, в) низкие концентрации 
легких цепей, г) атипичная молекула легких цепей, которая не вступает в реакцию с 
антисывороткой, д)легкие цепи со «скрытыми» детерминантами легких цепей (что иногда 
наблюдается с IgA и IgD). Для получения определенных результатов тестирование может 
включать а) более высокую или низкую степень разбавления образца с целью оптимизации 
равенства антител/антигенов, б)использование антисыворотки более чем от одного 
производителя с целью облегчения идентификации атипичных иммуноглобулинов, и
в)обработка образца b-2-меркаптоэтанолом с целью «обнаружения» легких цепей.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Полоса В рамках цикла 
(п=24)
Между циклами (п=4)
Среднее (%) Коэф. вар. (%) Среднее (%) Коэф. вар. (%)
Полоса 1 54,9 2,7 53,6 3.0
Полоса 2 5,0 8,3 Гб,2 9.5
Полоса 3 8.9 9,1 9,3 9,2
Полоса 4 9,7 7,3 9,8 7,5
Полоса 5 6.8 8,9 7,1 10,4
Полоса 6 14,6 6.8 12,6 6,9
6) Чувствительность
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 81 ---
л е 1 е п а
50нг на полосу (эквивалент 10мг/л образца) определено как самая малая концентрация 
белка, которая была видна как отдельная полоса на выполненном геле.
б) Линейность
Линейность метода -  это функция спецификации денситометра, а также эффективность 
геля. Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определил линейность метода, 
основываясь на используемом в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Fauchier, Р. and Catalan, F, 'Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis ' Alfred Fournier Institute, Paris,  
France, 1988,
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Ту Ilia, M.M. ‘ Finding Clues to Disease in U rine’  Diagnostic Medicine, 1980  
; M ay/June: 69-75.
3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘ Determination o f Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different  
Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations' Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-  
172.
4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘ Determination o f Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic  
Methods', Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262.
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. 'A Comparison o f Three  
Procedures fo r  the Detection o f Bence-Jones Proteinuria' Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374.
6. Alper, C.A and Johnson, A.M., ‘ Immunofixation Electrophoresis: A Technique fo r  the Study o f  
Protein Polymorphism', Vox. Sang., 1969; 17: 445-452.
7. Alper, C.A., 'Genetic Polymorphism o f Complement Components as a Probe o f Structure and Function ’ , Progress  
in Immunology. First International Congress o f Immunology. 1971 : 609-624, Academic Press, New York.
8. Microprotein - P R ^^ (Procedure No. 611) Sigma Diagnostics, September 1995.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.conn
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom
10


--- стр. 82 ---
H e l e n a
Тест-система "Белки сыворотки (бета-сплит)-10" для
прибора SAS-MX (SAS-MX "SP-10 SB").
Тест-система "Белки сыворотки (бета-сплит)-бО" для
прибора SAS-3 (SAS-3 "SP-60 SB"),
Тест-система "Белки сыворотки (бета-сплит)-ЮО" для
прибора SAS-3 (SAS-3 "SP-100 SB")
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для разделения и  количественного определения белков 
сыворотки методом электрофореза в агарозном геле.
Сыворотка содержит более 100 отдельных белков, каждый со специальным набором 
функций, и концентрация которых подлежит специфическим вариациям при различных 
патологических состояниях.^
Со времени изобретения Тиселиусом (Tiselius)^ электрофореза с подвижной границей и  
последующего использования зонального электрофореза белки сыворотки были 
разделены на фракции на основе их заряда при определенном pH. Набор SAS-1 Белки 
сыворотки предназначен для разделения белков сыворотки на 5 основных классов 
(альбумин, альфа-1 глобулин, альфа-2 глобулин, бета-глобулин, и гамма-глобулин) в 
соответствии с зарядом в агарозном геле. Затем белки окрашивают с целью визуализации 
и  количественной интерпретации. Каждая из классических зон электрофореза, за 
исключением альбумина, обычно содержит 2 или более компонентов. Данные о 
пропорциональном отношении этих фракций зарекомендовали себя как хорошее 
вспомогательное средство при диагностике и прогнозировании определенных 
патологических состояний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И  МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при 
работе со всеми компонентами набора. См. паспорт безопасности химического вещества, 
положения о рисках и обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации.
СОСТАВ
1. Гели белки сыворотки бета сплит SAS-1
Содержит агарозу в Трис/барбитал буфере с тиомерсалом и азидом натрия в качестве 
консерванта. Гель упакован готовым к употреблению.
2. Кислотный синий краситель, концентрат
Содержит концентрированный кислотный синий краситель. Довести содержимое бутыли до 
700 мл с использованием очищенной воды. Перемешать, оставить на ночь, отфильтровать 
перед использованием. Хранить в бутыли с плотно закрывающейся крышкой.
3. Обесцвечивающий раствор, концентрат
Содержит концентрированный обесцвечивающий раствор. Довести содержимое бутыли до
2-х литров с использованием очищенной воды. Хранить в бутыли с плотно закрывающейся 
крышкой.
1
С €
^44 B iosciences Europe Q ueensw ay South,
Эл. почта info@helena- Team Valley Trading Estate, Gateshead,
biosciences.com jy^g Wear, NE11  OSD, United Kingdom
www.helena-biosciences.com


--- стр. 87 ---
l e l e n a
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рекомендуется выполнять оценку гелей относительно нормальных значений, полученных 
для данного метода в каждой отдельной лаборатории.
Подробное рассмотрение оценки белков сыворотки см. Рицманн С.Е. (Ritzmann S.E.), 
‘1982.®  Исследования показывают, что значения одинаковы как для мужчин, так и для 
небеременных женщин. Некоторые различия наблюдают у беременных женщин и у 
женщин, принимающих оральные контрацептивы.
На нормальные значения оказывает некоторое влияние возраст. В пуповинной крови 
отмечается пониженное значение общего белка, альбумина, альфа 2 и бета фракций; 
немного повышенный уровень альфа 1  и нормальный или повышенный уровень гамма 
фракции (в основном материнского происхождения). Количество гамма-глобулинов быстро 
снижается до 3-х месячного возраста, и к этому же возрасту другие фракции достигают 
уровня взрослого человека. Уровни гамма-глобулинов соответствуют показателям 
взрослого человека не ранее 10-16 летнего возраста. После 40 лет снижается уровень 
альбумина и повышается уровень бета глобулина.
1. Качественная оценка:
Гели можно оценить визуально на наличие или отсутствие полос, представляющих 
интерес.
2. Количественная оценка:
Сканировать гель, стороной с гелем вниз, при 595 нм,
В любом случае повышение или снижение уровня отдельных компонентов сыворотки или 
обнаружение необычных компонентов сыворотки требуют дальнейшего исследования. 
Выполненный гель для белков сыворотки SAS-1 стабилен в течение неопределенного 
периода времени.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Так как все процедуры электрофореза не являются линейными, важно в точности 
следовать данной инструкции по применению с целью достижения оптимального 
разрешения и воспроизводимых результатов. При несоблюдении настоящей инструкции по 
применению полученные результаты могут быть ошибочными.
СПРАВОЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Следующие нормальные значения были получены с использованием 20 нормальных проб 
доноров мужского и  женского пола в возрастных рамках 20-59 лет (данные представлены 
только в справочных целях);
.Фракция белков Среднее(%) ±2 станд. откл. диапазон
Альбумин 59,3 53,1-65,5
Альфа 1 3,5 2,3-4,6
Альфа 2 8,7 6,5-10,9
Бета 1 8,6 6,5-10,7
Бета 2 10,7 3,7-6,0
Гамма 15,0 11,6-18,6
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 88 ---
<jT
л е 1 е п а
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Воспроизводимость_______
Гель (п=24) Между гелями (п=96)
Средняя (%) Коэф. вар. (% Средняя (%) Коэф. вар. (%
Альбумин 59,2 3,7 59,7 3.9
Альфа 1 3,9 9,7 4,0 12,7
Альфа 2 9,9 6,0 9,1 6,1
Бета 1 8,3 4.4 9,0 6,1
Бета 2 5,2 7,8 4,8 9.0
Гамма 13,6 6,8 13,2 8,2
Чувствительность
Данный метод чувствителен к 0,25 г/л на полосу, что было определено как самая малая 
концентрация белка, которая была явно видна как отдельная полоса на выполненном геле.
Линейность
Линейность метода -  это функция спецификации денситометра, а также эффективность 
геля. Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определил линейность метода, 
основываясь на используемом в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Alper, С.А. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 291 :  
287-290.
2. Tiselius, A. 'A New Apparatus fo r  Electrophoretic Analysis o f Colloidal Mixtures', Trans.  
Faraday Soc., 1937; 33 : 524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization o f  
Proteins, Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,  
Hagerstown, 1979.
4. Tietz, N.W. (Ed), Textbook o f Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-  
582, 1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume I :  Physiology o f Immunoglobulins -  
Diagnostic and Clinical Aspects \ Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.
6. Tietz, NW . (Ed), Textbook
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 89 ---
H e l e n a
Т е с т -с и с т е м а  ’Ъ е л к и  с ы в о р о т к и , в ы с о к о е  р а з р е ш е н и е - 1 2 ” д л я  п р и б о р а  
SA S-1 (SA S-1 H i-R e s 12 K it),
Т е с т -с и с т е м а  ” Б е л к и  с ы в о р о т к и , в ы с о к о е  р а з р е ш е н и е '*  д л я  п р и б о р о в  
S A S -M X , S A S -3  (S A S -M X , S A S -3 H i-R e s K it)
Назначение
Тест-система Белки сыворотки высокое разрешение предназначена для определения в 
сыворотке или плазме крови белков с помощью агарозного гель-электрофореза.
Сыворотка содержит более 100 отдельных белков, каждый из которых имеет определенный 
набор функций, концентрация отдельных белков может значительно меняться при 
различных патологических состояниях.
После разработки метода электрофореза в свободной жидкости по Tiselius^ и последующего 
использования зонального электрофореза, белки сыворотки стало возможно разделять на 
фракции на основе их заряда при определенном значении pH.
Набор для проведения высокого разрешения белков в сыворотке, в отличие от классической 
схемы на 5 фракций, дает возможность определить 10-15 различных фракций, тем самым 
увеличивая диагностическую значимость белковых фракций^'^ Около 15 белков сыворотки 
крови были изучены, поскольку они могут быть легко измерены^'^.
Тест-система Белки сыворотки высокое разрешение разделяет белки в сыворотке или 
плазме в зависимости от их заряда в агарозном геле. Белковые фракции, фиксированные и 
окрашенные пригодны для визуализации и качественной интерпретации. 
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при 
работе со всеми компонентами набора. См. паспорт безопасности химического вещества, 
положения о рисках и обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации. 
СОСТАВ
1. ГЕЛЬ.
Содержит агарозу в барбиталовом буфере с тиомерсалом и азидом натрия в качестве 
консерванта. Г ель упакован и готов к использованию.
2. Краситель (концентрат).
'Содержит концентрат красителя для высокого разрешения. Разведите содержимоебутылки 
в 700 ml с окрашивающим раствором и хорошо перемешайте. Храните в плотно закрытой 
бутылке.
3. Другие компоненты набора.
Каждый набор содержит инструкцию по применению и достаточное количество блоггера С 
для выполнения 10 гелей.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
1. SAS-1 Plus Белки сыворотки высокое разрешение, ГЕЛЬ
Гель следует хранить при температуре 15-30°С, в этом случае гели сохраняют стабильность 
до окончания срока годности, указанного на упаковке. НЕ ОХЛАЖДАТЬ И НЕ 
ЗАМОРАЖИВАТЬ. Испорченный гель можно определить по следующим признакам; 1) 
кристаллический внешний вид, который указывает на то, что гель был заморожен; 2)
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44(0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
W W W , helena-biosciences. com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 93 ---
helena
Biosciences Europe
Pre-Albumin  
tti-Acid Glycoprotein _  
a-Lipoprotein  
a,-Antlchymotrypsin  
Haptoglobin  
C3 
IgA 
IgG
Albumin 
a,-Antitrypsin
tti-Macroglobulin
Transferrin
P-Lipoprotein
Fibrinogen 
(in plasma only)
Высокое разрешение структуры белка электрофореза главным образом интерпретируется 
путем сравнения относительной интенсивности полос полученой от неизвестных образцов 
с данными, полученными от нормальных пациентов.
Одной из самых распространенных моделей ненормальных белков сыворотки крови, это 
когда наблюдается неспецифическая воспалительная реакция, которая характеризуется 
увеличением а 1-антитрипсина и гаптоглобина с пониженной фракцией преальбумина, 
альбумина и трансферрина. Хотя это не является полезной в создании общей диагностики, 
полезно в мониторинге ответ пациента на терапию.
Другие примеры клинически значимых изменений являются:
1. Повышение группы трансферрина, что свидетельствует о низком уровне железа.
2. Наличие моноклональных белков, что свидетельствует о нарушении в иммунной 
системе.
3. Низкий уровень гаптоглобина, предполагает повышенное разружение эритроцитов или в 
лабораторных условиях гемолиз.
4. Наличие CRP, указывает на острую воспалительную реакцию.
5. Низкий преальбумин, альбумин и трансферрин с диффузной гипергаммаглобулинемией, 
предполагает хроническое воспаление, инфекцию или антигенную стимуляцию.
6. Низкий уровень СЗ в свежих образцах, предполагает комплемент. 
Высокое разрешение белков методом электрофореза - это отличный аналитический 
инструмент, чтобы получить общее представление о белках в моче^’  Нормальная моча 
обычно содержит следы белка, а иногда и слабые группы трансферрина. 
Гломерулярные протеинурии обычно состоят из выраженных полос альбумина, как a l- 
кислого гликопротеина и а 1-антитрипсина в широкой зоне а1 и трансферрина в р1 регионе. 
В сыворотке мы видим сокращение этих белков, с увеличением белков клубочках. Шаблон 
в моче протеинурия трубчатые обычно consistes в обморок группы, альбумин, двойная 
полоса в а2 регионе в связи с а2-микроглобулином, сильная полоса в середине бета региона 
в связи с р2-микроглобулина, а иногда и диффузный фон окраски гамма области за счет 
свободных легких цепей. Хронические заболевания почек или почечная недостаточность
5
С €
Т ел .+44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 94 ---
helena
Biosciences Europe
может привести к смешанной формам, вызванным повреждением, как канальцев, так и 
клубочков.
Увеличение или снижение, в частности, компонентов образца или выявления необычных 
образцов компонентов требует дальнейшего изучения. Окрашенный гель SAS-1 Plus с 
высоким разрешением стабилен в течение неопределенного периода времени. 
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ  
Чувствительность
Метод чувствителен к 60 мг / л для каждого полосы, определяется как минимальная 
концентрация белка, который был определен по завершению анализа геля.
Линейность
Линейность метода зависит от спецификации денситометра, а также производительности 
геля.
Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определял линейность метода, основанную на 
денситометре, используемого в лаборатории.
ЛИТЕРАТУРА
1 . Alper, С.А. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic A id ’,  N. Eng. J. Med., 1974; 291 :
287-290.
2. Tiselius, A. ‘A New Approach fo r Electrophoretic Analysis o f Colloidal M ixturesTrans. Faraday Soc., 1937; 33 :  
524.
3. Laurell, C.B. ‘Composition and Variation o f the Gel Electrophoretic Fractions o f Plasma,
Cerebrospinal Fluid and U rine’ Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1972; 29 (Suppl. 24) : 71.
4. Killingsworth, L M . et al. ‘Protein Analysis, Deciphering Cerebrospinal Fluid Patterns’ Diag. Med., 1980;  
March/April: 1-7.
5. Killingsworth, L M . et al. ‘Protein Analysis, Finding Clues to Disease in Urine' Diag. Med., 1980; May/June ; 69-  
75.
6. Killingsworth, L M . ‘C linical Applications o f Protein Determinations in Biological Fluids Other Than Blood’ Clin.  
'Chem., 1982; 28(5) : 1093-1102.
7 . Ritzmann, S.E and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization o f  
Proteins. Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper & Row, Inc.,
Hagerstown, 1979.
8. Killingsworth, L.M. et al. ‘Protein Analysis’ Diag. Med., 1980; Jan/Feb : 3-15.
9. Killingsworth, L.M. ‘Plasma Protein Patterns in Health and Disease’ C RC  Critical Reviews in  
Clinical Laboratory Sciences, August 1979.
10. Peterson, P. A., Ervin, P.E. and Beggard,  /. ‘Differentiation o f Glomerular, Tubular and Normal Proteinuria:  
determination o f Urinary Excretion o f a2-microglobulin. Albumin and Total Protein’ J. Clin. Invest., 1969; 48 ; 1189-  
1198.
C €
Т ел.+44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 95 ---
P S
helena
Biosciences Europe
Т е с т -с и с т е м а  ’’Б е л к и  с ы в о р о т к и - 1 0 ” д л я  п р и б о р а  S A S -M X
(S A S -M X  " S P -lO K it”),
Т е с т -с и с т е м а  ’’Б е л к и  с ы в о р о т к и - 6 0 ” д л я  п р и б о р а  S A S -3
(S A S -3 "S P -6 0 K it"),
Т е с т -с и с т е м а  ’’Б е л к и  с ы в о р о т к и - 1 0 0 ” д л я  п р и б о р а  S A S -3
(S A S -3 ''S P -1 0 0  K it")
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система Белки сыворотки предназначена для разделения и  
определения белков сыворотки методом электрофореза в агарозном геле.
количественного
Сыворотка содержит более 100 отдельных белков, каждый со специальным набором функций, 
и  концентрация которых подлежит специфическим вариациям при различных патологических 
состояниях.^
Со времени изобретения Тиселиусом (Tiselius)^ электрофореза с подвижной границей и  
последующего использования зонального электрофореза белки сыворотки были разделены на 
фракции на основе их заряда при определенном pH. Набор SAS-1 Белки сыворотки 
предназначен для разделения белков сыворотки на 5 основных классов (альбумин, альфа-1 
глобулин, альфа-2 глобулин, бета-глобулин, и  гамма-глобулин) в соответствии с зарядом в 
агарозном геле. Затем белки окрашивают с целью визуализации и  количественной 
интерпретации. Каждая из классических зон электрофореза, за исключением альбумина, 
обычно содержит 2 или более компонентов. Данные о пропорциональном отношении этих 
фракций зарекомендовали себя как хорошее вспомогательное средство при диагностике и  
прогнозировании определенных патологических состояний. ^  ®
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И  МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in-vitro. 
Не глотать и  не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при работе 
со всеми компонентами набора. См. паспорт безопасности химического вещества, положения о  
рисках и  обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации.
СОСТАВ
1. SAS-1 Гель для белков сыворотки
.Содержит агарозу в Трис/барбитал буфере с тиомерсалом и  азидом натрия в качестве 
консерванта. Гель упакован готовым к употреблению.
2. Кислотный синий краситель, концентрат
Содержит концентрированный кислотный синий краситель. Довести содержимое бутыли до 700 
мл с использованием очищенной воды. Перемешать, оставить на ночь, отфильтровать перед 
использованием. Хранить в бутыли с плотно закрывающейся крышкой.
3. Обесцвечивающий раствор, концентрат
Содержит концентрированный обесцвечивающий раствор. Довести содержимое бутыли до 2-х 
литров с использованием очищенной воды. Хранить в бутыли с плотно закрывающейся 
крышкой.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom
1


--- стр. 99 ---
Helena
Biosciences Europe
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рекомендуется выполнять оценку гелей относительно нормальных значений, полученных для 
данного метода в каждой отдельной лаборатории.
Подробное рассмотрение оценки белков сыворотки см. Рицманн С.Е. (Ritzmann S.E.), 1982.®  
Исследования показывают, что значения одинаковы как для мужчин, так и  для небеременных 
женщин. Некоторые различия наблюдают у беременных женщин и у женщин, принимающих 
оральные контрацептивы.
На нормальные значения оказывает некоторое влияние возраст. В  пуповинной крови 
отмечается пониженное значение общего белка, альбумина, альфа 2 и  бета фракций; немного 
повышенный уровень альфа 1  и  нормальный или повышенный уровень гамма фракции (в 
основном материнского происхождения). Количество гамма-глобулинов быстро снижается до
3-х месячного возраста, и  к этому же возрасту другие фракции достигают уровня взрослого 
человека. Уровни гамма-глобулинов соответствуют показателям взрослого человека не ранее 
10-16 летнего возраста. После 40 лет снижается уровень альбумина и  повышается уровень 
бета глобулина.
1. Качественная оценка:
Гели можно оценить визуально на наличие или отсутствие полос, представляющих интерес.
2. Количественная оценка:
Сканировать гель, стороной с гелем вниз, при 595 нм.
В  любом случае повышение или снижение уровня отдельных компонентов сыворотки или 
обнаружение необычных компонентов сыворотки требуют дальнейшего исследования. 
Выполненный гель для белков сыворотки SAS-1 стабилен в течение неопределенного периода 
времени.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Так как все процедуры электрофореза не являются линейными, важно в точности следовать 
данной инструкции по применению с целью достижения оптимального разрешения и  
воспроизводимых результатов. При несоблюдении настоящей инструкции по применению 
полученные результаты могут быть ошибочными.
СПРАВОЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Следующие нормальные значения были получены с использованием 20 нормальных проб 
доноров мужского и  женского пола в возрастных рамках 20-59 лет (данные представлены
Фракция белков Среднее (%) ±2 станд. откл. диапазон
Апьбумин 60,4 55,8-65,0
Альфа 1 3.4 2,2-4,6
Альфа 2 10,3 8,2-12,5
Бета 10,7 7,2-14,2
Гамма 15,0 11,5-18,6
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Teann Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 100 ---
Helena
Biosciences Europe
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Гель (п=16) Мезкду гелями (п=95)
Средняя (%) Коэф. вар. (%) Средняя (%) Коэф. вар. (%)
Альбумин 60,1 1.7 60,4 2,3
Апьфа 1 4,2 7,5 4,3 7,3
Апьфа 2 11,4 4,1 10,3 7,8
Бета 10,5 2,1 11,2 6,8
Гамма 13,8 3,0 13,8 5,5
Чувствительность
Данный метод чувствителен к 0,3 г/л на полосу, что было определено как самая малая 
концентрация белка, которая была явно видна как отдельная полоса на выполненном геле.
Линейность
Линейность метода -  это функция спецификации денситометра, а также эффективность геля. 
Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определил линейность метода, основываясь на 
используемом в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
/. Alper, С.А. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-290.
2. Tiselius, A. 'A New Apparatus fo r Electrophoretic Analysis o f Colloidal Mixtures', Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : 524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization o f  
Proteins, Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,
Hagerstown, 1979.
4. Tietz, N. W . (Ed.), Textbook o f C linical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582, 1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1  : Physiology o f Immunoglobulins-  
Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.
6. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook o f Clinical Chemistry, (3rd Edition), W.B. Saunders Co., Philadelphia, page 524, 1995.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 101 ---
Helena
Biosciences Europe
Т е с т -с и с т е м а  ” И з о ф е р м е н т ы  К р е а т и н к и н а з ы '^ ( в и з у а л ь н ы й  д е т е к т о р ) д л я  
п р и б о р о в  S A S -M X , S A S -1 , S A S -3  (S A S -M X , S A S -1 , S A S -3 "С К  V IS  K it")
ПРИМЕНЕНИЕ
Тест-система предназначена для разделения и количественного определения изоферментов 
'креатинкиназы в сыворотке или плазме методом электрофореза на агарозном геле. 
Креатинфосфокиназа (КФК) (ЕС 2.7.3.2.) является ферментом, передачи энергии, который 
катализирует обратимую реакцию:
ADP i - creatine phosphate ^
СК
ATP + creatine
СК существует в первую очередь в скелетных мышцах, сердечной мышце и головном 
мозге, причем небольшое количество есть и в ряде других тканей. Количество 
разнообразных клинических эпизодов, таких как хирургическое вмешательство, 
внутримышечные инъекции и инфаркта миокарда стимулируют увеличение активности 
КФК в сыворотке крови 2,3.При повышенной активности СК необходимо проводить 
изоферментную оценку. Есть две молекулярных субъединицы СК, обозначаемых как М 
и В, комбинации, которые производят три вида изоферментов. СК-ММ (в основном в 
скелетных мышцах), СК-МВ (миокард) и СК-ВВ (прежде всего головной мозг).
Анализ изоферментов СК является одной из наиболее важных процедур, используемых 
при раннем обнаружении повреждения миокарда. После острого инфаркта миокарда 
(ИМ), СК-МВ появляется в сыворотке крови приблизительно от 4 до 6 часов, достигает 
пика активности на 18-24 часов, и может исчезнуть полностью в течение 72 часов. В 
течение первых 48 часов после перенесенного ИМ, СК-МВ присутствует у 100% 
пациентов с ИМ, а также в некоторых случаях при тяжелой коронарной 
недостаточности 1,3,5.Наиболее обоснованным лабораторным тестом в диагностике 
ИМ является проведение исследований изофермента СК в сочетании с изоферментами 
лактатдегидрогеназы (LD) 3,5-8. Специфичность и чувствительность достигается при 
этих двух тестах и устраняет необходимость проведения дополнительных исследований 
фермента при точной диагностики инфаркта миокарда. Наиболее важным фактором в 
интерпретации изоферментов СК и ЛДГ является выявление характерного изменения 
структуры -  появления многочисленных полос (сравнительно быстрое появление и 
исчезновение СК-МВ и LD1 над LD2) 1,3,9. Персистирующее увеличение СК-МВ не 
свидетельствует об инфаркте миокарда. СК-МВ может быть полезной в диагностике 
малых инфарктов, при которых общая активность СК не превышает верхней границы 
нормы. СК вырабатывает миокардом только 25-40% СК-МВ, а остальное - это СК- 
ММ. Таким образом, подъем СК в связи с инфарктом миокарда происходит не только 
за счет роста СК-МВ, но и СК-ММ. Изоферменты СК были оценены различными 
методами. Электрофорез дает явное преимущество полного разделения изоферментов 
без риска пересечения. Изоферменты СК разделяются в соответствии с их 
электрофоретической подвижностью в агарозном геле, после инкубации с реагентами,
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
ww w .helena-biosciences.com
С €
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 106 ---
/г > ё
Helena
Biosciences Europe
В  шаблон (относительно быстрого появления и исчезновения) 1,3,9.
Позитивные идентификации второго инфаркта миокарда: после первых ИМ. СК-МВ 
возрастает после начинает снижаться. Общая СК не может показывать рост после начала 
снижения.
Значения изоферментов СК и ЛДГ при операциях на открытом сердце ^  менее конкретные, 
чем в большинстве диагностических ситуаций. СК-МВ будет повышена в связи с 
поражением миокарда в следствии оперативной процедуры, а также травмы в сердце от 
манипуляций и катетеризации. ЛДГ переворачивается вторичным по отношению к гемолизу 
с искусственным кровообращением. Пациенты с инфарктом имеют более высокий уровень 
активности КФК-МВ, но широкий спектр активности изофермента не связан с заболеванием 
ИМ, что перекрывает отметил пациентов с ИМ, делая полный дискриминации невозможно. 
Несмотря на эти трудности, точность диагностики ИМ может быть повышена путем 
проведения серийных определений СК-МВ в послеоперационный период и мониторинга 
тенденций. Пери-оперативной инфаркт пациентов, как правило, постепенное повышение 
уровня СК-МВ, в то время как не-больных ИМ обладают более быстрым снижением СК-МВ 
после операции 2, 26.
Высота при заболеваниях, кроме М.: Тяжелая коронарная недостаточность, мышечная 
дистрофия Дюшенна в Рокки Маунтин сыпной тиф, рабдомиолиз, дерматомиозит, 
миаглобинурия, полимиозит, синдром Рея.
СК-ВВ
Часто появляется в сыворотке крови больных раком предстательной железы, а иногда и в 
сыворотке крови больных с другими раками и злокачественными опухолями 1  (см. 
ограничений). Редко появляется в сыворотке крови больных с черепно-мозговой травмой 
вследствие повреждения гематоэнцефалического барьера 1,27. Иногда появляется в 
сыворотке крови больных с тяжелым шоком (вероятно, из-за легкого или небольшого 
участия кишечника).
Иногда появляется в сыворотке крови больных с хронической почечной недостаточностью. 
Число атипичных полос СК не поступало. Нетипичные полосы, мигрирующие между СК- 
МВ и СК-ММ были отнесены к СК-ВВ к комплексу с IgG 28, 29 и комплексу СК-ММ с 
липопротеидами 30, а также другим лицам без положительного определения 31-33. 
Митохондриальная СК мигрирует в катодной области СК-ММ 34 , и группа, обозначенная 
"СК макро", изолированна от больных раком и мигрирует в катодно-СК-ММ 35.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
CK/LD контроля (кат. № 5134) может быть использована для проверки на всех этапах 
процедуры и должна быть использована на каждом геле. Обратитесь к листку-вкладышу для 
анализа приемлемых значений.
ОГРАНИЧЕНИЯ
SAS-1 СК изоферменты - процедура не предназначена для выявления опухолевых маркеров. 
Эталонные значения
Нормальный диапазон исследований осуществляется с использованием практически 
здоровых мужчин и женщин-добровольцев дали следующие результаты:
СК-ММ = 100% СК-МВ = 0% СК-ВВ = 0%
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
ww w .helena-biosciences.coin
С €
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 107 ---
Helena
Biosciences Europe
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Линейность
Метод линеен при активности СК до 1300 МЕ/л в каждой фракции. 
Чувствительность
Метод чувствителен от 4 МЕ/л для каждой фракции. 
Воспроизводимость
ск-мм
ск-мв
св -в в
W Ithtn G e |(n = l)
M e w  (% ) C V (% )
68.3 2.9
10.3 6.3
21.4 7.3
B etw een G e |(n = 4 ) 
M «an(% ) C V (% )
69.5 6.6
10.8 16.4
19,7 17.8
ЛИТЕРАТУРА
1 . Brisk L.K., 'CK & LD  Isoenzyme. A Self-Instniclionul Text', Am. Soc. O f Clin. Path. Press, Chicago, 1984 :  30-47.
2. Wolf, P.L, Griffiths, J.C  and Koett, J. W., 'Interpretation o f Electrophoretic Patterns o f Proteins and Isoenzymes ’,  
Mason Publishers, hlew York, 1981 : 60.
'3. Tietz, N.W., Ed. ‘Textbook o f Clinical Chemistry’,  W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986 :  678-700.
4. Galen, R.S., ‘The Enzyme Diagnosis o f Myocardial Infarction’,  Human Path., 1975; 6(2): 141-155.
5. Wagner, G.S., Roe, C.R., Limbird, L.E., Rosati, R..4. and Wallace, A.G., ‘The Importance o f Identification o f the  
Myocardial-Specific Isoenzyme o f Creatine Phosphokinase (MB Form) in the Diagnosis o f Acute Myocardial  
Infarction’,  Circulation, 1973; 47: 263-269.
6. Marmor, A. and Alpan, G., ‘Specificity o f Creatine Kinase M B Isoenzyme fo r Myocardial Injury’,  Clin. Chem.,
1978; 24(12): 2206.
7 . Galen, R.S., Reiffel, J.A. and Gamhino, S.R., ‘Diagnosis o f Acute Myocardial Infarction’,  J. Am. Med. .Assoc., 1975;  
232(2): 145-147.
8. Frolich, J., Brosseiik, A., Grant, A. and McLennan, М., ‘Study o f the Value o fC P K  and LD H  Isoenzyme  
Determinations in the Differential Diagnosis o f Ischemic Chest Pain', Clin. Biochem., 1978; 11(6): 232-234.
9. Yasmineh, W.G., Pyle, R.B, Cohn, J.N., N icolojf D.M., Hanson, N.Q. and Steele, B.W., 'Serial Serum Creatine  
Phosphokinase M B I.soenzyme Activity» After Myocardial Infarction’,  Circulation, 1977; 55(5): 733-737.
10. D ’Souza, J.P., Sine, H.E., Hoi'vitz, R.A., Kubasik, N.P., Brody, B.B. and Barold, S.S., ‘The Significance o f the MB  
Isoenzyme in Patients with Acute Cardiovascular Disease with a Normal or Borderline Total C P  К  Activity’,  Clin.  
Biochem., 1978; 11(5): 204-209.
11. Mercer, D. W., 'Separation o f Tissue and Serum Creatine Kinase Isoenzymes by Ion-Exchange Column  
Chromatography’,  Clin. Chem., 1974; 20(1): 36-40.
12. Rao, P.S., Lukes, J.J., Ayres, S.M. and Mueller, H., 'New manual and Automated Method for Determining Activity  
'of Creatine Kinase Isoenzyme MB, by Use o f Dithiothreitol: Clinical Applications’,  Clin. Chem., 1975; 21(11): I6I2-  
1618.
13. Jockers-Wretou, E. and Pfleiderer, G., 'Quantitation o f Creatine Kinase Isoenzymes in Human Tissues and Sera  
by an Immunological Method’,  Clin. С  him. Acta, 1975; 58: 223-232.
14. Roberts, R., Sobel, B.E. and Parker, C.W., 'Radioimmunoassay fo r Creatine Kinase Isoenzymes’,  Science, 1976;  
194: 855-857.
15. Van Der Veen, K.J. and Willebrands, A.F., 'Isoenzymes o f Creatine Phosphokinase in Tissue Extracts and in  
Normal and Pathological Sera’,  Clin. Chim. .Acta, 1966; 13: 312-316.
16. Wong, R. and Swallen, T.O., ‘Cellulose Acetate Electrophoresis o f Creatine Phosphokinase Isoenzymes in the  
Diagnosis o f Myocardial Infarction’,  Am. J. Clin. Pathol., 1975; 64: 209-216.
17. Burger, A.. Richterich, R. und Aebi, H., 'Die Heterogenitat der Kreatin-Kinase’,  Biochemische Zeitschrift, 1964;  
339: 305-314.
18. Deul, D.H. and van Breeman, J.F.L., 'Electrophoresis o f Creatine Phosphokinase from Various Organs’, Clin.  
Chim. Acta, 1964; 10: 276-283.
19. Rosalki, S.B., ‘Creatine Phosphokinase Isoenzymes ’, Nature, 1965; 207: 414.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 108 ---
У/ЯР
Helena
Biosciences Europe
20. Trainer, T.D. and Grnenig, D., ‘A Rapid Method for the Analysis o f Creatine Phosphokinase Isoenzy’tnes', Clin.  
Chim. Acta, 1968; 21: 151-154.
21. Henry, R.J. and Cannon, D.C., E d ’s, ‘Clinical Chemistry Principles and Technics’,  2nd Edition, Harper and Row,  
New York, 1974: 901-903.
22. Young, D.S. ,  ‘Effects o f Drugs on Clinical Laboratory Tests’,  3rd Edition, A A C C  Press, Washington D.C., 1990.
23. Cho, H. W . and Meltzer, H. У., ‘Factors Affecting Stability o f Isoenzymes o f Creatine Phosphokinase ’,  Am. J. Clin.  
Pathol., 1979; 71(1): 75-82.
24. Marmor, A., Alpan, G., Keidar, S., Grenadier, E. and Palant, A., ‘The M B  Isoenzyme o f Creatine Kinase os an  
Indicator o f Severity' o f Myocardial Ischaemia', Lancet, 1978; Oct 14: 812-814.
25. Galen, R.S., Personal Communication. June 1980.
26. Galen, R.S., ‘Diagnostic Tests in Cardiac and Non-Cardiac Disorders’ Diag. Med., 1978 Feb., 74-87.
27. Bayer, P.M., Gabl, F., Granditsch, G., Widhalm, K., Zyman, H. and Deutsch, E., ‘Creatine Kinase Isoenzymes in  
Cerebral Fluid in a Case o f Brain Damage’,  Clin. Chem., 1976; 22(8): 1405-1407.
28. Stein, W . and Bohner, ‘Immunoglobidin-Bound Creatine Kinase В В ("Macro С  К ”) in Three Patients with  
Different Diseases', Clin. Chem., 1979; 25(8): 1513-1514.
29. Piidek, M.R., Jacobson, B.E., Urquhart, N. and Rabkin, S. W ., ‘Effect o f Macro Creatine Kinase BB on Results o f  
Different Creatine Kinase Isoenzyme Methods’,  Clin. Chem., 1982; 28(6): 1400.
30. Velletri, K , Griffiths, IV. C. and Diamond, I., ‘Abnormal Electrophoretic Mobilit\> o f a Creatine Kinase M M  
Isoenzyme’, Clin. Chem., 1975; 21(12): 1837-1838.
31. Sax, S.M., Moore, J.J., Giegel, J.L. and Welsh, М., ‘Atypical Increase in Serum Creatine Kinase Activity in  
Hospital Patients’,  Clin. Chem., 1976; 22(1): 87-91.
32. Ljungdahl, L. andGerhardt, W., ‘Creatine Kinase Isoenzynne Variants in Human Serum’,  Clin. Chem., 1978;  
24(5): 832-834.
33. Lott, J.A. and Heinz, J. W., ‘A Stable, Unusual Isoenzyme o f Creatine Kinase Obser\>ed in a Case o f Acute Anoxia’,  
Clin. Chem., 1978; 24(6): 1047.
34. James, G.P. and Harrison, R.L., ‘Creatine Kinase Isoenzymes o f Mitochondrial Origin in Human Serum ’,  Clin.  
Chem., 1979; 25(6): 943-947.
35. Yuu, Hoyuo, et ai, Clin. Chem., 1978: 24(11): 2054-2057.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 113 ---
lelena
Biosciences Europe
визуально на наличие или отсутствие тех или иных фракций. 
Количественная оценка: отсканируйте гели при 595nm, в течение 2 часов после проведения 
анализа. Сделанные гели должны храниться в темноте любое время.
После проведения электрофореза, как правило, можно увидеть 5 фракций ЛДГ. Быстрые 
фракции (LD1) мигрируют в геле аналогично альфа! глобулинам, а медленные фракции 
(LD5) мигрируют аналогично гамма-глобулинам. Другие три зоны обладают 
промежуточной подвижностью. Активность ЛДГ в сыворотке крови отражает распад 
многих типов клеток, и все пять зон могут быть видны. LD2 преобладает, затем LD1 и 
LD3. LD4 и LD5 встречаются в незначительном количестве.
1. LD2 -  это изофермент ЛДГ, который находится в нормальной сыворотке в наибольшем 
количестве
2. LD1 повышается и может быть больше, чем LD2 при следующих состояниях:
а) инфаркт миокарда
б) мышечная дистрофия Дюшенна, которая представляет собой клиническую картину 
подобную ИМ, но помочь гораздо легче, если провести диферентировку заболевания '
с) Гемолиз (в том числе гемолитическая анемия), может быть решающим фактором, когда 
активность изоферментов ЛДГ сыворотки крови достигает уровня выше 5-ти норм и когда, 
в основном увеличивается LD1 и LD2 фракции. Общей уровень ЛДГ гораздо выше при 
гемолитической анемии, чем при ИМ, если сопровождается тяжелым шоком. 
Рецедивы злокачественной анемии дают такую же картину ЛДГ, как гемолиз и показывают 
один из самых высоких уровней общей активности ЛДГ в сыворотке в таком состоянии
г) Инфаркт почки
3. LD3 увеличивается при инфаркте легких 7,12,21
4. Увеличение изофермента LD4 не было связано с какой-либо патологией.
5. LD5 увеличивается при патологии печени и мышечных повреждениях, а также при 
заболеваниях кожи ’.
6. Когда общее значение уровня ЛДГ значительно увеличено, но все изоферменты
распределены нормально, те имеют нормальные проценты, то такое состояние называют 
изоморфной картиой. Изучение различных групп клинических диагнозов, показали, что эта 
картина может наблюдаться при кардиореспираторном заболевании, злокачественных 
опухолях, переломах, болезни центральной нервной системы, инфекции и воспалении, 
циррозе печени, алкоголизме, травме без перелома, инфекционном мононуклеозе, 
гипотиреозе, уремии, некрозе, псевдомононуклеозе, вирусемии и непроходимости 
кишечника .
7. Изоферменты ЛДГ и СК менее спецефичны для операциях на открытом сердце, чем они 
есть в большинстве диагностических ситуаций. СК-МВ будет повышенна в связи с 
поражением миокарда при оперативном вмешательстве и травме в результате манипуляций 
и катетеризации сердца. LD2/LD1 может быть повышенна вторичной по отношению к 
гемолизу связанном с искусственным кровообращением
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
СК/Контроль (кат. № 5134) может быть использован для проверки на всех этапах 
процедуры и должен быть использован на каждом геле. Обратитесь к листку-вкладышу для 
оценки полученных значений.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www .helena-biosciences.com
С €
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 114 ---
helena
Biosciences Europe
ОГРАНИЧЕНИЯ
Тест-система изоферменты ЛДГ Vis-12 SAS-1 не предназначена для выявления 
опухолевых маркеров.
НЕОБХОДИМЫ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ:
Л. Должна быть определена общая активность ЛДГ. Существуют противоречивые 
сообщения об истинном значении общего уровня ферментов в сыворотки крови и степенью 
тяжести заболевания
2. В диагностике ИМ, необходимо выполнять анализ изоферментов СК
3. Исследования гаптоглобина могут быть выполнены, чтобы исключить гемолиз, как одну 
из причин повыщения LD1 и LD2.
РЕФЕРЕНСНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Приведенные ниже нормальные значения были получены в исследованиях проведенных 
компанией Helena. Эти значения могут служить лищь в качестве ориентира. Каждая 
лаборатория должна устанавливать свои собственные ожидаемые нормальные значения для 
данного метода.
LD1 = 20,6-32,0%
LD2 = 31,1 -35,9%
LD3 = 19,8-25,7%
LD4 = 7,0 - 10,4%
.LD5 = 6,5- 14,0%
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Линейность.
Эта система является линейной до 650 МЕ/л в группе или общей активности ЛДГ 1300 
МЕ/л
ЛИТЕРАТУРА
/. Brisk, L.K. 'СК & LD  Isoenzymes А Self-Instructional Text’ ,  Am. Soc. o f Clin. Path. Press, Chicago, 1984: 85-  
120.
2. Hadden, D.M. and Prentiss, Т., Cardiac Profiling by Electrophoresis’,  Lab. Mgt., 1977; May: 19-24.
3. Henry, J.D. ‘Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods’, 16th Edition, 1979; I: 366-369, fV.B.  
Saunders Co., Philadelphia.
4. Galen, R.S., Reiffel, J.A. and Gambino, S.R., Diagnosis o f Acute Myocardial Infarction’,  J. Am. Med. Assoc., 1975;  
232(2): 145-147.
5. Frolich, J., Brosseuk, A., Grant, A. and McLennan, М., ‘Study o f the Value o f C P K  and L D H  Isoenzyme 
Determinations in the Differential Diagnosis o f Ischemic Chest P a in ’,  Clin. Biochem., 1978; 11(6): 232-234.
6. Wagner, G.S., Roe, C.R., Limbird, L.E., Rosati, R.A. and Wallace, A.G., ‘The Importance o f Identification o f the  
Myocardial-Specific Isoenzyme o f Creatine Phosphokinase (MB Form) in the Diagnosis o f Acute Myocardial  
Infarction’,  Circulation, 1973; 47: 263-269.
.7. Nerenberg, S.T., ‘Electrophoretic Screening Procedures’,  1973: 96-125, Lea & Febiger, Philadelphia.
8. Preston, J.A., Briere, R.O. and Batsakis, J.G., ‘Rapid Electrophoretic Separation o f Lactate Dehydrogenase  
Isoenzymes on Cellulose Acetate’,  Am. J. Clin. Pathol., 1965; 43(3): 256-260.
9. Hsu, M-Y., Kohler, M.M., Barolia, L. and Bondar, R.J.L., ‘Separation o f Five Isoenzymes o f Serum Lactate  
Dehydrogenase by Discontinuous Gradient Elution from a Miniature Ion-Exchange Column ’,  Clin. Chem., 1979;  
25(8): 1453-1458.
10. Usategui-Gomez, М., Wicks, R. W . and Warshaw, М., ‘Immunochemical Determination o f the Heart Isoenzyme o f  
Lactate Dehydrogenase(LDHI) in Human Serum’,  Clin. Chem., 1979; 25(5): 729-734.
11. Rotenberg, Z., Weinberger, I., Sagie, A., Fuchs, J., Sperling, O. and Agmon, J., ‘Lactate Dehydrogenase  
Isoenzymes in Serum During Recent Acute Myocardial Infarction’,  Clin. Chem., 1987; 33(8): 1419-1420.
12. Tietz, N.W. et al., ‘Textbook o f Clinical Chemistry’,  1986: 691-700, W.B. Saunders Co., Philadelphia.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
ww w .helena-biosciences.com
С €
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 115 ---
/ ' / ’ S '
Helena
Biosciences Europe
/ i . Rothwell, D.J., Jendrzejczak, B., Becker, M. and Doumas, B.T., ‘Lactate Dehydrogenase Activities in Serum and  
Plasma', Clin. Chem., 1976; 22(7): 1024-1026.
14. Latner, A .L  andSkillen, A. IV., ‘Isoenzymes in Biology and Medicine’,  1968: 146-157, Academic Press, London.
15. Kreutzer, H.H. and Fennis, W.H.S., 'Lactic Dehydrogenase Isoenzymes in Blood Serum after Storage at Different  
Temperatures’,  Clin. С  him. Acta, 1964; 9: 64-68.
16. Galen, R.S., Personal Communication, Dec. 1981.
17. Clark, Р.1., Kostuk, W.J. and Henderson, A.R., ‘Time-Dependency o f Human Lactate Dehydrogenase Isoenzyme 5  
'Inhibition by U rea’,  Clin. Chem., 1976; 22(12): 2059.
18. Young, D.S., ‘Effects o f Drugs on Clinical Laboratory Tests’,  3rd Ed., 1990, A A C C  Press, Washington D.C.
19. Roses, A.D., Roses, M.J., Nicholson, G.A. and Roe, C.R., ‘Lactate Dehydrogenase Isoenzyme 5 in Detecting  
carriers o f Duchenne Muscular Dystrophy’, Neurology, 1977; 27(May): 414-421.
20. Yasmineh, W.G., Ibrahim, G.A., Abbasnezhad, M. and Aw ad, E.A., ‘Isoenzyme Distribution o f Creatine Kinase  
and lactate Dehydrogenase in Serum and Skeletal Muscle in Duchenne Muscular Dystrophy, Collagen Disease, and  
Other Muscular Disorders’, Clin. Chem., 1978; 24(11): 1985-1989.
21. Papadopoulos, N.M., ‘C linical Applications o f Lactate Dehydrogenase Isoenzymes ’,  Annals o f Clin. Lab. Sci.,  
1977; 7(6): 506-510.
22. Jacobs, D.S., Robinson, R.A., Clark, G.M. and Tucker, J.M., ‘Clinical Significance o f the Isomorphic Pattern o f  
the Isoenzymes o f Serum Lactate Dehydrogenase’,  Annals o f Clin, and Lab. Sci., 1977; 7(5): 411-421.
23. Galen, R.S., ‘Diagnostic Tests in Cardiac and Non-Cardiac Disorders’ Diag. Med., 1978 Feb., 74-87.
24. Mohiuddin, S.М., Raffetto, J., Sketch, M.H., Lynch, J.D., Schultz, R.D. and Runco, V., ‘L D H  Isoenzymes and  
Myocardial Infarction in patients Undergoing Coronary Bypass Surgery: An Excellent Correlation’, Am. Heart J.,  
1976; 92(5): 584-588.
25. Chapelle, J-P., Albert, A., Smeets, J-P., Marechal, J-P.,Heusghem, C. and Kulbertus, H.E., ‘Does Lactate  
Dehydrogenase Isoenzyme-5 Contribute to the Predictive Power o f Total Lactate Dehydrogenase in Myocardial  
Infarction?’ Clin. Chem., 1983; 29(5): 774-777.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта lnfo@helena- 
biosciences.com
www .helena-biosciences.com
С €
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 117 ---
H e l e n a
B i o s c i e n c e s  Europe
,3. Изоферменты ALP для SAS-3; субстрат ___
Сод^)жит BCIP (5-Вгото-4-хлор-3-индолил ф о ^ а т ) в буфере !2-ампино-151етил-Г 
пропандиола. Субстрат готов к использованию в упакованном виде.
4. Изоферменты ALP для SAS-3, хромоген.
Содержит NBT (нитросиний тетразолия) порошок. См. пошаговое руководство.
5. Другие компоненты набора
Каждый комплект содержит инструкции по эксплуатации и достаточное количество 
блоттеров С для анализа на 10 гелей.
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Г ели, изоферменты ALP для S AS-3
Гели должны храниться при температуре 15 ... 30 ° С и стабильны до срока годности, 
указанного на упаковке. НЕ хранить в холодильнике и не замораживать. Ухудшение геля 
можно выявить по следующим признакам 1) появление кристаллов, указывает на то, что 
гель был заморожен, 2) трещины и шелушения указывают на то, что гель высох и 3) 
видимые загрязнения агарозы - бактериальной или грибковой природы.
2. Изоферменты ALP для SAS-3 разделение Enhancer
Усилитель разделения должен хранится при 2 ... 6 ° С, устойчив до истечения срока, 
указанного на этикетке.
3. Изоферменты Й Ь ^для SAS-3, субстрат
Субстрат должен храниться при^тёмпературе +2 .f. +6 ° С, Э этих условиях jpH устойчив до 
истечения срока годноВти, указанного на этикетке. Избегать контаминации раствора 
субстрата
4. Изоферменты ALP для SAS-3, хромоген
Флаконы с хромогенным раствором должны храниться при температуре 2 ... 6 ° С и 
стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке.
МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ 
Cat. № 310200 аппликаторы (1 х 10)
Cat. № 310300 аппликаторы (5 х 10)
Cat. № 210100 одноразовых ячейки для образцов (100)
Cat. № 3386 SAS-3 распределитель реагентов 
Cat. № 3100 теплоотводящая жидкость 
Дистиллированная вода
ОБЕСЦВЕЧИВАЮЩИЙ РАСТВОР: смешайте 400 мл ледяной уксусной кислоты и 7600ml 
очищенной воды. Хранить в плотно закрытой бутылке.
Вортекс.
НРОБОПОДГОТОВКА
Свежесобранные образцы сыворотки. Сыворотка должна быть отмыта от эритроцитов как 
можно скорее после взятия крови. Образцы собранные в пробирку с консервантом: 
оксалатом, цитратом или ЭД1А не могут быть использованы, так как эти вещества 
препятствуют определению активности щелочной фосфатазы Общий уровень ALP 
должен быть определен соответствующим образом. Пациенты должны быть на диете.
С €
Тел .+44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-
b io sc ie n c e s.c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 118 ---
/ 3 ^
л е 1 е п аB i o f  c i L r K c : . E u r o p e
Пациенты с группой крови О или В могут иметь повышенную кишечную фракцию ALP в 
течении 2 часов после жирной еды 4-6.
.Рекомендуется, чтобы сыворотка использовалась как можно скорее после сбора и 
храниться сыворотка должна при температуре +2 ... +6 ° С. В случае необходимости 
сыворотку крови следует хранить в замороженном виде при температуре -20 ° С не более 
чем 24 часа 7,8.
ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ:
1) фосфаты, оксалаты, цитраты и цианиды могут препятствовать определению активности 
ALP 4, 8.
2) Избыток глицина может препятствовать определению ALP из-за комплексообразования 
с ионами магния.
3) ЭДТА может ингибировать некоторые изоэнзимы ALP 4.
4) Некоторые препараты вызывают ферментативный дисбаланс, который может повлиять 
на уровеньАЬР 9.
Образцы с высокой суммарной активности ALP можно разбавлять, если высокая 
активность влияет на способность различать типы изоферментов. Разведения не должны 
быть выполнены в физиологичесим раствором или водой, так как будет затронута миграция 
Изоферментов. Разведения должны быть выполнены в сыворотке крови от мужчины- 
донора, который был термически обработан (56 ° С в течение 15-20 минут), чтобы 
уничтожить эндогенную активность ALP. Пригодности сыворотки для использования в 
качестве растворителя должна быть проверена перед использованием.
ПОШАГОВАЯ ИНСТРУКЦИЯ
1. Ниже представлено программирование параметров анализатора (SAS3)
Step Tim e (m m :ss) T em perature (®C) V oltage
Electrophoresis
Load Sample 00:30 2 1
Apply Sample 01:00 21
Repeat *Load Sample» Apply Sample' for a total of 4 applications.
Electrophoresis 30:00 i  0 500
Apply Reagent 2 1
Incubate 35:00 45
‘  Dry 03:00 54
O ther
Speed 6  
Speed 6*
8 cycles
- использование места для 1  SPIFE 3000 и SAS-3
Примечание: Для SPIFE 3000 / SAS-3 пользователей: шаг "Применить реагента" должен 
быть запрограммирован.
оперативное Пресс-клавишу, чтобы продолжить ", так что реагент флаконе может быть 
помещен в центр положение реагент, после растворения.
С €
Тел. +44(0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-
b io sc ie n c e s.c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 119 ---
H e l e n a
Step
Stainer
Time (mmiss) Tem perature (X )
Destatn 05:00
Destain 05:00
Dry 17:00 63
Voltage Other
Recirculate OFF 
Recirculate OFF
2. Установите аппликаторы в соответствующие позиции:
Applicator Position
SP IF E  Combo 9
SP IF E  2000/3000/SAS-3 8
3. Для каждого образца или контроля 30 добавить реагента для разделения ALP 
Enhancer - ЮцЬ и хорошо перемешать. Инкубируйте при 15 ... 30 ° С в течение 10 минут 
перед использованием.
4. i) для SPIFE Combo пользователей: отберите 20цЬ образца. Закройте образцы от 
испарения.
II) для SPIFE 2000 / 3000 / SAS-3 пользователей: Отберите 35цЬ образца в соответствующие 
чашки образца. Закройте образцы от испарения.
5. Удалите гель из упаковки, снимите защитную пленку.
6. Распределите 2 мл теплоотводящей жидкости на левой стороне камеры и осторожно 
поместите гель в камеру, совмещая отверстия в геле с штырьками на камере и избегайте 
образование пузырьков под гелем. Прикрепите электрод на внешнюю сторону 
электрододержателя, так чтобы он находился в контакте с гелем блоков (SPIFE 3000 / SAS- 
3 пользователей:) и распределителем реагентов с внутренней стороны электрода.
7. Промокните поверхность геля с блоггером С, не накрывайте крышкой.
8. Выберите программу тест щелочная фосфатаза и, следуя подсказкам, делайте образцы, 
выполните электрофорез и инкубирование геля с реагентами.
9. Примерно за 10 минут до окончания электрофореза, разведите 1  флакон ALP 
изофермента Хромогена с 3.0ml ALP субстратом. Перемешайте на вортексе и дайте 
постоять в течение 2 минут до использования.
10. После электрофореза:
i) SPIFE Combo / 2000 пользователей: Залить содержимое флакона ALP вдоль одного края 
геля.
Использование распределителя реагентов, по поверхности геля распределите реагент два 
раза, туда и обратно, чтобы обеспечить равномерное покрытие.
II) SPIFE 3000 / SAS-3 пользователи: установите флакон в центр слота реагента и нажмите 
любую клавишу для продолжения.
11. После инкубации удалите электрод и удалите гель и блоки с использованием 
соответствующей лопаточки.
12. Прикрепите гель в держатель для окрашивания лицом вперед,
13. Выберите тест щелочную фосфатазу из меню программы, и, следуя подсказкам, 
обесцветте и высушите гель.
14. В конце цикла окрашивания, удалите гель из камеры. Гель готов к рассмотрению.
4
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena-
www.helena-
biosciences.com
Helena B iosciences Europe Q ueensw ay South, 
Team  V alley Trading Estate, G ateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD. United Kingdom


--- стр. 121 ---
; с е /
h e l e n a
характерную квадратную форму, в отличие от более нормальной продолговатой формы 
электрофоретической полосы. Костная изоферментная фракция увеличивается, как 
результат возросшей активности остеобластов.
Это изофермента, как правило, повышается у растуших детей и взрослых в возрасте старше 
50 лет. Высокие значения общей активности ALP были отнесены к увеличению костной 
фракции изофермента при болезни Педжета или почечной рахит 
Аномально высокий уровень костной фракции изофермента может также служить 
признаком рака костей, остеомаляция или застоя в брюшине Снижение костнойфракции 
ALP у детей может быть связано с кретинизм или гипофосфотазой.
Доявление полосы у катода до костной фракции - макропеченочная фракция (быстрый 
печени). Макропеченочная фракция ALP была выделена в случаях с метастатическим раком 
печени и была предложена в качестве диагностического инструмента для выявления таких 
случаев. Она также была выделена у больных с вирусным гепатитом, алкогольным 
циррозом и другими заболеваниями печени. Данные, полученные в Viot и associates 
предпологают, что макропеченочная фракция ALP в значительной мере связана с наличием 
метастазов в печени, и что присутствие этого изофермента позволяет прогнозировать 
появление метастазов в печени. Viot также сообщает, что ма 1фОпеченочная фракция ALP 
проявляется, иногда у больных без каких-либо заболеваний .
Кишечная группа изофермента ALP появляется у катода рядом с макропеченочной 
фракцией. Появление до трех полос очень часто возможно в образцах, взятых у пациентов 
не находящихся на диете.
1. Качественная оценка: гели могут быть визуально осмотренны на наличие или отсутствие 
каких-либо конкретных полос.
2. Количественная оценка: Сканирование геля SPIFE ALP изофермента (гелевой стороной 
вниз) в течение 2 часов после завершения при 595nm и щели размером 5.
В любом случае, увеличение или уменьшение отдельньгк компонентов сыворотки или 
выявления необычных компонентов сыворотки требует расследования. Завершение SAS-3 
ALP изофермента гель следует хранить в темноте, чтобы предотвратить повышенный фон 
окраски.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контроль изоферментов щелочной фосфатазы (кат. № 3059) содержит нормальный уровень 
печеночной и костной фракции и может быть использован для проверки на всех этапах 
процедуры и должен быть использованы на каждом геле. Для оценки значений, обратитесь 
к листу-вкладышу.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Определение изоферментов ALP, таких как Риган, Нагао и ПА может потребовать 
использования дополнительных протоколов испытаний, таких, как тепловая инактивация
16, ингибирование аминокислот 
полиакриламидном геле 
Ч увствительность
1 7 - 1 9, денатурация мочевины, 18 или разделения на
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-
b io sc ie n c e s.c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 122 ---
л е 1 е п а
Метод чувствителен от 8 U/L для каждого диапазона, определяется как низкая 
концентрация изофермента ALP которая проявляется как дискретная группа по 
завершению разгонки геля.
Линейность
Линейность метода является функцией денситометра и приведена в спецификации, а также 
зависит от производительности геля.
Рекомендуется, чтобы каждый клиент определил линейность метода, основанную на 
денситометре, используемого в его лаборатории.
Эталонных значения
Рекомендуется, чтобы любая оценка геля осуществлялась исходя от нормальных значений, 
которые были изготовлены для этого теста в каждой отдельной лаборатории. 
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Воспроизводимость
Within-Run (n=20) Between-Run (n=60)
Mean CV (%) Mean CV (%)
Liver 61.2% 1.0 61.5% 6.5
Macrohepatic 38.8% 1.6 38.5% 2.2
ЛИТЕРАТУРА
/. Fishman, W.H. А т. J. Med., 1974; 56 :  617-650.
2. Moss, D.W. and Edwards, R.K. Clin. Chim. Acta, 19S4; 143 : 177-182.
3. Moss, D. W . et al. Biochem. J., 1966; 98: 32C-33C.
4. Young, D.S. et al., ‘Effects o f Drugs on C linical Laboratory Tests’,  3rd Ed., Л ЛСС Press, Washington D.C., 1990.
5. Sundblad, L. et al Clin. Chim. Acta, 1973; 45 :  219-223.
6. Rhone, D.P. et al, Clin. Chem., 1973; 19(10) ; 1142-1147,
7 . Massion, C.G. andFrankenfeld, J.K,, Clin. Chem., 1972; 18(4) :  366-373.
S. W olf P.L., Arch. Pathol. Lab. Med, 1978; 102 :  497-501.
9. Ahmad, 1 ., Clin. Chem., 1978; 24(10); 1850-1851.
10. Fritsche, И.А. and Adams-Park, И.Н., Clin. Chem., 1972; 18(5) ; 417-421.
11. Lee, l.M . and Kenny, M.A., Clin. Chem., 1975; 21(8) ; 1128-1135.
12. Eastman, J.R. and Bixler, D., Clin. Chem., 1977: 23(9) :  1769-1770.
13. Cherian, A.G. and Hill, J.G., Am. J. Clin. Pathol., 1978; 70(5) ; 783-789.
14. Nerenhurg, S.T. 'Medical Technology', Lea and Fehiger Inc., Philadelphia, 122-123, 1973.
15. Viot, M. et al. Biomedicine, 1979; 31 ; 74-77.
16. Posen, S. et al, Ann. Int. Med., 1965; 62(6) ; 1234-1243.
17. Stepan, J. and Vecerek, S., Acta Univ. C arol, 1977: Mono  77; 135-140.
18. О ’Carroll, D. et al., Am. J. Clin. PathoL, 1975; 63 : 564-572.
19. Rhone, D.P. andMizuno, F.M., Am. J. Clin. PathoL, 1973; 59 ;  531-541.
20 Johnson, R.B. etal,  Clin. Chem., 1972; 18(2) : 110-115.
21. Rosalkl S.B. andFoo, A.Y., Clin. Chem., 1985; 31(7) ; 1198-2000.
C €
Тел .+44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-
b io sc ie n c e s.c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 123 ---
/ J 3
л е 1 е п а
Тест-система "Изоформы гемоглобина,
изоэлектрофокусирование" для приборов SAS-MX, SAS-1, SAS-3 
(SAS-MX, SAS-1, SAS-3 "HB-IEF").
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для разделения гемоглобинов человека методом электрофореза 
в агарозном геле.
Гемоглобины (НЬ) представляют собой группу белков, основной функцией которых 
является транспортировка кислорода из легких к тканям, а углекислого газа -  в обратном 
направлении. Они состоят из полинептидных цепей, называемых глобинами, и групп 
ферропротопорфирина (гемов). Специфическая последовательность аминокислот образует 
каждую из четырех полинептидных цепей. Каждая нормальная молекула гемоглобина 
состоит из одной пары альфа и одной пары отличных от альфа цепей. В гемоглобине 
здорового взрослого человека, НЬА, цепи, отличные от альфа, именуются бета. Цепи 
фетального гемоглобина, отличные от альфа, именуются гамма. Незначительная (3%) 
фракция гемоглобина, именуемая НЬА2, содержит альфа и дельта цепи. Две другие цепи 
формируются в эмбрионе.
Основную часть гемоглобина в эритроцитах здорового взрослого человека составляет НЬА 
наряду с небольшими количествами НЬА2 и HbF. Кроме того, в настоящее время известны 
более 400 мутаций гемоглобинов, некоторые из которых могут оказывать серьезное 
клиническое воздействие, особенно в гомозиготном состоянии или в комбинации с другим 
анормальным гемоглобином. Уинтроб ' (Wintrobe) подразделяет аномалии синтеза 
гемоглобина на три группы.
1. Производство анормальной молекулы белка (например, серповидноклеточная анемия).
2. Снижение объема синтеза нормального белка (например, талассемия).
3. Аномалии развития (например, наследственная персистенция фетального гемоглобина 
(HPFH)).
Наиболее часто встречаются две мутации молекулы гемоглобина, HbS и НЬС. Менее часто 
встречаются НЬ Lepore, НЬЕ, HbG-Philadelphia, HbD-Los Angeles, HbO-Arab. ^
Hb-IEF 10 -  это простая процедура, которая требует незначительного количества 
гемолизата для получения дополнительных доказательств присутствия HBs, НВ и Hbf, а 
также несколько других аномальных гемоглобинов.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при 
работе со всеми компонентами набора. См, паспорт безопасности химического вещества, 
положения о рисках и обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации. 
СОСТАВ
1. Гель Alkaline НЬ
Содержит агарозу и сепараторы, pH 6-8 с азидом натрия и тиомерсалом в качестве 
консерванта. Г ель упакован и готов к употреблению.
2. Hb-IEF анодный раствор.
Содержит О.ЗМ уксусной кислоты. Раствор готов к употреблению.
3. Hb-IEF катодный раствор.
С €
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South.
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom
1


--- стр. 125 ---
/ J f
H e l e n a
Cat. No. 5014 Bee для проявления 
Cat. No. 3039 Охлаждающие блоки для камеры изо электрофокусирования 
Cat. No. 3100 REP Prep 
Cat. No. 5331 AFSC Hemo Control 
Cat. No. 5330 AFSA2 Hemo Control 
Cat. No. 5329 ASA2 Hemo Control 
Cat. No. 5328 AA2 Hemo Control
Сушильная печь с принудительным движением воздуха, нагрев до 60-70°С 
Фиксирующий раствор; Смешайте 5% трихлоруксусную кислоту в 35% р-ре метанола. 
Обесцвечивающий раствор: Смешайте 500 мл метанола и 500 мл дистиллированной воды. 
Добавьте 100 мл ледяной уксусной кислоты. Хранить в закрытой крышкой бутылке. 
Физиологический раствор (0,85% NaCl)
Очищенная вода
О ТБОР И ПОДГТОВКА ОБРАЗЦОВ
Предпочтение следует отдать свежесобранной в ЭДТА или антикоагулированной с 
использованием гепарина крови. Образцы допускается хранить в охлажденном виде при 
температуре 2-6°С сроком до 1  недели. Для достижения оптимальных результатов отмытые 
солевым раствором эритроциты следует использовать для приготовления лизатов. Таким 
образом, исключается возможная интерференция с белками плазмы.
а) Смешать 200цл хорошо перемешанной цельной крови со 1  О О О  цл солевого раствора.
б) Центрифугировать в целях получения осадка эритроцитов,
в) Удалить ЮООрл надосадочной жидкости и утилизировать ее.
г) Добавить еще ЮООцл солевого раствора и хорошо перемешать.
д) Повторить шаги б-д 2 раза.
е) После последнего центрифугирования удалить ЮООцл надосадочной жидкости и 
работать с оставшимся образцом как с цельной кровью, или удалить всю надосадочную 
жидкость и работать с оставшимся образцом как с отмытыми осажденными эритроцитами. 
Разведите каждую пробу контроля/пациента до концентрации гемоглобина 2,0 - 4,0 g/dL 
гемоглобин лизирующим агентом Hb-IEF для не окрашиваемых гелей или до концентрации 
гемоглобина 1,0 - 2,0 g/dL для окрашиваемых гелей.
ПОШАГОВАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Удалите гель из упаковки и положите на бумажное полотенце. На поверхность геля 
положите блотт С.
2. На гель, совмещая со стрелками, поместите шаблон для образцов (на 8 проб или 10 
образца в зависимости от предпочтений. Положите б л о тер  А сверху на шаблон и протрите 
пальцем в местах нанесения образцов, чтобы обеспечить хороший контакт. Удалить 
блоттер и сохранить его для использования в шаге 5.
3. Нанесите 2|j.l образца в каждое отверстие шаблона и подождите пока произойдет 
абсорбция в течение 10-15 минут.
4. Хотя образцы абсорбируются, выдержите 1  фитиль электрода катода решения и бло 1тер 
тгочти сухой между двумя промокательную бумагу, фитиль. Позиция этот фитиль вдоль 
катода (-) край геле.
5. После абсорбции образца, блоттером А (сохраненным на шаге 2) промокните шаблон, и 
выбросьте блоттер и шаблон.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 126 ---
л е 1 е п а
6. Намочите одну электродную полоску в анодном растворе и промокните ее почти досуха 
между двумя блоттерами.
Поместите эту электродную полоску по краю геля вдоль анода (+). Старайтесь не 
смешивать анодный и катодный растворы.
Примечание: Выполнение процедуры в соответствии с документом:
7А. Работа с набором REP:
I. Используйте набор REP IEF. Поместите 500^1 из REP Prep на камеру. Поместите гель на 
камеру, поместите на гель анодную полоску под центральным анодным электродом набора 
REP1EF и катодную полоску под внешним катодным электродом- Катодные и анодные 
полоски промокните почти досуха между двумя блоперами. Поместите их на гель.
II. Запрограммируйте следующие параметры в REP (оставив все другие разделы программы 
экран пустым):
Eiaccrophorasls V d ci]g e
E fe ctropho ree nT lm e 30:00 m m ;*»
Efacm sphorasK T e m pап киг® IO ,.,2Cnc
D ry  T m a lO'OO m m :**
D ry  T a m p « im ra
S c i^ b f  T  ftrnpen curA \m .
III. Авто-камеры, чтобы закрыть крышку и нажать клавишу F1, чтобы начать работать. 
7В. Работа в SPIFE / SAS-3 приборах:
I. Использование SPIFE / SAS-3 МЭФ собраний электрода. Поместите гель, как описано в 
7А (i).
II. Программа следующие параметры в SPIFE / SAS-3:
Е Ь а ш р Ь о гш Ь 30:00 т т ш ir c 900 w h s
End o f (»et
III. Закройте крышкой камеры, нажмите СТАРТ и следуйте инструкциям, чтобы начать 
■электрофорез.
7С. Работа на SAS-1 Plus:
I. Отберите 400цЕ из REP Ргер на поверхность для электрофореза. Положите гель, 
агарозной стороной вверх, правильно совместите полюса, избегайте образование 
воздушных пузырьков под гелем
II. Прикрепите электроды на верхнюю сторону, чтобы они находились в контакте с 
буферными электродными полосками.
iii. Выполните Hb-IEF электрофорез;
Е к > с с п с 1 |з Ь ш ш 1 к Т 1 1 1 Ш
E la c tr o js h s iiiQ s if e  Tftm pem uroISX
7d. Работа на обычных IEF системах:
I. Следующие параметры должны быть использованы при использовании альтернативных 
ИП:
F W e r 10 watti
V o lis U im 900 « h s
CuiTfiot Limit SOmA
Run "ntrw m*o:s«
Run Tem psm ure ю .- г о х
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South.
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear. NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 127 ---
H e l e n a
7e. Работа на Helena lEF камере для изоэлектрофокусирования;
i. Используйте следующие параметры:
4 0 0 ^ c lN »  
60 frtnates
ii. Убедитесь, что в охлаждающие блоки камеры находились при температуре 2 ... 6 ° С, по 
крайней мере 30 минут перед использованием. Поместите их в центр камеры.
ПРИМЕЧАНИЕ: напряжения, время и температура выбраны для фокусировки, долх<ны 
определяться каждой лаборатории согласно щаблону требуемой длины. Температура 
должна быть выбрана для сведения к минимуму образование конденсата на поверхности 
геля, которые могут привести к размытию структуры.
Избегайте перефокусировки геля, в качестве катода дрейфа градиента может привести к 
потере белков на катодной полоске, а также введение перерывов в градиента. При 
использовании камеры Helena IEF убедитесь, что охлаждающие блоки хранились перед 
использованием при 5  °  С .
8. После электрофореза, высушите гель при 60 ... 70 ° С 
ПРИМЕЧАНИЕ: После фокусировки, не сушит гель.
9. Фиксация геля фиксирующим раствором в течение 15 минут.
10. Промыть обесцвечивающим раствором в течение 10 минут.
11. Поместите блоггер В (смоченным в обесцвечивающем растворе) на поверхность геля, а 
затем 3 блоггера D. Используйте пресс для геля в течении 15 минут.
12. Сухой гель.
13. Окунитесь сухой гель на 10 минут.
14. Промойте гель в очищенной воде в течение 5 минут,
15. Обесцветте гель в обесцвечивающем растворедо прояснения и высушите. Отсканируйте 
при 595пт.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Качественная оценка:
Возможные отличительные черты типов гемоглобина, присутствующих в пробах, могут 
быть определены посредством визуальной оценки выполненного геля. Гематологические 
контроли представляют собой маркер для идентификации полос.
Количественная оценка: относительный процент каждого типа гемоглобина на геле может 
быть определен методом денситометрии сделанного геля при 595nm.
На рис. 1  приведены возможные полосы наиболее часто встречающихся типов 
гемоглобина.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.conn
W W W , helena-btoscie n  ces.  com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 128 ---
л е 1 е п а
Большинство вариаций гемоглобина не вызывают каких-либо очевидных клинических 
симптомов, поэтому они представляют интерес главным образом для ученых и 
исследователей. Вариации являются клинически значимыми, когда их присутствие 
обуславливает появление таких нарушений как выработка серповидных форм, синдромы 
талассемии, стойкий цианоз, гемолитические анемии или эритроцитоз, или если 
преобладание гетерозиготы таково, что обуславливает необходимость медико­
генетического консультирования. Комбинации HbS-S, HbS-D-Los Angeles, HbS-O-Arab 
обуславливают серьезные нарушения, связанные с выработкой серповидных форм^. 
Несколько вариаций, включая НЬН, E-Fort Worth и Lepore, обуславливают 
талассемическую картину крови^.
Две вариации гемоглобинов, характеризующихся наибольшей значимостью в плане 
частоты выявления и патологий, - это HbS и НЬС^. Серповидно-клеточная анемия (HbSS) 
является тяжелой и смертельной болезнью. Она впервые проявляет себя в возрасте 5-6 
месяцев. Клиническое течение характеризуется мучительными эпизодами боли и 
повышения температуры с анемией, вялостью, летаргией и инфарктом практически всех 
органов тела. Человек с гомозиготной НЬСС страдает умеренной гемолитической анемией, 
которую связывают с осаждением или кристаллизацией НЬС в эритроцитах. Случаи 
заболевания HbSC характеризуются гемолитической анемией, которая протекает менее 
остро, чем серповидно-клеточная анемия.
Талассемии представляют собой группы гемоглобинопатий, характеризуемых гипохромией 
и микроцитозом вследствие снижения синтеза одной цепи глобинов (альфа или бета), в то 
время как синтез других цепей происходит нормально. Такой несбалансированный 
синтез приводит к нестабильности глобиновых цепей. Они осаждаются в эритроцитах, 
формируя инородные включения, которые сокращают жизненный цикл клеток. При альфа- 
талассемии сокращено количество или наблюдается отсутствие альфа-цепей, а при бета- 
талассемии вышесказанное касается бета-цепей. Другое количественное нарушение синтеза 
гемоглобина, наследственная персистенция фетального гемоглобина (HPFH), представляет 
собой генетическое нарушение работы механизмов, которые отключают синтез гамма- 
цепей в возрасте около 4-х месяцев от рождения, что приводит к постоянному высокому 
процентному содержанию НЬР. В отличие от действительных талассемий это менее 
опасное состояние, и лица, гомозиготные к HPFH, развиваются нормально,
асимптоматичны и не имеют анемии. 1 0
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.coin
www.helena-biQsciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 133 ---
ПОШАГОВАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Достаньте гель из упаковки и положите на бумажное полотенце. Снимите прозрачную зашитную 
пленку и наложите блоггер С (blotter С), подождите 10-30 секунл -  блоттер должен полностью 
намокнуть, удалите блоттер.
2. Намочите полоску для электродов (electrode wick) в буфере для анода и промокните почти до 
сухого состояния между двумя блоттерными полосками (wick blotters).
Поместите эту электродную полоску на анодный (+) край геля. Повторите ту же самую процедуру 
для катодного буфера и поместите соответствующую полоску на катодный (-) край геля. ВАЖНО: 
следите, чтобы катодный и анодный буфер не смешивались.
3. Поместите 5мкл образца в каждое углубление для образцов на геле. Важно делать это медленно, 
чтобы не повредить гель и исключить контаминацию.
4. SAS-1 Plus:
i. Нанесите 400 мкл дистиллированной воды в камеру. Поместить гель на теплоотвод стороной с 
агарозой вверх, совместив положительные и отрицательные стороны геля с соответствующими 
стойками электродов, при этом следует исключить попадание пузырьков воздуха под гель.
ii. Подсоединить электроды к верхней части стоек электродов таким образом, чтобы они 
контактировали с электродными полосками.
iii. Провести IgG-IEF электрофорез:
Число аппликаций - О  
Электрофорез Напряжение 600 Вольт 
Температура электрофореза 15®С 
Время 60:00 мин
Инкубация OFF
5. После фокусирования, положите гель на блоттер D (blotter D). Удалите буферные полоски.
6. Подготовьте 2 НЦ мембраны. Смочите первый лист мембраны в дистилляте. Дайте воде стечь. 
Тщательно просушите мембрану между двумя бумажными полотенцами. Осторожно поместите 
мембрану, красной точкой вниз, на поверхность геля при помощи ролика -  держите мембрану за 
верхний край почти под прямым углом к гелю, накатывая ролик, постепенно опускайте мембрану на 
гель, как бы вытесняя воздух между мембраной и гелем. Не требуется прокатывать ролик несколько 
раз! Оставьте в таком положении 10 секунд и затем аккуратно удалите,
7. Смочите второй лист мембраны в дистилляте или в 10%  растворе метанола. Дайте лишней 
жидкости стечь с мембраны, держа ее вертикально в течение 10-20 секунд. Осторожно поместите 
мембрану, красной точкой вниз, на поверхность геля как указано выше. Не удаляйте мембрану. 
Положите сверху блоттер С (blotter С), три блоттера D (blotter D) и груз. Оставьте на 30 минут.
8. Удалите блоттеры и поместите мембрану, красной точкой вверх, в лоток для окрашивания, 
добавьте 20 мл блокирующего раствора А, так, чтобы мембрана была погружена целиком. 
Осторожно помешивайте в течение 30 минут.
9. Промойте мембрану несколько раз в дистилляте.
10. В 15 мл блокирующего раствора В добавьте 15 мкл антител (single step antibody) и тщательно 
перемешайте. Опустите мембрану в полученный раствор так, чтобы мембрана была погружена 
целиком. Оставьте на 30 минут периодически осторожно помешивая,
11. Промойте мембрану дистиллятом несколько раз, залейте 20 мл солевого раствора и оставьте на 5 
минут, помешивая. Снова промойте дистиллятом. Приготовьте окрашивающий раствор: 25 мл 
ацетатного буфера (разбавленного как описано выше), 5 мл хромогенного буфера и 25 мкл 
пероксида водорода. Залейте мембрану этим раствором.
Окрашивайте в течение 20 минут осторожно перемешивая. Раствор должен изменить оттенок на 
зеленоватый.


--- стр. 134 ---
/ J '^
12. Промойте мембрану дистиллятом несколько раз и высушите в токе воздуха или на бумажном 
полотенце.
И н т е р п р е т а ц и я  р е з у л ь т а т о в
Полосы IgG становятся видимыми на мембране (окрашены в красный/красно-коричневый цвет). 
Сравнение образцов пары сыворотка/СМЖ должно являться стандартной процедурой. При 
различных болезнях полосы в образце могут носить моноклональный или олигоклональный 
характер. Образцы пациентов, страдающих рассеянным склерозом (PC), обычно дают 
олигоклональный IgG ответ в СМЖ и не обнаруживают полос в образце сыворотки. Интерпретация 
полученных образцов должна производиться с учетом истории болезни пациента.
Контроль качества
Использование СМЖ от донора с позитивными олигоклональными полосами рекомендуется для 
использования на каждом геле как контрольный образец для подтверждения всех стадий процедуры 
в случае отсутствия коммерчески доступного контрольного материала.
Возможные проблемы
Проблемы возможные причины и способы устранения
Н ет  окраш ивания полос образца. a) образец не был нанесен.
b) первичные и/или вторичные антитела не сработали/не были нанесены.
c) не добавлена перекись водорода.
Р авном ерно и сильно окраш ен ф он a) пропущ ен ш аг блоттинга.
b ) недостаточная промы вка мембраны во время ш агов иммуноф иксации 
и прокраш ивания.
Сильно, но неравном ерно окраш ен  
ф он
а) пропущ ен или выполнен неправильно ш аг предблоттинговой 
подготовки
Л и н и и  образца окраш ены , но  
слабовы раж ены .
a) нанесено недостаточное количество образца.
b) недостаточное время прокраш ивания.
c) старая или загрязненная перекись водорода.
d) спад активности антител из-за неправильного хранения.
e) окисленны й хромоген (появится черны й цвет).
f) pH ацетатного буфера не верен (должен бы ть 5.0 - 5.2).
Л иния образца чрезвы чайно  
окраш ены.
а) нанесено превышающее количество образца, потеряно разрешение, 
fa) Передержано в скраш иваю щ ем растворе (редко).
Л и н ии  образца  
деф орм ированы /разм азаны .
a) не использовалась полоска для удаления избы тка ж ид кости.
b) конденсат на поверхности геля из-за переизбы точного охлаждения 
геля.
В ся краска в яч ей ке нанесения  
образца
а) В о время электрофореза не бь(ло подклю чено питание.
Белы е пят на в прокраш енном  
образце.
a) воздуш ные пузы ри между гелем и мембраной во время стадии пресса.
b) убедитесь в том, что мембрана перед использованием смочена и что 
пузы ри между гелем и мембраной удалены.
Аналитические характеристики
Чувствительность: Дискретные полосы хорошо выражены на мембране при концентрации IgG 
равной 0.28мг/л в СМЖ.
Воспроизводимость
a. На одном геле
Один образец СМЖ, протестированный на 10 дорожках одного геля показал одинаковое 
расположение полос.
b. Между гелями
Один и тот же образец был тестирован на трех разных гелях и на каждом из них показал одинаковое 
положение полос.
Специфичность
Используемые в наборе антитела высоко специфичны для IgG, и не обнаруживают перекрестных 
реакций с IgA или IgM человека.


--- стр. 135 ---
l e l e n a
Тест-система ’^Изоэлектрофокусирование трансферрина'^ для приборов 
SAS-1, SAS-3 (SAS-1, SAS-3 ’’TRANSFERRIN IEF Kit”)
ПРИМЕНЕНИЕ
Тест-система IEF трансферрина предназначена для выявления изоформ трансферрина в 
сыворотке крови человека путем сочетания изоэлектрического фокусирования и 
иммуноблоттинга.
Трансферрин является белком, участвующим в транспорте железа, который обладает 
микрогетерогенностью в результате изменений в степени гликозилирования и насыщения 
железом 1. Среди изоформов трансферрина в крови, содержатся 4 остатка сиаловых 
кислот, связанных с двумя еденицами олигосахаридов 1, 2, Эти остатки сиаловых кислот 
оказывают влияния на электрофоретическую подвижность молекулы трансферрина, таким 
образом их последовательное удаление приводит к по меньщей мере 6 возможным 
состояниям заряда 1  -3. Аномальное распределение различных изоформ трансферрина, в 
частности, формы с большим числом остатков сиаловых кислот, было связано с рядом 
патологических состояний, включая гемохромостаз, артрит и рак 4-5.
Повышение уровня изоформов с меньшим количеством остатков сиаловых кислот 
(дисиалотрансферрин и ниже), принято обозначать общим термином безуглеводитый 
трансферрин (CDT), были связаны с относительно небольшим числом государств болезни. 
Изоэлектрофокусирование трансферрина в сыворотке по праву считается самым мощным 
скрининг-тестом на CDG (Врожденные заболевания гликозилирования), хотя не все виды 
можно обнаружить с помощью этого теста. Тип 1  IEF образца (наблюдается в CDG-I) 
характеризуется уменьшением тетрасиало-трансферрина и увеличением ди-и асиало- 
трансферрина, в то время как тип 2 показывает (наблюдается в CDG-II) увеличение три- и 
моносиало-трансферрин 6. Увеличение изоформ CDT обнаружены в сыворотке крови 
больных алкоголизмом, особенно молекулы дисиало-трансферрина 7 и увеличение 
соотношения дисиало-трансферрина в общем трансферрине увеличивается в случаях 
чрезмерного потребления алкоголя 5, и что экскреция алкоголя приводит к постепенному 
исчезновению изоформы дисиало-трансферрина в течение 2-3 недель после воздержания от 
употребления алкоголя 8,9. Утечка ЦСЖ через нос или ухо в результате травмы 
(хирургическое лечение, перелом основания черепа, повышение внутричерепного 
давления) может быть подтверждено наличием асиало-трансферрина (тау белка) с 
использованием метода изоэлектрофокусирования на агарозе.
Тест-система Трансферрин- IEF определяет изоформы трансферрина в соответствии с 
изоэлектрической точкой в агарозном геле IEF, ph 5-6. В условиях in vitro насыщение 
молекул трансферрина гарантирует, что только Ее2-трансферин присутствует в сыворотке 
крови образца, тем самым уменьшается число изоформ и микрогетерогенность сводится к 
минимуму фокусировка с различными вариантами сиаловой кислоты и железа, но при той 
же изоэлектрической точке. Белки, которые затем переносятся на нитроцеллюлозу и 
нитроцеллюлоза подвергается иммунофиксадии позволяет визуализировать трансферрин 
конкретных групп. Модели интерпретируются качественно, путем сравнения наличия или 
отсутствия частных сиаловых изоформ трансферрина.
БЕЗОПАСНОСТЬ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены для использования только в лабораторных условиях.
Не глотайте реактивы и не пытайтесь набирать их при помощи рта. При работе надевайте
С €
ф|?с +44 (oll9l 482 8^2 Biosciences Europe Queensway South, ^
Эл. почта info@heiena-biosciences.com Team Valley Trading Estate, Gateshead,
WWW.helena-biosciences.com Tyne and Wear, NE11  OSD. United Kingdom


--- стр. 136 ---
l e l e n a
перчатки. За информацией по охране труда и утилизации обращайтесь к спецификации по 
технике безопасности.
СОСТАВ
1. Трансферрин IEF-гель
Состоит из агарозы и сепараторов, pH 5-6 с тиомерсалом в качестве консерванта. Гель 
упакован в готовом к использованию виде.
2. IEF Анодный раствор
Содержит 0,3 М уксусной кислоты. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
3. IEF катодный раствор
Состоит из 0,1 М NaOH. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
4. IEF блокирующий агент
Содержит сухой белковый остаток коровьего молока.. IgG- IEF блокирующий агент 
используется для приготовления двух рабочих растворов: Блокирующий раствор А: 
Растворите Ш  порощка в 50 мл физиологического раствора. Блокирующий раствор В: 
Развести 5ml блокирующего раствора А до 50 мл физиологическим раствором.
5. IEF концентрат ацетатного буфера
Содержит 0,2 М ацетатного буфера pH 5,1. Разбавить 2,5 мл концентрата ацетатного буфера 
25ml очищенной воды перед применением и немедленно использовать.
6. IEF Хромогенный субстрат
Состоит из порощка З-амино-9-этил-карбазола. Растворить содержимое флакона в 50 мл 
метанола. Хранить можно аликвоты по 5ml при температуре -20 ° С в темноте.
Используйте для этого специальную стеклянную посуду, чтобы предотвратить 
контаминацию в хромогене.
7. Раствор хлорида железа
Содержит 22 мМ хлорида железа. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
8. Бикарбонат натрия
Содержит 1.2 М бикарбоната натрия. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
9. Антитела содержащиеся в наборе (кат.№ 103100)
Трансферрин- IEF первичные антитела, содержат кроличьи антититела к человеческому 
.сывороточному трансферрину.
Трансферрин- IEF вторичные антитела
Содержат из козьи антитела к IgG кролика конъюгированные с пероксидазой.
10. Другие компоненты набора.
Каждый набор содержит инструкции по эксплуатации и достаточное количество 
мембранных блоттов, шаблоны, блоггеров А, С и D, полоски для электродов, полоски 
блоггеров и промокательную бумагу в количесте для проведения анализа на 10 гелей. 
Хранение и срок годности
1. IEF трансферрина, гель
Гели должны храниться при температуре 15 ... 30 ° С и стабильны до окончания срока 
годности на упаковке.
НЕ хранить в холодильнике и не замораживать.
УО порче геля свидетельствует: 1) появление
кристаллических структур, указывающих на факт замораживания геля; 2) 
растрескивание и расслаивание, сопровождающее высыхание геля; 3) видимая 
бактериальная или грибковая контаминация агарозы.
* 2 . IEF Анодный раствор.
С €
Й с  +44 {0)191 482 8442 Biosciences Europe Queensway South, 2 [
Эл. почта info@heiena-biosciences.com Team Valley Trading Estate, Gateshead, I
WWW.heiena-biosciences.com Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom (


--- стр. 137 ---
H e l e n a
.Раствор для анода следует хранить при температуре 15-30®С, в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Помутнение раствора 
или инородные включения могут говорить о его порче.
3. IEF Буфер для катода
Буфер для катода следует хранить при температуре 15-30°С, в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Помутнение раствора 
или инородные включения могут говорить о его порче,
4. IEF блокирующий агент
Блокирующий агент следует хранить при температуре 15-30°С, в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. IgG-IEF Blocking Agent 
должен быть не спрессованным (рассыпчатым) белым (возможен слабый оттенок) 
порощком, любые изменения, в том числе и окраски, могут свидетельствовать о порче.
5. IEF концентрат ацетатного буфера
Концентрат ацетатного буфера следует хранить при температуре 15-30°С, в этом случае он 
сохраняет стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Помутнение 
раствора или инородные включения могут говорить о его порче.
6. IEF Хромогенный субстрат
Хромоген должен храниться при температуре 2 ...6 ° С , в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Замороженные аликвоты 
стабильны в течение 6 месяцев. Раствор хромогена должен иметь красно-коричневую 
окраску, изменение ее или ухудшение качества окрашивания может указывать на порчу 
раствора.
7. Раствор хлорида железа
Раствор должен храниться при температуре 2...6°С  , в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке.
Помутнение раствора или инородные включения могут говорить о его порче.
8. Бикарбоната натрия
Раствор должен храниться при температуре 2...6°С , в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Если происходит 
кристаллизация выдержите смесь при комнатной температуре пока раствор не станет 
прозрачным.
9. Антитела содержащиеся в наборе (кат.№ 103100):
Трансферрин- IEF первичные антитела
Раствор антител должен храниться при температуре 2 ... 6 ° С в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Помутнение раствора 
или инородные включения могут говорить о его порче.
Трансферрин- IEF вторичные антитела
Раствор антител должен храниться при температуре 2 ... 6 ° С в этом случае он сохраняет 
стабильность до окончания срока годности, указанного на ярлыке. Помутнение раствора 
или инородные включения могут говорить о его порче.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 
30% (по объему) перекись водорода 
Физиологический раствор (0,85% NaCI)
Cat, № 3100 Теплоотводящая жидкость 
Cat. № 5014 Вес для проявления 
Вортекс
С €
ф|5с +44  jo)l9l 482 8442 Biosciences Europe Queensway South,
Эл. почта info@heiena-biosciences.cQiTi Team Valley Trading Estate, Gateshead,
www.helena-bi0sciences.c0nn Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 138 ---
l e l e n a
Метанол 
Дистиллированная вода
ИП и камера для проведения изоэлектрофокусирования 
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Предпочтительньми образцами являются свежая сыворотка либо спинномозговая 
жидкость (СМЖ). Образцы могут храниться при температуре от +2 до + б'^С в течение 3 
дней, или при температуре -20°С  в течение 2 недель.
Насыщение образца железом (для сыворотки)
К ЮОмкл сыворотки добавьте 25мкл 22мМ раствора хлорида железа и 12мкл 1,2М 
раствора бикарбоната натрия. Тщательно перемешайте и инкубируйте в течение 2 часов 
при комнатной температуре (+15-30°С). Затем перемешайте образцы с помощью вихревой 
мешадки (Вортэкс) и немедленно разведите физиологическим раствором до внесения в 
гель (на Юмкл образца 5Омкл физиологического раствора).
Примечание: СМЖ должна использоваться в чистом виде. Насыщения образцов СМЖ 
железом не требуется, поскольку не обнаружено никаких генетических или гликированных 
разновидностей трансферрина (независимо от содержания железа), которые бы обладали 
такой же электрофоретической подвижностью, как тау-белок. Это означает, что 
результаты анализа образца, рассматривающегося как СМЖ, могут быть получены 
максимально быстро.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Достаньте гель из упаковки и поместите на бумажное полотенце. Промокните его 
поверхность с помощью блоггера С, затем удалите блоггер.
2. Совместите матрицу для внесения образцов со стрелками вдоль края геля.
Поместите блоттер А поверх матрицы и слегка проведите пальцем вдоль щелей, чтобы 
обеспечить надежный контакт. Удалите блоттер А, но сохраните его для использования на 
этапе 5.
3. Внесите по 5мкл образца в каждую щель и позвольте образцам абсорбироваться в 
течение 10 минут.
4. Пока образцы абсорбируются, погрузите один электродный фитиль в анодный раствор и 
почти досуха промокните его между двумя фитильными блоттерами. Поместите указанный 
фитиль вдоль анодного (+) края геля. Избегайте смешивания анодного и катодного 
растворов.
« 5 . После абсорбции образцов, слегка промокните матрицу с помощью блоггера А, 
сохраненного после этапа 2, затем удалите матрицу и блоттер. Этап электрофореза должен 
начаться не позднее 5 минут после удаления матрицы для внесения образцов.
6. Погрузите один электродный фитиль в катодный раствор и почти досуха промокните 
его между двумя фитильными блоттерами. Поместите указанный фитиль вдоль катодного 
(-) края геля.
ПРИМЕЧАНИЕ: Следуйте процедуре, соответствующей прибору.
7а. При использовании блока REP:
I. Поместите гель в камеру REP, используя 0,5мл REP Prep между задней стороной 
геля и дном камеры. Не набирайте REP Prep с помощью рта. Поместите анодный фитиль 
под центральный анодный электрод электродного узла блока REP IEF и катодный фитиль 
под внешний катодный электрод. Поместите по одному дренажному блоггеру снаружи
С €
ф|Гс +44  (0)191 482 8442 Ие\епа Biosciences Europe Queensway South.
Эл. почта info@heiena-biosciences.com Team Valley Trading Estate, Gateshead,
WWW.helena-biosciences.com Tyne and Wear, NE1 1  OSD, United Kingdom


--- стр. 139 ---
l e l e n a
от катодного и анодного электродов для удаления избытка жидкости. Убедитесь, что 
дренажные блоггеры находятся в контакте с гелем.
П. Запрограммируйте REP следующим образом (оставляя все другие поля пустыми):
Вольтаж электрофореза 600В
Вре^^я э-ректрсфореза 45:00 ь*ми:сеи
Те(йг?.ература электрофореза -10.20= С
Рабочая темп'&ратура ^16'С
III. Нажмите FI, чтобы запустить электрофорез.
76. При использовании блока SAS-3/SPIFE:
I. Используйте SAS-3/SPIFE электродный узел. Поместите гель, электроды, фитили
и дренажные блоггеры в камеру SAS-3/SPIFE, как это описано в пункте 7а для блока REP.
II. Запрограммируйте SAS-3/SPIFE следующим образом с соответствующим названием 
теста:
Электрофоре! 45;00 уингсек +10'С 6ШВ
Завершение теста
III. Закройте крышку камеры и нажмите «START», а затем «TEST SELECT», чтобы 
запустить электрофорез.
7в. При использовании обычных систем изоэлектрофокусирования (ИЭФ):
I, Следующие параметры должны быть соблюдены в случае использования 
альтернативных систем ИЭФ:
Мощность 10-20BT
Предел из оря женил 600В
Предел силь( тока
Bpentfl алектрсфорез^а 30:00 м инхек
Рабочая температура ^10-20'С
7г. При использовании камеры Helena IEF (Cat. No, 4065):
I. Следующие параметры должны быть соблюдены в случае использования камеры 
Helena 1EF:
Вольтаж электрофореаа 4D0B
Время электрофореза 60:00 мии:сек
7д. При использовании SIS-I Plus (Cat. No. 1531):
I. Добавьте 0,5мл REP Prep в основание SIS-I Plus. He набирайте REP Prep с 
помощью рта. Поместите гель в основание SIS-I Plus, избегая образования пузырьков 
воздуха под гелем. Удалите избыток REP Prep куском ткани, если это необходимо.
П. Следующие параметры должны быть соблюдены в случае использования SIS-I 
Plus:
Ноплер заявки Q
Вольтаж мектрофореза S O O B
Температура э.тектрофореза -15'С
Spewfl электрофореза 45:00 глин:сек
Инкубация еыкя
Техническое примечание:
Используемый вольтаж, время и температура фокусирования должны быть определены в 
каждой конкретной лаборатории в соответствии с необходимой длиной пробега белков 
анализируемых образцов. Кроме того, температура должна выбираться так, чтобы 
минимизировать конденсацию на поверхности геля, которая может привести к размытию 
дорожек образцов. Нельзя допускать избыточной фокусировки, поскольку катодный ток
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena-biosciences.com
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate. Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 140 ---
h e l e n a
белков может привести к их потере в катодном фитиле, так же как к появлению разрывов в 
градиенте. При использовании камеры Helena IEF убедитесь, что охлаждающий элемент 
предварительно охладился до +5°С.
ЭТАП ИММУНОФИКСАЦИИ
1. После этапа фокусирования, поместите гель на блоттер D. Удалите электродные фитили.
2. Предварительно увлажните блоттинг-мембрану в дистиллированной воде. Удалите 
11збыток воды путем осторожного промокания мембраны между двумя бумажными 
полотенцами или кусками ткани. Аккуратно поместите блогтинг-мембрану на поверхность 
геля красной точкой вниз. Позвольте мембране увлажниться за счет впитывания жидкости 
из геля, чтобы предотвратить образование воздушных полостей. Выждите 10 секунд и 
удалите ее.
3. Предварительно увлажните вторую блоттинг-мембрану в дистиллированной 
(деионизированной) воде или 10% водном растворе метанола. Позвольте избытку 
жидкости удалиться с мембраны, подержав ее в вертикальном положении в течение 10-20 
секунд. Аккуратно положите эту блоттинг-мембрану на поверхность геля красной точкой 
вниз и слегка проведите по ее поверхности пальцем, чтобы обеспечить надежный контакт с 
гелем и удалить воздушные полости между гелем и мембраной (избегайте чрезмерного 
давления, которое может повредить гель). Поместите поверх мембраны один блоттер С, три 
блоттера D и достаточный вес, прижав на 30 минут. Вес должен составлять от 2 до 2,5кг.
4. Удалите блоггеры и поместите блоттинг-мембрану красной точкой вверх в сосуд для 
окрашивания, содержащий 20мл блокирующего раствора А, так, чтобы вся поверхность 
мембраны была им покрыта. Аккуратно перемешивайте в течение 15 минут.
5. Промойте мембрану в воде несколько раз.
6. Поместите мембрану в 15мл блокирующего раствора В, содержащего 15мкл первичных 
антител, на 15 минут с аккуратным перемешиванием. Промойте мембрану в воде 
несколько раз, а затем в физиологическом растворе в течение 5 минут. Поместите мембрану 
в 15мл блокирующего раствора В, содержащего 15мкл вторичных антител, на 15 минут при 
осторожном перемешивании.
7. Промойте мембрану в воде несколько раз, а затем в физиологическом растворе в течение 
5 минут. Ополосните в очищенной воде. Поместите мембрану в раствор, содержащий 25мл 
ацетатного буфера (разбавленного как указано), 5мл раствора хромогена и 25мкл перекиси 
водорода. Позвольте проявиться окраске в течение 20 минут при медленном 
перемешивании. На данном этапе возможно появление осадка хромогена.
8. Сполосните мембрану водой несколько раз и позвольте ей высохнуть.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Готовый гель можно оценить на наличие или отсутствие интересующих фракций (полос) 
визуально, либо можно отсканировать при помощи планшетного сканера и программного 
обеспечения Platinum. Хотя известно около 8 изоформ трансферрина, вьщеляемых по 
числу присоединенных к молекуле остатков сиаловой кислоты, у нормальных индивидов 
преобладает тетрасиало-изоформа (-80%  от всего трансферрина), за ней следует 
пентасиало- (-10% ) и трисиало-(~8%) изоформы. Молекулы трансферрина с углеводной 
недостаточностью (дисиало-, моносиало и асиало-изоформы) обычно присутствуют в 
количестве менее 2% от всего трансферрина. Интерпретация полученных результатов 
должна осуществляться с учетом клинической истории пациента.
С €
ffiiiQi tto  Helena Biosciences Europe Queensway South,
Эл, почта info@heiena-biosciences.com Team Valley Trading Estate, Gateshead,
WWW.helena-biosciences.com Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 141 ---
И /
H e l e n a
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
При отсутствии имеющегося в продаже контрольного материала рекомендуется 
использовать образцы с известным количеством трансферрина в каждом геле в качестве 
контрольной пробы для подтверждения правильности проведения всех этапов процедуры, 
ПРОБЛЕМЫ И НЕИСПРАВНОСТИ
Следующая таблица подробно описывает возможные причины и рещения некоторых 
наиболее часто возникающих проблем, связанных с ИЭФ и последующим 
иммуноблотпшгом.
Суть проблемы
Не окрашены дорожки 
образцов.
Возможные причины и решения
а) Не добавлен образец.
!  б) Пропущен этап добавления 
I  первичных и/или вторичных антител. 
;  в) Не добавлена перекись водорода.
Интенсивно и однородно 
окрашен фон.
Интенсивно, но 
неравномерно 
окрашен фон.
i  а) Пропущен этап добавления 
'  блокирующего раствора
б) Неправильно выполнена промывка 
блоттинг-мембраны на этапе 
иммунофиксации и окрашивания.
а) Пропущены или неправильно 
I  выполнены этапы, предшествующие 
^  блоттингу.
,  а) Использовано недостаточное 
На дорожках образцов окраска |  количество образца, 
есть, но очень слабая. |  б) Использовано недостаточное время
окрашивания.
в) Использована старая или 
загрязненная перекись водорода.
г) Разрушены антитела в результате 
неправильного хранения.
д) Хромоген окислен (выглядит 
черным).
е) Несоответствующее значение pH 
ацетатного буфера (должно быть 5,0- 
|5,2).
Дорожки образцов интенсивно >  а) Использовано избыточное количество
окрашены.
Дорожки образцов 
искривлены 
или размыты.
образца с потерей разрешения.
I  б) Образец передержан (редко).
i
а) Не использовались дренажные 
блоггеры.
б) Конденсация на поверхности геля из-
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
^  Факс +44 (0)191 482 8442
MywJielena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 142 ---
/ A l
l e l e n a
Вся окраска сосредоточена в 
'  месте внесения образцов.
Белые пятна в окрашенном 
^  образце.
i  за его чрезмерного охлаждения. ,
i  а) Не было подключено питание во 
I  время электрофореза.
!  а) Имелись воздушные пузырьки между |
I  гелем и мембраной на стадии блотгинга. |
I  б) Убедитесь, блоттинг-мембрана ;
i  I  предварительно увлажнена, а j
!  :  воздушные пузырьки между мембраной j
j  ' и гелем удалены. i
ЭКСПЛУАТАЦИОННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ '
Воспроизводимость
а. Внутри одного геля
Одиночный образец трансферрина показал при проверке одинаковый результат на всех 10 
дорожках одного геля.
б. Между гелями
Тот же образец проверялся на 3 различных гелях и показал одинаковый результат в каждом 
из них.
Специфичность
Было показано, что антитела, используемые в наборе, являются специфичными к 
трансферрину, и выявляется только трансферриновая дуга преципитации против 
человеческой плазмы.
ЛИТЕРАТУРА
/. De Jong, g. and van Eijk, H.G., 'Functional Properties of the carbohydrate M oiety> of Human 
Transferrin', Int. J. Biochem., 1989; 21: 253-263.
2. Giblett, e.R., ‘The Plasma Transferrins [Review]’ , Prog. Med. genet. ’  1962; 2: 34-36.
3. van Noort, W.L and van Eijk H.G., ‘ Seperation of Human Serum and Cerebrospinal Fluid 
Transferrins in Subfractions by Isoelectric Focusing with Phast System and Quantitations with 
Vetroscan XL Densitometer’  Sci. Tools, 1992: 36: 1-6.
4. van Eijk H.G., van Noort, W.L.., Dubelaar, ML. and van der Heul, C., Clin. С him. Acta, 1987: 165 
:  141-J45.
5. Stibler, H ., Sydow, O . and van den Berg, S , ‘ Quantitative Estimation of Abnormal 
Microheterogenity of Serum Transferrin in Alcoholics’ ,  Pharmacol. Biochem. Behav., 1980 ; 13 
(Suppl. I) :  47-51.
6 . Grunewald, S., Matthijs, G andJaeken, J. ‘ Congenital Disorders of Gly cosylation: A  Review'. 
Pediatric Research, 2002; 52: 618-624.
7 . Stibler, H . ‘ Carhohyfrate-deficient Transferrin in Serum: A  New Marker of Potentially Harmful 
Alcohol Consumption Reviwed. ’  Clin. С hem., 1991; 37: 2029-2037.
8. Vesterberg, O., Petren, S . and Schmidt, D. ‘ Increased Concentrations of a Transferrin Variant 
After Alcohol Abuse’  Clin. Chim. Acta, 1984; 141: 33-39.
9. Kapur, A., W ild, G., Milford-Ward, Л. and Triger, D.R. ‘ Carbohydrate-deficient Transferrin: A 
Marker for Alcohol Abuse' British Medical Journal, 1989; 299: 427-431.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
^  Факс +44 (0)191 482 8442
www.helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD. United Kingdom


--- стр. 143 ---
H e l e n a
Тест-система ^^Иммунофиксация-1^^ для прибора SAS-MX
(SAS-MX "IFE-1 KIT”)
Тест-система "Иммунофиксация-9” для прибора SAS-3 (SAS-3 ’ ’ IFE-9") 
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для разделения и  идентификации моноклональных 
гаммопатий методом электрофореза в агарозном геле.
Электрофорез с иммунофиксацией (1 F E ) -  это двухступенчатая процедура, использующая 
эле1строфорез высокого разрешения в агарозном геле на первом этапе и  иммунофиксацию 
на втором этапе.
Наибольшая потребность в IFE  присутствует в клинических лабораториях, где метод 
используется в первую очередь для определения моноклональных гаммопатий. 
Моноклональная гаммопатия - это первичное состояние заболевания, при котором один 
клон клеток плазмы производит повышенные уровни иммуноглобулина определенного 
класса и  типа. Такие иммуноглобулины называют моноклональными белками, М -белками 
или парапротеинами. И х присутствие может носить неопасный характер или иметь 
сомнительное значение. В  некоторых случаях они указывают на злокачественное развитие 
заболевания, например множественная миелома или макроглобулинемия Вальденстрема. 
Следует дифференцировать поликлональную и  моноклональную гаммопатию, так как 
поликлональные гаммопатии представляют собой вторую стадию заболевания, 
обусловленную клиническими нарушениями, такими как хроническое заболевание печени, 
коллагеновые нарушения, ревматический артрит и  хроническая инфекция.
Белки мочи образуются в первую очередь на основе белков плазмы, которые фильтруются 
почками. Присутствие аномальных белков плазмы в моче имеет важнейшее значение при 
оценке почечной функции. Соответствующее исследование протеинурии должно включать 
количественную и  качественную оценки типов и  количества выделяемых белков. ^  ®  
Комбинация разделения белков мочи методом электрофореза в сочетании с 
идентификацией отдельных типов белков методом иммунопреципитации позволяет 
дифференцировать различные типы протеинурии -  физиологическую, гломерулярную 
(селективную и  неселективную), тубулярную, а также протеинурию, ассоциируемую с 
дисглобулинемиями.
В  литературе иммунофиксация была впервые описана Альфонсо (A lfonso) в 1964 г . ®  
Альпер (A lper) и  Джонсон (Johnson) опубликовали более удобную процедуру в 1969 г., а 
также опубликовали количество исследований, использующих данную методику, 
Иммунофиксация использовалась в качестве процедуры для исследования 
иммуноглобулинов с 1976 г . Набор аксессуаров SAS-3 IFE  используется для 
разделения белков сыворотки в соответствии с зарядом а агарозном геле. Белки затем 
инкубирую т с моносферической антисывороткой, промывают и  окрашивают в целях 
обеспечения визуализации иммунопреципитата для количественной интерпретации.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и  не пипетировать ртом н и  один компонент набора. Надевать перчатки при 
работе со всеми компонентами набора. См, паспорт безопасности химического вещества, 
положения о рисках и  обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации.
^  С  Ф а?с *44 (0)191 482 8442 he\ena Biosciences Europe Queensway South, ^
^  t  Эл. почта info@helena- Team Valley Trading Estate, Gateshead,
blo ^ ie n ^ s .com W ear, N E11  OSD, United Kingdom
wvw.helena-biosciences.com


--- стр. 158 ---
H e l e n a
Талассемии представляют собой группы гемоглобинопатий, характеризуемых гипохромией 
и микроцитозом вследствие снижения синтеза одной цепи глобинов (альфа или бета), в то 
время как синтез других цепей происходит нормально. Такой несбалансированный 
синтез приводит к нестабильности глобиновых цепей. Они осаждаются в эритроцитах, 
формируя инородные включения, которые сокращают жизненный цикл клеток. При альфа- 
талассемии сокращено количество или наблюдается отсутствие альфа-цепей, а при бета- 
талассемии вышесказанное касается бета-цепей. Другое количественное нарушение синтеза 
гемоглобина, наследственная персистенция фетального гемоглобина (HPFH), представляет 
собой генетическое нарушение работы механизмов, которые отключают синтез гамма- 
цепей в возрасте около 4-х месяцев от рождения, что приводит к постоянному высокому 
процентному содержанию HbF. В отличие от действительных талассемий это менее 
опасное состояние, и лица, гомозиготные к HPFH, развиваются нормально.
асимптоматичны и не имеют анемии. 1 0
Наиболее часто встречающиеся гемоглобинопатии:
1) Серповидно-клеточный признак
Это гетерозиготное состояние, характеризующееся НЬА и HbS и нормальным количеством 
НЬА2 на ацетатцеллюлозе. Результаты на цитратном агаре показывают гемоглобины в 
миграционных позициях (зонах) НЬА и HbS.
2) Серповидно-клеточная анемия
Это гомозиготное состояние, характеризующееся практически исключительно HbS, при 
этом может присутствовать незначительное количество HbF.
3) Серповндная-С болезнь
Это гетерозиготное состояние, характеризующееся HbS и НЬС.
4) Серповидно-клеточная болезнь -  таласеемия 
Данное состояние характеризуется НЬА, HbF, HbS и НЬА2.
При серповидно-клеточной болезни р°-талассемии отсутствует НЬА.
При серповидно-клеточной болезни ( З ’ ^-талассемии НЬА присутствует в ограниченных 
количествах.
5) Болезнь талассемия-С
Данное состояние характеризуется НЬА, HbF, НЬС.
6) С-болезнь
Это гомозиготное состояние, демонстрирующее практически исключительно НЬС.
7) Большая таласеемия
Данное состояние характеризуется HbF, НЬА и НЬА2.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Некоторые аномальные гемоглобины имеют сходную электрофоретическую мобильность, и 
их следует дифференцировать другими методами.
Дальнейшего тестирования требуют:
1. Анализ глобиновых цепей (как кислотных, так и щелочных), а также структурные 
исследования могут быть необходимы в целях положительной идентификации некоторых 
более редко встречающихся гемоглобинов.
2. Анионообменная колоночная хроматография является наиболее точным методом 
'количественного определения НЬА2. Рекомендуются метод Helena Bio Sciences Sickle-Thal
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл, почта info@helena- 
biosciences.com
w ww .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 159 ---
l e l e n a
Quick Column (Номер по каталогу 5334) для количественного определения НЬА2 в 
присутствии HbS, рекомендуется использовать Helena BioSciences Beta-Thal HbA2 Quick 
Column (Номер no каталогу 5341). Количественное определение HbA2 является одним из 
наиболее важных диагностических тестов при диагностировании признака бета-талассемии,
3. Количественное определение низких уровней HbF (Ы 0 % ) можно с высокой степенью 
точности выполнить методом радиальной иммунодиффузии с использованием процедуры 
Helena BioSciences HbF-QuiPlate (Номер по каталогу 9325).
РЕФЕРЕНСНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
При рождении большая часть гемоглобина в эритроцитах здорового индивидуума 
представляет собой фетальный гемоглобин, HbF. Также присутствует некоторое количество 
основного типа гемоглобина взрослого человека, НЬА, и малое количество НЬА2. На конец 
первого года жизни и в течение всей взрослой жизни основной тип гемоглобина -  это НЬА, 
на фоне до 3,7% НЬА2 и менее 2% HbF.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
a) ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
SAS-1 Acid НЬ гель предназначен для качественной идентификации полос гемоглобина. 
Использование контрольных материалов, содержащих гемоглобины S и А2, те же 
структуры группы были замечены в пределах одного геля, а также между различными 
гелями. Полосы не пропадали и не появлялись никакие дополнительные полосы между 
анализами.
b) ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
0.08.g/dL на полосу, определяется как минимальная концентрация гемоглобина, который 
был заметен, как дискретная группа по завершению анализа геля.
c) ЛИНЕЙНОСТЬ
4 g/dL на полосу, для каждого диапазона, основанна на максимальной концентрации 
гемоглобина в группе, которая позволяет отделить полосы друг от друга, без белка.
Эта процедура не предназначена для сканирования на денситометре.
ЛИТЕРАТУРА
1 . Wintrobe, Maxwell М ., Clinical Hematology, 6th Edition, Lea and Febiger, Philadelphia, J967. pages 145-167.
2. Fairbanks, V .F., ‘The Nomenclature and Taxonomy of Hemoglobin Variants’ ,  Diagnostic Medicine, Nov/Dec., 53- 
58, 1980.
3. Schneider, R.G., Hightower, B.J. and Barwick, R.C., ’ Laboratory Identification of the Hemoglobins', Lab 
Management, 1981; August: 29-43.
4. Center for Disease Control, Laboratory Methods for Detecting Hemoglobinopathies, U.S. Department of Health 
and Human Services/Public Health Service, 1984.
5. Schneider, R.G.,’  Methods for Detection of Hemoglobin Variants and Hemoglobinopathies in the Routine Clinical 
aboratory’ , CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1978.
6. Schneider, R.G., Hightower, S., Hosty, T.S., Ryder, H., Tomlin, G., Atkins, R., Brimhall, B., and Jones,
R.T., ’ Abnormal Hemoglobins in a Quarter Million People’ ,  Blood, 1976; 48(5) :  629-637.
7 . Huisman, TH.J. and Schroeder, I V . A., 'New Aspects of the Structure, Function and Synthesis of Hemoglobins’ .
CRC Press, Cleveland, 1971.
8. Schmidt, R.M., Huisman, T.H.J., and Lehmann, H., The Detection of Hemoglobinopathies. CRC Press, Cleveland, 
1974.
9. Weather all, D.J. and Clegg, J.B., The Thalassemia Syndromes, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1972.
10. Lehman, H . and Huntsman, R.G., Man’ s Haemoglobins, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, 1974.
C €
Ten, +44(0)191 482 8440 
Ф акс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 160 ---
Тест-система ”ЛВП-холестерин-10^' для прибора SAS-MX
(SAS-MX "HDL 10"),
Тест-система ”ЛВП-холестерин-12” для прибора SAS-1
(SAS-1 HDL-12 Kit),
Тест-система ”ЛВП-холестерин" для прибора SAS-3
(SAS-3 HDL Kit)
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система позволяет разделить в сыворотке крови липопротеины в соответствии с их 
зарядом в агарозном геле. Фракции липопротеидов затем визуально рассматривают при 
инкубации с реагентом холестерина, количественно определяют холестерин и эфиры 
холестерина в соответствии со следующей последовательностью реакций:
Cbc4esterol esterase 
Cholesterot ester ^
............. " ^ Cholesterol + Fatty Acid
Otolesterol x^efiydrogenaie 
Chde&terol + NAD* v .... '  Cholestenone + NADH + H *
NADH + + NBT
D iapl^rase
NAD* + FormaiiLn dy®
Альфа-фракции мигрирует быстрее всего к аноду и соответствуют ЛВП. Следующая 
фракция -  пре-бета, она соответствует липопротеинам очень низкой плотности (ЛОНП) и 
медленно мигрирующая бета-группа соответствует ЛНП.
Отнощения ЛВП холестерина играют важную роль при ишемической болезни сердца 
(ИБСХ сообщает Барр и др., а также Миллер в 1951 ‘  и Миллер в 1975^. Работы Кастелли и 
др. сосредоточили внимание на ЛВП холестерина для лабораторной оценки определения 
риска ИБС. Клинические рекомендации Национальной образовательной программы по 
холестерину (NCEP) дают рекомендации клиническим лабораториям проведить 
определение Общего холестерина, ЛВП и ЛНП холестерина и триглицеридов. ЛНП, как 
уже подтверждено это этерогенные липопротеиды на основе содержания холестерина и 
являются главной основой для решений относительного лечения по рекомендациям 
NCEP’.
Компания Helena Biosciences производит HDL холестерин на SAS-3, метод демонстрирует 
хорошее разделение основных классов липопротеинов, четкое и точное количественное 
определение холестерина ЛПВП в сравнении с эталонными методами.
П РЕДО СТЕРЕЖ ЕН И Я  И М ЕРЫ  БЕЗО П А СН О С ТИ
Все реагенты предназначены для использования только в лабораторных условиях.
Не глотайте реактивы и не пытайтесь набирать их при помощи рта. При работе надевайте 
перчатки. За информацией по охране труда и утилизации обращайтесь к спецификации по 
технике безопасности.
СОСТАВ РЕАГЕНТОВ
1. SAS-3 HDL холестерин, гели
Содержит агарозу на основе трис/барбитал буфера с азидом натрия и тиомерсалом в 
качестве консервантов. Гель упакован в готовом к использованию виде.
С €
Т ел,+44 {0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 161 ---
l e l e n a
2. Холестериновый реагент 
Содержит компоненты, необходимые для определения холестерина в зависимости от 
последовательности реакции, указанной выше.
3. Холестерин дилюент
Содержит Тритон Х-100 и консерванты. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
4. Другие компоненты набора
Каждый набор включает инструкцию по эксплуатации и достаточное количество 
блоттеров С в расчете на 10 гелей.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
1. SAS-3 HDL холестерин, гели
Гели должны храниться при температуре +15...30°С, стабильность сохраняется до 
истечения срока годности, указанного на упаковке. НЕ ОХЛАЖДАЙТЕ И НЕ 
ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ГЕЛИ! О порче геля свидетельствует: 1) появление 
кристаллических структур, указывающих на факт замораживания геля; 2) 
растрескивание и расслаивание, сопровождающее высыхание геля; 3) видимая 
бактериальная или грибковая контаминация агарозы.
2. Холестериновый реагент
Флаконы реагента должны храниться при температуре 2 ... 6 °С и стабильны до срока 
годности, указанного на этикетке. Растворенный реагент стабилен в течение 6 часов при 
температуре 2 ... 6 ° С.
3. Холестерин д и л ю е н т
Дилюент следует хранить при температуре 2 ... 6 ° С, в этом случае он устойчив до 
истечения срока годности, указанного на этикетке.
.Избегайте контаминации. Мутность и инородные включения могут указывать на 
ухудшение реагента.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
CCat. № 310200 аппликаторы (1 х 10)
Cat. № 310300 аппликаторы (5 x 1 0 )
Cat. № 210100 одноразовых ячейки для образцов (100)
Cat. № 3386 SAS-3 распределитель реагентов 
Cat. № 3100 теплоотводящая лшдкость
ОБЕСЦВЕЧИВАЮЩИЙ РАСТВОР; смешайте 250 мл ледяной уксусной кислоты и 4750ml 
очищенной воды. Хранить в плотно закрытой бутылке.
Дистиллированная вода
СБОР И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Предпочтительными образцами являются свежая сыворотка или плазма (с 
использованием ЭДТА в качестве антикоагулянта). Образцы могут храниться при 
температуре +2...6°С в течение 4 дней. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ОБРАЗЦЫ!
Подготовка пациента:
Если HDL холестерин является единственным параметром, который будет определяться, 
больной не должен придерживаться диеты.
Если другие значения липидов будут также определены, то пациент должен 
придерживаться диеты:
1) Обеспечить предварительное голодание пациента в течение 12-14 часов перед
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@heiena-
w w w . h e l e n a -
b i o s c i e n c e s . c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 162 ---
/ и
H e l e n ai C I i - . n C O '.  f
получением образца для предотвращения интерференции с хиломикронами, 
индуцирующимися пищей.
2) Отменить прием всех лекарств на 3-4 недели, если это возможно.
3) В течение 1  недели пациент должен поддерживать стабильный вес и придерживаться 
нормальной диеты.
4) В случае перенесения инфаркта миокарда или схожего травматического события 
требуется выждать 4-8 недель, прежде чем проводить анализ.
Ф акторы , препятствую щ ие точному анализу:
1) Гепариновая терапия может привести к изменениям в подвижности липопротеинов, в 
'частности Р“ ЛП.
2) По тем же причинам гепарин не может использоваться в качестве антикоагулянта при 
получении образцов плазмы.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Запрограммируйте, как показано ниже следующие параметры в анализатор:
Step Fime (m irk iss) Temperature fC) V oltaa» Other
E l« c № « p lw > r« fff
Load Sample 00:30 2 1
Appfy Sample 01:00 2 1
R e p « < a t load sam ple, a p f> (y  » e m p Je *  for a tio tal Ы  2 a p p lcatie< rt$ .
Electrophoresis 15:00 400
Apply Reagent 21
Incubate 20:00 30
• - U ie  Location i for SHFE 3000 and SAS-3
\6
S p eed  6  *
Staner
O e s c a in
Wash
O iy
15:00
15:00
40:00
R e c irc u la te  O N  
R eciro jlate O N
2. Установите правильное количество аппликаторов в соответствующие позиции 
анализатора:
Number of Sam ples Appicator Pofition
S P IF E  Com boS P IF E  2000 / 3000 .  S A S -1
2 . г  1 6 I  8 , 1 4
4 0 2,9
2 0 2 2
3. i) SPIFE Combo пользователи: отберите пипеткой 50fxl образца в соответствующие 
ячейки для образцов.
Накройте образцы для предотвращения испарения.
II) SPIFE 2000/3000/SAS-3 пользователи: отберите пипеткой 35ixl образца в 
соответствующие ячейки для образцов. Накройте образцы для предотвращения испарения.
4. Приготовьте 1  флакон с реагентом холестерина, добавив 2,5 мл дилюента для разведения 
холестерина и хорощо перемешайте:
i) SPIFE Combo/2000 пользователи: сохраните для использования после электрофореза.
II) SPIFE 3000/SAS-3 пользователи: поместите флакон в центральный реагентный слот.
5. Удалите гель из упаковки и снимите защитную пленку.
6. Нанесите 2 мл теплоотводящей жидкости на левую сторону камеры и осторожно
С С
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта i n f o @ h e l e n a -  
b i o s c i e n c e s . c o m
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate. Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 163 ---
/ к г
l e l e n a
поместите гель в камеру, совмещая отверстия на геле с соответствующими пазами в камере, 
избегайте образование пузырей под гелем. Прикрепите электроды на внешней стороне 
электрододержателя так, чтобы они находились в контакте с буферными блоками гелей.
7. Поместите блот на поверхность, используйте блоттер С, не накрывайте крышкой.
8. Выберите программу, HDL тест и, следуя подсказкам, поместите образцы и выполните 
электрофорез, затем проинкубируйте гель с реагентом,
9. SPIFE Combo/2000 пользователи: поместите содержимое флакона холестерина вдоль 
одного края геля. Используйте разбрызгиватель реагента, распределяя реагент по 
поверхности геля, распределите реагент два раза, чтобы обеспечить равномерное 
покрытие.
10. После инкубации удалите электроды и удалите буферные блоки с поверхности геля, 
используйте специальную лопатку.
.11. Прикрепите гель для окрашивания на держатель.
12. Выберите программу для окрашивания, HDL тест, и, следуя подсказкам, выполните 
окрашивание, обесцвечивание, промывку и сушку геля.
13. В конце цикла окрашивания, удалите гель из камеры. Гель готов к рассмотрению. 
ИН ТЕРП РЕТА Ц И Я РЕЗУ ЛЬТА ТО В
Рекомендуется проводить оценку результатов в сравнении с нормальными значениями, 
получаемыми данным методом в соответствующей лаборатории. Гели могут быть 
отсканированы при длине волны 525 нм агарозой вниз.
Принятие решений о тактике лечения приводятся в рекомендациях NCEP и главным 
образом основываются на уровне LDL холестерина :
T otal Cholesterol
Detiraii4e b lo o d  d io lesten o l< 200 ms^'dL
Botderline-High blood cholesterol200-239 mg/dL [
H gb b lo o d  choteeterol 240 rrt^'dL 1
H D L  Choi«iterol
Low  H D L cholesterol <  IS f
PV-oiectPn» H O L  chol№terol > £ > 0  rns/dL i
T riglycertdet
OesiraWe < 250 mgfdL
1iI
Borderline 250-500 mg/dL I.
E ev 3 t« d 500-1000 rt^^dL 1 :
Severely elevate^^poncrestitis> 1  О О О  mg/dL
L D L  Chdetterol 
D ietaiy T > i« ra p y inidbrion L » v e l L D L  Cod
iк
Wrthout C H D  and <2 risk  fe c t» r$ ^  1^0 m a^L < l60 rr®/dL 1
W ithoucG H D  and > 2 risk^ctt>rs l30 mg,'dL <  130 Fngj'dL
With C H D >  100 mgi'dL ^  100 rre/dL [
Dn«TWa|3Y
Without C H D  a n rf <  2 fecDors ^  190 rng/dL <  160 rre/dL I
Without C H D  snd >  2 пзйс fectors ^  I^Omgr'^dL <  130 rre/dL 1
With C H D ^  130 mg/dL ^ lO O n-e/dL ]
Факторы риска рассматриваемые в схеме классификации: возраст (мужчины> 45 лет, 
женщины> 55 лет), семейный анамнез преждевременного ИБС, курение, гипертония и
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл, почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 164 ---
l e l e n a
сахарный диабет. ЛВП холестерина считается высоким риском если уровень <35 мг/дл и 
учитывается как фактор риска в классификации. ЛВП холестерин > 60 мг/дл считается 
защитным уровнем и его вычитают из общего числа факторов риска.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля правильности выполнения всех этапов методики рекомендуется 
использовать Control HDL холестерин (кат. ном. 3189) при каждом запуске. Допустимые 
результаты анализа указаны во вкладыше, поставляемом вместе с контролем в упаковке. 
КОНТРОЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Использовано 14 образцов взятых от нормальных доноров мужчин и женщин с общим 
уровнем холестерина менее 200 mg/dL, были получены следующие диапазоны референсных 
значений (они представлены только в качестве ориентира):
P rot«n Fraction Mean (%) ±. 2SD Rai^e
HDl 283 1 ) .I -45.5
VLDL 3/1 0.0-7.Э
LD L 68.6 52.2 - 8S
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
1) Точность
B and WthhhRun (n= 30) R u n  (n = 90)
M «an S D CV(%) M e < 3 f i S D  C V <% )
И 0 1 29.6 0.9 12 29.6 1,3 4.4
LDL 66.9 1.0 1.4 66.9 1.3 2.0
VLDL 3 .4  0.1 Ъ .Ь 3.5 O .i 3.8
Чувствительность
Серийные разведения высокого уровня холестерина в образцах показали чувствительность 
системы, которая эквивалентна 9,7 мг/дл холестерина на каждую фракцию.
Линейность
Серийные разведения высокого уровня холестерина в образцах показали, что система 
линейна до 400 мг/дл холестерина на каждую фракцию.
ЛИТЕРАТУРА
/. Barr, D.P. et al Trotein-lipid Relationships in Human Plasma’ , Am. J. Med., 1951; U : 480-493.
2. Miller, G.J and Miller, N.E. ‘ Plasma-High Density-Lipoprotein Concentration and Development of Ischemic Heart 
Disease’ ,  Lancet, 1976; 1: 16-19.
3. Kannel, W .B . et al ‘ Serum Cholesterol, Lipoproteins and the Risk of Coronary Heart Disease’  Ann. Inter. Med., 
197} ; 74 (I) :  1-I2.
4. Gordon, T . et al ‘ High Density Lipoprotein as a Protective Factor Against Coronary Artery 
Disease. The Framingham Study>\ Am. J. Med.. 1977 ;  62 :  707-714.
5. Galen, R.S. ‘ HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor?'. Diag. Med., 1979 ; Nov/Dec : 39-58.
6. Castelli, W .P. et al. ’ HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease - The 
Cooperative Lipoprotein PhenotypingStudy' Circulation, 1977 :  55 (5): 767-772.
7 . National Cholesterol Education Program, Second report of the expert panel on detection, evaluation and treatment 
of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel 1 1 ). NCEP 1993.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@heiena- 
biQSCiences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 165 ---
/ ^ г
л е 1 е п а
С €
Т е л ,+44 {0)191 482 8440 
Ф а к с +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences, com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 166 ---
H e l e n a
Тест-система ”Липопротеины” для приборов SAS-MX, SAS-1, SAS-3
(SAS-MX, SAS-1, SAS-3 ’ Ъ1Р0 Kit” ).
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для разделения и количественного анализа липопротеинов 
сыворотки или плазмы с помощью электрофореза в агарозном геле.
С тех пор, как Fredrickson и Lees предложили систему для фенотипирования 
гиперлипопротеинемии (ГЛП) в 1965i, принцип обнаружения и предотвращения 
.коронарной болезни сердца с помощью электрофореза липопротеинов стал вполне 
обыденным тестом.
Эпидемиологические исследования выявили связь между потреблением с пищей 
жиров, в особенности холестерина, уровнем липидов в крови и частотой развития 
атеросклероза, главным проявлением которого являются сердечно-сосудистые 
заболевания и приступы. Ишемическая болезнь сердца, как выяснилось, также связана с 
гиперхолестеринемиеЙ 2.з. Необходимость точного определения фенотипов по 
липопротеинам обусловлена тем, что ГЛП характерна для целой группы болезней, 
отличающихся по клиническим признакам, прогнозам и чувствительности к лечению. 
Поскольку способы лечения этих заболеваний pa;^личaютcя для разных фенотипов, 
чрезвычайно важно установить верный фенотип до начала лечения4. В системе 
классификации ГЛП, которую предложили Fredrickson и Lees, только у типов II, 1 1 1  и IV 
установлена достоверная связь с атеросклерозом, В плазме липиды не циркулируют 
свободно, а транспортируются в связанной с белком форме, и потому могут 
классифицироваться как липопротеины. Разные фракции состоят из различных сочетаний 
белка, холестерина, глицеридов, эфиров холестерина, фосфатов и свободных жирных 
^(Ислот5. Для ра.зделения липопротеинов пла:шы применяли несколько способов, включая 
ультрацентрифугирование, тонкослойную хроматографию, иммунологические методы и 
электрофорез. В настоящее время наиболее щироко распространенными методами 
являются электрофорез и ультрацентрифугирование, каждый из которых дал начало 
собственной терминологии, В следующей таблице показана связь между 
соответствующей классификацией фракций липопротеинов и относительным липидным и 
белковым составом каждой фракции.
Принцип классвфнкацин Состав фракции. %
Электрофоретическая
подвижность
Ультр авснтрн фуги -  
рованне Белок Глнцеризы Холестерин Фосфолипиды
Хнломикронь£ 2 98
13-ЛП* ЛПНП'“ 21 12 45 22
пре-|3-ЛП ЛПОНП* 10 55 13 22
а-ЛП ЛИБО* 50 6 18 26
*ЛП (липопротеины), ЛГШП (липопротеины низкой плотности), ЛГЮНП (липопротеины 
очень низкой плотности), ЛПВГ1 (липопротеины высокой плотности)
Однако существуют некоторые исключения из указа 1!ных классификаций. Одно из 
таких исключений -  «оседающий пре-р-ЛП», представляющий собой вещество пре-(3-ЛП
С €
Т е л ,+44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South, 
Team V alley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  O S D , United Kingdom
1


--- стр. 167 ---
l e l e n a
фракции, которое при ультрацентрифугировании оседает совместно с фракцией ЛПНП (р- 
ЛП)б. «Оседающий пре-р-ЛП» относится к ЛП(а). как установил Dahien?, и считается 
нормальным вариантом, обнаруживаемым у 10% популяции.
Другое исключение -  «плавучий р-ЛП», представляющий собой вещество фракции р-ЛП, 
оседающее при ультрацентрифугировании на уровне фракции ЛПОНП. Этот аномальный 
липопротеин обнаруживается при ГЛП типа III. Разнообразные вспомогательные средства 
применялись для электрофоретического разделения липопротеинов. При создании 
классификации типов ГЛП, Fredrickson использовал бумажный электрофорезу». В 
настоящее время используются агарозные, крахмальные и полиакриламидные гели.
Набор SAS-MX Lipoprotein обеспечивает разделение липопротеинов сыворотки/плазмы в 
соответствии с их зарядом в агарозном геле, после чего следует их фиксация и 
хжрашивание для визуализации.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЯ И МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
Все реагенты предназначены для использования только в лабораторных условиях.
Не глотайте реактивы и не пытайтесь набирать их при помощи рта. При работе надевайте 
перчатки. За информацией по охране труда и утилизации обращайтесь к спецификации по 
технике безопасности.
СОСТАВ РЕАГЕНТОВ
1. Гель SAS-MX Lipoprotein
Содержит агарозу на основе трис/барбитал буфера с азидом натрия и тиомерсалом в 
качестве консервантов. Гель упакован в готовом к использованию виде.
2. Концентрат трис/барбитал буфера
Содержит концентрированный трис/барбитал буфер с азидом натрия в качестве 
консерванта. Разведите содержимое одной бутылки до конечного объема 1  л 
дистиллированной водой и тщательно перемешайте.
3. Краситель SAS-MX Lipoprotein
Содержит жирорастворимый краситель Fat Red 7В. Растворите содержимое одного 
’ флакона в 1  л этанола и перемешивайте в течение 24 часов, перед использованием 
профильтруйте. Приготовление рабочего раствора красителя: непосредственно перед 
использованием добавьте 5мл дистиллированной воды к 25мл маточного раствора.
Воду добавляйте по каплям с одновременным помешиванием.
4. Другие компоненты набора
Каждый набор включает инструкцию по эксплуатации и достаточное количество 
матриц для внесения образцов и блоггеров А и С в расчете на 10 гелей.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
1 . Гель SAS-MX Lipoprotein
Гели должны храниться при температуре + 1 5...30°С, стабильность сохраняется до 
истечения срока годности, указанного на упаковке. НЕ ОХЛАЖДАЙТЕ И НЕ 
ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ГЕЛИ! О порче геля свидетельствует: 1) появление 
кристаллических С1руктур, указывающих на факт замораживания геля; 2) 
растрескивание и расслаивание, сопровождающее высыхание геля; 3) видимая 
бактериальная или грибковая контаминация агарозы,
.2 . Концентрат трис/барбитал буфера
Концентрат буфера должен храниться при температуре +15.. .30°С, стабильность
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф а к с +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 168 ---
/ O ’
H e l e n a
сохраняется до истечения срока годности, указанного на этикетке. Разведенный буфер 
стабилен в течение 2 месяцев при температуре +15.. .ЗО^С.
3, Краситель SAS-MX Lipoprotein
Порошок красителя должен храниться при температуре +15...30°С, стабильность 
сохраняется до истечения срока годности, указанного на этикетке. Растворенный 
краситель стабилен в течение 6 месяцев при температуре +15...30°С. Хранить в 
герметично закрытом флаконе.
Д О П О Л Н И ТЕЛ ЬН Ы Е Н ЕО БХ О Д И М Ы Е М АТЕРИА ЛЫ
Кат. ном. 4063 Камера
Кат. ном. 1525 Блок питания EPS600
Сушильный шкаф с функцией принудительного нагнетания воздуха на +60...70°С 
Обесцвечивающий раствор: смешайте 75мл этилового спирта и 25мл дистиллированной 
воды непосредственно перед использованием 
Очишенная вода
СБО Р И П РИ ГО ТО В Л ЕН И Е ОБРАЗЦОВ
Предпочтительными образцами являются свежая сыворотка или плазма (с 
использованием ЭДТА в качестве антикоагудянта). Образцы могут храниться при 
температуре + 2 ...6°С в течение 5 дней. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ОБРАЗЦЫ!
Подготовка пациента: для получения максимально точных результатов необходимо 
принять следующие меры перед получением образца:
1) Обеспечить предварительное голодание пациента в течение 12-14 часов перед 
получением образца для предотвращения интерференции хиломикронами, 
индуцирующимися пищей.
2) Отменить прием всех лекарств на 3-4 недели, если это возможно.
3) В течение 1  недели пациент должен поддерживать стабильный вес и придерживаться 
нормальной диеты.
4) В случае перенесения инфаркта миокарда или схожего травматического события 
требуется выждать 4-8 недель, прежде чем проводить анализ.
Ф акторы , препятствую щ ие точному анализу:
* 1 ) Гепариновая терапия может привести к изменениям в подвижности липопротеинов, в 
частности р-ЛП.
2) По тем же причинам гепарин не может использоваться в качестве антикоагулянта при 
получении образцов плазмы.
ПОЭТАПНАЯ ПРО Ц ЕДУРА
1. Достаньте гель из упаковки и поместите на бумалсное полотенце. Промокните его 
поверхность с помощью блот'тера С, затем удалите блоггер.
2. Совместите матрицу для внесения образцов со стрелками вдоль края геля. Поместите 
блоггер А поверх матрицы и слегка проведите пальцем вдоль щелей, чтобы обеспечить 
надежный контакт. Удалите б лопер А, но сохраните его для использования на этапе
5.
3. Внесите по 2мкл образца в каждую щель и позвольте образцам абсорбироваться в 
течение 7 минут.
4. Пока образцы абсорбируются, залейте 25мл буфера в каждый внутренний отсек камеры 
SAS-MX.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф а к с +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena' 
biosciences.com
www.helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead.
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 176 ---
l e l e n a
*Испольэование помещения 2
ПРИМЕЧАНИЕ: Для скрининга сыворотки требуется 1  нанесение образца. Для скрининга 
мочи требуется 10 нанесений проб. Перед суш кой следует извлечь блоки геля.
в. П о завершении электрофореза (Пользователи SAS-1 Plus: снять кры ш ку), снять 
электроды с поверхности геля. (Пользователи SAS-3: снять направляющую). Разместить 
шаблон для нанесения антисыворотки на поверхности геля. П РИ М ЕЧА Н И Е: Каналы для 
антисыворотки следует наложить на квадрат, отмеченный на геле, на который наносят 
образцы.
9. Нанести бО рл пентавалентной антисыворотки в каждое отверстие шаблона 
антисыворотки. Следует убедиться, что антисыворотка полностью заполнила каналы.
10. Инкубировать гель.
11. П о завершении инкубации поместить гребенку-блоттер на отверстия шаблона 
антисыворотки. Оставить на 2 минуты для абсорбции излишков антисыворотки, затем 
удалить гребенку и  шаблон с поверхности геля.
12. Поместить промокательную бумагу D  (гладкой стороной вниз) на поверхность геля, 
оставить на 10 секунд и  удалить.
13. Поместить промокательную бумагу D  (гладкой стороной вниз) на поверхность геля и  
вновь положить шаблон антисыворотки для обеспечения горизонтального положения 
промокательной бумаги. Выполнить абсорбцию геля. П РИ М ЕЧА Н И Е: Незамедлительно 
после использования очистить шаблон антисыворотки с использованием мягкого 
биоцидного моющего средства.
14. Удалить промокательную бумагу D . Пользователи SAS-3: Высушить гель и  выполнить 
первую 3-х секундную промывку камеры на приборе SAS-4.
15. Удалить блоки геля и  установить гель на держатель камеры для окрашивания, затем 
выполнить последние шаги на SAS-2 или S A S --4 .
16. П о окончании цикла окрашивания удалить гель из камеры для окрашивания. Теперь 
гель готов для исследования.
а) SAS-2 (Прибор для автоматического окрашивания)
Шаг Раствор Время
(мин:сек)
Порт Температура
т
Суш ка — 10:00 55
Промывка Промывочный
раствор
07:00 4
Окрашивание Кислотный синий 03:00 6
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл, почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 177 ---
H e l e n a
краситель 1
Обесцвечивание Обесцвечивающий
раствор
02:00 2
С уш ка — 05:00 65
Промывка Промывочный
раствор
03:00 4
Промывка Промывочный
раствор
03:00 4
С уш ка — 05:00 65
б) SAS-4 (Прибор для автоматического окрашивания)
Шаг Время (миихек) Температура (°С) Другое
Промывка 00:03 Рециркуляция В К Л
Промывка 10:00 Рециркуляция В К Л
Окрашивание 04:00 Рециркуляция В К Л
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция В К Л
Обесцвечивание 02:00 Рециркуляция В К Л
С уш ка 12:00 64
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
П ри электрофорезе белков большая часть моноклональных белков мигрирует в катодный 
гамма-регион шаблона белков, однако вследствие аномальности их природы они могут 
мигрировать в любое место в рамках зоны глобулинов. В  таком случае анормальный белок 
следует идентифицировать с ислользованием иммунофиксации.
При наличии низких концентраций анормального белка анормальная полоса может 
появиться в рамках нормального поликлонального иммуноглобулина. Полосу также мож но 
будет увидеть на поликлональном фоне, где также присутствует значительное количество 
поликлонального иммуноглобулина.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
K em trol Abnormal (номер по каталогу 7025) дает одну моноклональную полосу на 
поликлональном фоне.
ОГРАНИЧЕНИЯ 
1 . Излишек антигена
Излишек антигена происходит в случае отсутствия небольшого излишка антител или 
равенства антигена/антител на стадии осаждения. Излишек антигена при иммунофиксации 
обычно обусловлен излишком иммуноглобулина в образце пациента. Излишек антигена 
характеризуется прозоной (неокрашенным участками в центре иммунофиксированной 
полосы белка, с окраской по краям). В  таком случае следует использовать более вью окую  
степень разведения образца с целью оптимизации концентрации иммуноглобулина.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
а) Чувствительность
П ри использовании метода для мочи (10 нанесений), количество Ю мг/л было определено 
как самая малая концентрация белка, которая была очевидно определена как отдельная 
полоса на выполненном геле.
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w ww .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 178 ---
h e l e n a
б) Линейность
Линейность метода » это функция спецификации денситометра, а также эффективность 
геля. Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определил линейность метода, 
основываясь на используемом в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Fauchier, Р. and Catalan, F. ‘ Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’  Alfred Fournier  
Institute, Paris, France, 1988.
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia,  M M  Finding Clues to Disease in Urine’  
'Diagnostic Medicine, 1980; May/June : 69-75,
3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘ Determination o f Urinary Protein Fractions. A Comparison  
With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations ’  
Clin. Chim. Acta., 2000; 297: 163-172.
4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘ Determination o f Urinary Protein Fractions by Different  
Electrophoretic M ethods’ , Clin. Lab.; 1999, 45 :  257-262.
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec,  Z , Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. ‘ A  
Comparison o f Three Procedures fo r the Detection o f Bence-Jones Proteinuria’  Ann. Clin.  
Biochem., 1997, 34 : 371-374.
6. Alfonso, E., 'Quantitation Immunoelectrophoresis o f Serum Proteins’ , Clin. Chim. Acta., 1964;  
10: 114-122.
7 . Alper, C.A and Johnson, A.M., Immunofixation Electrophoresis: A Technique fo r the Study o f  
Protein Polymorphism’ ,  Vox. Sang., 1969; 17: 445-452.
8. Alper, C.A., ’ Genetic Polymorphism o f Complement Components as a Probe o f Structure and  
Function’ , Progress in Immunology. First International Congress o f Immunology. 1971 : 609-624,  
Academic Press, New York.
'9. Johnson, A.M., ‘ Genetic Typing o f Alpha(l)-Antitrypsin in Immunofixation Electrophoresis.  
Identification o f Subtypes o f Pi M. ’ , J. Lab. Clin. Med., 1976; 87 :  152-163.
10. Cawley, L.P., Minard, B.J, Tourtellotte, W.W., Ma, B.L andChelle, C., ‘ Immunofixation  
Electrophoretic Technique Applied to Identification o f Proteins in Serum and Cerebrospinal  
Fluid’ , Clin. Chem., 1976; 22 : 1262-1268
11. Ritchie, R.F and Smith, R. ‘ Immunofixation III, Application to the Study o f Monoclonal  
Proteins’ , Clin. Chem., 1976; 22 : 1982-1985.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.cofn
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 179 ---
H e l e n a
Тест-система ''Холестериновый профиль^' для прибора SAS-3
(SAS-3 Cholesterol Profile kit),
Тест-система "Холестериновый профиль-12'^ для прибора SAS-1
(SAS-1 Plus Cholesterol Profile kit)
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система позволяет разделить в сыворотке крови липопротеины в соответствии с их 
зарядом в агарозном геле. Фракции липопротеидов затем визуально рассматривают при 
инкубации с реагентом холестерина, количественно определяют холестерин и эфиры 
холестерина в соответствии со следующей последовательностью реакций:
0 [ ( а 1 « « М № 1  « ( ■ : » № «C h o b s e a r o )  в * м г  ц   * : i < i
C hol*H»n>l + NJD’ T-
С 4 ) Ы в |» а г Ы  d e h ^ ro g o n o »- i »  C h d a s w n o n *  +  N A D H  +  H '
D l » p h < s r w «NaC W  4  H  +  N B . TN A D  +  F c m w a n
Альфа-фракции мигрирует быстрее всего к аноду и соответствуют ЛВП. Следующая 
фракция -  пре-бета, она соответствует липопротеинам очень низкой плотности (ЛОНП) и 
медленно мигрирующая бета-группа соответствует ЛНП.
Фракция или несколько фракций, которая может появиться между альфа- и пре-бета 
фракцией, но не все фракции необходимо интерпретировать как ЛП(а) - С фракция. 
Отношения ЛВП холестерина играют важную роль при ишемической болезни сердца 
(ИБС1 сообщает Барр и др., а также Миллер в 1951* и Миллер в 1975^. Работы Кастелли и 
др. сосредоточили внимание на ЛВП холестерина для лабораторной оценки определения 
риска ИБС. Клинические рекомендации Национальной образовательной программы по 
холестерину (NCEP) дают рекомендации клиническим лабораториям проведить 
определение Общего холестерина, ЛВП и ЛНП холестерина и триглицеридов. ЛНП, как 
уже подтверждено это этерогенные липопротеиды на основе содержания холестерина и 
являются главной основой для решений относительного лечения по рекомендациям
NCEP' 
Холестерин содержащий фракции был определен методом липопротеидов
у  ^
ультрацентрифугирования , селективным осаждением и электрофорезом на различных 
носителях Общий метод исследования для точного количественного определения ЛНП, 
и основной референтный метод, назначен «бета-количественный», бета-фракция 
Х)пределенная электрофоретически ЛНП. Бета-количественный метод предполагает 
сочетание ультрацентрифугирования и химическую преципитацию Бета-
количественный метод дает так называемую "широкую отсечку" ЛНП, который включает в 
себя ЛП (а)- С липопротеин NCEP группа пришла к выводу, что альтернативные 
методы, необходимые для рутинной диагностики, предпочтительно, непосредственно 
отдельные ЛНП количественно холестерина Одним из таких методов для прямого 
разделения ЛНП является электрофорез.
Компания Helena Biosciences производит холестериновый профиль на SAS-3, метод 
демонстрирует хорошее разделение на основные классов липопротеинов, четкое и точное 
количественное определение холестерина ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП и ЛП (а) в сравнении с 
эталонными методами.
П РЕДО СТЕРЕЖ ЕН И Я  И М ЕРЫ  БЕЗО П А СН О С ТИ
С €
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта infotaihelena-
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom
1


--- стр. 180 ---
/< fr
HelenaB io s r iL n c - j'j F jrfip c
Bee реагенты предназначены для использования только в лабораторных условиях.
Не глотайте реактивы и не пытайтесь набирать их при помощи рта. При работе надевайте 
перчатки. За информацией по охране труда и утилизации обращайтесь к спецификации по 
.технике безопасности.
СОСТАВ РЕАГЕНТОВ
1. SAS-3 Холестериновый профиль, гели
Содержит агарозу на основе трис/барбитал буфера с азидом натрия и тиомерсалом в 
качестве консервантов. Г ель упакован в готовом к использованию виде.
2. Холестериновый профиль реагент
Содержит компоненты, необходимые для определения холестерина в зависимости от 
последовательности реакции, указанной выше.
3. Холестериновый профиль дилюент
Содержит Тритон Х-100 и консерванты. Раствор упакован в готовом к использованию виде.
4. Другие компоненты набора
Каждый набор включает инструкцию по эксплуатахщи и достаточное количество 
блоттеров С в расчете на 10 гелей.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
1. SAS-3 холестериновый профиль, гели
Гели должны храниться при температуре +15...30°С, стабильность сохраняется до 
•истечения срока годности, указанного на упаковке. НЕ ОХЛАЖДАЙТЕ И НЕ 
ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ГЕЛИ! О порче геля свидетельствует: 1) появление 
кристаллических структур, указывающих на факт замораживания геля; 2) 
растрескивание и расслаивание, сопровождаюидее высыхание геля; 3) видимая 
бактериальная или грибковая контаминация агарозы.
2. Холестериновый профиль реагент
Флаконы реагента должны храниться при температуре 2 ... 6 °С и стабильны до срока 
годности, указанного на этикетке. Растворенный реагент стабилен в течение 6 часов при 
температуре 2 ... 6 ° С.
3. Холестериновый профиль дилюент.
Дилюент следует хранить при температуре 2 ... 6 ° С, в этом случае он устойчив до 
истечения срока годности, указанного на этикетке.
Избегайте контаминации. Мутность и инородные включения могут указывать на 
ухудшение реагента.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
CCat. № 310200 аппликаторы (1x10)
Cat. № 310300 аппликаторы (5 х 10)
Cat. № 210100 одноразовых ячейки для образцов (100)
Cat. № 3386 SAS-3 распределитель реагентов 
Cat. № 3100 теплоотводящая жидкость
ОБЕСЦВЕЧИВАЮЩИЙ РАСТВОР: смешайте 250 мл ледяной уксусной кислоты и 4750ml 
очищенной воды. Хранить в плотно закрытой бутылке.
Дистиллированная вода.
СБОР И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Предпочтительными образцами являются свежая сыворотка или плазма (с
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@ helena- 
faiosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 181 ---
Helena
Biosciences Europe
использованием ЭДТА в качестве антикоагулянта). Образцы могут храниться нри 
температуре +2...6°С в течение 4 дней. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ОБРАЗЦЫ! 
Подготовка пациента:
Если HDL холестерин является единственным параметром, который будет определяться, 
больной не должен придерживаться диеты.
Если другие значения липидов будут также определены, то пациент должен 
придерживаться диеты:
1) Обеспечить предварительное голодание пациента в течение 12-14 часов перед 
получением образца для предотвращения интерференции с хиломикронами, 
индуцирующимися пищей.
2) Отменить прием всех лекарств на 3-4 недели, если это возможно.
3) В течение 1  недели пациент должен поддерживать стабильный вес и придерживаться 
нормальной диеты.
4) В случае перенесения инфаркта миокарда или схожего травматического события 
требуется выждать 4-8 недель, прежде чем проводить анализ.
Ф акторы , препятствую щ ие точному анализу:
1) Гепариновая терапия может привести к изменениям в подвижности липопротеинов, в 
частности р-ЛП.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Запрограммируйте, как показано ниже следующие параметры в анализатор;
S o p T lm » ( n r m :n ) T « m f M r c t u r e  (X ) V o h a f » O th e rЕ 1 а ш « р Ь о п и кI x e d S a m p t o0 0 : 3 02 1 S p M d i0 1 : 0 0 2 1 S p e e dF U p M T t  iM d tu n p ie .tp p ^ H in p l» ' { 6 r » t « r t a l  » f  2  a f p lk M c n t.E b c tn o |: h o r e s b • M . O )1 2  2 5 0R * « g a n t 2 1 4 C y c l » sb c u b a t »2 0 : 0 03 0
$ Ш П « ГD t t s t a i nW j e h 1 5 : 0 01 5 ; 0 0 R e > c i r c u l a c «  O N  R f tc ir c u lj» O N
2. Установите правильное количество аппликаторов в соответствующие позиции 
анализатора:
N u m b e r  o f  S * m p 4 * i A f p lk x o r  P te tto nS P F E  C o r r b a S P I F E  » O Q /X O O /S > « .3« С - 2 ,9 . U 2.e, 1 4
■ t o 2 .9 2.S
2 0 2 2
3. i) SPIFE Combo пользователи: отберите пипеткой 17ц1 образца в соответствующие 
ячейки для образцов.
Накройте образцы для предотвращения испарения.
il) SPIFE 2000/3000/SAS-3 пользователи: отберите пипеткой 35ц1 образца в 
соответствующие ячейки для образцов. Накройте образцы для предотвращения испарения.
4. Приготовьте 1  флакон с реагентом холестерина, добавив 2,5 мл дилюента для разведения 
холестерина и хорошо перемешайте:
i) SPIFE Combo/2000 пользователи: сохраните для использования после электрофореза.
И) SPIFE 3000/SAS-3 пользователи: поместите флакон в центральный реагентный слот.
5. Удалите гель из упаковки и снимите защитную пленку.
6. Нанесите 2 мл теплоотводящей жидкости на левую сторону камеры и осторожно
С €
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 182 ---
Helena
Biosciences Europe
поместите гель в камеру, совмещая отверстия на геле с соответствующими пазами в камере, 
избегайте образование пузырей под гелем. Прикрепите электроды на внешней стороне 
электрододержателя так, чтобы они находились в контакте с буферными блоками гелей.
7. Поместите блот на поверхность, используйте блоттер С, не накрывайте крышкой.
8. Выберите программу, HDL тест и, следуя подсказкам, поместите образцы и выполните 
электрофорез, затем проинкубируйте гель с реагентом.
9. SPIFE Combo/2000 пользователи: поместите содержимое флакона холестерина вдоль 
одного края геля. Используйте разбрызгиватель реагента, распределяя реагент по 
поверхности геля, распределите реагент два раза, чтобы обеспечить равномерное 
покрытие.
10. После инкубации удалите электроды и удалите буферные блоки с поверхности геля, 
используйте специальную лопатку.
11. Прикрепите гель для окрашивания на держатель.
12. Выберите программу для окрашивания, HDL тест, и, следуя подсказкам, выполните 
окрашивание, обесцвечивание, промывку и сушку геля.
13. В конце цикла окрашивания, удалите гель из камеры. Гель готов к рассмотрению. 
ИН ТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУ ЛЬТА ТО В
Рекомендуется проводить оценку результатов в сравнении с нормальными значениями, 
получаемыми данным методом в соответствующей лаборатории. Гели могут быть 
отсканированы при длине волны 525 нм агарозой вниз.
Принятие решений о тактике лечения приводятся в рекомендациях NCEP и главным 
образом основываются на уровне LDL холестерина :
T o c » l  C h o h e t t r o JD e a r a b l e  b l o o d<  2 0 0  m j ' d Lb I c o d  c h c ( e e ( 4 r c 4 2 С О - 2 Э 9  m y d LH t g j i  b l o o d  d x i l K u r o l^ 2 4 0 m a - d L
H D L C h e l < M t * n ) lL o w  H D L  c h o ^ A t M r o l<  3 5  f ( \ g , ( d LP l 4 > t « c c t v «  H D L  c h o l s « ( * r o l>  (C r r \ g , ^ d L
T r t | | ) c « n i l e »D v M r a b b <  2 5 0  m g ' d LB o r d i r i m * 2 5 0 . 5 0 0  m j d L5 0 c « . l 0 0 0  m g . ' d L$ < r v « r > e l /  « k r v a c » d < p « n c n » a O ( K>  I O O O r r « . d L
L D L C h o l M t * r o lD i v i i r y  T h « n p y I n d a t l o n  U w a lL D L G o « lV V i t h o u t  CH D  » n d  < 2 г в к  f c c t o r j ^ l 6 0 ( Y i j * ' d L<  1 Й 0  m g ' ’ d LV V l t h c u :  C H D  a n d  >  2  r t i k  f a c t o r s^  1 3 0  t n y ’ d L < •  l 3 0 m g < d LW e h  C H D >  I O O m g » ' d LS. 1  C O  m g f ' d L
[ > u j  T h e r a p yD c t i i y  T h « n p yI n i t i a t i o n  L t w a lL D L  G o a lW t h o u t  CH D  a n d  c.i г | Л  - f a c t o nI W m ^ - ' d L <  1  (0 m g i ’ d LW k h e u t  CH D  a n d  >  2  r b k  f s p n o r s^ l 6 0 m j » ' d L < ;  l 3 0 n V ^ LW i t h  CH D ^ 1 3 0  m j - ' d L^  1 0 0  t n g C d L
Факторы риска рассматриваемые в схеме классификации: возраст (мужчины> 45 лет, 
женщины> 55 лет), семейный анамнез преждевременного ИБС, курение, гипертония и 
сахарный диабет. ЛВП холестерина считается высоким риском если уровень <35 мг/дл и 
учитывается как фактор риска в классификации, ЛВП холестерин > 60 мг/дл считается 
защитным уровнем и его вычитают из общего числа факторов риска.
КО Н ТРО ЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля правильности выполнения всех этапов методики рекомендуется 
использовать Control HDL холестерин (кат. ном. 3218) при каждом запуске. Допустимые
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w . h e l e n a -
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway Soutii,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 183 ---
helena
Biosciences Europe
результаты анализа указаны во вкладыше, поставляемом вместе с контролем в упаковке. 
К О Н ТРО Л ЬН Ы Е ЗН А ЧЕН И Я
Использовано 30 образцов взятых от нормальных доноров мужчин и женщин с общим 
уровнем холестерина менее 200 mg/dL, были получены следующие диапазоны референсных 
значений (они представлены только в качестве ориентира):
Prattli F ra c tio n h lM in (fb ) jfJSDFUree
H D L 2 7 ,9 16.4-■ К О
ЦмЖ 0.2- 1 7 4
V U X 1 0 .6 4  1  -20.9ID L S 7 .0 . « e.6
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
1) Точность
B in d W k h Jn -IU n  = < 0 ) = 1 8 0 )
M e a in S D cvr>t) М о в л S DC V f»t)
H D L 2 J.0 0 .4 1 .5 2 J.2 3 .S
lp (a > .C 10 0 .1 IS 2 .0 ft! 3iV ID L I0j6 0 ,1 II 1 0 ,5 0 .3 2 Й
ID L (A  A 0 .3 as 6 4 .3 M 1 ,4
Чувствительность
Серийные разведения высокого уровня холестерина в образцах показали чувствительность 
системы, которая эквивалентна 5,0 мг/дл холестерина на каждую фракцию.
Линейность
Серийные разведения высокого уровня холестерина в образцах показали, что система 
линейна до 350 мг/дл холестерина на каждую фракцию.
Корреляция
S A S -3  (S P IF E ) Х о л е с т е р и н о в ы й  п р о ф и л ь  Л В П , Л Н П  и Л П О Н П  к о л и ч е с т в е н н о  с р а в н и в а л и  с м е т о д о м  
у л ы р а ц е н т р и ф у г и р о в а н и я  и п о л у ч и л и  с л е д у ю щ и е  р е зу л ь та ты :
Л В П  у л ь т р а ц е н т р и ф у г и р о в а н и е м  = 1 ,00 0 0  х S P I F E  х о л е с т е р и н о в ы й  п р о ф и л ь  + 8 ,00 0 0  
р = 0,9725; п = 33
'Л Н П  у л ь т р а ц е н т р и ф у г и р о в а н и е  = 1,0693 х S P I F E  х о л е с т е р и н о в ы й  п р о ф и л ь  -1 2 ,8 7 1 5  
р = 0,9916; п = 33
Л П О Н П  у л ь т р а ц е н т р и ф у г и р о в а н и е  = 1 ,5470 х S P I F E  х о л е с т е р и н а  п р о ф и л ь  - 13,9402 
р = 0,9012; п = 33
S P I F E  х о л е с т е р и н о в ы й  п р о ф и л ь  Л П  (а) к о л и ч е с тв е н н о  с р а в н и в а л и  с к о м м е р ч е с к и  д о с т у п н ы м и  
м е т о д а м и  к л и н и ч еско й  х и м и и  Л П  (а) с о  с л е д у ю щ и м и  р е з у л ь та та м и :
Л п ( а )
К л и н и ч еска я  х и м и я  = 0 ,0 7 8 6  х S P I F E  х о л е с т е р и н о в ы й  п р о ф и л ь  + 0 ,10 0 7
р = 0,9477; п = 57
ЛИТЕРАТУРА
1 . Barr, D.P. el al ‘ Protein-lipidRelationships in Hitman Plasma’ ,  Am. J .  Med., 1951; 11 : 480-493.
2. Miller, G.J and Miller, N.E. ‘ Plasma-High Density-Lipoprotein Concentration and Development of 
Ischemic Heart Disease’ , Lancet, 1976 ; 1  : 16-19.
3. Kannel, I V . B . et al 'Serum Cholesterol, Lipoproteins and the Risk of Coronary Heart Disease’  Ann.
Inter. Med, 1971 ; 74 (I) : 1-12
4. Gordon, T. et al 'High Density Lipoprotein as a Protective Factor Against Coronary’  Artery 
Disease. The Framingham Study’ ,  Am. J. Med, 1977 ; 62 : 707-714.
5. Galen, R.S ‘ HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor? ' ,  Diag Med., 1979 ; Nov/Dec : 39-58.
6. Castelli, W .P. et al. 'HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease -  The Cooperative Lipoprotein 
'PhenotypingStud}’’  Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
7 . National Cholesterol Education Program, Second report of the expert panel on detection, evaluation 
and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel II). NCEP 1993.
8. Delalla, O.F. and Gofman, J.W. ‘Ultracentrifugal Analysis of Serum Lipoprotein’ , in Methods of
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
www.helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 184 ---
Helena
Biosciences Europe
Biochemical Analysis, Vol. I, D . Click (Ed.), New York, Interscience, 459-478, 1954.
9. Burstein, M . and Scholnick, H.R., ‘ Precipitation of Chylomicrons and Very Low density Lipoproteins From Human 
Serum W ith Sodium Laury>lSulfate’ ,  Life Sci., 1972; II : 177-184.
10. Cobb, S . A. and Sanders J.L., 'Enzymic Determination of Cholesterol in Serum Lipoproteins Separated by 
Electrophoresis’ , Clin. Chem., 1978: 24(7) : 1116-1120.
11. U.S. Department of Health and Human Services, Lipid Research Clinics Program. In: Hainline, Jr. A., Karon, 
Lippel, K. (Eds.), Manual of Laboratory Operations 1983. Second Edition, NIH
Publication.
12. Belcher, J.D., McNamara. J.R., Grinstead, G.F., Rifai, N., Warnick, G.R., Bachorik, P. and Frantz Jr., I . 
‘ Measurement of Low Density Lipoprotein Cholesterol Concentration’ .  In: Rifai, N . and Warnick. G.R (Eds.) Methods 
For Clinical Laboratory Measurement of Lipid and Lipoprotein Risk Factors Washington D.C. : A  ACC Press, 1991
: 75-86.
13. Utermann, G. 'The Mysteries Of Lipoprotein (a) ’ , Science. 1989; 246 : 904-910.
14. Loscalzo, J.. 'Lipoprotein (a) a Unique Risk Factor For Atherothrombotic Disease', Arteriosclerosis, 1990; 10 : 
'672-679.
15. Notional Cholesterol Education Program Lipoprotein Mea.surement Working Group. Recommendations For 
Measurement Of Low Density’  Lipoprotein Cholesterol. NIH Publication (In Press).
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-
biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 189 ---
Helena
Biosciences Europe
Большинство вариаций гемоглобина не вызывают каких-либо очевидных клинических 
симптомов, поэтому они представляют интерес главным образом для ученых и  
исследователей. Вариации являются клинически значимыми, когда и х присутствие 
обуславливает появление таких нарушений как выработка серповидных форм, синдромы 
талассемии, стойкий цианоз, гемолитические анемии или эритроцитоз, или если 
преобладание гетерозиготы таково, что обуславливает необходимость медико­
генетического консультирования. Комбинации HbS-S, HbS-D-Los Angeles, HbS-O-Arab 
обуславливают серьезные нарушения, связанные с выработкой серповидных форм^. 
Несколько вариаций, включая Н Ь Н , E-Fort W orth и  Lepore, обуславливают талассемическую 
картину крови^.
Две вариации гемоглобинов, характеризующихся наибольшей значимостью в плане 
частоты выявления и  патологий, - это HbS и  Н Ь С ^. Серповидно-клеточная анемия (HbSS) 
является тяжелой и  смертельной болезнью. Она впервые проявляет себя в возрасте 5-6 
"месяцев. Клиническое течение характеризуется мучительными эпизодами боли и  
повышения температуры с анемией, вялостью, летаргией и  инфарктом практически всех 
органов тела. Человек с гомозиготной Н ЬС С  страдает умеренной гемолитической анемией, 
которую  связывают с осаждением или кристаллизацией Н ЬС  в эритроцитах. Случаи 
заболевания HbSC характеризуются гемолитической анемией, которая протекает менее 
остро, чем серповидно-клеточная анемия.
Талассемии представляют собой группы  гемоглобинопатий, характеризуемых гипохромией 
и  микроцитозом вследствие снижения синтеза одной цепи глобинов (альфа или бета), в то 
время как синтез других цепей происходит нормально. Такой несбалансированный 
синтез приводит к  нестабильности глобиновых цепей. Они осаждаются в эритроцитах, 
формируя инородные включения, которые сокращают жизненный цикл клеток. П ри альфа- 
талассемии сокращено количество или наблюдается отсутствие альфа-цепей, а при бета- 
талассемии вышесказанное касается бета-цепей. Другое количественное нарушение 
синтеза гемоглобина, наследственная персистенция фетального гемоглобина (H PFH ), 
представляет собой генетическое нарушение работы механизмов, которые отключают 
синтез гамма-цепей в возрасте около 4-х месяцев от рождения, что приводит к  
лостоянному высокому процентному содержанию Н Ь Р . В  отличие от действительных 
талассемий это менее опасное состояние, и  лица, гомозиготные к  HPFH, развиваются 
нормально, асимптоматичны и  не имеют анемии.
Наиболее часто встречающиеся гемоглобинопатии:
1) Серповидно-клеточный признак
Это гетерозиготное состояние, характеризующееся Н Ь Д  и  HbS и  нормальным количеством 
Н Ь А 2. Результаты на цитратном агаре показывают гемоглобины в миграционных позициях 
(зонах) Н Ь Д  и  H bS.
2) Серповидно-клеточная анемия
Это гомозиготное состояние, характеризующееся практически исключительно H bS, при 
этом может присутствовать незначительное количество H bF.
3) Серповидная-С болезнь
Это гетерозиготное состояние, характеризующееся HbS и  Н Ь С .
4) Серповидно-клеточная болезнь -та л а с с е м и я
Данное состояние характеризуется Н Ь А , H bF, HbS и  Н Ь А 2.
П ри серповидно-клеточной болезни (3°-талассемии отсутствует Н Ь Д .
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 190 ---
Helena
Biosciences Europe
П ри серповидно-клеточной болезни p''-талассемии H bA  присутствует в ограниченных 
количествах.
5) Болезнь талассемия-С
Данное состояние характеризуется Н Ь А , H bF, Н Ь С .
6) С-болезнь
Это гомозиготное состояние, демонстрирующее практически исключительно Н Ь С .
7) Большая талассемия
Данное состояние характеризуется H bF, Н Ь А  и  Н Ь А 2.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Выпускается ассортимент гемоглобиновых контролей, способствующих идентификации 
неизвестных полос гемоглобина и  предназначенных для подтверждения 
удовлетворительного выполнения теста.
Номер по каталогу 5331 AFSC Гематологический контроль 
Номер по каталогу 5330 AFSA2 Гематологический контроль 
Номер по каталогу 5329 ASA2 Гематологический контроль 
Номер по каталогу 5328 А А 2 Гематологический контроль
ОГРАНИЧЕНИЯ
Некоторые аномальные гемоглобины имеют сходную электрофоретическую мобильность, 
и  и х следует дифференцировать другими методами.
Дальнейшего тестирования требуют:
1 . Электрофорез Н Ь  в кислой среде может быть необходим для подтверждения 
обнаруженных аномальных гемоглобинов.
2. Анализ глобиновых цепей (как кислотных, так и  щелочных), а также структурные 
исследования могут быть необходимы в целях положительной идентификации некоторых 
более редко встречающихся гемоглобинов.
3 . Анионообменная колоночная хроматография является наиболее точным методом 
количественного определения Н Ь А 2. Рекомендуются метод Helena BioSciences Sickle-Thal 
Q uick Colum n (Номер по каталогу 5334) для количественного определения Н Ь А 2 в  
присутствии HbS, или процедура Helena BioSciences Beta-Thal Н Ь А 2 Quick Column (Номер 
по каталогу 5341). Количественное определение Н Ь А 2 является одним из наиболее 
важных диагностических тестов при диагностировании признака бета-талассемии.
4. Количественное определение низких уровней H bF (1-10% ) можно с высокой степенью 
точности выполнить методом радиальной иммунодиффузии с использованием процедуры 
Helena BioSciences HbF-QuiPlate (Номер по каталогу 9325).
СПРАВОЧНЫ Е ЗНАЧЕНИЯ
П ри рождении большая часть гемоглобина в эритроцитах здорового индивидуума 
представляет собой фетальный гемоглобин, H bF. Также присутствует некоторое 
количество основного типа гемоглобина взрослого человека, Н Ь А , и  малое количество 
Н Ь А 2. Н а конец первого года жизни и  в течение всей взрослой жизни основной тип 
гемоглобина -  это Н Ь А , на фоне до 3,7% Н Ь А 2 и  менее 2%  H bF.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ  
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 191 ---
helena
Biosciences Europe
В  геле (n=6/12) 
Среднее(% ) Коэф.вар.(%)
М еж ду гелями 
(п=30/60) 
Среднее(% ) Коэф.вар.(%)
6 образцов Н Ь А97,45 0,24 97,30 0,51
Н Ь А 22,55 9,17 2,70 18,44
12 образцов Н Ь А97,03 0,67 97,31 0,46
Н Ь А 2 2,97 22,04 2,69 16,52
ЛИНЕЙНОСТЬ
Линейность метода -  это функция спецификации денситометра, а также эффективность 
геля. Рекомендуется, чтобы каждый пользователь определил линейность метода, 
основываясь на используемом в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
1 . Wintrobe, Махм’ еН  М., Clinical Hematology, 6th Edition, Lea and Febiger, Philadelphia, 1967. pages 145-167.
2. Fairbanks, V .F., ‘The Nomenclature and Taxonomy of Hemoglobin Variants’ , Diagnostic Medicine, Nov/Dec., 53- 
58, 1980.
3. Schneider, R.G., Hightower, B.J. and Barwick, R.C., ’ Laboratory Identification of the Hemoglobins’ , Lab 
Management, 1981; August: 29-43.
4. Center for Disease Control, Laboratory Methods for Detecting Hemoglobinopathies, U.S. Department of Health 
and Human Services/Public Health Service, 1984.
5. Schneider, R.G., ’  Methods for Detection of Hemoglobin Variants and Hemoglobinopathies in the Routine Clinical 
Laboratory’ , CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1978.
6. Schneider, R.G., Hightower, S., Hosty, T.S., Ryder, H., Tomlin, G., Atkins, R., Brimhall, B., and Jones,
R.T., ’ Abnormal Hemoglobins in a Quarter Million People’ , Blood, 1976; 48(5) : 629-637.
7 . Huisman, T.H.J. and Schroeder, W .A., 'New Aspects of the Structure, Function and Synthesis of Hemoglobins’ . 
CRC Press, Cleveland, 1971.
8. Schmidt, R.M., Huisman, T.H.J.,and Lehmann, H., The Detection of Hemoglobinopathies. CRC Press, Cleveland, 
1974.
9. Weatherall, D.J. and Clegg, J.B., The Thalassemia Syndromes, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1972.
10. Lehman, H . and Huntsman, R.G., Man’ s Haemoglobins, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, 1974.
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .helena-biosciences.com
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and Wear, NE11 OSD, United Kingdonn


--- стр. 192 ---
BioSciences 
l l d d l a  Europe
Тест-система «НВ-DNA Гели агарозы»
(HB-DNA Agarose gel)
Коды: 1010-20, 1110-20, 1017-20, 1117-20,1025-20, 1125-20
ПРЕДПОЛАГАЕМОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
Гель HB-DNA предназначен для разрешения молекул ДНК по размеру.
HB-DNA является предварительно подготовленным гелем агарозы в пластиковой кювете, 
совместимым с различными системами для электрофореза. Молекулы Д Н К, 
различающиеся по размеру, определяются при помощи электрофорезного анализа геля 
агарозы. ДНК обрабатывается бромидом этидия, а после чего осматривается под У Ф  
светом при длине волны в 254 нм. Гели HB-DNA предлагаются в концентрациях агарозы 
1,0%, 1,7% и  2,2% с или без обработки бромида этидия. Лоток с гелем 10 см шириной и  
13 см длиной. Сам гель 7 см шириной и  10 см длиной, с двумя рядами по 10 ячеек. 
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Гели предназначены только для лабораторного использования. Запрещается 
проглатывать. Надевайте подходящие перчатки при работе с реагентами. Фразы риска и  
опасности приведены в соответствии с нормами по химическим веществам (информация
об угрозах и  упаковка). Размещение знаков угрозы на гелях не является необходимым 
согласно правилу 9 (7).
СОСТАВ
Набор содержит 10 HB-DNA гелей в пластиковых кассетах заклеенных фольгой (по 2 геля 
в упаковке). Гели содержат 0,1% азида натрия. (Токсичен при проглатывании. При 
проглатывании незамедлительно обратитесь к  врачу и  покажите данную инструкцию или 
этикетку.)
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
Хранить при комнатной температуре (15-30 °С). Упаковки необходимо оставить 
герметичными непосредственно до момента применения.
ПОШАГОВАЯ ПРОЦЕДУРА
Рекомендуется использовать гели HB-DNA вне их оригинальной упаковки, однако, при 
необходимости допускается проводить анализ в оригинальных лотках. Необходимо 
заметить, что использование гелей в лотках увеличивает допустимое количество 
прогонов, и  может вызывать искажение полос по краям.
Использование геля HB-DNA вне оригинального лотка.
1.  Извлеките лоток из упаковки и  аккуратно снимите крышку с лотка. Крышку следует 
сохранить в случае дальнейшего использования.
2.  Аккуратно снимите гель с лотка приподняв один из краев при помощи лопаточки. 
Гель следует поддерживать снизу по всей длине. Поместите гель в емкость для 
гелей. Гель можно удержать в требуемом положении при помощи лотка Н В  D N A  
(коды HBTRY01, HBTRY02 и  HBTRY04). См. Рис. 1  (выше).
l e l e n a  luirope
B S  E N  IS O  9 0 0 2 :1 9 9 4
C E R T I F I E D
FM 27531
зарегистрировано в  Англии 179 6207 
HL-2-0802P DOI 2002/11(2)
n h e l e D j - b i o i c i e n c e s . t o m
Colima Avenue Sunderland Enterprise 
Park Sunderland Tyne &  Wear SR5 3XB 
Тел.; +44 (0) 191 549 6064 
Факс:+44(0) 191 549 6271 
E-mail:info@heiena-biosciences.com


--- стр. 193 ---
Рис. 1
3. Гелевый блок необходимо заполнить X  0,5 буф ера Т В Е  (44,5 м М  борат-трис, 1  м М  ED TA ) так, чтобы уровень буф ера был
приблизительно на 5 мм  выш е поверхности геля.
4. Загрузите образцы в ячейки. О бъ ем  в 10 мкл является оптимальным.
5. Подключите гелевый блок к блоку питания и при расстоянии между электродами 1-5 В/см подавайте напряжение до тех пор,
пока исследуемая Д Н К  не переместится требуемое положение.
6. Если гель содерж ит бромид этидия, то его можно осматривать под У Ф  транси ллю минатором  при 254 нм. Если гель не
содержит бромид этидия, то его мож но обработать раствором бромида этидия 0,5 мкг/мл в течении 30 минут. Также 
используются альтернативны е способы  обработки ДНК.
П рим ечание: если необходимо м енее 20 ячеек, для первого анализа следует использовать нижние 10 рядов. Крышку лотка геля 
затем необходимо установить на место, а гель хранить при температуре 4’ С  до четы рех дней. О ставш иеся 10 свободных ячеек 
допускается затем  использовать для второго анализа.
П р и м е р ы  и с п о л ь зо в а н и я  гелей H B -D N A.
Рисунок 2. Разреш ение отдельны х ф рагм ентов Д Н К  при помощ и 1,0% геля H B -D N A после экстракции из 1,0% геля HB-DNA.
Рисунок 3. Вы явление точечной мутации при помощ и типирования по длине рестрикционных ф рагментов (R FLP) и продуктов P C R  с 
применением 2,2% гелей HB-DNA.
а. Протромбиновая мутация ф актора II 
Ь Мутация лейдена ф актора V.
И с п о л ь зо в а н и е  геля H B -D N A  в о р и ги н а л ь н о м  лотке.
1 .
2 .
3.
4.
Извлеките лоток из упаковки и аккуратно снимите крышку с лотка. Крышку следует сохранить в случае дальнейш его 
использования.
Удалите две клейких пластины и прикрепите к нижней части лотка с гелем. П ластины  следует располож ить по центру на лю бом 
из концов лотка с гелем.
Удалите защ итное покрытие с двух клейких пластин и прикрепите лоток на держ атель. Важно, чтобы лоток с гелем был 
параллелен сторонам блока для геля, а ячейки располагались у катода.
Убедитесь, что из под края лотка с гелем удалено максимально возмож ное количество воздуха, так как это мож ет оказать 
влияние на перемещ ение Д Н К  к границам геля. Полного удаления воздуха мож но добиться проколов край лотка горячей 
проволокой или лезвием  скальпеля перед заполнением буф ером.
Гелевый блок необходимо заполнить X 0,5 буф ера Т В Е  (44 м М  борат-трис, 1  м М  ED TA ) так, чтобы уровень буф ера был 
приблизительно на 5 мм  вы ш е поверхности геля.
Загрузите образцы в ячейки. О бъ ем  в 10 мкл является оптимальным.
Подключите гелевый блок к блоку питания и при расстоянии между электродами 1-5 В/см подавайте напряжение до тех пор, 
пока исследуемая Д Н К  не переместится требуемое положение.
Если гель содерж ит бромид этидия, то его можно осматривать под У Ф  транси ллю минатором  при 254 нм не вынимая из лотка. 
Если гель не содерж ит бромид этидия, то его можно обработать раствором бром ида этидия 0,5 мкг/мл в течении 30 минут. 
Также допускается использовать альтернативы  ДНК. Чтобы получить качественное ф отограф ическое изображение, гель 
следует извлечь из лотка.


--- стр. 194 ---
Пример искажения линий при использовании геля в оригинальном лотке.
1  2  3 4 5 6 7
1 1 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Рис. 4. (слева)
Гель агарозы 1,7%
Линия 1  50 Ь р  ДНК-лесенка
100 Ь р  ДНК-лесенка 
100 Ь р  ДНК-лесенкаР1и8 
□174 ДНК/BsuRI Ladder 
100 bp ДНК-лесенка 
ЛДНК/Н/nd III лесенка 
1  K b ДНК-лесенка 
50 bp ДНК-лесенка 
100 bp ДНК-лесенка 
100 bp ДНК-лесенкаР1из 
100 bp ДНК-лесенкаР1из 
100 bp ДНК-лесенка 
50 bp ДНК-лесенка 
1  K b ДНК-лесенка 
Линия 15 ЛДНК/Н/nd III лесенка 
Линия 16 100 Ь р  ДНК-лесенка
□174 ДНК/BsuRI лесенка 
100 Ь р  ДНК-лесенка Plus 
100 Ь р  ДНК-лесенка 
50 Ь р  ДНК-лесенка
Линия 2 
Линия 3 
Линия 4 
Линия 5 
Линия 6 
Линия 7 
Линия 8 
Линия 9 
Линия 10 
Линия 1 1 
Линия 12 
Линия 13 
Линия 14
Линия 17 
Линия 18 
Линия 19 
Линия 20
Спецификации геля
Код Концентр. Диап. Кол-во Бромид Буфер Лоток Д X  Ш Гель Д X  Ш Кол-во
агарозы размеров образцов этидия
1010-20 1,0% 500-10000 20 Да ТВЕ 130 X  100 м м100 X  70 м м 10 гелей
1110-20 1.0% 500-10000 20 Нет ТВЕ 130 X  100 м м100 X  70 м м 10 гелей
1017-20 1.7% 80-3000 20 Да ТВЕ 130 X  100 м м100 X  70 м м 10 гелей
1117-20 1.7% 80-3000 20 Нет ТВЕ 130 X  100 м м100x70 мм 10 гелей
1025-20 2.2% 50-3000 20 Да ТВЕ 130 X  100 м м 100 X  70 м м 10 гелей
1125-20 2.2% 50-3000 20 Нет ТВЕ 130 X  100 м м 100 X  70 м м 10 гелей


--- стр. 195 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
V-CE Urine analysis column kit (комплектная колонка для исследования мочи V -КЭ), используемая 
совместно с the V-CE Semm Protein 5-t)and kit (пятиполосным комплектом для анализа сывороточных 
белков V~K3) предназначена для разделения и количественного анализа белков мочи с помощью 
капиллярного электрофореза (КЭ).
Белки, содержащиеся в моче, в основном относятся к белкам плазмы, фильтрующимся через почки. 
Аномальное появление белков плазмы в моче играет ценную роль в исследовании функции почек. 
Исследование при протеииурии должно включать определения типа и количеств зкскретируемых 
белков.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И  МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диагностики in vitro. Не 
глотайте и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. 1При манипуляциях со всеми 
компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности п р о д ^ а , формулировки, 
касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в спецификации продукта в 
отношении безопасности.
СОСТАВ
1.U rine P rotein Buffer - буф ер для анализа белков м очи. REF H L-3-2124SA  ( 3  х 1 0 0  м л ). Каждый 
комплект содержит Urine Protein Buffer (буфер для анализа белков мочи) в количестве, достаточном 
для 20 анализов. Буфер готов к применению.
2 . К ол он ки  для обессоливания при определении белков м очи ( х  2 0 ) . Колонки готовы к 
применению.
3 . И нструкция по прим енению . В каждом комплекте имеется инструкция по применению.
ХРАНЕНИЕ И  СРОК ГОДНОСТИ
1 . Urine Protein Buffer -  буф ер для анализа белков м очи . Urine Protein Buffer (буфер для анализа 
белков мочи) следует хранить при 1б-30“С; он стабилен до истечения срока годности, указанного на 
этикетке. Открытые флаконы стабильны в течение 4 недель при 15-30°С.
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
R E F 800100 V-CE Serum Protein 5-band kit —  пятиполосный комплект для анализа сывороточных 
белков
R E F 830100 V-CE Storage Buffer — буфер для хранения
R E F 830200 V-CE Maintenance Buffer—  буфер для поддержания
НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫ Е КОМПОНЕНТЫ
R E F 800300 V-CE Immunodisplacement kit —  комплект для иммуновытеснения (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
R E F 820500 V-CE Anti-Free kappa anti-sera —  антисыворотки к свободным каппа-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
R E F 820600 V-CE Anti-Free lambda anti-sera —  антисыворотки к свободным лямбда-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
R E F 821400 V-CE Anti-lgD anti-sera —  антисыворотки к IgD (если проводится иммуновытеснение в 
сыворотке или моче)
R E F 821500 V-GE Anti-lgE kappa anti-sera —  антисыворотки к каппа-цепи IgE (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
ОТБОР И  ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Оптимальный образец для анализа мочи —  свежесобранная моча (суточная). Образцы можно хранить 
при 2-6'С на протяжении срока до 7 суток. Для более длительного хранения рекомендуется 
температура -70“С, при которой образцы можно хранить на протяжении срока до 1  месяца. НЕ 
Х РАН И ТЕ образцы при -20°С.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Снимите верхнюю и нижнюю крышки с колонки для обессоливания и дайте стечь из колонки лишней 
жидкости. Поддерживайте колонку над соответствующей емкостью для вытекающей жидкости, чтобы 
уловить поток буфера.
П рим ечание: если в колонке останется лишняя жидкость, поток через колонку будет слишком 
медленным.


--- стр. 196 ---
2. Залейте в колонку 10 мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белка в моче) и до>кцитесь. 
пока жидкость .н м ^ л р ед е л и тся  равномерно.
Примечание: таЩ рЬбъем  соответствует 3 полным циклам заполнения колонки.
3. Д ощ итесь, пока Urine Protein Buffer (буфер для определения белков мочи) полностью не затечет в 
гель под действием силы тяжести. Не создавайте положительное давление.
4. После окончания протекания буфера через колонку, добавьте образец мочи в колонку до 
максимального объема 0,5 мл. Дождите<^, пока образец полностью не затечет в гель.
5. Добавьте 0,2 мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белков мочи) в верхнюю часть 
колонки. Дохадитесь, пока буфер полностью не затечет в гель
6. Поместите под колонкой сборную трубку соответствующего размера. Элюируйте образец мочи 0,7 
мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белков мочи). Конечный объем должен составлять
0,7 мл.
7. Утилизируйте использованную колонку для обессоливания.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Большинство моноклональных белков перемещается в катодный гамма-участок белковой 
дорожки, но поскольку эти белки аномальны, они могут двигаться при электрофорезе белков в 
любой участок глобулинов.
Когда аномальный белок содержится в низких концентрациях, полоса аномального белка 
может выглядеть как полоса внутри нормального поликлонального иммуноглобулина. Также 
можно увидеть полоску на фоне поликлонального белка, где также присутствует большой 
поликлональный иммуноглобулин.
Ти л протеинурии В ы явлен н ы е п о л о сы  Присутствую щ ие белки
Нормальная моча Небольшой альбумин Альбумин
Клубочковая Альбумин, альфа-1,  Альбумин, альфа-1
бета, гамма антитрипсин, трансферрин.
гамма-глобулины
Канальцевая альфа-1, альфа-2, бета Белок, связывающий ретинол,
бета2-микроглобулин,
альфа-2-микроглобулин.
Гиперпротеинурия гамма или различные иммуноглобулины,
свободные леп<ие цепи
НЕДОСТАТКИ
1. Реакция с анти сы воротка ми к легким цепям каппа или лямбда, но отсутствует 
реакция с антисы еороткам и к тяж елы м  цепям IgG, IgA или IgM. Образцы, в которых это 
наблюдается, могут указывать либо на моноклональную гаммапатию со свободными цепями, 
либо содержать моноклональный белок IgD или IgE. В такой ситуации анализ на IgD следует 
повторить, заменив антисыворотки к IgD и IgE на другие антисыворотки к другим тяжелым 
цепям. Отсутствие реакции с антисыворотками к IgD или IgE будет указывать на болезнь 
свободных легких цепей.
2. Полоса в гамма-участке, не реагирую щ ая с антисы воротками во врем я 
электроф ореза с иммуноф иксацией. У  больных с острой воспалительной реакцией может 
выявляться С-реактивный белок (СРБ).^'^ Повышенные уровни альфа-1-антитрипсина и 
гаптоглобина —  дополнительные свидетельства в пользу СРБ.
3. О тсутствие реакции с антисы вороткам и к целям каппа и лямбда. В отдельных 
случаях образец будет реагировать с антисывороткой к тяжелым цепям, но не к легким цепям.
В такой ситуации следует исключить;
а) болезнь тяжелых цепей;
б) очень высокие концентрации легких цепей, что ведет к избытку антигена;
в) низкие концентрации легких цепей;
г) атипичные молекулы легких цепей, не реагирующие с антисывороткой;
д) легкие цепи со «скрытыми» детерминантами легких цепей (как иногда наблюдается 
в отношении IgA и IgD).
Чтобы получить однозначные результаты, в ходе анализа могут потребоваться;
а) большая или меньшая степень разведения образца для оптимизации соотношения 
антитело/антиген,
б) обработка образца р-2-меркаптоэтанолом для «проявления» легких цепей.
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
Проведены серии анализов и сравнение с коммерческим тест-комплектом, при этом оба 
комплекта показали одинаковые результаты.
Ч увствительность: ч
М етодом анализа мочи K3-V8 можно выявлять белки в моче, эквивалентные одной полосе при w
уровне
_ _мг/л.


--- стр. 197 ---
ЛИТЕРАТУРА
1. Jeppsson, J.O., Laurell, С.В. and Franzen, B„ ‘Agarose Gel Electrophoresis’. ^ n .  Chem., 1979;
25 ( 4 ); 629-638. M
2. Kiliingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., 'Protein Analysis', Diagnosn^/ledicine, 1980; 
Jan/Feb: 3-15,


--- стр. 199 ---
h e l e n a
eio&c»«i>c«s Europe
Partners in Good Science
Тест-система «SPE белки сыворотки» для  
прибора V8 - V8 Serum Protein SPE kit
И н стр у к ц и я  n o  п р и м е н е н и ю  
R E F 80 0 1 0 0
Helena Biosciences Europe
Queensway Soutii
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Тел. +44 (0)191 482 8440
Факс+44 (0)191 482 8442
Эл. почта ir > fo@helena-biosciences.com
W W W . helens-biosciences. com
H L - 2 -1 8 2 9 P  2 0 0 8 / 1 2 ( 1 )
C €


--- стр. 200 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
V-CE Serum Protein S-band kit (пятиполосный комплект V-КЭ для анализа сывороточных белков) 
предназначен для разделения и количественного анализа сывороточных белков с помощью 
капиллярного электрофореза (КЭ).
В сыворотке содержится больше 100 различных белков, обладающих определенными свойствами и 
изменяющимися определенным образом по концентрации при различных патологических состояниях.’ 
С момента внедрения Tiselius^ электрофореза в свободном потоке и последующего применения 
зонного электрофореза сывороточные белки были разделены с уровнем их заряда при 
соответствующем значении pH. С помощью комплекта V-CE Senjm Protein 5-band kit {пятиполосного 
комплекта V-КЭ для анализа сывороточных белков) производится разделение сывороточных на 5 
главных классов (альбумин, альфа-1-глобулин, альфа-2-глобулин, бета-глобулин и гамма-глобулин). В 
ка>едой проведенной электрофорезе, за исключением альбумина, содержится, как минимум, 2 
компонента. Относительное содержание этих фракцией оказалось полезным показателем в 
диагностике и прошозе некоторых патологических состояний
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диагностики in vitro. Не 
глотайте и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях со всеми 
компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта, формулировки, 
касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в спецификации продукта в 
отношении безопасности.
СОСТАВ
1. Serum Protein Buffer (буфер для анализа сывороточных белков). REF HL-3*2118SA (1 х S00 
анализов). Каждый флакон содержит Serum Protein Buffer (буфер для анализа сывороточных 
белков) в количестве, достаточном для 500 анализов. Serum Protein Buffer (буфер для анализа 
сывороточных белков) готов к применению, и его следует помещать в соответствующее место на 
инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.
2. Фильтр, REF HL-3-2130SA (х1). Фильтр следует устанавливать на входную трубку переходника 
для флакона с Serum Protein Buffer (буфером для анализа сывороточных белков) инструмента 
Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя. Фильтр предназначен для 
одноразового использования, и при замене Serum Protein Buffer (буфера для анализа 
сывороточных белков) его тоже следует заменять.
3. Стаканчики для образцов, REF HL-3-2134SA (4 х 36). Стаканчики для образцов следует 
устанавливать на инструменте Helena V8 согласно руководству пользователя.
4. Прочие компоненты комплекта. В каждом комплекте имеется инструкция по применению. 
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Serunn Protein Buffer (буфер для анализа сывороточных белков). Serum Protein Buffer (буфер 
для анализа сывороточных белков) следует хранить при 15-30°С: он стабилен до истечения срока 
годности, указанного на этикетке. Открытые флаконы, установленные на инструменте Helena V8, 
стабильны в течение 6 месяцев при 15-30°С.
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
REF 830100 V'CE Storage Buffer — буфер для хранения 
REF 830200 V-CE iVlaintenance Buffer — буфер для поддержания
НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫ
REF 800300 V-CE Imm и nodisplacement kit — комплект для иммуновытеснения (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 800400 V-CE Urine analysis centrifugation kit 5-band — пятиполосный комплект для 
центрифугирования при анализе мочи (если проводится преаналитическое концентрирование и 
обессоливание с использованием мембранных концентраторов при анализе мочи)
REF 800405 V-CE Urine analysis column kit 5-band — пятиполосный комплект для колонки при анализе 
мочи (если проводится преаналитическое обессоливание при анализе мочи с использованием 
колоночной хроматографии)
REF 820500 V-CE Anti-Free kappa anti-sera — антисыворотка к свободной цепи каппа (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 820600 V-GE Anti-Free lambda anti-sera — антисыворотка к свободной цепи лямбда (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 821400 V-CE Anti-lgD anti-sera — антисыворотка к IgD (если проводится иммуновытеснение в 
сыворотке или моче)


--- стр. 201 ---
REF 821500 V-CE Anti-lgE kappa anti-sera — антисыворотха к lgE-каппа (если проводится 
иммуновытеснение в сьгарротхе или моче)cbtapp(
sI R eОТБОР И ПОДГОТОВЯЯСБРАЗЦОВ
Оптимальный образец — свежая сыворотка. Образцы можно хранить при 15-30®С в течение срока до 
4 суток, при 2-6’ С — до 14 суток и при -ZO^C — до 6 месяцев. Использование плазмы приведет к 
образованию полосы фибриногена между бета- и гамма-фракциями.
ПОБОЧНЫЕ ФАКТОРЫ
1. Гемолиз может вызывать ложное повышение альфа-2- и бета-фракций.
2. Неточные результаты возможны из-за испарения, когда образцы оставляют в незакрытом виде. 
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Убедитесь, что имеется выдвижной ящик для емкости для отходов, и он пуст.
2. До перехода к V8 убедитесь, что имеются буфер для хранения, буфер для поддержания и 
одноразовые стаканчики, и они находятся в соответствующих положениях. Установка всех 
расходных компонентов описана в руководстве пользователя.
3. Переключитесь на инструмент Helena V8, как описано в руководстве пользователя.
4. При заполнении V8 запустите Platinum 4V и начните новый сеанс КЭ. В Platinum 4V 
выберите ‘СЕ SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ) из выпадающего меню, нажмите на ‘DEFAULT 
METHOD’ (МЕТОД ПО УМОЛЧАНИЮ) и выберите V8 Serum Protein 5 band (пятиполосный 
комплект V8 для определения сывороточных белков) или V8 Urine Protein 5 band (комплект 
V8 для определения белков мочи) в зависимости от того, какой анализ требуется провести.
5. Выбор определенных анализов описан в руководстве пользователя.
6. Вставьте флакон с V-CE Seaim Protein 5-band (буфером для пятиполосного анализа 
сывороточных белков V-КЭ) в отделение для флаконов с жидкостями на инструменте Helena 
V8 и убедитесь, что он находится в правильном положении. Чтобы правильно установить 
флакон с V-CE Serum Protein 5-band (буфером для пятиполосного анализа сывороточных 
белков V-КЭ) прежде чем устанавливать его на инструменте Helena V8, убедитесь, что на 
входную трубку переходника для флакона с буфером установлен новый фильтр (см. 
руководство пользователя).
7. После установки флакона с V-CE Serum Protein 5-band (буфером для пятиполосного 
анализа сывороточных белков V-КЭ) автоматически откроется окно ‘DEFINE BUFFER’ 
(ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУФЕРА) в Platinum 4V. Отсканируйте или введите штрих-код в поле 
позиции буфера, совпадающий с позицией буфера.
8. Когда V8 будет готов для обработки образцов, на инструменте начнет мигать красный 
индикатор.
9. Поместите пробирки с первичными образцами в подставку для образцов и убедитесь, что 
штрих-код четко виден через окошечко в подставке (см. руководство пользователя).
10. Установите подставки для образцов на левую половину транспортной области V8 и закройте 
крышку, как описано в р^оводстве пользователя.
11. V8 автоматически начнет анализ всех загру) 1«нных образцов, и результаты будут 
передаваться в Platinum 4V.
12. После анализа и при необходимости запустите режим прекращения работы V8. выключив 
инструмент, как описано в руководстве пользователя.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рекомендуется проводить оценку дорожки КЭ против нормальных значений, полученных данным 
методом в каждой лаборатории.
Полный обзор анализа сывороточных белков приведен в работе Ritzmann, S.E, 1982.^ Исследования 
показали, что значения у мужчин и небеременных женщин одинаковы. У беременных на поздних 
сроках и женщин, принимающих противозачаточные федства, имеются некоторые отличия.
Некоторое влияние на нормальные значения оказывает возраст. В пуповинной крови снижено 
содержание общего белка, альбумина, альфа-2- и бета-фракций, несколько повышено содержание 
альфа-1-фракции, а содержание гамма-фракции нормально или повышено (в основном материнского 
происхождения). Гамма-глобулины быстро снижаются к 3-месячному возрасту, в то время как другие 
фракции к этому времени достигают величин, характерных для взрослых. Уровни гамма-глобулинов, 
характерные для взрослых, достигаются только к 10-16-летнему возрасту. Содержание альбумина и 
бета-глобулина повышаетат после 40 лет.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для верификации всех стадий процедуры анализа сьгвороточных белков можно использовать 
контрольные сыворотки Helena Biosciences Kemtrol Senjm Controls (кат. номера 7024 и 7025). 
Соответствующие показатели приведены во вкладыше к упаковке.


--- стр. 202 ---
НЕДОСТАТКИ
Использование старых или замороженных образцов может приводить к ^шжению бета-фракции. 
Гемолиз может вызывать ложное повышение альфа-2- и бета-фракций.
НОРПЛАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
По 20 образцам доноров мужчин и женщин в возрасте 20-60 лет определены следующие нормальные 
показатели (представлены только для справкй);
Белковая фракция Среднее значение(%) Диапазон + 2SD
Альбумин 61 55-65
Альфа-1 4 3-5
Альфа-2 9 7-11
Бета 11 9-15
Гамма 15 13-17
ХАРАКТЕРИСТИКИ М Е Т О ^
В компании Helena Biosciences определены следующие характеристики метода, приведенные для 
справки. В каждой лаборатории следует определять собственные характеристики.
Точность:
Воспроизводимость в 
пределах одного анализа 
(п = 30)
Воспроизводимость между 
разными анализами (п = 
300)
Воспроизводимость между 
разными партиями (п = 3) 
(N= 30)
Среднее Коэффициент среднее Коэффициент Среднее Коэффициент
значение вариации (%) значение вариации (%) значение вариации (%)
т  .. (%) _  _ (%)
Альбумин 61 0,9 61 0.9 61 0,9
Альфа-1 4 1,8 4 1,8 4 1,8
Альфа-2 9 1,9 9 1.9 9 1,9
Бета 1 1 1.9 11 1.9 11 1,9
Гамма 15 1,3 15 1.3 15 1,3
Чувствительность:
Метод анализа сывороточных белков КЭ V8 способен выявлять сывороточные белки при 
концентрации ___мкг/мл.
Достоверность:
Сравнение с коммерческим полуавтоматическим методом определения сывороточных белков с 
помощью гель-электрофореза дал следующий результат:
у = 0.9999 + 0.313, г^ = 0.888
ЛИТЕРАТУРА
1. Alper, С.А. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-290.
2. Tiselius, A. 'A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures', Trans. Faraday 
Soc., 1937:33:524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of 
Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,
Hagerstown. 1979.
4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582,1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1  :  Physiology of Immunoglobulins - 
Diagnostic and Clinical Aspects’,  Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


--- стр. 203 ---


--- стр. 209 ---
l e l e n a8 (0 4 c ie n < * s  E g r^ p *
Partners in Good Science
Тест-система «Белки в моче (колоночный метод) 6 фракций,  
высокое разрешение» для прибора V8 - V8 Urine Analysis  
Column 6-band Zoom k it
И н ст р у к ц и я  n o  п р и м е н е н и ю  
R EF 8 00 4 0 6
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Тел. +44 {0)191 482 8440
Факс+44 (0)191 482 8442
Эл. почта infb@helena-biosciences.com
W W W . helena-biosciences.com C €
H L - 2 -1 8 8 6 P 2 0 0 8 / 1 2 ( 1 )


--- стр. 210 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
Комлпеетная колонка для исследования мочи V-КЭ, используемая совместно с V-CE Serum Protein 6- 
band kit (шестиполосным комплектом для анализа сывороточных белков V-КЭ) предназначена для 
разделения и количественного анализа белков мочи с помощью капиллярного электрофореза (КЭ).
Белки, содержащиеся в моче, в основном относятся к белкам плазмы, фильтрующимся через почки. 
Аномальное появление белков плазмы в моче играет ценную роль в исследовании функции почек. 
Исследование при протеинурии должно включать определения типа и количеств экскретируемых 
белков.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диагностики in vitro. 
Запрещается глотать и вводить пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях 
со всеми компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта, 
формулировки, касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в 
спецификации продукта в отношении безопасности.
СОСТАВ
1. Urine Protein Buffer - буфер для анализа белков мочи. REF HL-3-2141SA (3 х 100 мл). Ка>едь1Й  
комплект содержит буфер для анализа белков мочи в количестве, достаточном для 20 анализов. 
Буфер готов к применению.
2. Колонки для обессоливания при определении белков мочи (х 20). Колонки готовы к 
применению.
3. Инструкция по применению. В ка>кдом комплекте имеется инструкция по применению.
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
I.U nn e Protein Buffer (буфер для анализа белков мочи). Urine Protein Buffer (буфер для анализа 
белков мочи) следует хранить при 15-30“С; он стабилен до истечения срока годности, указанного на 
этикетке. Открытые флаконы стабильны в течение 4 недель при 15-30°С.
НЕ0БХ0ДИ1и1ЫЕ КОМПОНЕНТЫ. НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
REF 800200 V-CE Serum Protein 6-band !< it — шестиполосный комплект для анализа сывороточных 
белков
REF 830100 V-CE Storage Buffer — буфер для хранения 
REF 830200 V-CE Maintenance Buffer — буфер для поддержания
НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫ
REF 800300 V-CE Immunodisplacement kit — комплект для иммуновытеснения (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 820500 V-CE Anti-Free kappa anti-sera — антисыворотки к свободным каппа-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 820600 V-CE Anti-Free lambda anti-sera — антисыворотки к свободным лямбда-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 821400 V-CE Anti-lgD anti-sera ~  антисыворотки к IgD (если проводится иммуновытеснение в 
сыворотке или моче)
REF 821500 V-CE Anti-lgE kappa anti-sera — антисыворотхи к каппа-цепи IgE (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Оптимальный образец для анализа мочи — свежесобранная моча (суточная). Образцы можно хранить 
при 2-6°С на протяжении срока до 7 суток. Для более длительного хранения рекомендуется 
температура -70°С. при которой образцы можно хранить на протяжении срока до 1  месяца. НЕ 
ХРАНИТЕ образцы при -20“С.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Снимите верхнюю и нижнюю крышки с колонки для обессоливания и дождитесь отекания из колонки 
излишка жидкости. Поддерживайте колонку над соответствующей емкостью для вытекающей 
жидкости, чтобы уловить поток буфера.
Примечание: если в колонке останется лишняя жидкость, поток через колонку будет слишком 
медленным.
2. Залейте в колонку 10 мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белка в моче) и дождитесь, 
пока жидкость не распределится равномерно.
Примечание: такой объем соответствует 3 полным циклам заполнения колонки.


--- стр. 211 ---
3. Дояедитесь, пока Urine Protein Buffer (буфер для определения белков мочи) полностью не затечет в 
гель под д е й с тв и ^^ л ы  тяжести. Не создавайте положительное давление,
4. После пр е кр а ^м я  протекания буфера через колонку добавьте образец мочи в колонку до 
максимального объема 0,5 мл. Дождитесь, пока образец полностью не затечет в гель.
5. Добавьте 0.2 мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белков мочи) в верхнюю часть 
колонки. Дохадитесь, пока буфер полностью не затечет в гель
6. Поместоте под колонкой сборную трубку сооУветствующего размера. Элюируйте образец мочи 0,7 
мл Urine Protein Buffer (буфера для определения белков мочи). Конечный объем должен составлять
0,7 мл.
7. Утилизируйте использованную колонку для обессоливания.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Большинство моноклональных белков перемещается в катодный гамма-участок белковой 
дорожки, но поскольку эти белки аномальны, они могут двигаться при электрофорезе белков в 
любой участок глобулинов.
Когда аномальный белок содержится в низких концентрациях, полоса аномального белка может 
выглядеть как полоса внутри нормального поликлонального иммуноглобулина. Также можно 
увидеть полоску на фоне поликлонального белка, где также присутствует большой 
поликлональный иммуноглобулин.
Тип протеинурии Выявленные полосы Присутствующие белки
Нормальная моча Небольшой альбумин Альбумин
Клубочковая Альбумин, альфа-1, Альбумин, альфа-1
бета, гамма антитрипсин, трансферрин,
гамма-глобулины
Канальцевая альфа-1, альфа-2, бета Белок, связывающий ретинол,
бета2-микроглобулин,
альфа-2-микроглобулин.
Гиперпротеинурия гамма или различные иммуноглобулины,
свободные легкие цепи
НЕДОСТАТКИ
1. Реакция с антисыворотками к легким цепям каппа или лямбда, но отсутствует 
реакция с антисыворотками к тяжелым цепям IgG, IgA или IgM. Образцы, в которых это 
наблюдается, могут указывать либо на моноклональную гаммапатию со свободными цепями, 
либо содержать моноклональный белок IgD или IgE. В такой ситуации анализ на IgD следует 
повторить, заменив антисыворотки к IgD и IgE на другие антисыворотки к Другим тяшлым цепям. 
Отсутствие реакции с антисыворотками к IgD или IgE будет указывать на болезнь свободных 
леп(их цепей.
2. Полоса в гамма-участке, не реагирующая с антисыворотками во время 
электрофореза с иммунофиксацией. У больных с острой воспалительной реакцией может 
выявляться С-реактивный белок (СРБ).'*’^ Повышенные уровни альфа-1-антитрипсина и 
гаптоглобина — дополнительные свидетельства в пользу СРБ.
3. Отсутствие реакции с антисыворотками к цепям каппа и лямбда. В отдельных 
случаях образец будет реагировать с антисывороткой к тяжелым цепям, но не к леп<им цепям. В 
такой ситуации следует исключить;
а) болезнь тяжелых цепей;
б) очень высокие концентрации легких цепей, что ведет к избытку антигена;
в) низкие концентрации леп<их цепей;
г) атипичные молекулы леп<их цепей, не реагирующие с антисывороткой;
д) легкие цепи со «скрытыми» детерминантами легких цепей (как иногда наблкздается в 
отношении IgA и IgD).
Чтобы получить однозначные результаты, в ходе анализа могут потребоваться:
а) большая или меньшая степень разведения образца для оптимизации соотношения 
антитело/антиген,
б) обработка образца р-2-меркаптозтанолом для «проявления» легких цепей. 
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
Проведены серии анализов и сравнение с коммерческим тест-комплектом, при этом оба 
комплекта показали одинаковые результаты.
Чувствительность:
Методом анализа мочи K3-V8 можно выявлять белки в моче, эквивалентные одной полосе при 
уровне
___мг/л.
ЛИТЕРАТУРА
1. Jeppsson, J.O., Laurell, С.В. and Franzen, В., ‘Agarose Gel Electrophoresis’, Clin. Chem., 1979; 25 .
(4): 629-638. Л
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., ‘Protein Analysis’, Diagnostic Medicine, 1980; ^
Jan/Feb: 3-15.


--- стр. 212 ---
H e l e n a
Тест-система «Белки сыворотки (бета-сплит)-24» для прибора SAS-1
(SAS-1 SP-24 SB kit)
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-систем а предназначена для разделения и количественного определения белков 
сыворотки м етодом  электроф ореза в агарозном  геле.
Сы воротка содерж и т более 100 отдельны х белков, каж ды й со специальны м  набором 
функций, и концентрация которы х подлеж ит специф ическим  вариациям  при различны х 
патологических состояниях.^
Со времени изобретения Т иселиусом  (Tiselius)^ электроф ореза с подвиж ной границей и 
последую щ его использования зонального электроф ореза белки сы воротки были разделены 
на фракции на основе их заряда при определенном  pH. Н абор SAS-1 Белки сыворотки 
предназначен для разделен и я белков сы воротки на 5 основны х классов (альбум ин, альф а-1  
глобулин, альфа-2 глобулин, бета-глобулин, и гам м а-глобулин) в соответствии с зарядом в 
агарозном геле. Затем  белки окраш иваю т с целью  визуализации и количественной 
интерпретации. К аж дая из классических зон электроф ореза, за исклю чением  альбумина, 
обычно содерж ит 2 или более ком понентов. Д анны е о пропорциональном  отнош ении этих 
фракций зареком ендовали себя как хорош ее вспом огательное средство при диагностике и 
прогнозировании определенны х патологических состояний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты  предназначены  только для диагностического использования в условиях in- 
vitro. Не глотать и не пипетировать ртом  ни один ком понент набора. Н адевать перчатки при 
работе со всеми ком понентам и набора. См. паспорт безопасности хим ического вещ ества, 
полож ения о рисках и обеспечении безопасности, а такж е инф орм ацию  об утилизации, 
СОСТАВ
1. Гели белки сыворотки бета сплит SAS-1
С одерж ит агарозу в Т рис/барбитал буфере с тиом ерсалом  и азидом  натрия в качестве 
консерванта. Г ель упакован готовы м  к употреблению .
2. Кислотный синий краситель, концентрат
.Содержит концентрированны й кислотны й синий краситель. Д овести содерж имое бутыли 
до 700 мл с использованием  очищ енной воды. П ерем еш ать, оставить на ночь, 
отф ильтровать перед использованием . Х ранить в буты ли с плотно закрываю щ ейся 
крыш кой.
3. Обесцвечивающий раствор, концентрат
Содерж ит концентрированны й обесцвечиваю щ ий раствор. Д овести содерж имое буты ли до 
2-х литров с использованием  очищ енной воды. Х ранить в буты ли с плотно закрываю щ ейся 
крыш кой.
4. Другие компоненты набора
Каж дый набор содерж и т инструкцию  по прим енению  и достаточное количество 
промокательной бум аги С д ля вы полнения 10 гелей.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И СРОК ГОДНОСТИ
1. SAS-I Гель SB для белков сыворотки.
Гель следует хранить при тем пературе 15-30®С, в этом случае гели сохраняю т стабильность 
до окончания срока годности, указанного на упаковке. Н Е О Х Л А Ж Д А Т Ь И НЕ
С €
Тел. +44 {0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United Kingdom
1


--- стр. 215 ---
H e l e n a
a) SAS-2 (Прибо 1р  для автоматического окрашивания)
Шаг Раствор Время
(мин:сек)
Порт Температура
('^С)
О краш ивание К ислотны й синий 
краситель
10:00 6
П ромывка О чищ енная вода 01:00 1
Суш ка — 15:00 65
О бесцвечивание О бесцвечиваю щ ий
раствор
03:00 2
О бесцвечивание О бесцвечиваю щ ий
раствор
03:00 2
П ромывка О чищ енная вода 01:00 1
Суш ка — 10:00 65
б) SAS-4 (Прибор для автоматического окрашивания)
1} Шаг Время (мин:сек) Температура (°С) ДругоеiS! О краш ивание 04:00 Рециркуляция ВКЛ
1( О бесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
1 О бесцвечивание 02:00 Рециркуляция ВКЛ
1 С уш ка 12:00 63
с) Вручную
Следовать последовательности действий, указанной для при бора для автоматического 
окраш ивания SA S-2, используя кю вету для ш агов ф иксации, окраш ивания, обесцвечивания 
и промывки, и суш ильную  печь с рециркуляцией воздуха и нагревом  до 60-70°С для этапов 
сушки.
10. По окончании ц икла окраш ивания извлечь гель из кам еры  для окраш ивания. Теперь 
гель готов для исследования.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контроли K em trol Serum  C ontrols (ном ера по каталогу 7024 и 7025) м огут быть 
использованы  для вериф икации всех этапов процедуры  и долж н ы  бы ть использованы  при 
вы полнении каж дого ц икла по планш ету. С оответствую щ ие справочны е значения см. 
прилагаемый упаковочны й вклады ш .
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Реком ендуется вы полнять оценку гелей относительно норм альны х значений, полученны х 
для данного м етода в каж дой отдельной лаборатории.
П одробное рассм отрение оценки белков сы воротки см. Рицм анн С.Е. (R itzm ann S.E.), 1982.^ 
И сследования показы ваю т, что значения одинаковы  как для м уж чин, так и для 
неберем енны х ж енщ ин. Н екоторы е различия наблю даю т у берем енны х ж енщ ин и у 
ж енщ ин, приним аю щ их оральны е контрацептивы .
Н а норм альны е значения оказы вает некоторое влияние возраст. В пуповинной крови 
отмечается пониж енное значение общ его белка, альбум ина, альф а 2 и бета фракций; 
немного повы ш енны й уровень альф а 1  и норм альны й или повы ш енны й уровень гамм а 
фракции (в основном  м атеринского происхож дения). К оличество гам м а-глобулинов быстро
4
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 216 ---
l e l e n a
1  O 'jC .e n C b -b  El;'j(j'
сниж ается до 3-х м есячного возраста, и к этому же возрасту другие ф ракции достигаю т 
уровня взрослого человека. У ровни гам м а-глобулинов соответствую т показателям  
взрослого человека не ранее 10-16 летнего возраста. П осле 40 лет сниж ается уровень 
альбумина и повы ш ается уровень бета глобулина.
1. Качественная оценка:
Г ели мож но оценить визуально на наличие или отсутствие полос, представляю щ их интерес.
2. Количественная оценка:
Сканировать гель, стороной с гелем вниз, при 595 нм.
В лю бом случае повы ш ение или сниж ение уровня отдельны х ком понентов сы воротки или 
обнаруж ение необы чны х ком понентов сы воротки требую т дальнейш его исследования. 
В ы полненны й гель для белков сы воротки SAS-1 стабилен в течение неопределенного 
периода времени.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Так как все процедуры  электроф ореза не являю тся линейны м и, важ но в точности следовать 
данной инструкции по прим енению  с целью  достиж ения оптим ального разреш ения и 
воспроизводимьгк результатов. П ри несоблю дении настояш ей инструкции по применению  
полученны е результаты  м огут бы ть ош ибочны ми.
СПРАВОЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Следую щ ие норм альны е значения бы ли получены  с использованием  20 норм альны х проб 
доноров м уж ского и ж енского пола в возрастны х рам ках 20-59 лет (данны е представлены  
только в справочны х целях):
Фракция белков Среднее (%) ±2 станд. откл. диапазон
А льбумин 59,3 53,1-65,5
А льф а 1 3,5 2,3-4,6
А льф а 2 8,7 6,5-10,9
Бета 1 8,6 6,5-10,7
Бета 2 10,7 3,7-6,0
Гамма 15,0 11,6-18,6
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Воспроизводимость
Г ель (п=24) Меяеду гелям и (п=96)
С редняя (®/о) Коэф. вар. (% ) С редняя (% ) Коэф. вар. (Уо)
Альбумин 59,2 3,7 59,7 3,9
А льф а 1 3,9 9 J 4,0 12,7
А льф а 2 9,9 6,0 9,1 6,1
Бета 1 8,3 4,4 9,0 6,1
Б ета 2 5,2 7,8 4,8 9,0
Гамма 13,6 6,8 13,2 8,2
Чувствительность
Д анны й метод чувствителен к 0,25 г/л на полосу, что бы ло определено как самая малая 
концентрация белка, которая бы ла явно видна как отдельная п олоса н а вы полненном  геле.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
ж
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Teann Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 217 ---
- l i t '
h e l e n a
Линейность
Л инейность м етода -  это ф ункция специф икации денситом етра, а такж е эф ф ективность 
геля. Реком ендуется, чтобы  каж ды й пользователь определил линейность м етода, 
основы ваясь н а используем ом  в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
1 . Alper, С.А. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 29] :  287-290.
2. Tiselius, A. 'A New Apparatus fo r Electrophoretic Analysis o f Colloidal Mixtures', Trans. Faraday Soc., 1937; 33  
524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization o f Proteins,  
Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,
Hagerstown, 1979.
4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook o f C linical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582, 1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1  :  Physiology o f Immunoglobulins-Diagnostic and Clinical  
Aspects', Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.
6. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook
C €
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scte n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 221 ---
л е 1 е п ав ю » о е о с « &  £ и г о р «
Partners in Good Science
Тест-система «SPE Белки в моче (колоночный метод)» для 
прибора V8 - V8 Urine Analysis Column SPE kit.
Инструкция по применению 
REF 800405
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442
Эл. почта info@helena-biosciences.com ^  ^
www.heiena-biosciences.com ^  ^
H L - 2 - 1 8 7 7 P 2 0 0 8 / 1 2 ( 1 )  Ч


--- стр. 222 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
V'CE Serum Protein 6'band kit (шестиполосный комплеет V-КЭ для определения сывороточных белков) 
предназначен для разделения и количественного анализа’ сывороточных белков с помощью 
капиллярного электрофореза (КЭ).
В сыворотке содержится больше 100 различных белков, обладающих определенными свойствами и 
изменяющимися определенным образом по концентрации при различных патологических состояниях.’ 
С момента внедрения Tiseiius^ электрофореза в свободном потоке и последующего применения 
зонного электрофореза сывороточные белки были разделены с уровнем их заряда при 
соответстеующем значении pH. С помощью комплекта V-CE Serum Protein 6-band kit (шестиполосн]и) 
KOM nneKTf V-КЭ для определения сывороточных белков)производится разделение сывороточных на 6 
главных классов (альбумин, альфа-1-глобулин, альфа-2-глобулин, бета-1-глобулин, бета-2 глобулин и 
гамма-глобулин). В каждом проведенном электрофорезе, за исключением альбумина, содержится, как 
минимум, 2 компонента. Относительное содержание этих фракций оказалось полезным показателем в 
диагтностике и прогнозе некоторых патологических состояний.^®
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диажостики in vitro. Не 
глотайте и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях со всеми 
компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта, формулировки, 
касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в спецификации продукта в 
отношении безопасности.
СОСТАВ
1. Serum Protein Buffer. REF HL-3-2119SA (1 x 500 tests) - буфер для анализа сывороточных 
белков. (1 X 500 анализов). Каждый флакон содержит Serum Protein Buffer (буфер для анализа 
сывороточных белков) в количестве, достаточном для 500 анализов. Serum Protein Buffer (буфер 
для анализа сывороточных белков) готов к применению, и его следует помещать в 
соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве 
пользователя.
2. Фильтр. REF HL-3-2130SA (х1) Фильтр следует устанавливать на входную трубку переходника 
для флакона с буфером для анализа сывороточных белков инструмента Helena V8 согласно 
инструкции в руководстве пользователя. Фильтр предназначен для одноразового использования, 
и при замене буфера для сывороточных белков его тоже следует заменять.
3. стаканчики для образцов. REF HL-3-2134SA (4 х 36). Стаканчики для образцов следует 
устанавливать на инструменте Helena V8 согласно руководству пользователя.
4. Прочие компоненты комплекта. В каждом комплекте имеется инструкция по применению. 
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Serum Protein Buffer - буфер для анализа сывороточных белков. Serum Protein Buffer (буфер 
для анализа сывороточных белков) следует хранить при 15-30”С; он стабилен до истечения срока 
годности, указанного на этикетке. Открытые флаконы, установленные на инструменте Helena V8, 
стабильны в течение 6 месяцев при 15-30°С.
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
REF 830100 V-CE Storage Buffer —буфер для хранения
REF 830200 V-CE Maintenance Buffer — буфер для поддержания
НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫ
REF 800300 V-CE Immunodisplacement kit — комплект для иммуновытеснения (если проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 800401 V-CE Urine analysis centrifugation kit 6-band — шестиполосный комплект для 
центрифугирования при анализе мочи (если проводится преаналитическое концентрирование и 
обессоливание с использованием мембранных концентраторов при анализе мочи)
REF 800406 V-CE Urine analysis column kit 6-band — шестиполосный комплект для колонки при анализе 
мочи (если проводится преаналитическое обессоливание при анализе мочи с использованием 
колоночной хроматографии)
REF 820500 V-CE Anti-Free kappa anti-sera — антисыворотки к свободным каппа-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 820600 V-CE Anti-Free lambda anti-sera — антисыворотки к свободным лямбда-цепям (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 821400 V-CE Anti-lgD anti-sera — антисыворотки к IgD (если проводится иммуновытеснение в 
сыворотке или моче)


--- стр. 223 ---
REF 821500 V-CE Anti-lgE kappa anti-sera — антисыворотки к каппа-цепи IgE (если проводится 
иммуновытеснение в сыцвротке или моче)
Ж
е
ЕОТБОР И ПОДГОТОВЮГОБРАЗЦОВ
Оптимальный образец — свежая сыворотка. Образцы можно хранить при 15-30°С в течение срока до 
4 суток, при 2-6°С — до 14 суток и при -20°С — до 6 месяцев. Использование плазмы приведет к 
образс^ванию полосы фибриногена между бета- и гамма-фракциями^
ПОБОЧНЫЕ ФАКТОРЫ
1. Гемолиз может вызывать ложное повышение альфа-2- и бета-фракций.
2. Неточные результаты возможны из-за испарения, когда образцы оставляют в незакрытом виде.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Убедитесь, что имеется вьщвижной ящик для емкости для отходов, и он пуст.
2. До перехода к V8 убедитесь, что имеются буфер для хранения, буфер для поддержания и 
одноразовые стаканчики, и они находятся в соответствующих положениях. Установка всех 
расходных компонентов описана в руководстве пользователя.
3. Переключитесь на инструмент Helena V8, как описано в руководстве пользователя.
4. При заполнении V8 запустите Platinum 4V и начните новый сеанс КЭ. В Platinum 4V 
выберите СЕ SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ) из выпадающего меню, нажмите на ‘DEFAULT 
METHOD’ (МЕТОД ПО УМОЛЧАНИЮ) и выберите V8 Serum Protein 6 band (шестиполосный 
V8 сывороточных белков) или V8 Urine Protein 6 band (шестиполосный V8 белков мочи) в 
зависимости от того, какой анализ требуется провести.
5. Выбор определенных анализов описан в руководстве пользователя.
6. Вставьте флакон с V-CE Serum Protein 6-band buffer (буфером для шестиполосного анализа 
сывороточных белков V-КЭ) в отделение для флаконов с жидкостями на инструменте Helena 
V8 и убедитесь, что он находится в правильном положении. Чтобы правильно установить 
флакон с V-CE Senjm Protein 6-band buffer (буфером для шестиполосного анализа 
сывороточных белков V-КЭ) прежде чем устанавливать его на инструменте Helena V8, 
убедитесь, что на входную трубку переходника для флакона с V-CE Serum Protein 6-band 
buffer (буфером для шести полосного анализа сывороточных белков \/-КЭ)установлен новый 
фильтр (см. руководство пользователя).
7. После установки флакона с V-CE Serum Protein 6-band buffer (буфером для шестиполосного 
анализа сывороточных белков V-КЭ) автоматически откроется окно 'DEFINE BUFFER' 
(ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУФЕРА) в Platinum 4V. Отсканируйте или введите штрих-код в поле 
позиции V-CE Semm Protein 6-band buffer (буфера для шести полосного анализа 
сывороточных белков V-КЭ), совпадающий с позицией флакона.
8. Когда V8 будет готов для обработки образцов, на инструменте начнет мигать красный 
индикатор.
9. Поместите пробирки с первичными образцами в подставку для образцов и убедитесь, что 
штрих-код четко виден через окошечко в подставке (см. руководство пользователя).
10. Установите подставки для образцов на левую половину транспортной области V8 и закройте 
крышку, как описано в руководстве пользователя.
11. V8 автоматически начнет анализ всех загруженных образцов, и результаты будут 
передаваться в Platinum 4V.
12. После анализа и при необходимости запустите режим прекращения работы V8, выключив 
инструмент, как описано в руководстве пользователя.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рекомендуется проводить оценку дорожки КЭ против нормальных значений, полученных данным 
методом в каждой лаборатории.
Полный обзор анализа сывороточных белков приведен в работе Ritzmann, S.E, 1982.® Исследования 
показали, что значения у мужчин и небеременных женщин одинаковы. У беременных на поздних 
сроках и женщин, принимающих противозачаточные средства, имеются некоторые отличия.
Некоторое влияние на нормальные значения оказывает возраст. В пуповинной крови снижено 
содержание общего белка, альбумина, альфа-2- и бета-фракций, несколько повышено содержание 
альфа-1-фракции, а содержание гамма-фракции нормально или повышено (в основном материнского 
происхождения). Гамма-глобулины быстро снижаются к 3-месячному возрасту, в то время как другие 
фракции к этому времени достигают величин, характерных для взрослых. Уровни гамма-глобулинов, 
характерные для взрослых, достигаются только к 10-16-летнему возрасту. Содержание альбумина и 
бета-глобулина повышается после 40 лет.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для верификации всех стадий процедуры анализа сывороточных белков можно использовать ^  
контрольные сыворотки Helena Biosciences Kemtrol Serum Controls (кат. номера 7024 и 7025). 
Соответствующие показатели приведены во вкладыше к упаковке.


--- стр. 224 ---
нию бетач|)ракции.
НЕДОСТАТКИ
Использование старых или замороженных образцов может приводить к аащю 
Гемолиз мо)1ют вызывать ложное повышение альфа-2- и бета-фракций.
НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
По 20 образцам доноров мужчин и женщин в возрасте 20-60 лет определены следующие нормальные 
показатели (представлены только для справки):
Белковая фракция Среднее значение (%) Диапазон *  2SD
Альбумин
Альфа-1
Альфа-2
Бета-1
Бета-2
Гамма
61
4
9
7
4
15
55-65
3-5
7-11
5-9
3-5
13-17
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
В компании Helena Biosciences определены следующие хараетеристики, которые можно использовать 
как справочные. В каждой лаборатории необходимо установить собственные характеристики метода.
Точность:
Воспроизводимость в 
пределах одного анализа 
(п = 30)
Воспроизводимость между 
анализами (п =  300)
Воспроизводимость между 
разными партиями (п =  3) 
(N =  30)
Среднее Коэффициент Среднее Коэффициент Среднее Коэффициент
значение
(% )
вариации (%) значение (% ) вариации (%) значение
.....т
вариации (%)
Альбумин 61 0,9 61 0,9 61 0,9
Альфа-1 4 1.8 4 1,8 4 1,8
Альфа-2 9 1.9 9 1,9 9 1,9
Бета-1 7 1,9 7 1,9 7 1.9
Вета-2 4 1.9 4 1,9 4 1.9
Гамма 15 1,3 15 1,3 15 1,3
Чувствительность:
Метод СЕ V8 Serum Protein (анализа сывороточных белков КЭ V8) способен выявлять сывороточные 
белки при концентрации ___мкг/мл.
Достоверность:
Сравнение с коммерческим полуавтоматическим методом определения сывороточных белков с 
помощью гель-электрофореза дал следующий результат;
у = 0,9999+ 0 ,3 1 3 ^ = 0,888
ЛИТЕРАТУРА
1. Alper, С.Л. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-290.
2. Tiselius, A. 'A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal IWixtures’,  Trans. Faraday 
Soc., 1937; 33 : 524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of 
Proteins. Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Нафег and Row, Inc.,
Hagerstown, 1979.
4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582,1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1  :  Physiology of Immunoglobulins - 
Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New Yoric, 1982.


--- стр. 225 ---
г г < д - ^ w v wc ‘  w  « - . '  U:.K.^'i


--- стр. 230 ---
H e l e n a
неберем енны х ж енщ ин. Н екоторы е различия наблю даю т у берем енны х ж енщ ин и у 
ж енщ ин, приним аю щ их оральны е контрацептивы .
На нормальны е значения оказы вает некоторое влияние возраст. В пуповинной крови 
отмечается пониж енное значение общ его белка, альбум ина, альф а 2 и бета фракций; 
немного повы ш енны й уровень альф а 1  и норм альны й или повы щ енны й уровень гамм а 
'фракции (в основном  м атеринского происхож дения). К оличество гам м а-глобулинов быстро 
сниж ается до 3-х м есячного возраста, и к этому же возрасту други е ф ракции достигаю т 
уровня взрослого человека. У ровни гам м а-глобулинов соответствую т показателям  
взрослого человека не ранее 10-16 летнего возраста. П осле 40 лет сниж ается уровень 
альбумина и повы ш ается уровень бета глобулина.
1. Качественная оценка:
Гели мож но оценить визуально н а наличие или отсутствие полос, представляю щ их интерес.
2. Количественная оценка:
С канировать гель, стороной с гелем  вниз, при 595 нм.
В лю бом случае повы ш ение или сниж ение уровня отдельны х ком понентов сы воротки или 
обнаруж ение н еобы чны х ком понентов сы воротки требую т дальнейш его исследования. 
Вы полненны й гель для белков сы воротки SAS-1 стабилен в течение неопределенного 
периода времени.
ОГРАНИЧЕНИЯ
Так как все процедуры  электроф ореза не являю тся линейны м и, важ но в точности следовать 
данной инструкции по прим енению  с целью  достиж ения оптим ального разреш ения и 
воспроизводим ы х результатов. П ри несоблю дении настоящ ей инструкции по применению  
полученны е результаты  м огут бы ть ош ибочны ми.
СПРАВОЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Следую щ ие норм альны е значения бы ли получены  с использованием  20 норм альны х проб 
доноров м уж ского и ж енского пола в возрастны х рам ках 20-59 лет (данны е представлены
Фракция белков Среднее (%) ±2 станд. откл. диапазон
А льбумин 60,4 55,8-65,0
А льф а 1 3,4 2,2-4,6
А льф а 2 10,3 8,2-12,5
Бета 10,7 7,2-14,2
Гамма 15,0 11,5-18,6
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Ф акс+44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scle n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 231 ---
H e l e n a
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ  
Воспроизводимость
Гель (п=16) Между гелями (п=95)
Средняя (%) Коэф. вар. (%) Средняя (%) Коэф. вар. (%)
Альбумин 60,1 1,7 60,4 2,3
А льф а 1 4,2 7,5 4,3 7,3
А льф а 2 11,4 4,1 10,3 7,8
Бета 10,5 2,1 11,2 6,8
Гамма 13,8 3,0 13,8 5,5
Чувствительность
Д анны й м етод чувствителен к 0,3 г/л на полосу, что было определено как самая малая 
концентрация белка, которая бы ла явно видна как отдельная п олоса на вы полненном  геле. 
Линейность
Л инейность м етода -  это ф ункция специф икации денситом етра, а такж е эф ф ективность 
геля. Реком ендуется, чтобы  каж ды й пользователь определил линейность м етода, 
основы ваясь на используем ом  в лаборатории денситометре.
БИБЛИОГРАФИЯ
}. Alper, С.Л. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med, 1974; 291 : 287-290.
2. Tiselius, A. 'A Nerw Apparatus fo r Electrophoretic Analysis o f Colloidal Mixtures', Trans. Faraday Soc., 1937; 33 :  
524.
3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization o f  
Proteins, Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,
Hagerstown, 1979.
4. Tietz, N. JV . (Ed.), Textbook o f C linical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582, 1986.
5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1  :  Physiology o f Immunoglobulins-  
Diagnostic and Clinical Aspects ’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.
6. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook o f C linical Chemistry, (3rd Edition), W.B. Saunders Co., Philadelphia, page 524, 1995.
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 232 ---
Рисунок 1: Схема нанесения образца 
Интерпретация результатов анализа
Обработанный гель можно анализировать визуально на наличие интересующих пЗш с или рисунка, а также 
можно сканировать при помощи планшетного сканера и профаммы Platinum. Каждый образец пациента 
покажет 5 полос с обработкой альфа-1-антитрипсином. Существует 2 основных полосы, обозначенные 4 и 6. 
и 3 меньшие; полоса 2 (анодная для 4 и 6) и полосы 7 и 8 (катодная для 4 и 6).^  У  пациентов с фенотипами 
PiZZ и PiSZ будут наблюдаться слабые следы из-за низкой концентрации альфа-1-антитрипсина. 
Интерпретация полученных результатов должна выполняться с учетом клинической истории пациента. 
Контроль качества
При отсутствии контрольного материала, следует использовать образец с известным фенотипом альфа-1- 
антитрипсина в качестве контроля с каждым гелем, чтобы подтвердить все этапы процедуры.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Воспроизводимость
a. Внутри геля
Один образец а1-АТ показывает одинаковый рисунок, в каждой из 7 исследуемых полос геля.
b . Между гелями
Тот же образец был протестирован на 3 различных гелях и показал одинаковый рисунок для каждого из 
гелей.
Специфичность
Антитела, используемые в наборе, специфичны к а1-АТ и показали только осаждение а1-АТ в плазме крови 
человека.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 . Isoelectric Focusing in Immobilised pH gradients for the Detennination of the Genetic Pi (a1-AT) Variants. 
Electrophoresis 4 (1983) 153-157, Gorg, A: Postel, WWeser, J et al.
2. Cox, DW, Alpha-1-Antitrypsin Deficiency, 7* Ed. Scriver, OR; Beaudel, AC; Sly, WS; Valle, D eds. The 
Metat)olicand Molecular Bases of Inherited Diseases. 1995; Vol iii: 4125-4158. McGraw-Hiil New Yori<
3. Pierce, JA. Antitrypsin and Emphysema: Perspective and Prospects. JMA 1988: 259: 2890-2895.
4. Jeppsson, JO; Franzen, B. Typing of Genetic Variants of Alpha-1-Antitrypsin by Electrofocusing. Clin 
Chem. 28/1,219-225(1982).


--- стр. 233 ---
Тест-систе^р
«И зоэлектроф окусирование  
альфа-1«энтитрипсин»  
Alpha-1-Antitrypsin IEF kit
H e l e n a
E u ro p e
Partners in Good Science
Helena Biosdences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gatestiead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Tel.+44{0)191 482 8440 
Fax+44 {0)191 482 8442 
Email info@heiena-biosciences.com 
www.helena-biosciences.com 
HL-2-1970P 2009/07(1)
C €


--- стр. 234 ---
ПРЕДПОЛАГАЕМОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
Тестч:истема «изоэлектрофокусирование альфа-1-антитрипсин» (А1рЬЭ'1-АпШгур51п^Р kit) предназначена 
для идентификации изменений генов в сыворотке крови человека при помощи изоэлектрического 
фокусирования и иммунофиксации. Варианты алы)за-1-антитрипсина разделяются в соответствии с 
изоэлектрической точкой в IEF геле агарозы с pH 4,2-4,9. Основные варианты -  М (норма), F, S и Z, каждый из 
которых фокусируется между pH 4,5 и 4,7,’
Альфа-1-антмтрипсин (ai-AT) является ингибитором протеазы серима в 52 кДа.^ Он предохраняет ткани от 
старения со стороны протеолитических ферментов, синтезируемых в тканях ( в основном этастазы в легких).^ 
а1-АТ синтезируется в печени, а средняя концентрация в плазме здорового человека составляет 
приблизительно 1,3 г/л. Нормальный а1-АТ помечается «М» или «PiMM» (где Pi - это ингибитор протеазы, а 
ММ -  характер исчерченности пациента). Существует огромное количество генетических вариаций, большая 
часть которых не представляет значительного клинического интереса. Однако некоторые варианты связаны с 
дефицитом а1-АТ, который может привести к эмфиземе легких и неонатальному гепатиту. В частности, у 
пациентов с PiZZ концентрация al-AT составляет 15% от нормы, а у PiSZ -  приблизительно 35% от нормы.^ 
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты предназначены только для i n  v i t r o диагностики. Не глотать и не пипетировать ртом любой из 
компонентов набора. Фразы безопасности и риска, а также информация по утилизации приведены в 
инструкции по применению.
СОСТАВ
1 Alpha-1-Antitrypsin Gel (альфа-1-антитрипсин гель) (х10)
Содержит гель агарозы и разделители, pH 4,2-4,9 с добавлением тиомерсала в качестве консерванта. Гель в 
упаковке готов к использованию.
Z  Acid Violet Stain (кислый фиолетовый краситель) (1 х 2 г)
Содержит порошок кислого фиолетового красителя. Растворите содержимое пробирки в 1000 мл раствора 
промывки. Перемешайте, оставьте на ночь, а перед использованием профильтруйте. Храните смесь в плотно 
закрытой бутыли.
3. Alpha-1-Antitrypsin Antisera (альфа-1-антитрилсин иммунная сыворотка)
Содержит поликлональную альфа-1-антитрипсин иммунную сыворотку.
Другие компоненты набора
Каждый набор содержит инструкции по применению и достаточное количество шаблонов нанесения образца, 
шаблонов нанесения иммунной сыворотки, фитилей для электродов, блоггеров А, В, D и X для 10 полных 
наборов гелей.
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Alpha-1-Antitrypsin Gel (альфа-1-антитрипсин гель)
Гели, хранимые при температуре от 15 до 30 °С, стабильны до окончания срока годности, указанного на 
этикетке. ГЕЛИ НЕОБХОДИМО ОХЛАДИТЬ ДО 2...6“С НЕ БОЛЕЕ, ЧЕМ НА 30 МИНУТ ПЕРЕД 
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ.
НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ. Разложение геля можно определить по следующим признакам: 1) кристаллы в геле 
указывают на то, что он замерз. 2) потрескавшаяся и расслоившаяся поверхность указывает на высыхание 
геля или 3) видимо загрязнение агарозы бактериями или грибками.
2. Acid Violet Stain (Кислый фиолетовый краситель)
Порошковый краситель, хранимый при температуре от 15 до 30°С, стабилен до окончания срока годности, 
указанного на этикетке. Растворенный краситель стабилен в течение 6 месяцев при температуре от 15 до 30 
”С. Использованный краситель следует выбросить немедленно, чтобы предотвратить использование 
вещества с ухудшающейся красящей способностью. Низкая красящая способность может указывать на порчу 
раствора красителя.
3. Alpha-1-Antitrypsin Antisera (альфа-1-антитрипсин иммунная сыворотка)
Набор иммунной сыворотки, хранимый при температуре от 2 до 6°С, стабилен до окончания срока годности,
указанного на этикетке. Загрязнение частицами или помутнение может указывать на порчу продукта,
НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
Код 4065 E1F камера Helena
Код 3039 устройство охлаждения камеры
Код 4062 инк^атор
Блок питания, обеспечивающий напряжение в 500 В.
Груз на 3 кг
Печь-сушилка, с подачей воздуха под давлением и температурой бО -ТОХ
Раствор промывки -  смешайте 500 мл метанола и 500 мл очищенной воды. Добавьте 100 мл ледяной 
уксусной кислоты. Храните смесь в плотно закрытой бутыли.
Солевой раствор (0,85% NaCI)
Очищенная вода
СБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
По возможности следует отбирать свежесобранную сыворотку. Образцы можно хранить при температуре от
2 до 8°С до трех дней или до двух недель при -20® С.
ПОШАГОВАЯ ПРОЦЕДУРА
Примечание. Убедитесь, что охлахздающий блок оставался при 2...6‘‘С не менее 30 минут перед началом 
процедуры
Гели необходимо охладить до 2...6“С не более, чем на 30 минут перед использованием.
1 . Извлеките гель из упаковки, а затем поместите на бумажное полотенце и удалите верхний слой. 
Поместите блоттер А так, чтобы стрелки на краю геля были направлены в центр. АККУРАТНО


--- стр. 235 ---
re плцшх^
2. Установите с^^Нфитили для электродов в анодном и катодном кон 14ах геля.
3. Отцентруйте ячейки при помощи шаблона размещения образца (ячейки к верхней части) со
стрелками на краях геля. Разместите шаблон на геле. Поместите блоттер А сверху на шаблон и 
проведите пальцем по ячейкам, чтобы обеспечить хороший контакт. Удалите блоттер и сохраните 
дЛя использования на шаге 5.
4. Поместите по 3 мкл образца в каждую ячейку и оставьте их впитаться на 10 минут,
5. После абсорбции, обработайте шаблон при помощи блоггера А, оставшегося с шага 3, и 
выбросьте блоттер и шаблон,
6. Убедитесь, что охлаждающий блок хранился при 2...6°С не менее 30 минут перед началом 
процедуры. Поместите в центральный выступ камеры.
7. Затем поместите при помощи пипетки 500 мкл деионизированной воды на охлаждающий блок.
Разместите гель на охлаждающий блок стороной с агарозой вверх, выровняв положительную {+ ) и
отрицательную {-) стороны в соответствующих частях камеры. Закрепите электроды на фитилях, 
проверьте качество соединения.
Следуйте процедуре, соответствующей прибору
8а. Эксплуатация IEF камеры Helena
i. С IEF камерой следует использовать следующие параметры:
Напряжение элещзофореза 500 В
Время электрофореза -  30 минут
I I . Убедитесь, что устройство охлаждения камеры хранилось при 2.. .6°С не менее 30 минут перед 
началом процедуры. Place into the central traugh of the chamber.
9. После фокусировки аккуратно уберите фитили электродов,
10. Поместите гель в инкубатор с влажным бумажным полотенцем и на поверхность геля поместите 
шаблон размещения иммунной сыворотки. Примечание: обеспечьте плотное прилегание шаблона 
к гелю.
11. Поместите 250 мкл иммунной сыворотки на оба сегмента шаблона, обеспечьте равномерное 
распределение иммунной сыворотки покачав гель.
12. Инк^ируйте 15 минут п ри температуре 15 - 30 "С,
13. После инкубации удалите шаблон ополоснув гель в солевом растворе и немного его покачав.
14. Поместите гель на бумажное полотенце агарозной стороной вверх. Поместите блоттер В 
(смоченный S солевом растворе) на поверхность геля, а затем блоттер D и X. Придавите гель 
грузом в 3 кг и оставьте на 15 минут. Примечание: необходимо оставить гель под грузом в течении 
всего времени, чтобы удалить как можно больше влаги.
15. Аккуратно снимите блоггеры и поместите гель в солевой раствор на 4 минуты немного его 
покачивая.
16. Поместите гель на бумажное полотенце агарозной стороной вверх. Поместите блоттер В 
(смоченный в солевом растворе) на поверхность геля, а затем 2 блоттера D. Придавите гель 
грузом и оставьте на 5 минут,
17. Повторите шаги 15 и 16 еще раз.
18. Удалите блоггеры и высушите гель при 60-70°С.
19. Погрузите сухой гель в краситель на 1  минуту.
20. Смойте краситель промыв гель дважды по 2 минуты промывочным раствором. Примечание: если 
гель должен быть без фона, продолжите его промывку.
21. Сполосните гель очищенной водой и высушите при 60-70 °С.


--- стр. 236 ---


--- стр. 237 ---
l e l e n a
B to s c ic n c c a  E u r o p e
Partners in Good Science
Тест-система «Изоэлектрофокусирование гемоглобина» для  
прибора У8  
(V8 Haemoglobin IEF kit).
Инструкция по применению 
R EF 8 0 0900
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 O S D
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс+44 (0)191 482 8442
Эл. почта info@helena-biosciences.com ^  ^  >
www.helena-biosciences.com ^  ^  ^
HL-2-1904P 2008/12(1)


--- стр. 238 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
V-CE Haemoglobin lEF Kit (комплект для анализа гемоглобина методом изоэлектрического 
фокусирования ИЭФ V-КЭ предназначен для разделения и определения концентрации 
гемоглобина методом капиллярного электрофореза (КЗ). Многие компоненты можно разделить 
после однократного анализа при минимальном объеме образца и потреблении реактивов.
Основная форма гемоглобина в эритроцитах взрослых — НЬА, вместе с небольшим количеством 
НЬАг и HbF. Кроме того, на сегодняшний день известно больше 400 различных вариантов 
гемоглобина, часть которых может оказывать серьезные кпинические эффекты, особенно когда они 
присутствуют в гомозиготном состоянии или в сочетании с другим типом гемоглобина. Wintrobe’ 
различает три группы аномалий синтеза гемоглобина:
1. Продукция аномальной белковой молекулы.
2. Снижение синтеза нормального белка.
3. Врожденные аномалии.
При КЭ-разделении гемоглобина используются различные изозлектрические точки для разных 
молекул гемоглобина при разделении методом изоэлектрофокусировки в градиенте pH.
В комплекте этот принцип используется 2 путями:
1. Протокол количественного скрининга НЬАг
2. Протокол анализа вариантов НЬ в качестве исходной точки на этапах идентификации 
аномальных форм гемоглобина.
С учетом существования таких многочисленных мутантных форм гемоглобина ни один метод не 
позволяет однозначно идентифицировать все варианты гемоглобина. Капиллярный электрофорез, 
имеющийся в V8, позволяет отделить самые распространенные варианты от нормального пика А. 
Поло)«юние на дорожке различных вариантов гемоглобина можно использовать для первичной 
идентификации какого-либо варианта. Для более точной идентафикации можно воспользоваться 
другим методом или секвенированием белка.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диатостики in vitro. Не 
глотайте и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях со 
всеми компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта, 
формулировки, касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в спецификации 
продутаа в отношении безопасности.
СОСТАВ
1. Anode Buffer - анодный буфер REF HL-3-2136SA (1 х 200 анализов). Ка>едый флакон 
содержит Anode Buffer (анодный буфер) в количестве, достаточном для 200 анализов. Буфер готов 
к применению, и следует поместить в соответствующее положение на инструменте Helena V8 
согласно инструкции в руководстве пользователя.
2. Cathode Buffer- катодный буфер REF HL-3-2137SA (1 х 200 анализов). Каждый флакон 
содержит Cathode Buffer (катодный буфер) в количестве, достаточном для 200 анализов. Буфер 
готов к применению, и следует поместить в соотеетствующее положение на инструменте Helena V8 
согласно инструкции в руководстве пользователя.
3. Haemoglobin Ampholyte Buffer • амфотерный гемоглобиновый буфер REF HL-3-2138SA (1 х 
200 анализов). Каждый флакон содержит Haemoglobin Ampholyte Buffer (амфотерный 
гемоглобиновый буфер) в количестве, достаточном для 200 анализов. Буфер готов к применению, и 
следует поместить в соответствующее положение на инструменте Helena V8 согласно инструкции в 
руководстве пользователя.
4. Methyl Cellulose Solution • раствор метил целлюлозы REF HL-3-2139SA (2 х 100 анализов).
Каждый комплект содержит Methyl Cellulose Solution (раствор метилцеллюлозы) в количестве, 
достаточном для 200 анализов. Раствор готов к применению, и его следует поместить в 
соответствующее положение на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве 
пользователя.
5. Haemoglobin Lysing Agent - реактив, расщепляющий гемоглобин REF HL-3-2140SA (1 х 200 
анализов). Ка>цдый флакон содержит Haemoglobin Lysing Agent (реактив, расщепляющий 
гемоглобин) в количестве, достаточном для 200 анализов. Расщепляющий реактив готов к 
применению, его следует поместить в соответствующее положение на инструменте Helena V8 
согласно инструкции в руководстве пользователя.
6. Фильтр REF HL-3-2130SA. Этот фильтр следует установить на входную трубку переходника для 
флакона с Cathode Buffer (катодным буфером) на инструменте Helena V8 согласно инструкции в


--- стр. 239 ---
руководстве пользователя. Фильтр предназначен для одноразового использования, и его следует 
заменять при замене ш  ра.
7.Стаканчики для образцов REF HL-3-2134SA {3 х 36). Стаканчики для образцов следует 
установить на инструмент Helena V8 согласно р^оводству пользователя.
8. Прочие компоненты комплекта. Каждый комплект содержит инструкцию по примененик). 
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Anode Buffer - анодный буфер. Anode Buffer (анодный буфер) следует хранить при 2-8“С, и он 
остается стабильным до истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые флаконы, 
установленные на инструменте Helena V8, стабильны в течение 6 месяцев.
2. Cathode Buffer - катодный буфер. Cathode Buffer (катодный буфер) следует хранить при 2-8°С, 
и он остается стабильным до истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые 
флаконы, установленные на инструменте Helena V8, стабильны в течение 6 месяцев.
3. Haemoglobin Ampholyte Buffer - амфотерный гемоглобиновый буфер. Haemoglobin 
Ampholyte Buffer (амфотерный гемоглобиновый буфер) следует )фанить при 2-8”С, и он остается 
стабильным до истечения срока годности, указанного на этикетхе. Открьпые флаконы, 
установленные на инструменте Helena V8, стабильны в течение 6 месяцев.
4. Methyl Cellulose Solution - раствор метилцеллюлозы. Methyl Cellulose Solution (раствор 
метилцеллюлозы) следует хранить при 2-8°С, и он остается стабильным до истечения срока 
годности, указанного на этикетке. Открытъ 1е флаконы, установленные на инструменте Helena V8, 
стабильны в течение 3 месяцев.
5. Haemoglobin Lysing Agent - реактив, расщепляющий гемоглобин. Haemoglobin Lysing Agent 
(реактив, расщепляющий гемоглобин) следует хранить при 2-8°С, и он остается стабильным до 
истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые флаконы, установленные на 
инструменте Helena V8, стабильны в течение 6 месяцев.
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
REF 830100 V-CE Storage Buffer — буфер для хранения 
REF 830200 V-CE Maintenance Buffer — буфер для поддержания
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Оптимальный образец — свежевзятая цельная кровь в ЭДТА для предупреждения свертывания. 
Образцы можно хранить при 2-6°С на протяжении срока до 7 суток. Однако наилучшие 
результаты получают при анализе свежих образцов, поскольку в процессе хранения образуются 
продукта распада гемоглобина.
ПОБОЧНЫЕ ФАКТОРЫ
1  .Неточные результаты возможны из-за испарения, когда образцы оставляют в незакрытом виде.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Убедитесь, что имеется выдвижной ящик для емкости для отходов, и он пуст.
2. До перехода к V8 убедитесь, что имеются буфер для хранения, буфер для поддержания и 
одноразовые стаканчики, и они находятся в соответствующих положениях. Установка всех 
расходных компонентов описана в руководстве пользователя.
3. Переключитесь на инструмент Helena V8, как описано в руководстве пользователя.
4. При запуске V8 запустите Platinum 4V и начните новый сеанс КЭ. В Platinum 4V выберите 
'СЕ SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ) из выпадающего меню, нажмите на 'DEFAULT METHOD’ 
(МЕТОД ПО УМОЛЧАНИЮ) и выберите V8 Haemoglobin IEF (V8 гемоглобин И ЭФ) как 
анализ по умолчанию. Выбор отдельных анализов описан в руководстве пользователя.
5. Вставьте флакон с V-CE cathode buffer (катодным буфером V-КЭ) в отделение для 
флаконов с жкадкостью Helena V8 и убедитесь, что он находится в правильном положении. 
Чтобы правильно установить флакон с V-CE cathode buffer (катодным буфером V-K3) 
пре>кде чем вставлять его в инструмент Helena V8, убедитесь, что на входную трубку 
переходника для флакона с буфером установлен новый фильтр (см. руководство 
пользователя).
6. После установки флакона с V-CE cathode buffer (катодным буфером V-КЭ) автоматически 
откроется окно ‘DEFINE BUFFER’ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУФЕРА) в Platinum 4V. Отсканируйте 
или введите штрих-код в попе позиции буфера, совпадающий с позицией буфера.
7. Снимите все крышки с Anode buffer (анодного буфера). Ampholyte buffer (амфотерного 
буфера). Methy Cellulose solution (раствора метилцеллюлозы) и Haemoglobin lysing agent 
(реактива, расщепляющего гемоглобин), и убедитесь в том, что все флаконы находятся в 
правильном положении в области флаконов с реактивами (см. руководство пользователя).
8. Убедитесь, что данные штрих-кода загружены в Platinum 4V, выбрав ‘СЕ SYSTEM’ 
(СИСТЕМА КЭ) в выпадающем меню. Нажмите на ‘DEFINE REAGENTS’ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ 
РЕАГЕНТОВ) и убедитесь, что положение реактивов совпадает с каждым положением на 
инструменте V8.


--- стр. 240 ---
9. Когда V8 будет готов для обработки образцов, на инструменте начнет мигать красный 
индикатор.
10. Поместите пробирки с первичными образцами в подставку для о б р а ^ ^  и убедитесь, что 
штрих-код четко виден через окошечко в подставке (см. руководство пользователя).
11. Установите подставки для образцов на левую половину транспортной области V8 и 
закройте крышку, как описано в руководстве пользователя.
12. V8 автоматически начнет анализ всех загруяданных образцов, и результаты будут 
передаваться в Platinum 4V.
13. После анализа и при необходимости запустите режим прекращения работы V8, выключив 
инструмент, как описано в руководстве пользователя.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Большинство вариантов гемоглобина клинически никак не проявляются и в основном 
представляют собой научный интерес. Варианты клинически значимы, когда их присутствие ведет 
к серповидно-клеточной анемии, талассемиям, пожизненному цианозу, гемолитическим анемиям 
или эритроцитозу, или если гетерозиготы распространены настолько, что делают 
целесообразным генетическое консультирование. Сочетания HbS-S, HbS-D-Los Angeles и HbSO 
Arab ведут к серьезной серповидно-клеточной анемии.^ Несколько вариантов гемоглобина, 
включая НЬН, E-Fort Worth и Lepore, вызывают в крови картину талассемии.^ Два варианта 
гемоглобина, которые имеют наибольшее значение в отношении частота и тяжести патологии, — 
это HbS и НЬС.^ Серповидно-клеточная анемия (HbSS) — тяяжлое и смертельное заболевание. 
Оно проявляется в 5-6-месячном возрасте. Клиническое течение включает приступы мучительной 
боли и лихорадку с анемией, беспокойством, сонливостью и инфарктами почти всех органов. У 
лиц-гомозигот по НЬСС возникает лепсая гемолитическая анемия, которую объясняют 
оса>едением или кристаллизацией НЬС в эритроцитах. Для случаев заболевания HbSC типичны 
гемолитическая анемия, которая выражена меньше, чем серповидно-клеточная.
Талассемии — это группа заболеваний, обусловленных аномалией гемоглобина, для которых 
характерны гипохромия и микроцитоз из-за сниженного синтеза одной цепи глобина (а или Р), в то 
время как синтез второй цепи происходит нормально.^'^ Такой несбалансированный синтез 
приводит к образованию нестабильных цепей глобина. Они осаждаются в эритроцитах, образуя 
тельца включения, которые укорачивают жизнь клеток. При а-талассемиях а-цепи укорочены или 
совсем отсутствуют, при р-талассемии аномальны р-цепи. Еще одно количественное нарушение 
синтеза гемоглобина — наследственная персистенция фетального гемоглобина, которая 
обусловлена генетическим отсутствием механизма отключения гамма-цепей примерно в 4- 
месячном возрасте, что приводит к аномально высокому содержанию HbF. Это менее опасное 
заболевание, чем истинные талассемии, и лица, гомозиготные по генам этого заболевания, 
нормально развиваются, здоровы клинически и не страдают анемией.'*
Самые частые аномалии гемоглобина;
Серповидно-клеточная аномалия
Это гетерозиготное состояние, при котором имеются НЬА и HbS и нормальное количество НЬЛ2. 
Результаты указывают на положения миграции (зоны) НЬА и HbS.
Серповидно-клеточная анемия
Это гомозиготное состояние, при котором выявляется почти исключительно HbS, хотя может 
присутствовать и небольшое количество HbF.
Серповидно-клеточная гемоглобинопатия С
Это гетерозиготное состояние, при котором имеются HbS и НЬС.
Серповидно-клеточная талассемия
При этом заболевании встречаются НЬА, HbF, HbS, and HbA2 При серповидно-кпеточной ро- 
талассемии НЬА отсутствует. При серповидно-клеточной р+-талассемии НЬА имеется в 
сниженных количествах.
Талассемия С
При этом заболевании имеются НЬА, HbF и НЬС.
Гемоглобинопатия С
При этом гомозиготном состоянии имеется почти исключительно НЬС.
Большая талассемия
При этом заболевании встречаются HbF, НЬА и НЬА2.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для верификации всех этапов анализа гемоглобина можно использовать контрольные образцы 
Helena Biosciences ААг Hemo Control (5328) и AFSC Hemo Control (xxxx). Сведения о концентрации 
гемоглобина и разведении, необходимом для V8, содержатся в инструкции-вкладыше.
НЕДОСТАТКИ
Использование старых или замороженных образцов может приводить к формированию 
дополнительных побочных пиков, обусловленных продуктами разрушения гемоглобина.
1. Для идентификации некоторых редких форм гемоглобина могут потребоваться анализ цепей 
гемоглобина (кислотный и щелочной) и структурные исследования.
2, Анионобменная хроматофафия — самый надежный метод количественного определения НЬА2. 
Рекомендуются методы Helena BioSciences Sickle-Thal Quik Column Method (кат. № 5334) для


--- стр. 241 ---
количественного определения НЬА2 в присутствии HbS или Helena BioSdences Beta-Thal HbA2 Quik 
Column Procedure M l 5341). Количественный анализ HbA2 является самым важным 
диагностическим тест^Рфи подтверх^цении р-талассемии.
3. Низкие уровни HbF (1-10%) можно точно определить радиоиммунодиффузионным методом с 
использованием процедуры Helena BioSdences HbF-QuiPlate Procedure (кат. 9325).
НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Нормальные показатели в разных лабораториях неодинаковы, и по этой причине в каждой 
лаборатории необходимо установить собственные фаницы нормы. Границы нормы для 
человеческого НЬА2 составляют 2,5-3,5%.
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
В компании Helena Biosciences определены следующие характеристики, которые можно 
использовать как справочные. В каждой лаборатории необходимо установить собственные 
характеристики метода.
Точность:
Воспроизводимость в 
пределах одного 
анализа(п = 30)
Воспроизводимость 
между анализами (п = 
300)
Воспроизводимость 
между разными 
партиями (п = 3)
(N = 30)
% Коэффициент % Коэффициент % Коэффициент
вариации вариации вариации
HbA2 3,1 2,2 3,3 4,2 3.2 4,5
Mbs 22,4 1,8 23,1 2,2 23,3 2,8
HbA 96,5 0,9 96,9 2 97 2,2
Чувствительность:
Метод определения гемоглобина V8 IEF может выявлять гемоглобин при концентрации мкг/мл.
Достоверность:
Сравнение с гель-электрофоретическим методом определения гемоглобина Helena Biosciences 
Haemoglobin IEF Gel дало следующий результат:
у = 0,9999 + 0,313,г2 = 0,888
ЛИТЕРАТУРА
1. Wintrobe, М.М., Clinical Haematology 6th Edition, Lefebiger, Philadelphia, 1967.
2. Fairbanks, V.F., The Nomenclature and Taxonomy of Hemoglobin Variants’,  Diagnostic Medidne, 
Nov/Dec., 53-58, 1980.
3. Weatherall, D.J. and Clegg, J.B., The Thalassemia Syndromes, Blackwell Sdentific Publications, 
Oxford, 1972.
4. Lehman, H. and Huntsman, R.G., Man's Haemoglobins, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, 1974.


--- стр. 242 ---


--- стр. 243 ---
H e l e n a
Bio»ci«ri<«s Europ«
Partners i n  Good Science
Тест-система «Иммунозамещение» для прибора  
V8 
(V8 Immunodisplacement kit).
Инструкция no применению 
REF 800300
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Vailey Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Тел.+44 (0)191 482 8440
Ф а к с +44 (0)191 482 B442
Эл. почта infb@helena-biosciences.com
www.helena-biosciences.com
H L - 2 -1 8 4 7 P  2 0 0 8 / 1 2 ( 1 )
С €
$


--- стр. 244 ---
НАЗНАЧЕНИЕ
V-CE Immunodisplacement kit (комплект для иммуновытеснения V-КЭ) предназначен для разделения и 
идентификации моноклональных гаммапатий методом капиллярного электрофореза.
Максимальная потребность в иммуновытеснении имеется в клинической лаборатории, где этот метод 
применяется преимущественно для выявления моноклональных гаммапатий. Моноклональная 
гаммапатия — это первичная патология, при которой один единственный клон плазматических клеток 
вырабатывает повышенные уровни иммуноглобулина одного класса и типа. Такие иммуноглобулины 
называют моноклональными белками, М-белками или парапротеинами. Их наличие может не 
представлять опасности, а может оставаться невыясненным. 8 некоторых случаях такие белки 
являются признаком злокачественной опухоли, такой как миеломная болезнь или макроглобулинемия 
Вальденстрема. Моноклональные гамма патии необходимо отличать от поликлональных, так как 
поликлональные гаммапатии — вторичные патологические состояния, обусловленные такими 
заболеваниями, как хронические болезни печени, коллагенозы, ревматоидный артрит и хронические 
инфекции.
Белки, содержащиеся в моче, в основном относятся к белкам плазмы, фильтрующимся через почки. 
Аномальное появление белков плазмы в моче играет важную роль в исследовании функции почек. 
Исследование при протеинурии должно включать определения типа и количеств экскретируемых 
белков.’’^ Комбинация элект^форетического разделения белков мочи вместе с идентификацией типов 
белков методом иммунопреципитации позволяет дифференцировать несколько типов протеинурии — 
физиологическую, клубочковую (селективную и неселективную), канальцевую и протеинурию, 
сочетающуюся с дисглобулинемиями.’’^
V-CE Immunodisplacement kit (комплект для иммуновытеснения V-КЭ) обеспечивает разделение 
сывороточных белков по заряду. После инкубации белков с моноспецифичными антисыворотками 
происходит вытеснение иммуноглобулина определенного Tvina из дорожки капиллярного 
электрофореза.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в этом комплекте, предназначены только для диагностики in vitro. Не глотайте 
и не капайте пипеткой в рот какие-либо компоненты комплекта. При манипуляциях со всеми 
компонентами комплекта надевайте перчатки. Данные по безопасности продукта, формулировки, 
касающиеся безопасности, и сведения об утилизации приведены в спецификации продукта в 
отношении безопасности.
СОСТАВ
1. Anti'human IgG antisera. REF HL-3-2125SA (1 x 50 анализов) - актисыворотки к человеческому 
IgG. В каждом флаконе содержатся антисыворотки в количестве, достаточном для 50 анализов. 
Антисыворотки готовы к применению, и их следует помещать в соответствующее место на 
инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.
2. Anti-human IgA antisera. REF HL-3-2126SA (1 x 50 анализов) • антисыворотки к человеческому 
IgA. В каждом флаконе содержатся антисы воротки в количестве, достаточном для 50 анализов. 
Антисыворотки готовы к применению, и их следует помещать в соответствующее место на 
инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.
3. Anti-human tgM antisera. REF HL-3-2127SA ( 1  x 50 анализов) - антисыворотки к человеческому 
iglVI. В каждом флаконе содержатся антисыворотки в количестве, достаточном для 50 анализов. 
Антисыворотки готовы к применению, и их следует помещать в соответствующее место на 
инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве пользователя.
4. Anti-human kappa antisera. REF HL-3-2128SA (1 x 50 анализов) - антисыворотки к 
человеческому белку каппа. 8 каждом флаконе содержатся антисыворотки в количестве, 
достаточном для 50 анализов. Антио> 1воротки готовы к применению, и их следует помещать в 
соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве 
пользователя.
5. Anti-human lambda antisera. REF HL-3-2129SA (1 x 50 анализов) - антисыворотки к 
человеческому белку лямбда. В каждом флаконе содержатся антисыворот 1ш в количестве, 
достаточном для 50 анализов. Антисыворотки готовы к применению, и их следует помещать в 
соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в руководстве 
пользователя.


--- стр. 245 ---
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
1. Anti-human IgG '^ ||e ra  антисыворотки к человеческому 1д6. Антисыворотки следует хранить 
при 2-6°С, и он1^ ^ б и л ь н ы  до истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые 
флаконы, установленные на область для флаконов с реактивами на инструменте Helena V8, 
стабильные в течение 4 недель.
2. Anti-human IgA antisera - антисьГворогки к человеческому IgA. Антисыворотки следует храйить 
при 2-6°С, и они стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые 
флаконы, установленные на область для флаконов с реактивами на инструменте Helena V8, 
стабильные в течение 4 недель.
3. Anti-human IgM antisera - антисыворотки к человеческому |дМ. Антисыворотки следует хранить 
при 2-6°С, и они стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке. Открытые 
флаконы, установленные на область для флаконов с реактивами на инструменте Helena V8, 
стабильные в течение 4 недель.
4. Anti-human kappa antisera - антисыворотки к человеческому белку каппа. Антисыворотки 
следует хранить при Z-S^C, и они стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке. 
Открытые флаконы, установленные на область для флаконов с реактивами на инструменте Helena 
V8, стабильные в течение 4 недель.
5. Anti-human lambda antisera - актисыворотки к человеческому белку лямбда. Антисыворотки 
следует хранить при 2-6°С, и они стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке. 
Открытые флаконы, установленные на область для флаконов с реактивами на инструменте Helena 
V8, стабильные в течение 4 недель.
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ. НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
REF 830100 V-CE Storage Buffer — буфер для хранения 
REF 830200 V-CE Maintenance Buffer — буфер для поддержания
REF 800100 V-CE Serum Protein 5-band kit — пятиполосный комплект для анализа сывороточных 
белков (если проводится пятиполосное разделение)
REF 800200 V-CE Serum Protein 6-band kit — шестипопосный комплект для анализа сывороточных 
белков (если проводится шестиполосное разделение)
НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫ
REF 800400 V-CE Urine analysis centrifugation kit 5-band — пятиполосный комплект для 
центрифугирования при анализе мочи (если проводится преаналитическое кониентрирование и 
обессоливание с использованием мембранных концентраторов при анализе мочи)
REF 800401 V-CE Urine analysis centrifugation kit 6-band — шестиполосный комплект для 
центрифугирования при анализе мочи (если проводится преаналитическое концентрирование и 
обессоливание с использованием мембранных концентраторов при анализе мочи)
REF 800405 V-CE Urine analysis column kit 5-band — пятиполосный комплект для колонки при анализе 
мочи (если проводится преаналитическое обессоливание при анализе мочи с использованием 
колоночной хроматофафии)
REF 800406 V-CE Urine analysis column kit 6-band — шестиполосный комплект для колонки при 
анализе мочи (если проводится преаналитическое обессоливание при анализе мочи с 
использованием колоночной хроматографии)
REF 820500 V-CE Anti-Free kappa anti-sera — антисыворотка к свободной цепи каппа (если 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 820600 V-CE Anti-Free lambda anti-sera — антисыворотка к свободной цепи лямбда (еспи 
проводится иммуновытеснение в сыворотке или моче)
REF 821400 V-CE Anti-lgD anti-sera — антисыворотка к IgD (еспи проводится иммуновытеснение в 
сыворотке или моче)
REF 821500 V-CE Anti-lgE kappa anti-sera — антисыворотка к lgE-каппа (еспи проводится 
иммуновытеснение в сыворотке или моче)
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Оптимальной для определения сывороточного белка является свежая сыворотка. Образцы можно 
хранить при 15-30°С в течение срока до 4 суток, при 2-6°С — до 14 суток и при -20°С — до 6 месяцев. 
Использование плазмы приведет к образованию полосы фибриногена между бета- и гамма- 
фракциями.
Оптимальный образец для анализа мочи — свежесобранная моча (суточная). Образцы можно 
хранить при 2-6°С в течение срока до 7 суток. Для более длительного хранения рекомендуется 
температура -70°С, при которой образцы можно хранить на протяжении срока до 1  месяца. НЕ 
ХРАНИТЕ образцы при -20°С. Обессоливать образцы следует с использованием лкзбого из REF 
800400. REF 800401, REF 800405 или REF 800406.


--- стр. 246 ---
1. Убедитесь, что имеется выдвижной ящик для емкости для отходов,^ 1 ^  пуст.
2. До перехода к V8 убедитесь, что имеются буфер для хранения, буфер для поддержания и 
одноразовые колпачки, и они находятся в соответствующих положениях. Установка всех 
расходных комронентов описана в руководстве пользователя.
3. Переклк>читесь на инструмент Helena V8, как описано в руководстве пользователя.
4. При заполнении V8 запустите Platinum 4V и начните новый сеанс КЭ. В Platinum 4V выберите 
'СЕ SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ) из выпадающего меню, нажмите на 'DEFAULT METHOD’
{МЕТОД ПО УМОЛЧАНИЮ) и выберите соответствующий метод Immunodisplacement assay  
' иммуновытеснения (см. руководство пользователя). Выбор дополнительного или 
отдельного анализа описан в руководстве пользователя.
5. Для иммуновытеснения вставьте соответствующий флакон с буфером в отделение для 
флаконов с жидкостями на Helena V8 и убедитесь, что он находится в правильном 
положении. Чтобы правильно установить флакон с буфером для анализа сывороточных 
белков, прежде чем устанавливать его на инструменте Helena V8, убедитесь, что на входную 
трубку переходника для флакона с буфером установлен новый фильтр (см. руководство 
пользователя).
6. При установке соответствующего флакона с буфером для анализа сывороточных белков 
автоматически откроется окно 'DEFINE BUFFER’ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУФЕРА) в Platinum 4V. 
Отсканируйте или введите штрих-код в поле позиции буфера, совпадающий с позицией 
флакона.
7. Снимите крышки с флаконов с анттлсыворотками для иммуновытеснения и установите каждый 
флакон в нужное положение в области флаконов с реактивами (см. руководство 
пользователя).
8. Зафузите штрих-код реактива в Platinum 4V, выбрав ‘СЕ SYSTEM’ (СИСТЕМА КЭ) из 
выпадающего меню. Нажмите на 'DEFINE REAGENTS’ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ) и 
убедитесь, что положение реактивов соответствует каждой позиции в М8.
9. Когда V8 будет готов для обработки образцов, на инструменте начнет мигать красный 
индикатор.
10. В отношении образцов, выбранных для дополнительных анализов, но еще НЕ находящихся 
на инструменте V8, поместите пробирки с первичными образцами в подставку для образцов, 
при этом убедившись, что штрих-код четко виден через окошечко в подставке (см. 
руководство пользователя).
11. Установите подставки для образцов на левую половину транспортной области V8 и закройте 
крышку, как описано в руководстве пользователя.
12. V8 автоматически начнет анализ всех зафуженных образцов, и результаты будут 
передаваться в Platinum 4V.
13. После анализа и при необходимости запустите режим прекращения работы V8, выключив 
инструмент, как описано в руководстве пользователя.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Большинство моноклональных белков перемещается в катодный гамма-участок белковой дорожки, но 
поскольку эти белки аномальны, они могут перемещаться при капиллярном электрофорезе в любой 
участок глобулинов. Аномальный белок идентифицируют по типу антисыворотки, с которой он 
реагирует, когда первичный идентифицированный пик извлекают из КЭ-дорожки.
Если аномальный белок содержится в низких концентрациях, полоску аномального белка можно 
извлечь вместе с нормальным поликлональным иммуноглобулином.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для верификации всех стадий процедуры иммуновытеснения можно использовать контрольную 
сыворотку Helena Biosciences Kemtrol Serum Control REF7025.
НЕДОСТАТКИ
1. Реакция с антисыворотками к легким цепям каппа или лямбда, но отсутствует реакция с 
антисыворотками к тяжелым цепям IgG, IgA или IgM. Образцы, в которых это наблюдается, 
могут указывать либо на моноклональную гаммапатию со свободными цепями, либо содержать 
моноклональный белок IgD или IgE. В такой ситуации анализ на IgD следует повторить, заменив 
антйсыворолси к IgD и IgE на другие антисыворотки к другим тяжелым цепям. Отсутствие реакции 
с антисыворотками к IgD или IgE будет указывать на болезнь свободных легких цепей.
2. Полоса в гаммз'участке, не реагирующая с антисыворотками во время электрофореза с 
иммунофиксацией. У больных с острой воспалительной реакцией может выявляться С- 
реактивный белок (СРБ).^^ Повышенные уровни альфа-1-антитрипсина и гаптоглобина — 
дополнительные свидетельства в пользу СРВ.
3. Отсутствие реакции с антисыворотками к цепям каппа и лямбда. В отдельных случаях 
образец будет реагировать с антисывороткой к тяжелым цепям, но не к лепсим цепям. В такой 
ситуации следует исключить:
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА


--- стр. 247 ---
а) болезнь тяжелых цепей;
б) очень высокие М ^ентрации легких цепей, что ведет к избытку антигена;
в) низкие концент)Я№и легких цепей;
г) атипичные молекулы леп(их цепей, не реагирующие с антисывороткой;
д) легкие цепи со «скрытыми» детерминантами лепсих цепей (как иногда наблюдается в отношении 
IgA и IgD).
Чтобы получить однозначнб1е результаты, в ходе анализа могут потребоваться:
а) большая или меньшая степень разведения образца для оптимизации соотношения 
антитело/антиген.
б) обработка образца р-2-меркаптоэтанолом для «проявления» лепшх цепей.
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
Проведены серия анализов и сравнение с коммерчеосим тест-комплектом, при этом оба комплекта 
показали одинаковые результаты.
ЛИТЕРАТУРА
1. Fauchier, Р. and Catalan, F. '1п1еф ге11уе Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier Institute, Paris. 
France, 1988.
2. Killingsworth. L.M., Cooney, S.K, and Tyllia, M.M. 'Finding Clues to Disease in Urine' Diagnostic Medicine, 
1980 ; May/June : 69-75.
3. Umbreit, A. and Wiedemann. G. 'Detenmination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different 
Electrophoretic Methods and Quantitatively Detenriined Protein Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 
297:163-172.
4. Wiedemann. G. and Umbreit, A. 'Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic 
Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 ; 257-262.
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, 2., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. ‘A Comparison 
of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 :  371- 
374.
6. Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, B., ‘Agarose Gel Electrophoresis’, Clin. Chem., 1979; 25 (4) ;  
629-638.
7. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., ‘Protein Analysis’,  Diagnostic Medicine. 1980; Jan/Feb ;  
3-15.


--- стр. 248 ---
л е 1 е п а
Тест-система «И м м уноф иксация-4» для прибора SAS-1
(SAS-1 IFE-4 Kit)
НАЗНАЧЕНИЕ
.Тест-система предназначена для разделения и идентификации моноклональных гаммопатий 
методом электрофореза в агарозном геле.
Электрофорез с иммунофиксацией (IFE) -  это двухступенчатая процедура, использующая 
электрофорез высокого разрешения в агарозном геле на первом этапе и иммунофиксацию на втором 
этапе.
Наибольшая потребность в IFE присутствует в клинических лабораториях, где метод используется в 
первую очередь для определения моноклональных гаммопатий. Моноклональная гаммопатия - это 
первичное состояние заболевания, при котором один клон клеток плазмы производит повышенные 
уровни иммуноглобулина определенного класса и типа. Такие иммуноглобулины называют 
моноклональными белками, М-белками или парапротеинами. Их присутствие может носить 
неопасный характер или иметь сомнительное значение. В некоторых случаях они указывают на 
злокачественное развитие заболевания, например множественная миелома или макроглобулинемия 
Вальденстрема. Следует дифференцировать поликлональную и моноклональную гаммопатию, так 
как поликлональные гаммопатии представляют собой вторую стадию заболевания, обусловленную 
клиническими нарушениями, такими как хроническое заболевание печени, коллагеновые 
нарушения, ревматический артрит и хроническая инфекция.
Белки мочи образуются в первую очередь на основе белков плазмы, которые фильтруются почками. 
Присутствие аномальных белков плазмы в моче имеет важнейшее значение при оценке почечной 
функции. Соответствующее исследование протеинурии должно включать количественную и 
качественную оценки типов и количества выделяемых белков. Комбинация разделения белков 
мочи методом электрофореза в сочетании с идентификацией отдельных типов белков методом 
иммунопреципитации позволяет дифференцировать различные типы протеинурии -  
физиологическую, гломерулярную (селективную и неселективную), тубулярную, а также 
протеинурию, ассоциируемую с дисглобулинемиями.
В литературе иммунофиксация была впервые описана Альфонсо (Alfonso) в 1964 г. ^  Альпер (Alper) 
и Джонсон (Johnson) опубликовали более удобную процедуру в 1969 г., а также опубликовали 
количество исследований, использующих данную методику. ^  ^  Иммунофиксация использовалась в 
качестве процедуры для исследования иммуноглобулинов с 1976 г. Набор аксессуаров SAS-3 
1FE используется для разделения белков сыворотки в соответствии с зарядом а агарозном геле. 
Белки затем инкубируют с моносферической антисывороткой, промывают и окрашивают в целях 
обеспечения визуализации иммунопреципитата для количественной интерпретации. 
П РЕДУ П РЕЖ ДЕН И Я И  М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О РО Ж Н О С Т И
Все реагенты предназначены только для диагностического использования в условиях in-vitro. Не 
глотать и не пипетировать ртом ни один компонент набора. Надевать перчатки при работе со всеми 
компонентами набора. См. паспорт безопасности химического вещества, положения о рисках и 
обеспечении безопасности, а также информацию об утилизации.
СОСТАВ
1. S A S 'l Гель для иммунофиксации
Содержит агарозу в Трис/барбитал буфере с тиомерсалом и азидом натрия в качестве консерванта. 
Гель упакован готовым к употреблению.
2. Кислотны й ф иолетовы й краситель, концентрат
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United Kingdom


--- стр. 254 ---
H e l e n a
гам магл обул ины
Тубулярная альфа-1, альфа-2, бета ретинол-связывающий белок, 
бета2-микроглобулин, альфа2- 
микрогл обули н ______________
Обильное выделение гамма или различные имунноглобулины, свободные 
легкие цепи
О ГРА Н И ЧЕН И Я
1. Излиш ек антигена
Излишек антигена происходит в случае отсутствия небольшого излишка антител или равенства 
антигена/антител на стадии осаждения. Излишек антигена при иммунофиксации обычно обусловлен 
излишком иммуноглобулина в образце пациента. Излишек антигена характеризуется прозоной 
(неокрашенным участками в центре иммунофиксированной полосы белка, с окраской по краям). В 
таком случае следует использовать более высокую степень разведения образца с целью 
оптимизации концентрации иммуноглобулина.
2. Неспецифнческая преципитация во всех иммуноглобулиновы х дорожках.
Иногда выполненный планшет IFE демонстрирует полосу преципитата в одной и той же позиции на 
каждом паттерне по всему планшету. Такая ситуация может возникнуть по нескольким причинам:
а) Ig M  моноклоиальны е иммуноглобулины .
IgM моноклональные белки могут приклеиваться к матрице геля. Полоса появится во всех 5 
дорожках антисыворотки на геле. Тем не менее, там где полоса вступает в реакцию со 
специфической антисывороткой к тяжелым цепям и легким цепям, будет отмечено увеличение 
размера и интенсивности окрашивания полосы, что позволит идентифицировать тип 
иммуноглобулина. Дополнительное разведение пробы улучшит различия между реакцией IgM 
антител и неспецифического окрашивания осажденного IgM белка в других дорожках, что упростит 
диагноз.
б) Вы сокие ти тр ы  R F  или им м унны е комплексы.
Образцы с высокими титрами ревматоидного фактора или других иммунных комплексов могут 
демонстрировать полосу преципитата в одном и том же месте нанесения. Понижение концентрации 
образца с использованием DTT или бета-2-меркаптоэтанола может устранить данную 
неспецифическую реакцию. (Смешать 190цл разбавленной сыворотки с 1  Оцл 1  % (вес/объем) ВЕЕ в 
солевом растворе 0,85% или смешать ЮОцл сыворотки с Юцл водного раствора 1:10 р -2- 
меркаптоэтанола. Выполнить иммунофиксацию как обычно. П РИ М ЕЧ А Н И Е : при использовании р 
-2-меркаптоэтанола обязательно использовать пароуловитель).
в) Фибриноген.
Фибриноген, если присутствует в пробе, продемонстрирует четкую полосу во всех дорожках 
паттерна иммунофиксации. Фибриноген присутствует в плазме, и иногда в сыворотке пациентов, 
проходящих антикоагуляционную терапию.
3. Реакции с антисы вороткой к  легким  цепям каппа и лямбда, однако отсутствие реакции с 
IgG, IgA  или антисы вороткой к тяж елы м  цепям IgM .
Образцы, демонстрирующие подобный паттерн, либо характеризуются моноклональной 
гаммопатией со свободными легкими цепями, или содержат моноклональный белок IgD или IgE. В 
данной ситуации иммунофиксацию следует повторить, заменив антисывороткой к IgD и IgE две 
другие антисыворотки к тяжельЕМ цепям. Невозможность получить реакцию с антисывороткой к 
IgD и IgE может указывать на болезнь свободных легких цепей.
4. Полоса в катодом конце гамма-участка показывает отсутствие реакции с антисы вороткой 
IFE .
С €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 {0)191 482 8442 
Эл, почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United K in gdon n


--- стр. 255 ---
H e l e n a
Ф
С -реактивны й б елок (C R P ) м ож ет б ы ть обнаруж ен у  пац и ен тов с остры м  воспалительны м  
процессом . C R P  п оявляется в виде ш ирокой полосы  в катодном  кон це ш аблона белков 
сы воротки. П овы ш ен н ы е уровни а л ь ф а -1  -  анти три п си н  и гаптоглобин а являю тся
вспом огательн ы м и сви д етельствам и  присутствия C R P. У пац иентов с полосой C R P, возмож но, 
будет вы явлен повы ш ен н ы й  уровен ь при тестирован ии на C PR . В некоторы х случаях м ож ет быть 
видна узкая полоса в точке нан есен ия образца, что м ож ет б ы ть об условлен о хилом икронам и в 
сы воротке или осаж денны м  белком  в образцах, которы е бы ли зам орож ены .
5. Отсутствие реакции с каппа и лямбда антисывороткой.
И ногда образец м ож ет вступать в реакц ию  с тяж елой  цепью  ан ти сы воротки , при этом не 
наблю дается реакц ии с легко й  цепью . В такой ситуации н еоб ходи м о и склю чи ть следую щ ее: а) 
заболевание, связан н ое с тяж ел ы м и  цепям и, б) очень б ольш ие кон центраци и легки х  цепей, что 
приводит к излиш ку анти ген а, в) низкие кон центраци и л егки х  цепей, г) атипи чная м олекула легких 
цепей, которая не вступает в реакц ию  с антисьЕВОроткой, д )легк и е цепи со «скры ты м и» 
детерм инантам и л егки х  ц еп ей (что и н огд а наблю дается с IgA  и IgD ). Д ля получения определенны х 
результатов тести рован и е м ож ет вклю чать а) более вы сокую  или ни зкую  степ ень разбавления 
образца с целью  оп ти м и зац и и  равен ства ан тител/ан ти генов, б )и сп ользован и е ан тисы воротки более 
чем от одного прои зводи теля с целью  облегчения идентиф икац ии ати п и чн ы х им м уноглобулинов, и
в)обработка об разц а Р -2-м еркап тоэтан олом  с целью  «обнаруж ени я» л егки х  цепей.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Ряд образцов бы ли протести рован ы  и подверж ены  сравн ен и ю  с д руги м  им ею щ и м ся в продаж е 
тестовы м  набором  -  о б а н аб ора продем онстрировали од и н аковы е результаты .
БИБЛИОГРАФИЯ
/. Fauchier, Р. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis' Alfred Fournier Institute, Paris,  
France, 1988.
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Ту Ilia, M M . ‘Finding Clues to Disease in U rine’ Diagnostic Medicine, 1980  
; May/June :  69-75.
'3 . Umbreit, A. and Wiedemann, G. 'Determination o f Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different  
Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations ’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297: 163-  
172.
4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination o f Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic  
Methods', Clin. Lab.; 1999, 45 :  257-262.
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. 'A Comparison o f Three  
Procedures for the Detection o f Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374.
6. Afonso, E., ‘Quantitation Immunoelectrophoresis o f Serum Proteins’,  Clin. Chim. Acta., 1964; 10 : 114-122.
7 . Alper, C.A and Johnson, A.M., ‘Immunofixation Electrophoresis: A Technique fo r the Study o f Protein  
Polymorphism’, Vox. Sang., 1969; 17 : 445-452.
8. Alper, C.A., 'Genetic Polymorphism o f Complement Components as a Probe o f Structure and Function’,  Progress  
in Immunology. First International Congress o f Immunology. 1971 : 609-624, Academic Press, New York.
9. Johnson, A.M., ‘Genetic Typing o f Alpha(l)-Antitrypsin in Immunofixation Electrophoresis. Identification o f  
Subtypes o f P i M. ’, J  Lab. Clin. Med, 1976; 87 : 152-163.
10. Cawley, L.P., Minard, B.J, Tourtellotte, W.W., Ma, B.I. andChelle, C., ‘Immunofixation Electrophoretic  
Technique Applied to Identification o f Proteins in Serum and Cerebrospinal F lu id ’, Clin. Chem., 1976; 22 : 1262-  
1268.
11. Ritchie, R.F and Smith, R. ‘Immunofixation III, Application to the Study o f Monoclonal Proteins’, Clin. Chem.,  
1976; 22: 1982-1985.
'12. Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, S., ‘Agarose Gel Electrophoresis’,  Clin. Chem., 1979; 25 (4) : 629-  
638.
13. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Ту Ilia, M.M., ‘Protein Analysis’, Diagnostic Medicine, 1980; Jan/Feb: 3 ~
15.
C €
Тел, +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 (0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
W W W , h e le n a -fa io s c ie n c e s . c o m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11  OSD, United Kingdom


--- стр. 256 ---
l e l e n a
C €
Тел. +44 (0)191 482 8440 
Факс +44 {0)191 482 8442 
Эл. почта info@helena- 
biosciences.com
w w w .h e le n a -b io scie n ce s.co m
Helena Biosciences Europe Queensway South,
Team Valley Trading Estate, Gateshead,
Tyne and W ear, NE11 OSD, United K in gdon n


--- стр. 258 ---
•  ^
H e l e n ae i o « < i « n c e s  f g r o p «
Partners in Good Science
Тест-система «Карбогидрат-дефицитный трансферрин» для  
прибора V8 - V8 Carbohydrate Deficient Transferrin kit.
Инструкция по применению
REF 803100
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 OSD
Тел. +44 (0)191 482 8440
Факс+44 (0)191 482 8442
Эл. почта info@helena-biosciences.com
www.helena-biosciences.  com
H L - 2 - 1 9 1 3 P  2 0 0 8 / 1 2 ( 1 )


--- стр. 259 ---
ф
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для идентификации иэоформ трансферрина, дефицитных по углеводам, в 
человеческой сыворотке путем капиллярного зонного электрофореза.
Трансферрин — это белок-переносчик железа, для которого характерна микрогетерогенность,  
обусловленная различиями в степени гликозилировакия и насыщения железа/' Среди изоформ  
трансферрина в  крови преобладающие варианты содержат четыре молекулы сиаловой кислоты, 
связанных с двумя цепочками олигосахаридовЛ^ Эти остатю ч сиаловой кислоты влияют на  
электрофоретическую активность молекулы -фансферрина, и  их последовательное удаление дает 
минимум 6 возможных заряженных состояний.^
Трансферрин, дефицитный по углеводам — это общее название молекул с малым числом остатков 
сиаловой кислоты (асиало-, моносиало- и  дисиало-), которые встречаются в повышенном количестве у 
больных, хронически злоупотребляющих алкоголем. Трансферрин, дефицитный по углеводам, в 
настоящее время считаются самым надежным маркером алкоголизма.*’ ®  Суточное потребление 
алкоголя больше 50-80 г  на протяжении двух недель приводит к  изменениям в распределении изоформ 
трансферрина.®
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И  МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы, содержащиеся в  этом комплекте, предназначены только для диагностики in  vitro. Не глотайте 
и  не капайте пипеткой в  рот какие-либо компоненты комплекта. П ри манипуляциях со всеми 
компонентами комплекта используйте перчатки. Данные по безопасности продукта, формулировки, 
касающиеся безопасности, и  сведения об утилизации приведены в  спецификации продукта в  отношении 
безопасности.
СОСТАВ
1. С О Т Buffer - буфер Т Д У . REF HL-3-2143SA (1 х 400 анализов). Кажды й флакон содержит СО Т 
Buffer (буфер Т Д У ) в  количестве, достаточном для 400 анализов. Буфер готов к  применению, и  его 
следует помещать в  соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в 
руководстве пользователя.
2. С О Т Sample Diluent - раствор для разведения образца Т Д У . REF HL-3-2144SA (2 х 20 мл). 
К а)еды й комплект содержит СО Т Sample Diluent (раствор для разведения образца Т Д У ) в  количестве, 
достаточном для 400 анализов. Буфер готов к  применению, и  его следует помещать в  
соответствующее место на инструменте Helena V8 согласно инструкции в  руководстве пользователя.
3. СОТ Sample Preparation Solution - раствор для приготовления образца Т Д У . REF HL-3-214SSA (1 
X  20 мл). К аж ды й комплект содержит С О Т Sample Preparation Solution (раствор для приготовления 
образца Т Д У ) в  количестве, достаточном для 400 анализов. Буфер готов к  применению.
4. Фильтр. REF Hb3-2130SA (х1). Ф ильтр следует устанавливать на входную трубку переходника 
для флакона с С О Т  Buffer (буфером Т Д У ) инструмента Helena V8 согласно инструкции в руководстве 
пользователя. Ф ильтр предназначен для одноразового использования, и  при замене С О Т Buffer 
(буфера Т Д У ) его тоже следует заменять.
5. Стаканчики для образцов. REF HL-3-2134SA (4 х 36). С таканчики для образцов следует  
устанавливать на инструменте Helena V8 согласно руководству пользователя.
6. Прочие компоненты комплекта. В каждом комплекте имеется инструкция по применению. 
ХРАНЕНИЕ И  СРОК ГОДНОСТИ
1. СО Т Buffer - буфер Т Д У . С О Т  Buffer (буфер ТДУ) следует хранить при 15-30“ С ; он стабилен до 
истечения срока годности, указанного на этикетке. О ткры ты е флаконы, установленные на 
инструменте Helena V8, стабильны в  течение 6 месяцев при 15-30°С.
2. СО Т Sample D iluent - раствор для разведения образца ТД У . С О Т Sample O iluent (раствор для 
разведения образца Т Д У ) следует хранить при 15-30°С; он стабилен до истечения срока годности, 
указанного на этикетке. О ткрьп-ы е флаконы, установленные на инструменте Helena V8, стабильны в 
течение 3 месяцев при 1  б-З О ^ С .
3. С О Т Sample Preparation Solution - раствор для приготовления образца ТД У . СО Т Sample 
Preparation Solution (раствор для приготовления образца Т Д У ) следует хранить при 15-30°С; он 
стабилен до истечения срока годности, указанного на этикетке. О ткры ты е флаконы, установленные 
на инструменте Helena V8, стабильны в  течение 6 месяцев при 15-30“ С .
НЕОБХОДИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ. НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМ ПЛЕКТ ПОСТАВКИ


--- стр. 260 ---
REF 830100 V-CE Storage Buffer—буфер для хранения
REF 830200 V-CE Wgj^enance Buffer — буфер для поддержания
REF 830300 V'CE C^^ary Rinse — капиллярный ополаскиватель
ОТБОР И  ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Оп-ш мальный образец — свежая сыворотка. Образцы можно хранить в  холодильнике при 2-6Х 
сроком до 3 суток или -20°С — до 2 недель.
Н а с ы щ е н и е  ж е л е за  в о б р а зц е :
К  1  мл сыворотки добавьте 50 м кл С О Т Sample Preparation Solution (раствора для приготовления 
образца Т Д У ). Тщательно перемешайте и  инкубируйте в течение 15-30 минут при комнатной 
температуре (15-30'’ С). Перемешайте образцы с помощью вихревой мешалки и  поместите в 
подставку для образцов V 8.
ПОЭТАПНАЯ ПРОЦЕДУРА
1. Убедитесь, что имеется выдвижной ящ ик для емкости для отходов, и  он пуст.
2. До переключения на V8 убедитесь, что имеются буфер для хранения, буфер для 
поддержания, капиллярный ополаскиватель и  одноразовые стаканчики, и  они находятся в 
соответствующих положениях. Установка всех расходных компонентов описана в  руководстве 
пользователя.
3. Переключитесь на инструмент Helena V8, к а к  описано в  руководстве пользователя.
4. П ри заполнении V8 запустите Platinum  4V и  начните новый сеанс К Э . В  Platinum  4V выберите 
'СЕ SYSTEM ' (С И С ТЕМ А  К Э ) из выпадающего меню, нажмите на ‘ D EFA U LT M ETH O D’  (М ЕТО Д 
П О  У М О Л Ч А Н И Ю ) и  выберите V8 С О Т (V8 Т Д У ) в  качестве анализа по умолчанию. Выбор 
определенных анализов описан в  руководстве пользователя.
5. Вставьте флакон с V-CE С О Т buffer (буфером Т Д У  V -К Э ) в отделение для флаконов с
жидкостями на инструменте Helena V8 и  убедитесь, что он находится в  правильном 
положении. Чтобы  правильно установить флакон с V-CE С О Т buffer (буфером ТДУ  V-К Э ) 
прежде чем устанавливать его на инструменте Helena V8, убедитесь, что на входную трубку 
переходника для флакона с буфером установлен новый фильтр (см. руководство 
пользователя).
6. После установки флакона с буфером V-CE С О Т buffer (ТДУ  V-K3) автоматически откроется 
окно ‘ DEFINE BUFFER’  (О ПРВДЕЛЕНИЕ Б У Ф ЕРА ) в  Platinum 4V. Отсканируйте или введите 
штрих-код в поле позиции буфера, совпадающий с позицией буфера.
7. Когда V8 будет готов для обработки образцов, на инструменте начнет мигать красны й 
индикатор.
8. Поместите пробирки с первичными образцами в  подставку для образцов и  убедитесь, что 
штрих-код четко в ьаден  через окош ечко в  подставке (см. руководство пользователя).
9. Установите подставки для образцов на левую половину транспортной области V8 и  закройте 
к р ы ш к у, к а к  описано в  руководстве пользователя.
10. V8 автоматически начнет анализ всех загруженных образцов, и  результаты будут 
передаваться в  Platinum  4V.
11. После анализа и  при необходимости запустите режим прекращения работы V8, вы клю чив 
инструмент, к а к  описано в руководстве пользователя.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
А то время к ак  существует до 8 изоформ трансферрина в зависимости от числа остатков сиаловой 
кислоты, связанной с молекулой, у здоровых людей чаще всего встречается тетрасиало-изоформа 
('■85%  всего трансферрина), за которым следуют пенсиало- (-10%) и  трисиало-изоформы (-3%). 
М олекулы трансферрина, дефицитные по углеводам (Т Д У ) (дисиало, моносиало и  асиало-) обьмно 
присутствуют в количествах меньше 2%  от всего трансферрина.
Интерпретировать полученные результаты следует с учетом клинической картины  и  анамнеза. 
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для верификации всех стадий процедуры анализа Т Д У  можно использовать контрольные образцы 
сыворотки Helena Biosciences CD T Serum Controls (кат. № 803200 и  803300). Соответствующие 
показатели приведены во вкладыше к  упаковке.
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА
В  компании Helena Biosciences определены следующие характеристики, которые можно  
использовать к а к  справочные. В  каждой лаборатории необходимо установить собственные 
характеристики метода.


--- стр. 261 ---
Точность;
Воспроизводимость в 
пределах одного 
анализа(л = 30)
Воспроизводимость между 
анализами (п = 300)
Во^ммзводимость между 
р а ^ ^ и  партиями (п = 3) 
(N  = 30)
Среднее Коэффициент Среднее Коэффициент Среднее Коэффициент
значение
( % )
вариации (% ) значение
(% )
вариации (% ) значение
(% )
вариации (% )
П е н т а с и а л о -1 0 2 , 1 1 0 2 , 1 1 0 2 . 1
Т е т р а с и а п о -8 5 1 . 8 8 5 1 , 8 8 5 1 , 8
Т р и с и а л о - 3 2 , 3 3 2 , 3 3 2 , 3
Дис и а л о - 2 1 , 9 2 1 , 9 2 1 . 9
Чувствительность:
Метод V-К Э  Т Д У  может выявлять отдельные изоформы трансферрина при концентрациях___м кг/м л.
Достоверность:
Сравнение с коммерческим методом определения ТДУ с помощью колоночной хроматофэфии дало 
следующий результат:
у = 0,9999+ 0,313^ = 0.888
ЛИТЕРАТУРА
1. De Jong, G . and van E ijk , H .G., ‘ Functional Properties of the Carbohydrate M oiety of Human 
T ransferrin', In t. J. Biochem., 1989; 21: 253-263.
2. G iblett, E.R., The Plasma Transferrins [Review]’ , Prog. M ed. genet.’  1962; 2; 34-36.
3. van N oort, W .L . and van E ijk  H .G., ‘  Seperation of Hum an Serum and Cerebrospinal Fluid 
Transferrins in  Subfractions by Isoelectric Focusing w ith Phast System and Quantitations w ith 
Vetroscan X L  Densitometer’  Sci. Tools, 1992; 36:1-6.
4. Am dt, T . ‘ Carbohydrate-Deficient Transferrin as a M a rin er of Chronic AJcohol Abuse: A C ritical Review of 
Preanalysis, Analysis, and Interpretation.’  C lin. Chem. 2001; 47:13-27.
5. B ortolotti. F ; De Paoli, G ; Tagliaro, F. ‘ Carbohydrate-Deficient Transfen-in (CDT) as a M arlter of Alcohol 
Abuse: A  C ritical Review of Literature’ . 2001-2005. J. Chromatogr. B . 2006;841:96-109.
6. Stibler, H . Carbohydrate-Deficient Transferrin in  Seaim: A New M arker of Potentially H am n ful Alcohol 
Consumption Reviewed.' C lin. Chem. 1991;37 (12):2029-37.