Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения трийодтиронина в сыворотке крови человека ("ТироидИФА-трийодтиронин") по ТУ 9398-231-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12292 от 18.11.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Общий трийодтиронин (ТТ3) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 91 контракт, медианная цена за единицу 40 535 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора
от 20 г. №
Г енер^ьныйгдиректор 
O0Q?«|CoMnaHH^ Алкор Био» 
1й>фев М.В.
«1Я » апреля 2011 T v : i
\*''S^^P3nv"\ . а ч  Ltd. '
^^'Петепб'!^^--
ИНСТРУКЦИЯ n o  ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ 
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ТРИЙОДТИРОНИНА  
в  СБШОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«Т ироидИФ А-трийодтиронин»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТироидИФА-трийодтиронин» предназначен для количест­
венного определения трийодтиронина (далее Тз) в сыворотке крови человека методом твер­
дофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Трийодтиронин (3,5,3'-трийодтиронин, Тз) -тироидный гормон с молекуляр­
ной массой 651 Да. Трийодтиронин является одним из гормонов, синтезируемых щитовид­
ной железой. Количественное определение уровня трийодтиронина в крови имеет диагно­
стическое значение при оценке функционального состояния щитовидной железы.
1.3. Набор «ТироидИФА-трийодтиронин» рассчитан на проведение анализа в дуб­
ликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и од­
ной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
Стрипов одновременно (всего 96 определений).
П рим ечание: в случае дробного применения набор может быть использован только  
в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
В наборе «ТироидИФА-трийодтиронин» использован вариант конкурентного твер­
дофазного иммуноферментного анализа. При добавлении в лунки раствора АНС-Тз, ис­
следуемого образца и конъюгата Тз-пероксидаза, во время инкубации устанавливается 
равновесие между конъюгатом и эндогенным Тз съторотки крови в процессе связывания с 
антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связанного антитела­
ми конъюгата обратно пропорционалъно количеству Т з в исследуемом образце (P h c j t io k 1).


--- стр. 2 ---
(V
i
Планшет с
Конъюгат ТЗ-пер оке ид аз а
антителами к ТЗ
Эндогенный ТЗ 
конкурирует с конъюгатом 
за связывание с антителами
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна количеству связанного антителами конъюгата 
Тз-пероксидаза. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании 
калибровочного графика рассчитывается концентрация Тз в исследуемых образцах.
2.2. Состав набора
- комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к Тз, маркирован «Стри­
пы с моноклональными антителами к трийодтиронину» —  1  упаковка;
- калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества Тз. Флаконы мар­
кированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная про­
ба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба 
№6»; точные значения концентраций Тз в калибровочных пробах указаны на этикетках фла­
конов, ориентировочные -  0; 0,5; 1; 2; 4; 12 нмоль/л -  6 флаконов (лиофилизованные препара­
ты или жидкости по 0,5 мл);
конъюгат Тз-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» -  1  флакон (14 мл); 
раствор 6-анилинонафтил-1-сульфокислоты, маркирован «АНС-Тз» -  
1  флакон (14 мл);
концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» -  1  флакон (14 мл);
раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» -  1  флакон (14 мл); 
стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» -  1  флакон (14 мл); 
контрольная сыворотка с известным содержанием Тз, маркирована «Кон­
трольная сыворотка» -  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. А Н А ЛИ ТИ ЧЕСКИ Е И Д И А ГН О С ТИ ЧЕС К И Е Х А РА КТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Перекрестная реакция антител к Тз с другими тироидами приве­
дена в Таблице 1.
J


--- стр. 3 ---
Таблица 1
Тироид Перекрестная реакция, %
L -трийодтиронин 100
L-Тироксин 0,01
L- Дийодотирозин 0,001
3.2. Коэффициент вариации результатов определения Тз в одном и том же образ­
це сыворотки крови человека с использованием набора «ТироидИФА-трийодтиронин» не 
превышает 8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации Тз в образцах сьшоротки крови при раз­
ведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапазоне концентраций ка- 
либровочньк проб №2 - №6 и составляет 90-110%.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «откры­
тие» Тз —  проверка соответствия значения определяемой концентрации Тз расчетной ве­
личине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калиб­
ровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110 %.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация Тз в анализируемом образце не превышает 0,25 нмоль/л.
3.6. Диапазон ожидаемых значений. Содержание Тз измеряли в сыворотке крови, 
взятой с 9 до 11 часов у 120 здоровых лиц в возрасте 21— 45 лет. Диапазон измеренных кон­
центраций составил 1,0 -  2,8 нмоль/л.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой 
причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем 
значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены диапа­
зоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте расположения 
лаборатории.
Примечание: в наборе «ТироидИФА-трийодтиронин» значения концентраций ка­
либровочных проб выражены в нмоль/л. Для пересчета концентраций трийодтиронина в  
нг/мл необходимо значение концентрации в нмоль/л умножить на 0,651.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора— класс 1.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич­
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- 
реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количе­
ством проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пласти­
ковые перчатки, т.к. производные крови, входягцие в состав набора, и исследуемые образ­
цы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время 
сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.


--- стр. 4 ---
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального еканирования, позволяющий измерять опти­
ческую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), по­
зволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре 
+37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с 
изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, 
позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерятъ 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не разрешается использовать плазму крови, гемоли­
зированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликво- 
тировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С  и ниже. Не до­
пускается повторное замораживание образца.
1‘
7. П РО ВЕДЕН ИЕ АНАЛИЗА
7.1. П одготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использо­
ванию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыво­
ротки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к 
стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми 
на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыво­
роткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флако­
ны в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно 
наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая 
пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной 
температуре, периодически перемещивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип составляет


--- стр. 5 ---
1,15 мл.
7.1.4. Раствор АНС-Тз готов к использованию. Расход раствора АНС-Тз на один 
стрип составляет 1,15 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера Р развести дистилли­
рованной водой в 20 раз.
Например:
5 мл Буфера Р + 95 мл диетиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип со­
ставляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемешаны 
и доведены до комнатной температуры.
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. П остановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
А1, А2 -  № 1  -  для измерения величины оптичеекой плотноети раетвора ТМБ;
В 1, В2 -  № 2 -  для измерения величины оптической плотности КП №1;
С1, С2 -  № 3 -  для измерения величины оптической плотности КП №2;
D1, D2 -  № 4 -  для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1, Е2 -  № 5 -  для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 -  № 6 -  для измерения величины оптичеекой плотности КП №5;
G1, G2 -  № 7 -  для измерения величины оптической плотности КП №6;
Н1, Н2 -  № 8 -  для измерения величины оптической плотности контрольной сыво­
ротки.
7.2.2. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки в дубликатах, в оставшиеся лунки - по 50 мкл исследуемой сыворотки кро­
ви в дубликатах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным резуль­
татам.
7.2.3. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл раствора АНС-Тз.
7.2.4. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл конъюгата.
7.2.5. Инкубировать стрипы при встряхивании в течение 60 минут в термостати- 
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.6. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси водо­
рода) и промыть лунки четыре раза. При каждой промывке во все лунки добавить по 300 мкл 
промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку на шейкере в тече­
ние 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантирования 
тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в пере­
вернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства.
7.2.7. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в зави­
симости от степени развития окраски.
7.2.8. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как 
и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать 
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.


--- стр. 6 ---
il
7.2.9. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.8.,  то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать  
пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра  
необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОП.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лунках 
при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности в 
лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: среднее арифметическое значение среднее оптической плотности в  
лунках А1 иА2 не должно превышать 0,09 ед.ОП при 450 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от
концентрации Тз в калибровочных пробах (нмоль/л) (Рисунок 2). Внешний вид графика 
зависит от способа преобразования осей.
Примечание 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется использо­
вать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге не­
обходимо пользоваться формулой 1 или 2.
Если программа фотометра позволяет вычитать величину оптической плотности  
в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок, то для рас­
четов для каждой калибровочной или исследуемой пробы использовать формулу:
B/Bixl00%, (1)
где В -  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содер­
жащих калибровочные или исследуемые пробы;
В] -  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содер­
жащих калибровочную пробу №1.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности  
в лунках А1 иА2, то использовать формулу:
(В-Вт)/(В,-Вт)х100%, (2)
где
Вт— среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2.
9.2.  Определить содержание Тз в пробах по калибровочному графику.
9.3. Для образцов сыворотки крови со значениями оптической плотности выше оп­
тической плотности нулевого калибратора (Bi) принимать значение концентрации «ниже 
0,25 нмоль/л».
9.4. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации Тз, пре­
вышающих номинал КП №6, не допускается. При наличии таких случаев принимать зна­
чение концентрации исследуемого образца «выше концентрации КП №6».
€