Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения антигена ВИЧ-1 р24 (ИФА-ВИЧ-1-АГ-ФАКТОР) по ТУ 9398-002-69721380-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
т
тт
i'
УТВЕРЖДЕНА ; *
Приказом Росздравнадзора
от 2012 г. №’ i
УТВЕРЖДАЮ
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для
имл«уноферментного количественного определения
I антигена ВИЧ-1 р24
(ИФА-ВИЧ-1-АГ-ФАКТОР).
НАЗНАЧЕНИЕ. •I.
Набор предназначен для исследования сыворотки или плазмы крови человека на
наличие антигена ВИЧ-1 р24 методом иммуноферментного анализа. i
Набор рассчитан, в зависимости от комплектации, на проведение 96, 1 9 2 ? - или 48Q
анализов. '
I
ПРИНЦИП АНАЛИЗА.
>
■ iк
;г
I.
I
Принцип анализа основан на методе твердофазного ИФА в «сэндвич» варианте с
использованием биотин-стрептавидинового усиления специфического сигнала, г
В составе иммуносорбента используются мьппиные моноклональные | антитела
(МКАТ) к антигену ВИЧ-1 р24. f
Конъюгат №1 состоит из смеси биотин и лированных МКАТ к ВИЧ-1 р24.
При внесении в лунки планшета образцов сывороток (плазм) ВИЧ-инфиц|йрованной
крови и конъюгата №1 ат1[1иген ВИЧ-1 р24, в случае его нaли^шя, связывается с МКАТ к
ВИЧ-1 р24 в составе йм 1Йуносорбента и биотинилированного конъюгата!;' образуя
комшексы антиген-антитело. Образовавшиеся ' иммунные ' комплексы выявляют
пероксидазным конъюгатом стрептавидина (конъюгат №2),
После отмывания ие^свзЬанных компонентов в лунки добавляют раствор проявителя.
Пероксидазную реакцию ос^авливают, добавляя стоп-реагент, и измеряют ойтическую
плотность смеси в лунках''пАаншета при двухволновом режиме (основной фшргр- 450нм.,
референс фильтр - в диапазоне 620-650 нм.). Оптическая плотность пропорциональна
концентрации антигена ВИЧ-1 р24 в образцах сыворотки или плазмы крови.
Чувствительность тест-системы при использовании Международного стандарта
антигена р24 НГ/-1 (N1BSC, код 90/636) составляет 0,4 МЕ/мл, антигена р241 ^ -1 (АВ1,
USA) - 1 пкг/мл, при 1'естировании «Стандарта АГ(+) ВИЧ-1 р24-МБА» (код K lEF А014,
lot 1211/011)-8 пкг/мл.
В Е Р Н А
--- стр. 2 ---
;v...
■ ■ 'Г
ш т ш т
т г
t 'i
' \ ?
СОСТАВ НАБОРА;
г :1
Компонент
Еммувосорбеит « ,
Полистероловый плшшег, в лужах которого
сорбированы моноклональныеантитела к
аздигену р24 ВИЧ-1
Ю >й;аевтрат конъюгата № 1 (}1х)
Биотиинлирсванные антитела, к ,1ан тягвну р24
ВИ Ч-1. Синяя слегка опйлесцирующая
жидкость
___________$ ■ -______________
Концентрат конъюгата №2 (1 It)
Стрептавидин, конъюгированный с
лероксидазой хрена. слегка
ош ш ею вдрую щ ая жидкость
Положительный контро.1ь
Очищенный антиген р24 j В И Ч -1 в
концетрации 16 пкг/мл '(откалиброван
опгноситвльно антигена р24 H 1V -I ,А В 1, U SA).
Светло-желтая слегка опалесцирующая
жидкость
Отрицательный контроль j ,
Инаюгивированная сыворотка крови человека,
не содержащая an t и ген ; р24 ВИЧ-1,
поверхностный антиген вйр> Ф а гепатита В
(HBsAg), антитела к ВИЧ-| и 1 ВИЧ-2, вирусу
гепатита С и Treponema IpaiU dum . > Светло-
желтая слегка опалесцирующая жидкость
Концентрят промывочного раствора (2бх)
Конце1прат фосфатно-солеёого буфера,
содержит детергеьгг.- Бесцвепсая
опалесцирующая жидкостц допускается
расслоение и выпадение кристаллического
осадка. котх)ры й растворяется ври нагревании.
Раствор для разведения конъюгата № 1
Фосфатно-солевой буфер, содержит детергент,
казеиновую фракцию белков молока, блок-
компоненты, краситель и консерванты.
Синяя опалесцирующая ждЦк^сть
Раствор для разведения {фн-^гата №2
Фосфатно-солевой буфер, содержит детергент,
краситель и консерванты. ^
опалесцирующая кидкость_________
ТМБ^субстрат
3,3’,5,5’-тетраметилбензидин, в растворе,
содержащем перекись водорода.
П роарйачная .бесцветная жидкость
____________
Стон-реагент
Раствор серной кислоты.
Прозрачная бесцветная жидкость. ________
Клейкая пленка i______________
480
анализов
2x2 м л
]х7 м л
2x2 м л
1x9 м л
2x140 м л
1x40 м л
1x70 м л
1 хб О м л
1x60 м л
15 п гг.
192
анализа
1x1,4 м л
2x1,5 мл
2x1,5 мл
1x7 мл
1x140 м л
1x14 мл
1x30 мл
1x28
1x28 м л
анагтзьв
1
■
.‘ i
2xlJ м л
м л
) ! ■
liclS мл
I
6 шт. I
Ш т '
--- стр. 3 ---
V I „; ' ч -Ц ' ■ ■
ОБОРУДОВАНИЕ и РЕАГЕНТЫ; ' |
- фотоКсетр вертикального сканирования, позволяющий проводить изм<^ния *
оптической плотности в лунках планшета при двухволновом режймё (основной фильтр-
450нм., референс фильтр - в диапазоне 620-650 нм.); ' |
- вода дистиллированная; ? '
- дезинфицирующие средства, не оказьгаающие негативного воздействия на качество
ИФА (комбинированные средства на основе ЧАС, спиртов, третичных аминов);
; - спирт этиловый, 70°; . .
- вата гигроскопическая; 4
- бумага фильтровальная;
- пипетки одноканальиые (5-40,20-200,200-1000 мкл) и наконечники к ним; .
- пипетки 8-канальные (50-300 мкл) и наконечники к ним; |
_ “мерныйстакан или цилиндр (1000 мл);
® , - ванночки для реагентов;
' ' - флаконы для реагентов, 20 мл; ;
f ' - термостат суховоздуппдай на температуру (42±2)‘’С;
- аппарат для промывания фашпетов (вошер);
- контейнер для твердых за^язненных отходов; '
- когггейнер для 3ari)«:iHeSHiix мсидкостей.
МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАБОРА. |
1. Работу следуегг проводить в специально оборудованном помещении лабо{^рии.
2, При работе с набором необходимо использовать индивидуальные средства защиты:
халат, головной убор, речиновые или пластиковые перчатки, специальная обувь» защитные
очки или щиток), так как образцы сыворотки или плазмы крови следует рассматривать
как потенциально инфицированный биоматериал.
3, Все промывные растврры собираются в специальный контейнер и рбраб{йгываются
дезинфицирующими средстюми, разрешенными для применения йа территории РФ й
установленном порядке, в концентрации и с экспозицией, указашгых в инструкШ ам гх к
применению. ^ i
4, Все твердые отходы собираются в специальный контейнер, обезз£фазюгааЮ тся и
утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1,7.2790*^10 (<Ошитарйо-
эпидемиологические фебования к обращению с медицинскими отходами». |
5. Лабораторная посуда многоразового использования и расходные материалы,
контактирующие с исследуемыми и контрольньпк 1и образцами, обеззараживаются с
использованием дезинфицирующих'средств, не содержащих активный кислород и хлор,
оказывающих негативное воздействие на качество ИФА.
6. Инструменты, оборудование, а также рабочие поверхности столов необходимо
протирать 70° раствором этилового спирта.
П РАВИЛА РАБОТЫ С ТЕСТ-СИСТЕМОЙ. j
1. Не использовать набор после окончания срока годности.
2. Не смешивать компоненты наборов разных серий. й
3. Тщательно перемешивать реш^нты при подготовке и проведении аиализй.
--- стр. 4 ---
------■... ' ■ ' ........
I
4 '■ ■
M \
4. Использовать для прш'отовления реагентов химически чистую * посуду»
обработанную дистиллированной водой. I
5. Не допускать выс ыхания Лунок на всех этапах постановки ИФА. , . г|
6. Использовать только оборудование, прошедшее метрблогическую поверку. :
7. Исключить прямое воздействие солнечных лучей на планшет во время проведения
I j3 ; , 8. Не допускать присутствие паров перекиси водорода и хлора в помещении-при
' ■ ' проведении ИФА.
ТРЕБОВАНИЯ к ПРОМЫВКЕ.
Процедуру промывки необходимо выполнять в соответствии с требованиями
инструкции. Некачественное промывание планшета может привести' к получению
некорректных результатов. |
Промывку планшета рекомендуется проводить с использованием вошера. В случае
отсутствия вошера допускается промывка лунок 8-канальной пипеткой.
При каждой промывке необходимо вьшолнить следующие операции: |
- полностью удалить содержимое лунок;
- полностью заполнитъ лунки промывочным раствором (не менее 350 мкл в луШ су), без
переполнения и перетекания жидкости в соседние лунки; *
-выдержать лунки с промьтвочным раствором в течение 40-60 секунд; (
- полностью удалить раствор! из лунок. ''
На поверхности р ^1мки' и, стрипов после последней аспирации не Д О Л Ж Н О быть
остатков жидкости. Удалить остатки жидкости, перевернув планшет и йосхукивая
планшетом по фильтровальной бумаге.
■J . i
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ. !
Образцы сыворотки или йлазмы крови можно хранить при температуре 2 ^ С не
более 72 часов. Допускается замораживание образцов (желательно до температуры аиаке -
20“С) не более двух раз. Необходимо осветлять образцы сыворотки (плазмй), которые
содержат агрегаты и осадок, с помощью центрифугирования.
Образцы с азидом натрия, гемолизом, гиперлипидемией или бактерйшп>ньш
проростом не пригодны для анализа. ■
^ ''I ■ '
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ. I
i,.v> . I ■ , ,
г ■ Компоненты набора и анализируемые образцы крови должны бьпъ выдержайы гфН
комнатной температуре (18-25)°С в течение не менее 30 минут до начала а н ^ з а и
оставаться при указанной температуре в течение постайовки анализа.
После использования компоненты набора следует хранить при температуре (2г8)“ С.
А I Иммуносорбенпи 1
: . ‘ ' I ' - I
Извлеките необходимое количество стрипов ^ из упаковки, вставьте их в рамку.
Неиспо;п>зованные стрнпы можно хранить в плотно закрытом пакете при температуре
(2-8)°С не больше 30 дней. |
--- стр. 5 ---
«1 S ' -f»'
Л , ■
■ n - ^
w
II
Промывочный раствор.
■ ■ - : ' i
. 4
■ ':^
Содержимое одного флакона концентрата промьшочного раствора интенсивно
взболтайте. Если концентрат раствора содержит кристаллы, tqjpipeftre его при
температуре 37°С до полного растворения кристаллов. Разведите концентрат раствора
(26х) дистиллированной водой согласно таблице, перемешайте.
Количество
лунок
г— г --------------------------------
/Дистиллированная вода, мл
................................У |. у . е а т » 1 > й
Концентрат промв(арШ 1!11^
раствора, M ?i;
8 ...............175
16 275
32 375 ....................м - 1
температуре (2-8)“С.
- ■ И -
Раствор конъюгатам 1.
Разведите в чистом флакове концентрат конъюгата №1 (Их) раствором для
разведения конъюгата №1 согласно таблице. Тщательно перемешайте, не дойуЬкая.
Количество ’аствор для разведения Концентртт к о Е й У й
' лунок 1 конъюгата №1, мл МХЛ
8 Г""' 0,5
16 1 100
32 " ' 2 200
Раствор готовят непосрвдСйпвенно перед использованием, остатки
■ t
1
i Раствор конъюгата М 2.
Разведите в чистом флаконе концентрат конъюгата № 2 (Их)
■I
для
конъюгата № 2 согласно таблице.'Тщательно перемешайте;
аШообразования. I I ...............
Количество
лунок
* 1*аствор для разведения
конъютга > fe2, мл
8 1 рШ м
16 2
32 4 АШ : %:
Раствор готовят непосредствеш1о перед использованием, остатки pacTBOjAlae
Ч
Л - :
--- стр. 6 ---
’ I, '' I ■
' V , ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА. . 4
h i-' , - - i
. ^ • Подготовьте планшет с необходимым количеством лунок. '
• Подготовьте пять двукратных разведений положительного ко*^троля.‘ Д м этого в
лунки В1, С1, D1, Е1 внесите по 100 мкл отрицательного контроля. В лунки А1 и В1
добавьте по 100 мкл Положительного контроля. Далее выполните двуфатное
титрование положительного контроля отрицательным' контролем, перенося по 100
мкл из лунки В1в С1, из 01 в D1, из D1 в Е1. Из лунки Е1 lO O м:кл содержимого
удалите. Перед каждым Переносом содержимое лунок перемешайте пипетированием.
Конечная концентрация антигена ВИЧ-1 р24 в лунках А1, В1, С1, DI, Е1 - 16, 8, 4,2,
1 пкг/мл, соответственно.
• В лунку F1 внесите 100 мкл отрица-гельного контроля. В остальные лунки внеситепо
100 мкл исследуемых сывороток (плазм).
• Внесите в лунки поверх исследуемых и контрольных образцов по 50 мкл раствора
I конъюгата № 1 в рабочем разведении. <
• Перемешайте содержимое лунок при малой амплитуде встряхивания в течение 15*20
секунд. I
• Закройте планшет клейкой пленкой или крьипкой и инкубируйте при температуре
(42±2)®С в течение 60 минут.
• Промойте nnaHme-i' 6 раз промывочным раствором (так, как это описано в разделе
Требованш к промывке).
• Внесите в лунки по 100 мкл )эаствора конъюгата № 2 в рабочем разведении. v l
• Накройте планшеа клейкой пленкой или крышкой и инкубируйте при
температуре (18-25®С) в течение 30 минут. I
• Промойте планшет 6 раз промывочным раствором.
• Внесите в лунки по 100 мкл ТМБ-субстрата.
• Накройте планшет клейкой пленкой или крьшпсой и инкубируйте при комнатной
температуре (18-25” С) в темном месте в течение 30 минут.
• Внесите в лунки по 1 00 мкл стоп-реагента для 0ста1 1 0вки цветной реакции (в той же
последовательности внесения, что и ТМБ-субстрат).
I • Не более чем через 5 минут после остановки цветной реакции измерьте оптическую
плотность в лунках в двухволновом режиме (основной фильтр - 450 йм,, рефере^с
фильтр - в диапазоне 620-650 нм). Визуальный учет результатов не допускается
УЧ ЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
■ - ^ 'I , i...
Рассчитайте среднее значение оптической плотности (СП) отрицательного контрсмм -
О Кср. I
Исключите значение ОК, которое больше О Д либо в 2 раза отличается от О К ер, |
Рассчитайте О К«р по оставшимся значениям.
Проведение анализа считают достоверным, если О Кср не больше 0,1, а ОП ^
положительного контроля с к о н ц е н т р а ц и е й 16 пкг/мл не меньше 1,0.
Рассчитайте граничное значение (ГЗ), прибавляя константную величину к О К < р . ГЗ =
ОКср+ 0,1.
Результат анализа статается отршхательным, если ОП исследуемого образца меньше
ГЗ. ^ ,
•1 '
--- стр. 7 ---
■ ■
..л - -f'
Результат анализа считаегся положительным, если ОП исследуемого образца больше
ГЗ. г .
Для количественного анализа полученных результатов исследования щ н ^ ч и е
антигена ВИЧ-1 р24 постройте калибровочный график, откладывая на оси Y зйИвния
оптической плотности шеста контролей (отрицательного и пяти положит^ньчс), ааа
оси X - соответствующие им концентрации антигена ВИ Ч-1 p24i j '
Используя построенный калибровочный график, определите кощ ен4>»ЧИК>
антигена ВИЧ-1 р24 в каждом исследуемом образце согласно полученному значению
оптической плотности. ‘ А
I : : i
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА.
Хранение и транспортировка наборов должны производиться при температуре (2-8)® С
в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допуокается
хранение наборов при темп^5атуре 21-28“ С в течение 3 суток. Замораживание
компонентов набора не допускается. ;
Срок годности набора - 12 месяцев. |
Промывочный раствор, приготовленный для использования, можно при
температуре 2-8° С не более 10 дней. ^
Приготовленные для использования растворы конъюгатов № 1 и № 2
подлежат.
Остальные компоненты набора можно хранить при температуре 2-8® С
срока годности набора. Для получения надежных результатов необходимо
соблюдение инструкци и по применению набора. '
По вопросам, касающимся качества набора ИФА-ВИЧ-1-АГ-ФАКТОР, следует
обращаться в ООО «Фактор-Мед Продакшн» по адресу;
119334, г. Москва, 5-ый Донской п-д., д, 15, тел/факс (495) 661-70-82. ^
«СОГЛАСОВАНО» Инструкцию составил:
1
ГАУЗ КО «Калужский областной
Центр по профилактике и борьбе
со СПИД и инфекционными заболева
ниями»
а' и . ^ Мухина
Зав. производством |
ООО «Фактор-Мед ПродашЁ^
— “Г:
• J
' I':,".;:::,
i I .
V '
% I
i , S. 1 '
f
i
i i
--- стр. 8 ---