Набор реагентов для качественного иммуноферментного определения антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотке и плазме крови человека («ВичИФА-анти-HIV-1,2») по ТУ 9398-225-98539446-2010 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Приказом Росздравнадзора Генеральный директор от« » 20 г. № _________ Алкор Бис» Швырев М.В. ноября 201 Or. Алкор Био" "Alkor В^о aC V /'^ 7 - - Пг;ТйР '; ! .> ,. ■ «УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ» ИНСТРУКЦИЯ п о ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ А Н Т И Т Е Л К В И Р У С У ИМ М УНОД ЕФ ИЦИТА Ч ЕЛ О ВЕК А В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (« В и ч И Ф А -а н т и -Н 1 У -1 ,2 » ) 1. Н А З Н А Ч Е Н И Е 1.1. Набор реагентов «ВичИФА-анти-Н1У-1,2» предназначен для качественного определения антител к ВИЧ-1,2 в сыворотке и плазме крови человека методом твердофаз ного иммуноферментного анализа. 1.2. ВИЧ-инфекция представляет собой медленно прогрессирующее инфекцион ное заболевание, возникающее вследствие заражения вирусом иммунодефицита человека. Вирус иммунодефицита человека относится к семейству РНК-содержащих ретровирусов. Описаны 2 типа вируса - ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Источником инфекции являются инфицирован ные люди - больные СПИДом и «вирусоносители». Вирус передается при половых кон тактах, переливании зараженной крови и ее препаратов, повторном использовании инфи цированного медицинского инструментария. Возможен также вертикальный механизм не- редачи возбудителя (трансплацентарный). Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3 месяцев после за ражения, у 5-9% - через 6 месяцев от момента заражения, и у 0,5 - 1 % - в более поздние сроки. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ- инфекцию» сыворотки, дающие воспроизводимо положительный результат на наличие антител к ВИЧ-1,2, должны быть проверены с использованием подтверждающего метода (иммунный блот) или группы подтверждающих методов, включая иммунный блот. 1.3. Набор «ВичИФА-анти-Н!V-1,2» выпускается в двух вариантах комплектации. Комплектация на 96 определений рассчитана на проведение анализа в дубликатах 44 неизвестных проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно. Комплектация на 192 определения рассчитана на проведение анализа в дубликатах 88 неизвестных проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно. 1 --- стр. 2 --- О братите вни м ани е, что определение оптических плотностей контрольных проб и раствора ТМБ в соответствии со схемой маркировки лунок ( п. 7.2.1.) обязательно на каж дом планшете. Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован только в течение месяца после вскрытия компонентов набора. % 2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А 2.1. П р и н ц и п действия В наборе «ВичИФЛ-анти-ШУ>1,2» использован «сэндвич» - вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы рекомбинантный антиген ВИЧ-1 (gp41) и рекомбинантный антиген ВР1Ч-2 (gp36), которые иммобилизованы на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок) и конъюгированы с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата gp41-gp36-nepoKCHAa3a во время инкубации одновременно происходит иммобилизация антител к ВИЧ-1,2, содержащихся в ис следуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с конъюгатом. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой (Рисунок 1). Антитела к ВИЧ-1 Планшет с антигенами gp41 и gp36 < y \ > # Конъюгат gp41-gp36-пepoкcидaзa Антитела к ВИЧ-2 Р и сун о к 1. С хем а анализа Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству антител к ВИЧ-1,2 в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках их сравнивают со зна чением ОПкрит. Положительными считают образцы со значением оптической плотности равным или превышающим значение ОПкрит. Отрицательными считают образцы со зна чением оптической плотности меньшим, чем значение ОПкрит, 2.2. С о ста в набора • комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизо ванными на внутренней поверхности лунок рекомбинантными антигенами ВИЧ-1,2, маркирован «Стрипы с рекомбинантными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2» -1 упаковка или 2 упаковки, в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1); 2 --- стр. 3 --- • отрицательная контрольная проба (ОКП), не содержащая антитела к ВИЧ- 1,2. Флакон маркирован «Отрицательная контрольная проба» - 1 флакон или 2 флако на, в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жид кость, 0,8 мл) (Таблица 1) • ВИЧ-1 положительная контрольная проба (ВИЧ-1 ПКП), содержащая анти тела к ВИЧ-1, Флакон маркирован «ВИЧ-1 положительная контрольная проба» - 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1); • ВИЧ-2 положительная контрольная проба (ВИЧ-2 ПКП), содержащая анти тела к ВИЧ-2. Флакон маркирован «ВИЧ-2 положительная контрольная проба» - 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1); • конъюгат gp41-gp36-nepOKCHfla3a, маркирован «Конъюгат Е» — 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жидкость, 7 мл) (Таблица 1); ф • водно-солевой раствор для разведения конъюгата, маркирован «Буфер Е» (при включении в набор лиофилизованного конъюгата) — 1 флакон или 2 флакона, в за висимости от варианта комплектации (9 мл) (Таблица 1); • аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» - 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (7 мл) (Таблица 1); • концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркиро ван «Буфер Р» — 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1); • раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1); • стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1 флакон или 2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1); • прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- слойного полиэтилена) - 1 шт. или 2 шт., в зависимости от варианта комплектации ^ (Таблица 1). --- стр. 6 --- 6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е О Б Р А З Ц Ы 6.1. Забор Крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для получения плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт. После центри фугирования сыворотку или плазму переносят в отдельную пробирку. 6.2. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную или мутную сыворотку и плазму, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия. 6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрешается хранить при температуре +2...8®С не более 2 дней; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца. 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1. Подготовка реагентов 7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку необходимое количество стрипов. 7.1.2. Жидкие контрольные пробы готовы к использованию. Для восстановления лиофилизованных контрольных проб перед вскрытием флако нов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. Во флакон с лиоФ илизованной отрицательной контрольной пробой внести 0.8 мл дистил- лированной воды, во Флаконы с лиоф илизованны м и В И Ч -1 полож ительной контроль» ной пробой и В И Ч -2 полож ительной контрольной пробой внести по 0.5 мл дистиллиро- ванной воды и закрыть крышками. Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, переме шать их содержимое до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следую щих 10 минут вьщержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемеши вая. 7.1.3. Буфер Е готов к использованию. 7.1.4. Жидкий конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип составляет 0,58 мл. Для восстановления лиофилизованного конъюгата перед вскрытием флакона лег ким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенке флакона или к крышке. От крыть флакон и положить крышку перевернутой на сухую поверхность. ВНИМАНИЕ: во флакон с конъюгатом внести 1 мл дистиллированной воды и за крыть крышкой. Выдержать флакон в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флакон, перемешать его содержимое до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут вьщер жать флакон при комнатной температуре, периодически перемешивая. Количественно перенести содержимое флакона во флакон с буфером Е. Тщательно перемешать, избегая пенообразования. Расход конъюгата на один стрип составляет 0,83 мл. 7.1.5. Буфер А готов к использованию. Расход Буфера А на один стрип составляет 0,58 мл. 6 --- стр. 7 --- 7.1.6. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера Р развести дистил лированной водой в 20 раз. Например: 5 мл Буфера Р+95 мл дистиллированной воды Тщательно перемешать, избегая пенообразования. 7.1.7. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.8. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип со ставляет 1,15 мл. 7.1.9. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемеша ны и доведены до комнатной температуры (+18..,25°С). В Приложении 1 приведена схема проведения анализа. 7.2. П о ста н о в к а анализа 7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. В Н И М А Н И Е : схема м а р ки р о в ки и нанесения образцов отличается от стан дартной схем ы . Лунки промаркировать следующим образом: А1 - №1 - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ; А2, В1,В2 - №2 - дня измерения величины оптической плотности ОКП; С1, С2 -№ 3 - д ля измерения величины оптической плотности ВИЧ-1 ПКП; D1, D2 -№ 4 - для измерения величины оптической плотности ВИЧ-2 ПКП. 7.2.2. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 50 мкл Буфера А. 7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл контрольных проб, в оставшиеся лунки по 50 мкл исследуемых образцов в дубликатах. Примечание: общее время внесения контрольных проб и исследуемых образцов не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет значи тельно отличаться, что в конечном итоге может привести к получению неправильного «диагноза». 7.2.4. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 50 мкл конъюгата. 7.2.5. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати- руемом ш ейкере п р и тем пературе +37°С со ско р о стью 500-700 об/м нн. 7.2.6. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во дорода) и промыть лунки 4 раза. При каждой промывке во все лунки добавить по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.6, встряхнуть рамку на шейкере в те чение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в пере вернутом положении по фильтровальной бумаге. Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст ва. 7.2.7. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать стрипы в темноте при комнатной температуре (+18.. .25°С) в течение 20 минут. --- стр. 8 --- 7.2.8. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, пере мешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18...25°С). 7.2.9. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо средственно после выполнения п. 7.2.8., то следует иметь в виду, что окраска в лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18..,25°С. 8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я Р Е З У Л Ь Т А Т О В Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лун ках при длине волны 450 нм. При регистрации результатов необходимо в ы ч и т а т ь величину оптической плот ности в лунке Л1 из значений оптических плотностей всех остальных лунок. Примечание: значение оптической плотности в лунке А1 не должно превышать 0,09 ед.ОП. 9. У Ч Е Т Р Е З У Л Ь Т А Т О В 9.1. Оценить оптическую плотность в лунках, содержащих ОКП, для каждой лунки в отдельности. ОП должна быть не более 0,2 ед.опт.пл. Если значение СП в одной из лунок не удовлетворяет этому критерию, то это значение можно исключить из расчета среднего арифметического значения ОП ОКП. И с к л ю ч и т ь можно то л ько одно значение О П из трех. В случае если кр итер и ю не уд овлетворяю т О П в д вух или более л ун к а х, р езультаты анализа сч и та ю т недостоверны м и и анализ п овторяю т. 9.2. По трем или двум значениям, в зависимости от выполнения условий, описы ваемых в п. 9.1., определить среднее арифметическое значение ОП в лунках, содержащих ОКП. 9.3. Определить допустимый диапазон разброса значений ОП ОКП, для чего ум ножить среднее значение ОП ОКП на 0,6 и 1,4. Сравнить ОП в каждой лунке с расчетным диапазоном. Оптическая плотность каждой лунки, содержащей ОКП, должна попадать в полученный диапазон. Если значение ОП в одной из лунок не удовлетворяет этому крите рию, то это значение можно исключить и повторить операции, описанные в п. 9.2 и 9.3. И скл ю ч и т ь одно значение О П можно то л ько в том случае, если в п, 9.1. ни одно из значений О П и скл ю чено не бы ло, иначе, р е зул ь та ты анализа сч и та ю т недостовер ны м и и анализ п овторяю т. 9.4. Определить среднее арифметическое значение ОП, в лунках содержащих ВИЧ-1 ПКП. Полученное значение ОП должно быть больше 0,4 ед.опт.пл. Если получен ное значение ОП меньше 0,4 ед.опт.пл., результаты анализа считают недостоверными и анализ повторяют. 9.5. Определить среднее арифметическое значение ОП, в лунках содержащих ВИЧ-2 ПКП. Полученное значение ОП должно бьггь больше 0,4 ед.опт.пл. Если получен ное значение ОП меньше 0,4 ед.опт.пл., результаты анализа считают недостоверными и анализ повторяют. 9.6. Определить значение ОПкрит., для чего к среднему значению ОП ОКП при бавить Ккрит. Примечание: Ккрит. - коэффициент, определяемый на предприятии- изготовителе, и указанный в аналитическом паспорте.