Набор реагентов с принадлежностями для качественного иммуноферментного определения антигена р24 и антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотке и плазме крови человека «ВичИФА-НIV-Аг/Ат» по ТУ 21.20.23-226-98539446-2018 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11319 от 13.07.2011 · класс риска 3

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: ВИЧ1/ВИЧ2 антигены/антитела ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 47 контрактов, медианная цена за единицу 25 131 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА» 
Приказом Росздравнадзора
от« » 20 г.№
чй^дВЕРЖДАЮ»
ректор 
р Бис» 
вМ .В . 
2010г.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ 
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АНТИ1таАР24ИАШИГЕЛКВИРУСУ ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«ВичИФА-Н1У-Лг/Ат»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ВичИФА-Н1У-Аг/Ат» предназначен для качественного оп­
ределения антигена р24 и антител к ВИЧ-1,2 в сыворотке и плазме крови человека мето­
дом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. ВИЧ-инфекция представляет собой медленно прогрессирующее ин­
фекционное заболевание, возникающее вследствие заражения вирусом иммунодефицита 
человека. Вирус иммунодефицита человека относится к семейству РНК-содержащих рет­
ровирусов. Описаны 2 типа ~ ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Источником инфекции являются инфици­
рованные люди -  больные СПИДом и «вирусоносители». Вирус передается при половых 
контактах, переливании зараженной крови и ее препаратов, повторном использовании ин-
Ф  фицированного медицинского инструментария. Возможен также вертикальный механизм 
передачи возбудителя (трансплацентарный).
Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3  месяцев после за­
ражения, у 5-9% - через 6 месяцев от момента заражения, и у 0,5 -  1  % >  - в более поздние 
сроки.
Для более ранней диагностики ВИЧ инфицирования (до наступления сероконвер- 
сии) используют тест-системы, которые определяют не только антитела к ВИЧ, но и анти­
ген ВИЧ-1 р24. Р24 появляется в крови через 1-3 недели после заражения и служит ран­
ним маркером инфицирования.
1.3. Набор «ВичИФА-Н1У-Аг/Ат» вьшускается в двух вариантах комплектации.
Комплектация на 96 определений рассчитана на проведение анализа в дубликатах
43 неизвестных проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно.
Комплектация на 192 определения рассчитана на проведение анализа в дубликатах 
86 неизвестных проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно.


--- стр. 2 ---
Обратите вниманисч что определение оптических плотностей контрольных проб и 
раствора ТМБ в соответствии со схемой маркировки лунок (п. 7.2.1.) обязательно на каж­
дом планшете.
П рим ечание: в случае дробного применения набор моэюет быть использован только в  
течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
В наборе «ВичИФА-ШУ-Аг/Ат» использован «сэндвич» - вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы рекомбинантный 
антиген ВИЧ-1 (gp41), рекомбинантный антиген ВИЧ-2 (gp36) и моноклональные антитела к 
антигену р24, которые иммобилизованы на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок) 
и конъюгированы с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и 
конъюгата gp41-gp36-aнrи-p24-пepoкcидaзa во время инкубации одновременно происходит 
иммобилизация антигена р24 и/или антител к ВИЧ-1,2, содержащихся в исследуемом образце, 
и связьгеание образовавшегося комплекса с конъюгатом.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой (Рисунок 1).
Антитела к ВИЧ-1
Планшет
с антигенами 
gp41 и gp36 и 
антителами к 
р24
Конъюгат gp41-gp36“aHTH-p24- 
пероксидаза
Антитела к ВИЧ-2
Рисунок L Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна количеству антигена р24 и/или антител к ВИЧ-
1,2 в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках 
их сравнивают со значением ОПкрит. Положительными считают образцы со значением 
оптической плотности равным или превышающим значение ОПкрит. Отрицательными 
считают образцы со значением оптической плотности меньшим, чем значение ОПкрит.


--- стр. 3 ---
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизо­
ванными на внутренней поверхности лунок рекомбинантными антигенами ВИЧ-1,2 и 
мышиными моноклональными антителами к антигену р24, маркирован «Стрипы с реком­
бинантными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и моноклональными антителами к р24» -
1  упаковка или 2 упаковки в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• отрицательная контрольная проба (ОКП), не содержащая антиген р24 и ан­
титела к ВИЧ-1,2. Флакон маркирован «Отрицательная контрольная проба» -  1  флакон 
или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или 
жидкость, 0,8 мл) (Таблица 1);
• ВИЧ-1 положительная контрольная проба (ВИЧ-1 ПКП), содержащая анти­
тела к ВИЧ-1. Флакон маркирован «ВИЧ-1 положительная контрольная проба» -  1  флакон
^  или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или
жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1);
• ВИЧ-2 положительная контрольная проба (ВИЧ-2 ПКП), содержащая анти­
тела к ВИЧ-2. Флакон маркирован «ВИЧ-2 положительная контрольная проба» -  1  флакон 
или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или 
жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1);
• р24 положительная контрольная проба (Р24 ПКП), содержащая антиген 
ВИЧ-1 р24. Флакон маркирован «Р24 положительная контрольная проба» -  1  флакон или
2 флакона в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или 
жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1);
• конъюгат gp41-gp36-aнти-p24-пepoкcидaзa, маркирован «Конъюгат Е» —
1  флакон или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации (лиофилизованный пре­
парат или жидкость, 7 мл) (Таблица 1);
• водно-солевой раствор для разведения конъюгата, маркирован «Буфер Е»
^  (при включении в набор лиофилизованного конъюгата) — 1  флакон или 2 флакона в зави­
симости от варианта комплектации (9 мл) (Таблица 1);
• аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» - 1  флакон 
или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации (7 мл) (Таблица 1);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркиро­
ван «Буфер Р» — 1  флакон или 2 флакона в зависимости от варианта комплектации 
(14 мл) (Таблица 1);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон или
2 флакона в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1);
• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1  флакон или
2 флакона в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена) -  1  штука или 2 штуки в зависимости от варианта комплектации 
(Таблица 1 ).
2.2. С о с та в  наб ора


--- стр. 4 ---
Таблица 1  Варианты комплектации
Название компо­
нента
96 определений 
(лиофилизо- 
ванный конъю­
гат)
96 определе­
ний 
(жидкий 
конъюгат)
192 определе­
ния (лиофили- 
зованный 
конъюгат)
192 определения 
(жидкий 
конъюгат)
Комплект стрипов 
в рамке 1  шт. 1  шт. 2 шт. 2 шт.
Отрицательная 
контрольная проба 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
ВИЧ-1
положительная 
контрольная проба
1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
ВИЧ-2
положительная 
контрольная проба
1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Р24 положительная 
контрольная проба 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Конъюгат Е 1  фл. (3 мл) 1  фл. (20 мл) 2 фл. (3 мл) 2 фл. (20 мл)
Буфер Е 1  фл. 2 фл.
Буфер А 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Буфер Р 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Раствор ТМБ 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Стоп-реагент 1  фл. 1  фл. 2 фл. 2 фл.
Пакет полиэтиле­
новый закрываю­
щийся
1  шт. 2 шт. 1  шт. 2 шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность. Определяется как доля полученных отрица­
тельных результатов в исследуемых образцах, не содержащих антиген ВИЧ-1 р24 и анти­
тела к ВИЧ-1,2. Диагностическая специфичность набора «ВичИФА-ШУ-Аг/Ат» по ОСО 
42-28-214-02П составляет 100%.
3.2. Диагностическая чувствительность. Определяется как доля полученных по­
ложительных результатов в исследуемых образцах, содержащих антитела к ВИЧ-1,2. Ди­
агностическая чувствительность набора «ВичИФА-ШУ-Аг/Ат» по ОСО 42-28-212-02П и 
ОСО 42-28-216-02 составляет 100%.
3.3. Предел обнаружения антигена ВИЧ-1 р24 с использованием набора «ВичИ- 
ФА-Н1У-Аг/Ат» по ОСО 42-28-375-05 не превышает 25 пг/мл.
3.4. Коэффициент вариации оптической плотности в одном и том же образце сы­
воротки крови человека при определении антигена ВИЧ-1 р24 и антител к ВИЧ-1,2 с ис­
пользованием набора «ВичИФА-ШУ-Аг/Ат» не превышает 8%.
4


--- стр. 5 ---
3.5, Хук-эффект высоких концентраций. В наборах
реагентов, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях ана- 
лита зависимость величины оптической плотности от концентрации становится обратно 
пропорциональной (так называемый хук-эффект высоких концентраций). При использо­
вании набора «ВичИФА-ШУ-Аг/Ат» хук-эффект не был обнаружен.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 3.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р  52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  И раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на кожу 
и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной 
воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пласти­
ковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образ­
цы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время 
сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять опти­
ческую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый щейкер), по­
зволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с 
изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками,
позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-600 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;


--- стр. 6 ---
контейнер для дезинфекции;
ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для 
получения плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт. После центри­
фугирования сыворотку или плазму переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную или 
мутную сыворотку и плазму, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрешается хранить при температуре 
+2...8°С не более 2 дней; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не
^  допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие контрольные пробы готовы к использованию.
Для восстановления лиофилизованных контрольньгх проб перед вскрытием флако­
нов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или к 
крышкам. Открьггь флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. Во 
флакон с лиоФилизованной отрицательной контрольной пробой внести 0.8 мл дистил­
лированной воды, во флаконы с лиоФилизованными ВИЧ-1 положительной контроль­
ной пробой, ВИЧ-2 положительной контрольной пробой и Р24 положительной кон- 
^  трольной пробой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Выдер­
жать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, 
аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворе­
ния, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут вьщержать флаконы при 
комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Буфер Е готов к использованию.
7.1.4. Жидкий конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата на один 
стрип составляет 0,58 мл.
Для восстановления лиофилизованного конъюгата перед вскрытием флакона лег­
ким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенке флакона или к крышке. От­
крыть флакон и положить крышку перевернутой на сухую поверхность.
ВНИМАНИЕ: во флакон с конъюгатом внести 1  мл дистиллированной воды и за­
крыть крышкой. Выдержать флакон в течение 10 минут при комнатной температуре без 
перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флакон, перемешать его содержимое 
до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдер­
жать флакон при комнатной температуре, периодически перемешивая.
6


--- стр. 7 ---
Количественно перенести содержимое флакона во флакон с буфером Е. Тщательно 
перемешать, избегая пенообразования. Расход конъюгата на один стрип составляет 0,83 мл.
7.1.5. Буфер А готов к использованию. Расход буфера А на один стрип составляет 
0,58 мл.
7.1.6. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера Р развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:
5  мл Буфера Р+95 мл дистиллированной воды 
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.7. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.8. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.9. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок.
ВНИМАНИЕ: схема маркировки и нанесения образцов отличается от стан­
дартной схемы.
Лунки промаркировать следующим образом;
А1 -  Х « 1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
А2, В1 , В2 -  №2 - для измерения величины оптической плотности ОКГ[;
С1 , С2 -№3 - для измерения величины оптической плотности ВРГЧ-1  ПКП;
D1 , D2 -№4 - для измерения величины оптической плотности ВИЧ-2 ПКП;
Е1, Е2 - № 5 - для измерения величины оптической плотности Р24 ПКП.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 50 мкл Буфера А.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл контрольных проб, в оставшие­
ся лунки по 50 мкл исследуемых образцов в дубликатах.
Примечание: общее время внесения контрольных проб и исследуемых образцов не  
должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет значи­
тельно отличаться, ч то  в конечном итоге м о ж е т  привести к получению неправильного  
«диагноза».
7.2.4. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 50 мкл конъюгата Е.
7.2.5. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати- 
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-700 об/мин.
7.2.6. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки 4 раза. При каждой промывке во все лунки добавить по 300 мкл 
промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.6, встряхнуть рамку на шейкере в те­
чение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантирования 
тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в пере­
вернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.


--- стр. 8 ---
7.2.7, Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 20 минут.
7.2.8, Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, пере­
мешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18.. .25°С).
7.2.9, Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7,2,8,, то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18...25°С.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лун­
ках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плот­
ности в лунке А1 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: значение оптической плотности в лунке А1 не должно превышать  
0,09 ед.ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Оценить оптическую плотность в лунках, содержащих ОКИ, для каждой 
лунки в отдельности. ОП должна быть не более 0,2 ед.опт.пл. Если значение ОП в одной 
из лунок не удовлетворяет этому критерию, то это значение можно исключить из расчета 
среднего арифметического значения ОП ОКП. Исключить можно только одно значение 
ОП из трех. В случае если критерию не удовлетворяют ОП в двух или более лунках, 
результаты анализа считают недостоверными и анализ повторяют.
9.2. По трем или двум значениям, в зависимости от выполнения условий, описы­
ваемых в п. 9.1., определить среднее арифметическое значение ОП в лунках, содержащих 
ОКП.
9.3. Определить допустимый диапазон разброса значений ОП ОКП, для чего ум­
ножить среднее значение ОП ОКП на 0,6 и 1,4. Сравнить ОП в каждой лунке с расчетным 
диапазоном. Оптическая плотность каждой лунки, содержащей ОКП, должна попадать в  
полученный диапазон. Если значение ОП в одной из лунок не удовлетворяет этому крите­
рию, то это значение можно исключить и повторить операции, описанные в п. 9.2 и 9.3. 
Исключить одно значение ОП можно только в том случае, если в п. 9.1. ни одно из 
значений ОП исключено не было, иначе, результаты анализа считают недостовер­
ными и анализ повторяют.
9.4. Определить среднее арифметическое значение ОП, в лунках содержащих 
ВИЧ-1 ПКП. Полученное значение ОП должно быть больше 0,4 ед.опт.пл. Если получен­
ное значение ОП меньше 0,4 ед.опт.пл., результаты анализа считают недостоверными и 
анализ повторяют.
9.5. Определить среднее арифметическое значение ОП, в лунках содержащих 
ВИЧ-2 ПКП. Полученное значение ОП должно быть больше 0,4 ед.опт.пл. Если получен­
ное значение ОП меньше 0,4 ед.опт.пл., результаты анализа считают недостоверными и 
анализ повторяют.
9.6. Определить среднее арифметическое значение ОП, в лунках содержащих 
Р24 ПКП. Полученное значение ОП должно быть больше 0,4 ед.опт.пл. Если полученное
8