Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения эстрадиола в сыворотке и плазме крови человека ("СтероидИФА-эстрадиол") по ТУ 9398-206-98539446-2010 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Приказом от« » 20 г.№ «УТВЕРЖДЕНА» Росздравнадзора ^ ^ « У Т В Е Р Ж Д А Ю » ""X'' O '' / Г ' \ директор ф ы р е в М . В . v,o ^ о я б р я 2010г. ...■ ' ИНСТРУКЦИЯ п о ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА («СтероидИФА-эстрадиол») L НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов «СтероидИФА-эстрадиол» предназначен для количественно го определения эстрадиола в сыворотке и плазме крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа. 1.2. Эстрадиол - половой С-18-стероидный гормон с молекулярной массой 272,4 Да. Эстрадиол является наиболее активным эндогенным эстрогеном. Он продуциру ется в женском организме в основном яичниками и плацентой, а в мужском, в меньших ко личествах, корой надпочечников и семенниками. Содержание эстрадиола в периферической крови определяют для выявления причин нарушения менструального цикла, при бесплодии, недостаточности функции половых же лез, при подозрении на эстрогенпродуцирующие опухоли. Повышение уровня эстрадиола в сыворотке крови наблюдается при феминизации у детей, опухолях гонад и коры надпочеч ников, гинекомастии, циррозе печени, гипертиреозе. 1.3. Набор «СтероидИФА-эстрадиол» рассчитан на проведение анализа в дублика тах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и од ной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех стрипов одновременно (всего 96 определений). Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован толь ко в течение месяца после вскрытия компонентов набора. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип действия В наборе «СтероидИФА-эстрадиол» использован вариант конкурентного твердофазно го иммуноферментного анализа. При одновременном добавлении в лунки исследуемого образца и конъюгата эстрадиол-пероксидаза, во время инкубации устанавливается равно весие между конъюгатом и эндогенным эстрадиолом сыворотки или плазмы крови в про цессе связывания с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связанного антите лами конъюгата обратно пропорционально количеству эстрадиола в исследуемом образце (Рисунок 1). Конъюгат эстрадиол-пероксидаза Планшет с поликлональными антителами к эстрадиолу Эндогенный эстрад иол Рисунок 1. Схема анализа Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски обратно пропорциональна концентрации эстрадиола в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибро вочного графика рассчитывается концентрация эстрадиола в исследуемых образцах. ^ 2.2. Состав набора • комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизован ными на внутренней поверхности лунок поликлональными антителами к эстрадиолу, мар кирован «Стрипы с поликлональными антителами к эстрадиолу» — 1 упаковка; • калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества эстрадиола. Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калиб ровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калиб ровочная проба №6»; точные значения концентраций эстрадиола в калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 90; 450; 1300; 3800; 7500 пмоль/л - 6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 1,0 мл); • конъюгат эстрадиол-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» - 1 флакон (9 мл); • концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Буфер Р» - 1 флакон (14 мл); • раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» - 1 флакон (14 мл); • стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» - 1 флакон (14 мл); --- стр. 3 --- • контрольная сыворотка с известным содержанием эстрадиола, маркирована «Контрольная сыворотка» - 1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 1,0 мл); • прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- слойного полиэтилена). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность. Перекрестная реакция антител к эстрадиолу с другими сте роидами приведена в Таблице 1 . ___________________________________________________________________________ Таблица 1____________ ГТРРПИП Перекрестная _____________________________________________________ реакция. % Эстрон 1,0 17-альфа-эстрадиол <0,05 3,17-диглюкоконъюгат < 0,2 А Андростенедиол < 0,0002 ^ Эстриол < 1,2 Эстрон-З-бета-О-глюкоронид <1,0 Эстрон-З-сульфат < 0,2 Этинилэстрадиол < 0,5 Норгестрел <0,1 Прогестерон <0,1 Тестостерон <0,1 Норэтиндрон <0,1 Кортико стеро н <0,1 Даназол <0,1 ______Диэтилстиллбестрол____________________________________________< 0,1__________ 3.2. Коэффициент вариации результатов определения эстрадиола в одном и том же образце сыворотки или плазмы крови человека с использованием набора «СтероидИФА- эстрадиол» не превышает 8%. 3.3. Линейность, Зависимость концентрации эстрадиола в анализируемых образцах ф при разведении их калибровочной пробой №1, имеет линейный характер в диапазоне кон центраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110%. 3.4. Точность, Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» эстрадиола — проверка соответствия значения определяемой концентрации эстрадиола расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыво ротки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110%. 3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен трация эстрадиола в анализируемом образце не превьппает 30 пмоль/л. 3.6. Диапазон ожидаемых значений. Содержание эстрадиола измеряли в сыворотке крови, взятой с 9 до И часов, у 43 здоровых мужчин в возрасте 21-39 лет, 127 здоровых женщин в возрасте 19-39 лет в различных фазах менструального цикла, 22 женщин в воз расте 49-65 лет в постменопаузе. Концентрация эстрадиола в сыворотке крови женщин с нормальным менструальным циклом в фолликулиновой фазе составляет 46-607 пмоль/л, в фазе овуляции - 315-1828 пмоль/л, в лютеиновой фазе - 161-774 пмоль/л, в постменопаузе - 30-201 пмоль/л. Концентрация эстрадиола в сыворотке крови мужчин составляет 28- 156 пмоль/л. Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности мето- --- стр. 4 --- да, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изгото вителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определе ны диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте рас положения лаборатории. Примечание: в наборе «СтероидИФА-эстрадиол» значения концентраций калиб ровочных проб выражены в пмолъ/л. Для пересчета концентраций эстрадиола в пг/мл не обходимо значение концентрации в пмоль/л разделить на 3,67. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 1 . 4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич ными. 4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Ла боратории медицинские. Требования безопасности». 4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать раз брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной воды. 4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со хранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций. 4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. 4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с наборами. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ • Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять опти ческую плотность раствора в лунках при длинах волн 450 нм и 405 нм; • прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), по зволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С; • пипетки полуавтоматические одноканальные со сменньми наконечниками с изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 1000-5000 мкл; • пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл; • цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл; • стакан стеклянный подходящего объема; • вода дистиллированная; • бумага фильтровальная; • перчатки резиновые или пластиковые; • 1 % раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода; • контейнер для дезинфекции; • ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой. --- стр. 5 --- 6.1. Забор Крови И З вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для получения плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт (соли гепарина). После центрифугирования сьшоротку или плазму переносят в отдельную пробирку. Воз можность использования других антикоагулянтов для набора «СтероидИФА-эстрадиол» не установлена. 6.2. Для проведения анализа не разрешается использовать гемолизированные или мутные образцы сыворотки и плазмы, а также образцы, содержащие азид натрия. 6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не более 2 суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца. 6. АНАЛИЗИРУЕМ Ы Е ОБРАЗЦЫ 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1. Подготовка реагентов 7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку необходимое количество стрипов. 7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использо ванию. Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыво ротки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыво роткой внести по 1,0 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флако ны в течение 10 минут при комнатной температуре (+18...25°С) без перемешивания. За тем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного рас творения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая. 7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип со ставляет 0,75 мл. 7.1.4. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дистил лированной водой в 20 раз. Например: 5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды. Тщательно перемешать, избегая пенообразования. 7.1.5. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.6. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип со ставляет 1,15 мл. 7.1.7. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18.. .25°С). В Приложении 1 приведена схема проведения анализа. --- стр. 6 --- 7.2. Постановка анализа 7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим образом: А1,А2 - №1 - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ; В1, В2 - № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1; С1, С2 - № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2; D1, D2 - № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3; Е1, Е2 - № 5 -для измерения величины оптической плотности КП №4; F1, F2 - № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5; G1, G2 - № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6; Н1, Н2 - № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыворотки. 7.2.2. Внести в соответствующие лунки по 100 мкл калибровочных проб и кон трольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 100 мкл исследуемых образцов в дубликатах. П р и м е ч а н и е : общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным результатам. 7.2.3. Во все лунки, кроме А1 и А2, внести по 50 мкл конъюгата Е. 7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати- руемом шейкере при температуре +37®С со скоростью 500-^00 об/мин. 7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во дорода) и промыть лунки четыре раза. При каждой промывке во все лунки добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7,1.4., встряхнуть рамку на шейке ре в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантиро вания тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. Допускается промывка лунок при помощи автоматического промьшочного устрой ства. 7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать стрипы в темноте в термостатируемом шейкере без встряхивания при температуре +37°С в течение 20 минут. 7.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18.. .25°С). 7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо средственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18.. .25°С. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лун ках при длине волны 450 нм. Если значение оптической плотности превьппает предел ли нейности спектрофотометра, считывание результатов проводят при 405 нм. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плот ности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок. П р и м е ч а н и е : среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках Л1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП. --- стр. 7 --- 7.2. Постановка анализа 7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим образом: А1,А2 - №1 - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ; В1, В2 - № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1; С1, С2 - № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2; D I, D2 - № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3; Е1, Е2 - № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4; F1, F2 - № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5; G1, G2 - № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6; Н1,Н2 - № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыворотки. 7.2.2. Внести в соответствующие лунки по 100 мкл калибровочных проб и кон трольной сьгооротки, в оставшиеся лунки по 100 мкл исследуемых образцов в дубликатах. П р и м е ч а н и е : общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным результатам. 7.2.3. Во все лунки, кроме А1 и А2, внести по 50 мкл конъюгата Е. 7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати- руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин. 7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во дорода) и промьггь лунки четыре раза. При каждой промывке во все лунки добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.4., встряхнуть рамку на шейке ре в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантиро вания тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устрой ства. 7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать стрипы в темноте в термостатируемом шейкере без встряхивания при температуре +37°С в течение 20 минут. 7.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18.. .25°С). 7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо средственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18.. .25°С. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лун ках при длине волны 450 нм. Если значение оптической плотности превышает предел ли нейности спектрофотометра, считьшание результатов проводят при 405 нм. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плот ности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок. П р и м е ч а н и е : среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 иЛ2 не должно превышать 0,09 ед.ОП при 450 нм. --- стр. 8 --- 9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от концентрации эстрадиола в калибровочных пробах (пмоль/л) (Рисунок 2). Внешний вид графика зависит от способа преобразования осей. П р и м еч а н и е 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется использо вать Программное обеспечение «ИФА Мастер». П р и м еча н и е 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необ ходимо пользоваться формулой 1 или 2. Если программа фотометра позволяет вычитать величину оптической плотности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок, то для расчетов для каждой калибровочной или исследуемой пробы использовать формулу: B/BjxWO%, (1) Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотно сти в лунках А1 и А2, то использовать формулу: (B-B t)/(B i-B t) x 100%, (2) где В - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержа щих калибровочные или исследуемые пробы, Bi - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержащш калибровочную пробу №1, В т - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2. 9.2. Определить содержание эстрадиола в пробах по калибровочному графику. 9.3. Для образцов со значениями оптической плотности выше оптической плотно сти нулевого калибратора (ВО принимать значение концентрации «ниже 30 пмоль/л». 9.4. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации эстрадио- ла, превышающих номинал КП №6, не допускается. При наличии таких случаев принимать значение концентрации исследуемого образца «выше концентрации КП №6». SX0 1 С с: О Log концентрации эстрадиола, пмоль/л Рисунок 2. Типичный калибровочный график Запрещается использовать для оценки реальных экспериментальных данных!