Набор реагентов АмплиСенс® MDR VRE-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 ---
--- стр. 4 ---
111123. Москва, ул. Новогиреевская ЗА тел. (495) 974-96-42, факс f495^ 305-54-23. e-mail: obtk@pcr ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Форма 1 LOT02.09.19
2019-09-02
S2020 -12-02
ТУ 21.20.23-389-01897593-2019.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Отрицательный результат для образца ОК
(отрицательный контроль экстракции)
Определено значение Ct меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Значение Ct
отсутствует по каналам для флуорофоров FAM,
JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для ПКО-1 VRE в
качестве положительного контроля
экстракции
Определено значение Ct меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Определено значение
Ct по каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для образца К+
(положительный контроль ПЦР)
Определено значение Cf меньше граничного по
канапам дня фпуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Отрицательный результат для образца К-
(отрицательный контроль ПЦР)
Значение Cf отсутствует по каналам для
флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
FK-экспресс Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь-FL VRE
Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦР-буфер-В Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Полимераза(TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 VRE Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь VRE-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
3, Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент FK-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL VRE, ПЦР-буфера-В и полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL VRE, ПЦР-буфер-В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL VRE
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Реагент FK-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С. Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь VRE-Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь
VRE-Lyo хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи
г. Акимкин
HN-3892-1-4
--- стр. 5 ---
111123. Москва, ул. Новогиреевская ЗА тел. (495) 974-96-42, Факс (495) 305-54-23. e-mail: obtk(5)pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Форма 1 LOT03.09.19 2019-09-03|WT
^ 2020-12-03
ТУ 21.20.23-389-01897593-2019.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
1. Технические характеристики:
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Отрицательный результат для образца ОК
(отрицательный контроль экстракции)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Значение Ct
отсутствует по каналам для флуорофоров FAM,
JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для ПКО-1 VRE в
качестве положительного контроля
экстракции
Определено значение Cf меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Определено значение
Cf по каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для образца К+
(положительный контроль ПЦР)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Отрицательный результат для образца К-
(отрицательный контроль ПЦР)
Значение Cf отсутствует по каналам для
флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
2. Состав, внешний вид:
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ГК-экспресс Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь-FL VRE Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦР-буфер-В Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Попимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 VRE Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь VRE-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL VRE, ПЦР-буфера-В и полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL VRE, ПЦР-буфер-В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL VRE
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С. Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь VRE-Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь
VRE-Lyo хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи
ВЕРНО
Директор ФБУР1 ЦН1ИИ Эпидеш 10л
Роспотребнадзора
(Козлова O f
(Ф.И.О.)
з^шиrь(, ,
в.г. Акимкин
Форма 1: |REF| HN-3891 <-3892-1-4
--- стр. 6 ---
111123, Москва, ул. Новогиреевская ЗА тел. М95) 974-96-42, Факс (4951 305-54-23, e-mail: obtk@Dcr.m
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Форма 2 LOT02.09.19 2019-09-02
2020-12-02
ТУ 21.20.23-389-01897593-2019.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
1. Технические характеристики:
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Отрицательный результат для образца ОК
(отрицательный контроль экстракции)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Значение Ct
отсутствует по каналам для флуорофоров FAM,
JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для ПКО-1 VRE в
качестве положительного контроля
экстракции
Определено значение Cf меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Определено значение
Cf по каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для образца К+
(положительный контроль ПЦР)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Отрицательный результат для образца К-
(отрицательный контроль ПЦР)
Значение Cf отсутствует по каналам для
флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
2. Состав, внешний вид:
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ГК-экспресс Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь-FL VRE Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦР-буфер-В Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Полимераза(TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 VRE Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь VRE-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL VRE, ПЦР-буфера-В и полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL VRE, ПЦР-буфер-В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной камере лри температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL VRE
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С. Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь VRE-Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь
VRE-Lyo хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
ВЕРНО
Директор ФБУН ЦНИИ Эпидемиолоп)
Роспотребнадзора
_В.Г. Акимкин
"(Козлова Е « (л1»
(Ф.И.О.)
Дата выдачи
Форма 1
--- стр. 7 ---
111123. Москва, ул. Новогиреевская ЗА тел. (495) 974-96-42, сЬакс (495) 305-54-23, e-mail: obtk(a)pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Форма 2 LOT03.09.19
|WT 2019-09-03
г 2020-12-03
ТУ 21.20.23-389-01897593-2019.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Отрицательный результат для образца ОК
(отрицательный контроль экстракции)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Значение Ct
отсутствует по каналам для флуорофоров FAM,
JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для ПКО-1 VRE в
качестве положительного контроля
экстракции
Определено значение Ct меньше граничного по
каналу для флуорофора Суб. Определено значение
Cf по каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
соответствует
Положительный результат для образца К+
(положительный контроль ПЦР)
Определено значение Cf меньше граничного по
каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Отрицательный результат для образца К-
(отрицательный контроль ПЦР)
Значение Cf отсутствует по канапам для
флуорофоров FAM, JOE, ROX, Суб соответствует
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ГК-экспресс Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь-FL VRE
Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦР-буфер-В Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Полимераза(TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 VRE Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь VRE-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL VRE, ПЦР-буфера-В и полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL VRE, ПЦР-буфер-В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL VRE
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С. Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь VRE-Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь
VRE-Lyo хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи >9.19
(§ 7 ГРУППА
РуководительКОНТРОГ
ВЕРНО
Директор ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
"(Козлова 20//
(Ф.И.О., -------------------------
rvfiCXf.зшиты ^5^
ф Форма 1:|REF|HN-3891
В.Г. Акимкин
92-1-4
--- стр. 8 ---
ВКЛАДЫШ
к набору реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Форма 1 IREFIHN-3891-1
Форма 2 |r H HN-3892-1-4
02.09.19
Настройки для приборов роторного типа
Rotor-Gene 6000, Rotor-Gene Q
Канал
Calibrate/
Gain O ptim isation /
ОпТ.урОВНЯ СИГН.
Dynam ic tube /
Динамич.ф он
Slope C o rrect/
Коррект.
уклона
Threshold /
Порог
More Settings/
Outlier Rem oval/
Устранение
вы бросов
FAM/Green от 5 ДО 10 FI включена включена 0,1 5-15%
JOE/Yellow ОТ 5 ДО 10 FI включена включена 0,1 5-15 %
ROX/Orange ОТ 5 до 10 FI включена включена 0,1 5-15 %
Cy5/Red от 5 до 10 FI включена включена 0,1 5-15 %
При использовании ротора на 36 лунок при запуске включить опцию 15 тМ с добав. воска / 15 pL oil
layer volume, модифицирующую термоциклирование.
Настройки для приборов планшетного типа
CFX96, «ДТ-96», «ДТпрайм»
Примечание (для прибора CFX96) - Для каждого шага этапов циклирования, нажав на кнопку Step
Канал Threshold/Порог
FAM, HEX,
ROX, Су5
Устанавливается на уровне, соответствующем 10-20 % от максимального
уровня флуоресценции, полученного для образца К+ в последнем цикле
амплификации
«ДТ-96», «ДТпрайм»
Метод Тип
анализа Каналы
Критерий
положи
тельного
результата
ПЦР
Нижняя
граница/
порог положи
тельного
результата
Верхняя
граница/
порог
нормализации
данных
Норма
лизация
данных
Фитиро-
вание
(сглажи
вание)
данных
Поро
говый
(СО
Cf(Cp)
для всех
каналов
Fam, Hex,
Rox, Су5 90% 5 10
Не
исполь
зовать
Включено
Граничные значения порогового цикла Ct
Образец
Приборы роторного типа Приборы планшетного типа
Канал для с злуорофора
FAM JOE ROX Су5 FAM JOE ROX Су5
К+ 30 30 31 30 31 31 32 31
К- Ct отсутствует Ct отсутствует
ОК Ct отсутствует 34 Ct отсутствует 35
Исследуемые
образцы 33 33 33 34 34 34 34 35
ВЕРНО
Директор ФБУН ЦНИИ Эпидемиолоп
Роспотребнадзора
« » _ o s
--- стр. 10 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей и
благополучия человека (ФБУН
ЦНИИ / Зпидемиологии
Роспотс
V I vocncrp.
.г. Акимкин
2019 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
н а б о р а р е а г е н т о в
АмплиСенс® MDR VRE-FL
АмплиСенс
®
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
111123, город Москва, улица Новогиреевская,
дом ЗА, стр. 6
IVD
--- стр. 11 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ...............................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..................................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................7
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ ..................................9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.................................................11
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 14
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК..........................14
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..................................................................................15
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................15
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................16
ФОРМА 1 ( ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F).....................................17
СОСТАВ..................................................................................................................................17
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..........18
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................18
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».. 19
B. Анализ и интерпретация результатов ...................................................................20
ФОРМА 2 (ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-L) .............................................24
СОСТАВ..................................................................................................................................24
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..........24
A. Подготовка проб для амплификации ....................................................................24
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».. 25
B. Анализ и интерпретация результатов ...................................................................26
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................30
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................................................31
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................32
ПРИЛОЖЕНИЕ 1........................................................................................................................33
--- стр. 12 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
БАЛ - бронхо-альвеолярный лаваж
ВКО - экзогенный внутренний контрольный обоазеи
гэ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрисЬоссЬат
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт элидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
MDR - Полирезистентность (Multidruq-resistance)
VRE - ванкомицин-резистентные энтерококки
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® MDR VRE-FL предназначен
для качественного определения ДНК Enterococcus spp. и генов
vanA и vanB в образцах бактериальных культур, полученных
путем посева биологического материала (аспират из трахеи,
БАЛ, кровь, ликвор, мокрота, моча, раневое отделяемое) на
плотную или жидкую питательную среду, методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Детекцию генов vanA и vanB проводят с целью
выявления штаммов энтерококков, резистентных к антибиотику
ванкомицину (VRE). Материалом для проведения ПЦР служат
пробы ДНК, экстрагированные из исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011
№ 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской
Федерации» ПЦР-исследование является одним из методов
всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия
по лечению пациента.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования образцов бактериальных
культур, полученных путем посева биологического материала.
--- стр. 13 ---
взятого от лиц с клиническими и/или лабораторными
признаками инфекций различной локализации, которые могут
быть вызваны энтерококками.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда забор материала не может быть осуществлен по
медицинским показаниям.
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только
медицинские работники, обученные методам молекулярной
диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами 111—IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (ВКО^) и одновременной
амплификации участков ДНК Enterococcus spp., участков генов
резистентности энтерококков к ванкомицину {vanA и vanB) и ДНК
ВКО с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. ВКО
позволяет контролировать все этапы ПЦР-исследования для
каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на
результаты ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами ДНК проводится
реакция амплификации участка ДНК при помощи специфичных к
этому участку праймеров и фермента Taq-полимеразы. В
составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно
меченые олигонуклеотиды, которые гибридизуются с
комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в
результате чего происходит нарастание интенсивности
флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление
специфического продукта амплификации путем измерения
интенсивности флуоресцентного сигнала с помощью
амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала
в режиме «реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
ВКО входит в состав реагента ГК-экспресс.
--- стр. 14 ---
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата. Фермент УДГ
распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, содержащих
дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин.
Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК, но всегда
присутствует в ампликонах, поскольку дезоксиуридинтрифосфат
входит в состав смеси дНТФ в реагентах для амплификации.
Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны
восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала
амплификации ДНК-мишени, и, следовательно, они не могут
быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании
выше 50 °С и поэтому не разрушает ампликоны мишени,
нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводятся 4 реакции - амплификация ДНК Enterococcus spp.,
амплификация участков генов vanA и vanB, а также
амплификация последовательности ВКО. Результаты
амплификации регистрируются по четырем различным
каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX Су5
ДНК-мишень ген van А ген van В ДНК
Enterococcus spp. ДНК ВКО
Область
амплификации
участок
гена van А
участок
гена van В
участок гена 16S
рРНК
искусственная
нуклеотидная
последовательность
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
Форма 2: ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1, 2 предназначены для проведения исследования
образцов бактериальных культур, полученных при посеве
различных видов нативного биоматериала на жидкую или
плотную питательную среду.
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 96 реакций амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
--- стр. 15 ---
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий/мл
Бактериальные
культуры,
полученные
путем посева
биологического
материала на
жидкую или
плотную^
питательную
среду
согласно
Приложению 1 ГК-экспресс
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-100 F,
FRT-L
5x10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки ДНК заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
реагентов доказана при исследовании ДНК следующих
микроорганизмов, а также геномной ДНК человека;
1. Штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture
Collection, США) в концентрации не менее 1x10^ ГЭ/мл;
Streptococcus pneum oniae АТСС® 49619™, Streptococcus
m utans АТСС® 35668^^, Streptococcus bovis АТСС® 9809^^,
Streptococcus equisim ilis АТСС® 12388^^, Streptococcus
agalactiae ATCC® 13813^^, Streptococcus pyogenes
ATCC® 19615™, Streptococcus salivarius ATCC® 13419™,
Streptococcus uberis ATCC® 700407^^, Staphylococcus aureus
ATCC® 6 5 3 8 Staphylococcus saprophyticus
ATCC® 49907^^, Staphylococcus epiderm idis ATCC® 12228™,
Staphylococcus haem olyticus ATCC® 29970^^, Bacteroides
fragilis ATCC® 25285^^, M oraxella catarrhalis ATCC® 25238^^,
Rhodococcus equi ATCC® 6939^^, Stenotrophom onas
m altophilia ATCC® 13637^^, Pseudom onas aeruginosa
ATCC® 15442™, Neisseria lactam ica ATCC® 23970™,
^ Для бактериальных культур, полученных путем посева биологического материала на
плотную питательную среду, указана чувствительность в отношении суспензии
бактериальных клеток в реагенте ГК-экспресс.
--- стр. 16 ---
Neisseria gonorrhoeae ATCC® 19424^'^, Enterobacter cloacae
ATCC® 13047'^, Enterobacter aerogenes ATCC^ 13048
Corynebacterium m inutissim um ATCC
TM
mirabilis ATCC 12453 TM Proteus vulgaris ATCC
TM
23348'"'', Proteus
6380™,
Escherichia coliSerratia m arcescens ATCC 14756
ATCC® 25922™, Klebsiella oxytoca ATCC® 49131'^, Klebsiella
pneum oniae ATCC® 27736^^, Acinetobacter baum annii
ATCC® 19606™, Candida albicans ATCC® 14053™, Candida
guillierm ondii ATCC® 6260, Candida krusei ATCC® 14243^^,
Gardnerella vaginalis ATCC® 14018^'^, Listeria grayi
ATCC® 25401™, Listeria innocua ATCC® 33090™, Listeria
monocytogenes ATCC® 7644^'^, Salmonella enterica
ATCC^ 14028™.
2. ДНК человека в концентрации 1 мг/мл.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих соединениях указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость, воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
представляли собой смесь стандартных образцов
предприятия, содержащих ДНК Enterococcus spp., ДНК vanA и
ДНК vanB, с концентрацией 1x10^ копий/мл каждого, в качестве
отрицательного образца был использован реагент ГК-экспресс.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в одной
и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в разных лабораториях, разными операторами, с
использованием различного оборудования. Результаты
представлены в табл. 3.
--- стр. 17 ---
Таблица 3
АмплиСенс®
MDR VRE-FL Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов с
ожидаемыми,
%
Количество
образцов
Совпадение
результатов с
ожидаемыми,
%
Форма 1
Положительные 20 100 40 100
Отрицательные 20 100 40 100
Форма 2
Положительные 20 100 40 100
Отрицательные 20 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 4
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Тип образцов
Результаты применения
АмплиСенс® MDR VRE-FL
Результаты применения
референтного метода^
положи
тельных
отрица
тельных
Бактериальные
культуры,
полученные путем
посева
биологического
материала на
жидкую или плотную
питательную среду
Всего
исследовано
285 образцов
положительных 165 0
отрицательных 0 120
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
Тип образцов
Диагностическая
чувствительность'*
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Диагностическая
специфичность®,
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Бактериальные культуры,
полученные путем посева
биологического материала
на жидкую или плотную
питательную среду
100 (97,8-100) % 100 (97-100) %
^ в качестве референтного метода использовались бактериологический посев и
секвенирование генов vanA и vanB.
Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
--- стр. 18 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ
УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования;
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 С,
относительная влажность от 15 до 75%.
Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно
опасные, организовывать работу и хранение в соответствии
с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным.
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу
следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне
Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку ,
биологический материал, включая материалы, инструменты
и предметы, загрязненные биологическим материалом.
® Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
--- стр. 31 ---
В случае получения невалидного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции ДНК.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 10 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 10
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (Ct)
FAM JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
к- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 10) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК);
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX
определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК.
--- стр. 32 ---
б) ПО каналу для флуорофора Суб значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых мишеней, начиная с этапа экстракции
ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб
определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 33 ---
ФОРМА 2 (ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
ГК-экспресс - реагент для экстракции ДНК из образцов
бактериальных культур, полученных при посеве исследуемого
Реагент Описание Объем, мл Количество
ГК-экспресс
Прозрачная бесцветная
жидкость
5,0 6 пробирок
на проведение экстракции 120 проб,Реагент рассчитан
включая контроли.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участков генов vanA и vanB (детерминант
резистентности энтерококков к ванкомицину) и ДНК
Enterococcus spp. с гибридизационно-флуоресцентнои
детекцией в режиме «реального времени» - позволяет
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
гчиммлсм tsri 1 V.»!-
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь VRE-Lyo Порошок белого цвета - 96 пробирок
объемом 0,2 мл
ПКО-1 VRE
Прозрачная бесцветная
жидкость
0,5 1 пробирка
К-
Прозрачная бесцветная
жидкость
0,5 1 пробирка
9^
[\UIVU и 1С1\ I I I W 1 -. Г - ------------------- - I
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ с ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ» _
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДМл и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амллификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
лробы ДНК-25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для
амплификации с готовой лиофилизированной реакционной
ПЦР-смесью VRE-Lyo для амплификации ДНК
исследуемых и контрольных образцов (количество
контрольных образцов см. в п. 3).
--- стр. 37 ---
т
i
* Данный результат может быть получен при тестировании
образцов бактериальных культур, содержащих Staphylococcus
spp., обладающих генами vanA и/или vanB (например, при
тестировании положительных гемокультур).
** В случае получения невалидного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции ДНК.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 14 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 14
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (Cf)
FAM JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
опоеделено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ПЦР
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
гоаничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла {Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 14) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК);
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX
определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
--- стр. 38 ---
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК.
б) по каналу для флуорофора Суб значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых мишеней, начиная с этапа экстракции
ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб
определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 39 ---
9)
при получении
с указанными
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
разукомплектовать в соответствии
температурами хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-
100 F хранить в холодильной камере при температуре от 2 до
8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL VRE, ПЦР-буфера-В и полимеразы
(TaqF). ПЦР-смесь-FL VRE, ПЦР-буфер-В и полимеразу (TaqF)
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до
минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL VRE хранить в защищенном от
света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 С.
Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь VRE-Lyo) хранить в
пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь VRE-Lyo хранить в
защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
--- стр. 40 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail;
cs@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов,
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУ
«Поликлиника №1»
Управления делами Президента
Российской Федерации
Е.Н. Родионова
В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
--- стр. 41 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
Содержимого достаточно для
проведения п-количества
тестов
LOT Код партии Использовать до
IVD Медицинское изделие для
диагностики in vitro □ Л
Обратитесь к инструкции по
применению
VER
I
Ш |
А
Дата изменения
Температурный диапазон
Изготовитель
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по применению
о'/- Не допускать воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги