Набор реагентов АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. директора Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный научно-
исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей и благополучия
f
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL
АмплиСенс'
tJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация. 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ........... 3
НАЗНАЧЕНИЕ ............................................. ....................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА................................................. ................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ................................................... ...........................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ...... .......................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.......................................... ...............................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ .......................
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................................................12
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 16
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК................ 18
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИК) ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА .......................................... 20
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ ......................... 21
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................22
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант ГРТ-50 РН) ...............................................................23
СОСТАВ............................................................. 23
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............23
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................23
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 25
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................26
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант ЕРТ-Ц ................................................................ 30
СОСТАВ ..................................................... 30
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............30
A. Подготовка проб для амплификации........................................................ 30
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 31
B. Анализ и интерпретация результатов......................................................... 33
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ 36
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ 37
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОЛУКНИИ .....................
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 ................................................................... 39
--- стр. 3 ---
с п и с о к СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
ВКО ST1-87 - экзогенный внутренний контрольный образец
г э - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрисЬоссЬат
К+ - положительный контроль ПЦР
К - - отрицательный контроль ПЦР
КПЛ (SFG) - группы клещевых пятнистых лихорадок ('Spotted Fever Gronn^
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
тцпд.™ - титр вируса, выраженный в тканевых цитопатических дозах
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL
предназначен для диагностики и профилактики заболеваний,
вызванных группой клещевых пятнистых лихорадок (КПЛ),'
Rickettsia Spotted fever group {SFG), путем качественного
определения ДНК Rickettsia spp. в биологическом материале
(лейкоциты крови, тканевой материал, смывы с очага
первичного аффекта, ликвор, клещи) методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Материалом для проведения ПЦР служат
пробы ДНК, экстрагированные из исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 №
323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской
Федерации» ПЦР-исследование является одним из методов
всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия
по лечению пациента.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала.
--- стр. 5 ---
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата. Фермент УДГ
распознает и катализирует разрушение цепей ДНК,
содержащих дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей
дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК,
но всегда присутствует в ампликонах, поскольку
дезоксиуридинтрифосфат входит в состав смеси дНТФ в
реагентах для амплификации. Дезоксиуридин делает
контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению
ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и,
следовательно, они не могут быть в дальнейшем
амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при
нагревании выше 50 °С и поэтому не разрушает ампликоны
мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводятся 2 реакции - амплификация ДНК Rickettsia spp. SFG
и амплификация последовательности ВКО STI-87. Результаты
амплификации ДНК Rickettsia spp. SFG и ДНК ВКО STI-87
регистрируются по двум различным каналам флуоресцентной
детекции:
Таблица 1
Канал для флуорофора FAM JOE
ДНК-мишень ДНК ВКО STI-87 ДНК Rickettsia spp. SFG
Область амплификации
искусственная
нуклеотидная
последовательность
OmB ген
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1; «ПЦР-комплект» вариант РРТ-50 РМ
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант РРТ-Г
Формы 1 и 2 предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 48 реакций амплификации, включая контроли.
--- стр. 6 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Вид
исследуемого
материала
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий /мл^
Цельная кровь Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
РРТ-50 РЫ. РРТ-Р
10^
Тканевой
материал
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
РРТ-50 РМ, РРТ-1
10^
Ликвор Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
РКТ-50 РЫ. РРТ-1
10^
Смывы с
первичного
аффекта
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
РРТ-50 РМ. РРТ-1
10^
Клещи 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
РКТ-50 РЫ. РРТ-1
10^
Клещи 100 «МАГНО-
сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант
РРТ-50 РМ, РРТ-1
10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки ДНК заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
реагентов доказана при исследовании следующих
микроорганизмов/штаммов:
’ Количество копий микроорганизма в 1 мл образца исследуемого материала.
--- стр. 7 ---
Таблица 3
Возбудитель Штамм Концентрация
Japanese encephalitis virus {JEV) Pekin-1 Титр 10®
ТЦПДбо/мл
Leptospira kirschneri (серогруппа
kirshneri) Moskva V
Leptospira spp (серогруппа
Borgpetersenii) Poi
Tick-borne encephalitis virus (TBEV) Комарово
Borrelia miyamotoi lzh-4
West Nile virus {WNV) Leiv-VLG99-27889 human
Shigella sonnei ATCC® 1721
Shigella flexneri ATCC®851b (1270) He менее
10’’ ГЭ/мл
Salmonella enterica subsp. Enterica
serovar Braenderup ATCC® BAA-664
Escherichia coli O104H4 ATCC® BAA-2326™
Enterococcus faecalis ATCC® 29212™
Klebsiella pneumoniae ATCC® 27736™
Staphylococcus aureus ATCC® 29213™
Staphylococcus saprophyticus ATCC® 49907™
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 15442™
Proteus mirabilis ATCC® 12453™
Enterobacter cloacae ATCC® 13047™
Примечание - АТСС (American Туре Culture Collection, США) -
американская коллекция типовых культур.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных
микроорганизмов, а также ДНК цельной крови людей, не
бывавших в эндемичных по риккеттсиозам регионах, ДНК
клещей и ДНК грызунов, неспецифических реакций выявлено
не было.
Информация об интерферирующих соединениях указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительный образец
представлял собой стандартный образец предприятия,
содержащий ДНК Rickettsia spp. SFG в концентрации 1x10"^
ГЭ/мл, в качестве отрицательного образца был использован
--- стр. 8 ---
реагент ОКО.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости —
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах.
Результаты представлены в табл. 4.
Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Количество
образцов
Совпадение
результатов. %
Положительные 10 100 20 100
Отрицательные 10 100 20 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы следующие образцы (см. табл. 5):
Вид исследуемого материала Количество
образцов
Цельная кровь от пациентов с клиническим диагнозом
«Клещевой риккетсиоз» 260
Цельная кровь от пациентов с иными лабораторно
подтвержденными диагнозами 50
Смывы с первичного аффекта от пациентов с клиническим
диагнозом «Клещевой риккетсиоз» 90
Смывы с пораженных участков кожи от пациентов с иной
этиологией заболевания 50
Ьиопсийный материал из первичных аффектов от пациентов с
клиническим диагнозом «Клещевой риккетсиоз» 19
Аутопсийный материал от пациентов с иной этиологией
заболевания 50
Суспензии клещей^ 245
Ликвор от пациентов с иной этиологией заболевания 25
Ликвор от пациентов с иной этиологией заболевания,
контаминированный штаммом^ Rickettsiэ з1Ыпсэ Нецветаев в
концентрации 10^ копий/мл
25
Всего 814
^ Клещи из регионов, эндемичных по клещевому риккетсиозу.
Коллекция Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора.
--- стр. 9 ---
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL в сравнении с
референтным методом
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс® Rickettsia spp.
Результаты применения
референтного метода^
5)PG-FL п ол ожител ь н ых отрицательных
Цельная кровь
Всего
исследовано
310 образцов
положительных 185 3
отрицательных 2 120
Смывы с
первичного
аффекта и других
поражений кожи
Всего
исследовано
140 образцов
положительных 87 2
отрицательных 1 50
Тканевой
материал
(биопсийный и
аутопсийный)
Всего
исследовано
69 образцов
положительных 19 0
отрицательных 0 50
Клещи
Всего
исследовано
245 образцов
положительных 102 2
отрицательных 1 140
Ликвор
Всего
исследовано
50 образцов
положительных 25 0
отрицательных 0 25
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL
Вид исследуемого материала
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Цельная кровь 98,9 (9 7 ,4 - 100)% 97,5 (9 4 ,7 - 100) %
Смывы с первичного аффекта и
других поражений кожи 98,8 (9 6 ,5 - 100)% 9 6 ,0 (9 0 ,7 - 100)%
Тканевой материал
(биопсийный и аутопсийный) 100 (8 6 ,0 - 100)% 100 (9 4 ,2 - 100)%
Ликвор 100 (8 8 ,7 - 100)% 100 (8 8 ,7 - 100) %
Клещи 99,0 (97,1 - 100)% 98,5 (9 6 ,5 - 100)%
'' в качестве референтного метода использовался набор реагентов РеалБест ДНК Rickettsia
species, АО «Вектор-Бест», Россия, (РУ № РЗН 2017/6276).
® Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
® Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
--- стр. 10 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ
УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами 111-1\/ групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-1\/ групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно
опасные, организовывать работу и хранение в соответствии
с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами 111-1\/ групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-1\/ групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным.
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу
следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне
Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку^.
’’ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г .
--- стр. 15 ---
реакционном смеси;
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой
или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с
прозрачными крышками (например, Ахудеп, 1пс.
(«Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) - при
использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
плоской крышкой (например. Ахудеп, 1пс. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные) или пробирки для ПЦР к
Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с
крышками (например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»),
Германия, или аналогичные) - при использовании
прибора роторного типа.
28. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема с фильтром до 100 и до 200 мкл (например, Ахудеп,
1пс. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
29. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл
(например, Ахудеп, 1пс. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
30. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс)
(например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С.», ЗАО «Ламинарные
системы», Россия, или аналогичный).
31. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
32. Автоматические дозаторы переменного объема (например,
ООО «Биохит», Россия, или аналогичные).
33. Программируемый амплификатор с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»,
имеющий 2 или более независимых каналов
флуоресцентной детекции (например, Rotor-Gene О
(QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad
Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз, Инк.»), США) и
другие, рекомендованные Изготовителем).
34. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 °С.
35.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки
по МУ 1.3.2569-09.
36. Емкость для сброса наконечников.
37. ПО для автоматической обработки результатов.
--- стр. 16 ---
зарегистрированное в установленном порядке.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- цельная кровь,
- тканевой материал,
- клещи,
- ликвор,
- смывы с первичного аффекта.
Цельная кровь
Для получения бактериального осадка крови взятие цельной
крови следует производить натощак или через 3 часа после
приема пищи одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в
пробирку (специальная вакуумная система) с 6 % раствором
ЭДТА (конечная концентрация после забора крови составляет
0,3 %) или с 3,2 % раствором цитрата натрия в качестве
антикоагулянта. После взятия крови пробирку следует плавно
несколько раз перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке
тщательно перемешалась с антикоагулянтом. (В противном
случае кровь свернется, и экстракция ДНК станет
плавного перемешивания пробирку
образцов цельной крови до
невозможной!). После
поместить в штатив.
Допускается хранение
проведения предобработки:
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 12 часов.
Недопустимо замораживание образца цельной крови!
Подготовку образцов провести не позднее указанного
времени.
Тканевой материал
Материал отбирают из зоны предполагаемого
местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной
ткани или из участка, пограничного с поврежденным местом,
стерильным инструментом (например, пинцет) в стерильный
пластиковый контейнер объемом 50 мл с плотно
закрывающейся крышкой или в пробирку объёмом 2,0 мл.
Пробирку плотно закрывают крышкой.
Допускается хранение образцов тканевого материала:
--- стр. 17 ---
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Клещи
Собранный материал разбирают в лаборатории по видам,
полу, местам и датам сбора и помещают в сухие чистые
пробирки объемом 2,0 мл. При объединении клещей в пулы
число особей в одном пуле не должно превышать 10.
Допускается хранение материала после разбора и
формирования проб:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 месяца;
- при температуре не выше минус 68 °С или в сосуде Дьюара
с жидким азотом - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Ликвор (спинномозговая жидкость)
Спинномозговую жидкость в количестве не менее 1 мл
собирают, используя одноразовые иглы, в одноразовые
пробирки объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов ликвора до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Смывы с первичного аффекта
Материал забирают нестерильным тампоном на пластиковой
основе (зонд). Тампон предварительно смачивают в
физиологическом растворе и проводят движением с легким
нажимом по участку кожи с первичным аффектом. Затем
рабочую часть зонда с тампоном помещают в одноразовую
пробирку с защелкивающейся или завинчивающейся крышкой,
содержащей 300 мкл физиологического раствора, и аккуратно
обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более
--- стр. 28 ---
Таблица 13
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль Контролируемый этап
ПЦР-исследования
Значение порогового цикла по каналу для
____________Лщгрррфора (Cfl
FAM JOE
ОК Экстракция ДНК опоеделено
меньше граничного отсутствует
К - ПЦР отсутствует отсутствует
к+ ПЦР опоеделено
меньше граничного
опоеделено
меньше граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Cf) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE отсутствует или превышает граничное значение.
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов, в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для
флуорофора JOE определено значение порогового цикла
(Cf). Вероятна контаминация лаборатории продуктами
амплификации или контаминация реагентов, исследуемых
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации
источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для
всех образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE определено значение
порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла (Cf), при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
--- стр. 29 ---
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 30 ---
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участка ДНК Rickettsia spp. SFG с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» - позволяет проводить ПЦР-
исследование в качественном формате. Комплект реагентов
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Rickettsia spp.
SFG-Lyo Порошок белого цвета —
48 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ Rickettsia spp. SFG Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
ВКО STI-87 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.6 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 48 реакций
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Выбор пробирок для амплификации зависит от
используемого амплификатора с системой детекции в
режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК-2 5 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для
амплификации с готовой лиофилизированной реакционной
ПЦР-смесью Rickettsia spp. SFG-Lyo для амплификации
ДНК исследуемых и контрольных образцов (количество
контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК,
--- стр. 34 ---
* В случае получения невалидного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции ДНК.
** В случае получения сомнительного результата
необходимо провести повторное ПЦР-исследование
соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции. В случае повторения аналогичного результата
образец считать положительным. При получении
отрицательного результата в повторной постановке образец
считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие
материала для анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Cf указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 18 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 18
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль Контролируемый этап
ПЦР-исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора {Cti
FAM JOE
ОК Экстракция ДНК определено
меньше граничного отсутствует
К - ПЦР отсутствует отсутствует
К+ ПЦР определено
меньше граничного
определено
меньше граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Ci) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE отсутствует или превышает граничное значение.
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов, в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для
флуорофора JOE определено значение порогового цикла
(Ci). Вероятна контаминация лаборатории продуктами
амплификации или контаминация реагентов, исследуемых
--- стр. 35 ---
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации
источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для
всех образцов, в которых обнаружена специфическая ДНК,
начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE определено значение
порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла (Ct), при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
--- стр. 36 ---
СРОК го д н о сти . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-
буфера-Н и ПЦР-смеси-FL Rickettsia spp. SFG. ПЦР-буфер-Н,
ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL Rickettsia spp. SFG хранить в защищенном от света
месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь
Rickettsia spp. SFG-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем
в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
--- стр. 37 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
cs@pcr.ru^®.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов,
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Главный врач ФГБУ
«Поликлиника №1»
Управления делами Президента
Российской Федерации
Е.В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
--- стр. 38 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
cs@pcr.ru^®.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов,
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством. ^
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии О
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Главный врач ФГБУ
«Поликлиника №1»
Управления делами Президента
Российской Федерации
Е.В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amplisens.ru.
--- стр. 39 ---
символы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
| l o t | Код партии Использовать до
IVD Медицинское изделие
для диагностики in vitro т
Обратитесь к инструкции ло
применению
VER Дата изменения Не допускать воздействия
солнечного света
. Г
Температурный диапазон
d ]
Дата изготовления
nd
Изготовитель
f
Беречь от влаги
А
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по
применению
--- стр. 46 ---
--- стр. 47 ---
ФБУН «ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
111123. MocKRa vn. Новогиое евская ЗА тел. Г4951974-96-42. Факс (45
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
i5) 305-54-23. e-maii: омкйсосг.п
Набора реагентов
АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL
2019-08-23Форма 1 [Ь ° 1 ] 23.08.19 ^2020-11-23
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Положительный контроль ПЦР (К+) - К+
Rickettsia spp. SFG
Определены значения Ct не более граничных по
каналам для флуорофоров FAM, JOE соответствует
10-кратное разведение положительного
контроля амплификации (К+) - К+
Rickettsia spp. SFG
Определены значения Ct не более граничных по
каналам для флуорофоров FAM, JOE соответствует
Разведение в 10 раз ВКО STi-87
Определено значение Cine более граничного по каналу
для (¿луорофора FAM. Отсутствует значение Cino
каналу для флуорофора JOE
соответствует
Отрицательный контроль ПЦР (К-) - К- Отсутствуют значения Ct по всем каналам детекции соответствует
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG Прозрачная жидкость от бесцветного
до светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦР-смесь Rickettsia spp. SFG-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
ПЦР-буфер-Н Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
К+ Rickettsia spp. SFG Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
K- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
BKO STl-87 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
OKO Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 “С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN при получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 "С, кроме ПЦР-
буфера-Н и ПЦР-смеси-FL Rickettsia spp. SFG. ПЦР-буфер-Н, ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 ® С . ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG хранить в защищенном от света
месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 ® С . ПЦР-смесь
Rickettsia spp. SFG-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи
Руководитель
Форма 1 : 1 ^ Н-3741-1; Форма 2: IREFI Н-3742-1-4
--- стр. 48 ---
ФБУН «ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
111123 Москва ул. Новогиреевская ЗА тел. (495^ 974-96-42. Факс (4951 Э0&-М-23. 9l?tKfllPCr,£ U
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс* Rickettsia s\ip. SFG-fL
2019-08-23
^ 2020-11-23
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Положительный контроль ПЦР (К+) - К+ Определены значения Ct не более граничных по
каналам для ФлуороФоров FAM, JOE
соответствует
10-кратное разведение положительного
контроля амплификации (К+) - К+
Определены значения Ct не более граничных по
каналам для флуорофоров FAM, JOE
соответствует
Разведение в 10 раз ВКО ЗТ1-87
Определено значение Ct не более граничного по каналу
для флуорофора FAM. Отсутствует значение Ct по
каналу для флуорофора JOE
соответствует
Отрицательный контроль ПЦР (К-) - К- Отсутствуют значения Ct по всем каналам детекции соответствует
Z иостав. внешний вид.
Наименование реагента Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG
Прозрачная жидкость от бесцветного
до светло-лилового цвета соответствует 1
ni IP-смесь Rickettsia spp. SFG-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
пиР-буФео-Н Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
K+ Rickettsia SDD. SFG Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
K- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
BKO STl-87 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
OKO Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
Тратепортиро"ю^^ реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 "С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы. всеми видами крытых транслортных средств, Долускается транслортирование при
темлеоатуое от 2 до 25 *С не более 3 сут.«ПЦР^омплект» вариант FRT-50 FN при получении разукомплектовать в соответствии с указанными темпера1урами
хранения.
Ф^^Т«ПЦР-компле)ст» вариант FRT-50 FN хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 “С. кроме ПЦР-
и ПЦР-смеси-FL R%kettsia врр. SFG. ПЦР-буфер-Н. ПЦР-смесь-FL Rickettsia врр. SFG хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 X . ПЦР-смесь-FL Rickettsia spp. SFG хранить в защищенном от света
Фоома 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 X . ПЦР-смесь
Rickettsia spp. SFG-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте. ^
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи
Руководитель (Козлова Е.А.)
(Ф.И.О.)
Форма 1: Н-3742-1-4
--- стр. 49 ---
ВКЛАДЫШ
к набору реагентов
АмплиСенс® Rickettsia spp. SFG-FL
Форма 1 ^ Н-3741-1
Форма 2 IrEH Н-3742-1-4
[¡ЖТ23.08.19
Настройки для приборов роторного типа
Канал
Callbrate/Galn
Optimisation.../
Опт.уровня
сигн
Threshold)
Порог
Dynamic tube/
Динамич.фон
Slope Correct/
Коррект.
уклона
Eliminate
Cycles before/
Исключить
циклы
More Settings/Outlier
Removal/Устранение
выбросов
FAM /G reenO T5FI до 1 0 F 1 0,03включена включена 5 5%
JOE/Yellow от5Р1до 1 0 F I 0,03 включена включена 5 5%
примечание - ь случае если кривей« липвлу .. . — --- ---— .
экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб {NTC tnresnola /Порог Фонг -
ПФ) равным 10 %.
Настройки для приборов планшетного типа
CFX96
Примечание - Для каждого шага этапа циклирования, нажав кнопку Step Options, задать скорость
нагревания/охлаждения Ramo Wate 2.5 ’C/sec.
Канал Threshold/Порог
FA M ,
H E X
Установить пороговую линию на уровне 5 % от максимального уровня
ф луоресценции образцов К+ в последнем цикле амплиф икации
Примечание - 1фивая флуоресценции К+ должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Метод Тип
анализа Канал
«Критерий по
ложительного
результата
ПЦР»
Величина
Threshold
Нижняя
граница/порог
положитель
ного
результата
Верхняя
граница/
порог
нормализации
данных
Нормали
зация
данных
Фитирование
(сглажива
ние) данных
Пороговый
(С О
Качест
венный
Fam,
Hex/
R6G
90% 10StD 5 % F<Cp) 30 % F(Cp)
Не исполь
зовать Отключить
Канал Threshold/Порог
Fam ,
Hex/R 6G
Установить пороговую линию на уровне 3 % от максимального уровня
ф луоресценции образцов К+ в последнем цикле амплиф икации
Примечание - Кривая флуоресценции К+ должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Поибоо DOTODHOrO ТИПЭ Прибор планшетного типа
Образец Канал для флуорофора
FAM JOE FAM JOE
К+ 33 30 33 32
ОК 33 Cf отсутствует 33 Cf отсутствует
К- Cf отсутствует Cf отсутствует
Исследуемые образцы 32 42 34 43
Директор
Ш ^отребнадзора
кимкин