Набор реагентов АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. директора Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы
по надзорут'-;;^^, сфере защиты прав
потребителёиёй.бд^получия человека
.Z ' -
. ^ л1^А.ЩГ6релов
■ ■ ( I
Й019 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
АмплиСенс
©
t J
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................6
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ ..................................9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.................................................12
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 15
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК...........................15
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..................................................................................16
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................17
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................17
ФОРМА 1 (ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F ) ................................................18
СОСТАВ...................................................................................................................................18
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............18
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................19
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ..20
B. Анализ и интерпретация результатов ...................................................................20
ФОРМА 2 (ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-L) .............................................25
СОСТАВ........................................................................................... 25
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНоТо ВРЕМЕНИ» ............25
A. Подготовка проб для амллификации ....................................................................25
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ..26
B. Анализ и интерпретация результатов ...................................................................27
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................31
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................................................32
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................33
ПРИЛОЖЕНИЕ 1.........................................................................................................................34
стр. 2 из 35
--- стр. 3 ---
с п и с о к СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
БАЛ - бронхо-альвеолярный лаваж
вко - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
К- - отрицательный контроль ПЦР
К+ - положительный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПКО - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
MDR - Полирезистентность (Multidrug-resistance)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
предназначен для качественного определения генов ОХА-
карбапенемаз групп ОХА-23-подобных, ОХА-58-подобных и
ОХА-40-подобных (характерных для ацинетобактеров) и генов-
маркеров Acinetobacter baumannii (генов ОХА-51-подобных
карбапенемаз) в образцах бактериальных культур, полученных
путем посева биологического материала (аспират из трахеи,
БАЛ, кровь, ликвор, мокрота, моча, раневое отделяемое) на
плотную или жидкую питательную среду, методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Детекцию генов ОХА-карбапенемаз указанных
групп проводят с целью выявления штаммов ацинетобактеров,
резистентных к р-лактамным антибиотикам группы
карбапенемов. Выявление генов-маркеров Acinetobacter
baumannii (генов ОХА-51-подобных карбапенемаз) служит для
обнаружения данного микроорганизма. Материалом для
проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 №323-
ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской
Федерации» ПЦР-исследование является одним из методов
стр. 3 из 35
--- стр. 5 ---
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, которые
гибридизуются с комплементарным участком
амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит
нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с
системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата. Фермент УДГ
распознает и катализирует разрушение цепей ДНК,
содержащих дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей
дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК,
но всегда присутствует в ампликонах, поскольку
дезоксиуридинтрифосфат входит в состав смеси дНТФ в
реагентах для амплификации. Дезоксиуридин делает
контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению
ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и,
следовательно, они не могут быть в дальнейшем
амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при
нагревании выше 50 °С и поэтому не разрушает ампликоны
мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одкой пробирке
проводятся 5 реакций - амплификация ДНК генов-маркеров А.
baumannii (генов ОХА-51-подобных карбапенемаз), генов ОХА-
карбапенемаз ацинетобактеров групп ОХА-23-подобных, ОХА-
58-подобных и ОХА-40-подобных, а также амплификация
последовательности ВКО. Результаты амплификации
регистрируются по пяти различным каналам флуоресцентной
детекции;
стр. 5 из 35
--- стр. 6 ---
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ДНК-мишень
(группа генов
карбапенемаз)
ДНК
A.baumannii
ОХА-
23-подобные
ОХА-
58-подобные
ОХА-
40-подобные
ДНК
вко
Область
амплификации
участок гена
группы
ЫаОХА-51-
Ике
участок гена
группы
ЫаОХА-23-
Нке
участок гена
группы
ЫаОХА-58-
Нке
участок гена
группы
ЫаОХА-40-
Нке
искусственная
нуклеотидная
последова
тельность
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
Форма 2: ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1, 2 предназначены для проведения исследования
образцов бактериальных культур, полученных при посеве
различных видов нативного биоматериала на жидкую или
плотную питательную среду.
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 96 реакций амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект длл-<
амплификации
Аналитическая
, чувствитель
ность (предел
обнаружения),
копий/мл
Бактериальные
культуры,
полученные
путем посева
биологического
материала на
жидкую или
плотную^
питательную
среду
согласно
Приложению 1 ГК-экспресс
«ПЦР-
комплект»
вариант
FRT-100 F,
FRT-L
5x10^
^ Для бактериальных культур, полученных путем посева биологического материала на
плотную питательную среду, указана чувствительность в отношении суспензии
бактериальных клеток в реагенте ГК-экспресс.
стр. 6 из 35
--- стр. 7 ---
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки ДНК заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
реагентов доказана при исследовании ДНК следующих
микроорганизмов, а также геномной ДНК человека:
1. Штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture
Collection, США) в концентрации не менее 1x10^ ГЭ/мл:
Acinetobacter Iwoffii АТСС® 17925™, Escherichia coli АТСС®
25922'^'^, Klebsiella oxytoca АТСС® 49131^^, Klebsiella
pneumoniae АТСС® 27736^"^, Enterobacter cloaceae ATCC®
13047™, Enterobacter ------------- .о^лхотм
Pseudomonas aeruginosa
aerogenes
ATCC® 15442
ATCC^ 13048'
Pseudomonas
stutzeri ATCC'^ 39524"^^, Pseudomonas putida ATCC® 47054"^^,
Stenotrophomonas maltophilia ATCC® 13637™, Proteus
Proteus vulgaris ATCC® 6380™,
8090™, Serratia marcescens ATCC®
14756^'^, Staphylococcus aureus ATCC® 6538
Staphylococcus saprophyticus ATCC® 49907^'^, Staphylococcus
epidermidis ATCC® 12228™, Streptococcus anginosus ATCC®
49619™,
ЗбббТ"^^, Bordetella
mirabilis ATCC® 12453'
Citrobacter freundii ATCC^
9895
TM Streptococcus pneumoniae ATCC
Enterococcus faecium ATCC
bronchjseptica AJCC^ 10580^^, MoraxeJIa cataffhalis ATCC
25238
ATCC
TM, Rhodococcus equi AJCC^ 6939™, Neisseria lactamica
23970™, Neisseria gonorrhoeae AJCC^ 19424
TM
Neisseria meningitides ATCC_
minutissimum ATCC® 23348
13102^^, Corynebacterium
Corynebacterium jeikliumTM
ATCC'^ 43734“^^, Corynebacterium
Hemophilis parainfluensae ATCC® 7901
2. ДНК человека в концентрации 1 мг/мл.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
При тестировании изолятов Acinetobacter baumannii, у
которых отсутствовали фенотипические признаки продукции
карбапенемаз, неспецифических реакций выявлено не было.
xerosis
|ТМ
АТСС'^ 373 тм
стр. 7 из 35
--- стр. 8 ---
т.е. был получен отрицательный результат детекции генов
ОХА-карбапенемаз групп ОХА-23-подобных, ОХА-58-подобных
и ОХА-40-подобных и положительный результат детекции
генов-маркеров Acinetobacter baumannii.
Информация об интерферирующих соединениях указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость, воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
представляли собой смесь стандартных образцов предприятия,
содержащих ЦИК А.baumannii, ДНК ЫаОХА-23, ДНК ЫаОХА-40
и ДНК Ь/аОХА-58, с концентрацией 1x10® копий/мл каждого, в
качестве отрицательного образца был использован реагент ГК-
экспресс. Условия повторяемости включали в себя
тестирование в одной и той же лаборатории, одним и тем же
оператором, с использованием одного и того же оборудования
в пределах короткого промежутка времени. Условия
воспроизводимости - тестирование в разных лабораториях,
разными операторами, с использованием различного
оборудования. Результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3
АмплиСенс®
MDR А.Ь.-
OXA-FL
Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов с
ожидаемыми,
%
...•г
Количество
образцов
Совпадение
результатов с
ожидаемыми,
%
Форма 1
Положительные 30 100 60 100
Отрицательные 30 100 60 100
Форма 2
Положительные 30 100 60 100
Отрицательные 30 100 60 100
I
стр. 8 из 35
--- стр. 9 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 4
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
Тип образцов Результаты применения
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
Результаты применения
референтного^ метода
положи
тельных
отрица
тельных
Бактериальные
культуры, полученные
путем посева
биологического
материала на жидкую
или плотную
питательную среду
Всего
исследовано
220
образцов
положительных 100 0
отрицательных 0 120
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
Тип образцов
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Диагностическая
cпeцифичнocть^,
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Бактериальные культуры,
полученные путем посева
биологического материала
на жидкую или плотную
питательную среду
100 (96,4-100) % 100 (97-100) %
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ^,
УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
^ в качестве референтного метода использовались культуральные методы исследования и
секвенирование участков генома.
'' Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
® Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 9 из 35
--- стр. 10 ---
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75 %.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно
опасные, организовывать работу и хранение в соответствии
с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным.
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу
следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне
Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку®,
биологический материал, включая материалы, инструменты
и предметы, загрязненные биологическим материалом,
следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к
обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР
лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые
® Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
стр. 10 из 35
--- стр. 23 ---
1
ФОРМА 1
Таблица 9
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контроли
руемый
этап ПЦР-
исследо-
вания
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора
___________________________т _____________________
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
К+ ПЦР
определено определено определено определено определено
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
ОК Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла {Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 9) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или
ROX, и/или Суб определено значение порогового цикла
{Ct). Вероятна контаминация лаборатории продуктами
амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК, начиная с
этапа экстракции ДНК.
б) по каналу для флуорофора Суб.5 значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых мишеней, начиная с этапа экстракции
ДНК.
стр. 23 из 35
--- стр. 24 ---
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5, и/или
Суб.5 определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла по одному из каналов для флуорофоров РАМ и/или
JOE, и/или ROX, и/или Суб, при этом на графике
флуоресценции по этому каналу отсутствует участок
характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильномГуровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца. При
повторном анализе ожидается получение отрицательного
результата по этому каналу.
ФОРМА 1
стр. 24 из 35
--- стр. 25 ---
ФОРМА 2 (ГК-экспресс и «ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
ГК-экспресс - реагент для экстракции ДНК из образцов
бактериальных культур, полученных при посеве исследуемого
ФОРМА 2_____________________________________________________________________
Реагент Описание Объем, мл Количество
ГК-экспресс Прозрачная бесцветная
жидкость 5,0 6 пробирок
Реагент рассчитан на проведение экстракции 120 проб,
включая контроли.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участков генов ОХА-карбапенемаз
ацинетобактеров с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени» - позволяет
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Ab-OXA-Lyo Порошок белого цвета -
96 пробирок
объемом
0,2 мл
ПКО-1 АЬ-ОХА Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
К - Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для
амплификации с готовой лиофилизированной реакционной
ПЦР-смесью Ab-OXA-Lyo для амплификации ДНК
исследуемых и контрольных образцов (количество
стр. 25 из 35
--- стр. 29 ---
ФОРМА 2
результатов по каналу для флуорофора Суб.5 определено
значение Ct, не превышающее граничное значение.
Необходимо провести повторное ПЦР-исследование
соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции ДНК.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 12 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контроли
руемый
этап ПЦР-
исследо
вания
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора
(Cf)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
к+ ПЦР
определено определено определено определено определено
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
меньше
граничного
ок Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
опоеделено
меньше
граничного
к- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла {Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 12) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров ГАМ и/или JOE, и/или
ROX, и/или Суб определено значение порогового цикла
{Ct). Вероятна контаминация лаборатории продуктами
амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по
стр. 29 из 35
--- стр. 30 ---
ФОРМА 2
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК, начиная с
этапа экстракции ДНК.
б) по каналу для флуорофора Суб.5 значение порогового
цикла {Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена ДНК
анализируемых мишеней, начиная с этапа экстракции
ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб, и/или
Суб.б определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источкика контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла по одному из каналов для флуорофоров РАМ и/или
JOE, и/или ROX, и/или Суб, при этом на графике
флуоресценции по этому каналу отсутствует участок
характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно пря%ю линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца. При
повторном анализе ожидается получение отрицательного
результата по этому каналу.
стр. 30 из 35
--- стр. 31 ---
СРОК го д н о с ти . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
Хранение.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С,
кроме ПЦР-смеси-FL АЬ-ОХА, ПЦР-буфера-В и полимеразы
(TaqF). ПЦР-смесь-FL АЬ-ОХА, ПЦР-буфер-В и полимеразу (TaqF)
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до
минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL АЬ-ОХА хранить в защищенном от
света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С.
Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь Ab-OXA-Lyo) хранить
в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь Ab-OXA-Lyo хранить
в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 31 из 35
--- стр. 32 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
cs@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов,
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения)
законодательством.
в соответствии
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУ
«Поликлиника №1»
Управления делами Президен
Российской Федерации
действующим
Е.Н. Родионова
Е.В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
стр. 32 из 35
--- стр. 33 ---
сим волы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
Код партии
IVD Медицинское изделие для
диагностики in vitro □0
VER Дата изменения
1
Температурный диапазон
d]
ш 1
Изготовитель
f
А
Осторожно! Обратитесь к
инструкции по применению
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к инструкции
по применению
Не допускать воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги
стр. 33 из 35
--- стр. 42 ---
1 1 1 1 2 3 . М о скв а, ул. Н ов о ги реев ская ЗА тел . (4951 9 7 4 -9 6 -4 2 . Ф акс (4 9 5 ) 3 0 5 -5 4 -2 3 . e-m ail: obtk@Dcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
ФБУН «ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Форма 1 LOT А29.10.19
|WT2019-10-29
2 2021-01-29
Н а и м е н о в а н и е п о ка за те л я Н о р м а Р е зу л ь та ты
ко н тр о л я
Положительный контроль экстракции
(ПК) - ГК-экспресс + ПКО -1 АЬ-О ХА
О пределены значения Ct ло каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пределено значение Ct м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора С у5.5
соответствует
Отрицательный контроль экстракции
(О К) - ГК-экспресс
Отсутствую т значения Ct по каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пределено значение Ct м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора Суб.б
соответствует
Положительный контроль П Ц Р (К+) -
ПКО-1 АЬ-ОХА
О пределены значения Ct м енее граничных по каналам для
ф луороф оров FAM , JO E, R O X, Суб и Суб.б соответствует
Отрицательный контроль П Ц Р (К -) -
К - О тсутствую т значения Ct по всем каналам детекции соответствует
Н а и м е н о в а н и е р еаген та Х а р а к те р и с ти к а и н о р м ы Р е зу л ь та ты
ко н тр о л я
В с о с та в е ф о р м ы
к о м п л е кта ц и и
ГК-экспресс П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
П Ц Р -см есь-FL АЬ-ОХА
Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
П Ц Р-буф ер-В Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
П о л и м е р а за (TaqF) П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 АЬ-ОХА Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К - П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-см есь A b-O XA -Lyo П орош ок белого цвета соответствует 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Т р а н с п о р ти р о в а н и е . Н абор реагентов транспортировать при тем пературе от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содерж ащ их хладоэлементы , всеми видами крытых транспортны х средств. Д опускается
транспортирование при тем пературе от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦ Р-комплект» вариант F R T -1 0 0 F при получении разукомплектовать в соответствии с у|фзанными тем пературам и
хранения.
Х р ан ен и е.
Форма 1. Реагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком пл ект» вариант F R T -1 0 0 F хранить в холодильной кам ере при тем пературе от 2
до 8 °С, кроме П Ц Р -см еси-FL АЬ-О ХА , П Ц Р -б уф ер а-В и полимеразы (TaqF). П Ц Р -см есь-FL АЬ-О ХА, П Ц Р -б уф ер -В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной кам ере лри тем пературе от минус 24 до минус 16 °С. П Ц Р -см есь -F L А Ь -О Х А
хранить в защ ищ енном от света месте.
Форма 2. Реагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком пл ект» вариант F R T -L хранить в холодильной кам ере при тем пературе от 2 д о 8
°С. Лиофилизированные реагенты (П Ц Р -см есь A b-O X A -Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. П Ц Р -см есь А Ь -О Х А -
Lyo хранить в защ ищ енном от света месте.
Холодильные и морозильные кам еры должны обеспечивать регламентированны й температурны й режим.
Дата выдачи
Руководитель (Козлова Е.А.)
(Ф .И.О .)
, №РНО
З а м е с ти те л ь д и р екто р а " Ф В У Н Ц Н И И
Р о с п о тр е б н а д зо р а
' / / 2 0 / f г.
Форма 1: IREFI HN-3871-1; ФЪрма2;.Ж |д HN-3872-1-4
--- стр. 43 ---
1 1 1 1 2 3 . М о скв а, ул. Н овогиреевская ЗА тел. (495^ 9 7 4 -9 6 -4 2 . Ф акс (495^ 3 0 5 -5 4 -2 3 . e-m ail: obtk@Dcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
ФБУН «ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Форма 2 LO T 29.10.19
|VvT2019-10-29
К 2021-01-29
1. Технические характеристики:
Н а и м е н о в а н и е п о ка за те л я Н о р м а Р е зу л ь та ты
ко н тр о л я
Положительный контроль экстракции
(П К) - ГК-экспресс + ПКО-1 А Ь -О ХА
О пределены значения Ct по каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пределено значение C f м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора С уб.5
соответствует
Отрицательный контроль экстракции
(О К) - ГК-экспресс
Отсутствую т значения Ct по каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пределено значение Ct м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора С уб.5
соответствует
Положительный контроль П Ц Р (К+) -
ПКО-1 АЬ-ОХА
О пределены значения Ct м ен ее граничных по каналам для
ф луороф оров FAM , JO E , R O X , Суб и С уб.5 соответствует
Отрицательный контроль П Ц Р (К -) -
К - Отсутствую т значения Ct по всем каналам детекции соответствует
2. Состав, внешний вид:
Н а и м е н о в а н и е р еаген та Х а р а к те р и с ти к а и н о р м ы Р е зу л ь та ты
к о н тр о л я
В со с та в е ф о р м ы
ко м п л е кта ц и и
ГК-экспресс Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
П Ц Р -см есь-FL АЬ-ОХА
Прозрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦ Р -буф ер-В П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1
П о л и м е р а за (TaqF) П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 АЬ-ОХА Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К - Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-смесь A b-O XA-Lyo Порош ок белого цвета соответствует 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Т р а н с п о р ти р о в а н и е . Н абор реагентов транспортировать при тем пературе от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содерж ащ их хладоэлементы , всеми видами крытых транспортны х средств. Допускается
транспортирование при тем пературе от 2 до 25 °С не более 3 сут,
«ПЦ Р-комплект» вариант F R T -1 0 0 F при получении разукомллектовать в соответствии с указанны ми тем пературам и
хранения. « г
Х р ан ен и е.
Форма 1. Р еагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком плект» вариант F R T -100 F хранить в холодильной кам ере лри тем пературе от 2
до 8 °С, кроме П Ц Р -см еси -FL АЬ-О ХА, П Ц Р -б уф ер а-В и полимеразы (T aq F). П Ц Р -см есь-FL АЬ-О ХА, П Ц Р -б уф ер -В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной кам ере при тем пературе от минус 24 до минус 16 °С. П Ц Р -см есь -F L А Ь -О Х А
хранить в защ ищ енном от света месте.
Форма 2. Р еагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком плект» вариант FR T-L хранить в холодильной кам ере при тем пературе от 2 до 8
°С. Лиофилизированные реагенты (П Ц Р -см есь A b-O X A -Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. П Ц Р -см есь А Ь -О Х А -
Lyo хранить в защ ищ енном от света м есте.
Холодильные и морозильные кам еры должны обеспечивать регламентированны й температурны й режим.
Дата выдачи
Руководитель (Козлова Е.А.)
(Ф .И .0.1 _____
З а м е с ти те л ь д и р е к то р а Ф Б У Н Ц Й И И
Р о с п о тр е б н а д зо р а
«К»
|(^ОЛОГИИ
Г о р е л о в
г . • it
Форма 1:|REf| НN-387{-1?ijo.PMa;2^%EF| HN-3872-1-4
--- стр. 44 ---
1 1 1123 . М о сква, ул. Н овогиреевская ЗА тел . (4 9 5 ) 9 7 4 -9 6 -4 2 . Ф акс f495^ 3 0 5 -5 4 -2 3 e-m ail: obtk@Pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов
АмплиСенс® MDR A.b.-OXA-FL
ФБУН «центральный научно -исследовательский институт эпидемиологии »
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Форма 2 LOT А29.10.19 2019-10-29
2021-01-29
1. Технические характеристики:
Н а и м ен о в ан и е п о ка за те л я Н о р м а Р е зу л ь та ты
ко н тр о л я
Положительный контроль экстракции
(ПК) - ГК-экспресс + ПКО -1 А Ь -О ХА
О пределены значения Ct по каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пред елено значение Ct м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора С уб.5
соответствует
Отрицательный контроль экстракции
(О К) - ГК-экспресс
Отсутствую т значения Ct по каналам для ф луороф оров FAM ,
JO E , R O X И Суб. О пределено значение Ct м ен ее граничного
по каналу для ф луороф ора С уб.5
соответствует
Положительный контроль П Ц Р (К+) -
ПКО-1 АЬ-О ХА
О пределены значения Ct м ен ее граничных по каналам для
ф луороф оров FAM , JO E , R O X , Суб и С уб.5 соответствует
Отрицательный контроль П Ц Р (К -) -
К - О тсутствую т значения Ct по всем каналам детекции соответствует
Н а и м е н о в а н и е р еаген та Х а р а к те р и с ти к а и н о р м ы Р е зу л ь та ты
к о н тр о л я
В со с та в е ф о р м ы
к о м п л е кта ц и и
ГК-экспресс П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
П Ц Р -см есь-FL АЬ-ОХА
П розрачная жидкость от бесцветного до
светло-лилового цвета соответствует 1
ПЦ Р -буф ер-В П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1
П о л и м е р а за (TaqF) П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПКО-1 АЬ-ОХА П розрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К - Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПЦР-см есь A b-O XA-Lyo Порош ок белого цвета соответствует 2
при получении разукомплектовать в соответствии с указанны ми тем пературам и
3. Условия транспортирования и хранения:
Т р а н с п о р ти р о в а н и е . Набор реагентов транспортировать при тем пературе от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содерж ащ их хладоэлементы , всеми видами крытых транспортны х средств. Д опускается
транспортирование при тем пературе от 2 до 25 °С не более 3 сут.
«ПЦ Р-комплект» вариант F R T -1 0 0 F
хранения.
Х р ан ен и е.
Форма 1. Р еагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком плект» вариант F R T -1 0 0 F хранить в холодильной кам ере при тем пературе от 2
до 8 °С, кроме П Ц Р -см еси -FL АЬ-О ХА, П Ц Р -б уф ера-В и полимеразы (T aq F). П Ц Р -см есь-F L АЬ-О ХА , П Ц Р -б уф ер -В и
полимеразу (TaqF) хранить в морозильной кам ере при тем пературе от минус 24 до минус 16 °С. П Ц Р -см есь -F L А Ь -О Х А
хранить в защ ищ енном от света месте.
Форма 2. Р еагент ГК-экспресс, «П Ц Р -ком плект» вариант FR T-L хранить в холодильной кам ере при тем пературе от 2 до 8
°С. Лиофилизированные реагенты (П Ц Р -см есь A b-O X A -Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. П Ц Р -см есь А Ь -О Х А -
Lyo хранить в защ ищ енном от света месте.
Холодильные и морозильные кам ер ы должны обеспечивать регламентированны й температурны й режим.
Дата выдачи
Руководитель (Козлова Е.А.)
(Ф .И .О .)
f ВЕРНр
З а м е с ти те л ь д и р е к то р а Ф Б У Н ШЛШ
Р о с п о тр е б н а д зо р а
«
Форма 1 :|REF| НМ-38^1И;
пидё Миологии
Г о р е л о в
HN-3872-1-4
--- стр. 45 ---
ВКЛАДЫШ
к набору реагентов
АмплиСенс* MDR A.b.-OXA-FL
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Ф о р м а 1 |REF| H N -3871-1
Ф о р м а 2 И ер | HN-3872-1-4
|L0^ 29.10.19
Н а с т р о й к и д л я п р и б о р о в роторного ти па
f
V,
V
V
V
V
V
'V
Канал
Calibrate / Gain
Optimisation /
ОпТ.урОВНЯ С И Г Н .
Threshold 1
Порог
Dynamic tube /
Динамич.фон
Slope Correct /
Коррект.
уклона
More Settings/
Outlier Removal/
Устранение
выбросов
F A M /G reen ОТ 5 до 10 FI 0,1 включена включена 5 -1 5 %
JO E /Y ellow от 5 до 10 FI 0,1 включена включена 5 -1 5 %
R O X /O ran q e ОТ 5 до 10 FI 0,1 включена включена 5 -1 5 %
C y 5/R e d ОТ 5 до 10 FI 0,1 включена включена 5 -1 5 %
C y5.5/C rim son от 5 до 10 FI 0,1 включена включена 5 -1 5 %
При использовании ротора на 36 лунок при запуске включить опцию 15 тк! с добав. воска I 15 pL oil
layer volume, модифицирующую термоциклирование.
Н а с тр о й ки п л я п р и б о р о в п л а н ш е тн о го ти па
C F X 9 6 . « Д Т -96 », «Д Тпрайм »
Примечание (для прибора C F X 96 ) - Д ля каждого шага этапов циклирования. нажав на кнопку Step Cations,
задать скорость нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 *С/88с
Канал
FAM , HEX,
ROX, Су5,
CvS S
Threshold/Порог
Устанавливается на уровне, соответствующем 10-20 % от максимального уровня
флуоресценции, полученного для образца К+ в последнем цикле амплиф икации
«Д Т -96 », «ДТпрайм »
М ето д Тип
ан ал и за Каналы
Кр и тери й
п о л о ж и
тел ь н о го
резуль тата
ПЦР
Н и ж няя
гр ани ц а/
п оро г п о л о ж и
тел ь н о го
результата
В ер хня я
гр ан и ц а /
п оро г
н орм ал и зац и и
д а н н ы х
Н о р м а
л и за ц и я
д а н н ы х
Ф и ти р о -
в ан и е
(с гл а ж и
в ан и е)
д ан н ы х
Поро
говый
(С /)
Cf(Cp)
для всех
каналов
Fam, Hex,
Rox, Су5,
С у5 5
9 0 % 5 1 0
Не
исполь
зовать
Включено
Г р а н и ч н ы е з н ач е н и я п о р о го в о го ц и кл а Ct
О б р а зе ц
П р и бор ы р о то рн ого типа П р и бор ы п лан ш е тн о го типа
Канал д л я с элуорос )ора
FAM JO E RO X Су5 С у 5 .6 FA M JO E R O X С у5 CyS.S
К+ 30 30 30 30 30 31 31 31 31 31
К - C t отсутствует c t отсутствует
О К C t отсутствует 34 c t отсутствует 35
И с с л е д у е м ы е
о б р а з ц ы 33 33 33 33 34 34 34 34 35