Набор реагентов для количественного определения ракового антигена СА-62 в сыворотке крови человека методом иммунохемилюминесцентного анализа (ИХА-СА-62) для диагностики in vitro по ТУ 21.20.23-001-17673329-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
Проведенные ранее исследования показали, что клетки эпителиальных карцином
демонстрируют значительную экспрессию гликопротеиновых антигенов СА-62 во всех
исследованных локализациях эпителиальных карцином (молочной железы, предстательной
железы, легких, матки, желудка, ночек, яичников и др.) [1-4]. При этом большинство
доброкачественных заболеваний и здоровых образцов не демонстрируют повышенной
экспрессии маркера СА-62. Тест успешно прошел многочисленные пилотные
клинические исследования в США и Европе, результаты которых получили
высокую оценку зарубежных исследователей и клинических онкологов и были
опубликованы в [1-4]. Концентрацию СА-62 измеряли в сыворотке крови у здоровых людей
Западного региона России. Западной Европы. Западного и Восточного регионов Канады,
Западного и Восточного регионов США в возрасте 20-75 лет. Средняя концентрация
антигена СА-62 составляет 3500 Ед/мл в интервале 50-10000 Ед/мл. Для определения
диагностической чувствительности и специфичности были проанализированы
диверсифицированные группы больных и здоровых людей, которые относились к
различным расам, включаюшим европеоидную, негроидную и монголоидную.
Статистически значимых отличий между различными расами выявлено не было. Из них
были исследованы 380 образцов сыворотки пациентов с верифицированным раком
молочной железы, 200 образцов сыворотки пациентов с верифицированным раком
яичников, 212 образцов сыворотки пациентов с верифицированным раком предстательной
железы и 249 сертифицированных образцов сыворотки здоровых контролей
соответствующего возраста и пола. Результаты исследований приведены в Таблицах 1-2.
Таблица 1
Диагностическая чувствительность* теста
Карциномы
локализации
Количество
верифицир
ованкых
образцов
Число образцов
с истинно
положительны
ми
резуль'1 агами
ТР
Результаты измеренззй
Диагиостическ
ан
чувс1ви1е.1Ы1о
С1Ь
Положительные
результаты
Отрицательные
резулыаты
Молочная
железа 380 353 353 27 93%
11рслстательная
железа 212 170 170 42 85%
Яичники 200 180 180 20 90%
Таблица 2
Диагностическая специфичность* теста
Карциномы
локалнзацнм
Количество
сертфициро
ванных
клинических
образцов
Число
образцов с
истинно
отрииаз ельны
МП
результазами
Результаты измерений
ИХА-СА-62 Диагностичсс!'
аи
специфично
С1ЪПоложительные Отрицательные
Молочная
же.леза 120 120 0 120 99,23%
11редстательная
железа 24 24 0 24 99%
Яичники 105 105 0 105 99%
--- стр. 3 ---
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА - клиническая лабораторная диагностика.
3. ВИД МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ - 342340.
4. ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬ НАБОРА сотрудники клинико-
диагностических лабораторий, прошедшие соответствующую профессиональную
подготовку в области ин витро диагностики. Назначение анализа и интерпретация
результатов должна осуществляться врачом.
5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
5.1. Состав набора
В состав набора реагентов входят следующие компоненты:
1 .Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный черного цвета для люминесценции,
с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок мышиными моноклональными
IgM-антителами к раковому антигену СА-62, готовый для использования - 1 шт:
2. Конъюгат «СА-62-Акридин» с люминесцентным акридином, требует разведения,
указанного в паспорте к медицинскому изделию - 0.1 мл {I флакон);
3. Калибровочные пробы «Стандартные калибраторы СА-62», на основе сыворотки крови
человека, содержащие известные количества СА-62 человека: 50, 250, 650, 1250, 2500, 5000,
7000 и 10000 Ед/мл, готовые для использования - 0,5 мл (8 флаконов);
4. Положительный контрольный образец на основе сыворотки крови с известным
содержанием СА-62 (7000-10000 Ед/мл), готовый для использования - 1 мл (1 флакон);
5. Рабочий буферный раствор с Твин-80, готов к использованию - 25 мл (1 флакон);
6. Рабочий раствор А для диспенсера 1 хемилюминометра, готов к использованию - 25 мл (1
флакон);
7. Рабочий раствор Б для диспенсера 2 хемилюминометра. готов к использованию - 25 мл (1
флакон).
Набор рассчитан на проведение анализа в дупликатах 48 исследований, включая
стандартные калибраторы СА-62. и последующей детекции люминесцентного конъюгата
СА-62-Акридин, присосдинивщегося к специфическим моноклональным антителам анти-
СА-62 в результате одностадийного конкурентного иммунохемилюминесцентного анали:за
ИХА-СА-62, на специализированных для зтого приборах флэш-люминометрах.
5.2. Принцип метода
Набор реагентов «ИХА-СА-62» представляет собой одностадийный конкурентный
вариант твердофазного иммуно-хемилюминесцентного анализа (ИХА), при котором
происходит конкуренция между содержащимся в анализируемом образце карцином-
специфичным антигеном СА-62 и люминесцентным конъюгатом СА-62-Акридин за
связывание с моноклональными антителами к гликопротеину СА-62. иммобилизованными
на внутренней поверхности лунок планшета.
--- стр. 4 ---
Во время 2-х часовой инкубации к иммобилизованным специфическим антителам
добавляется раствор, содержащий разбавленный образец сыворотки и фиксированную
концентрацию меченого антигена, после чего сорбент отмывается от несвязавшихся
компонентов и затем ре 1истрируется люминесцентный сигнал образовавшихся на твердой
фазе иммунных комплексов.
Несвязавшиеся компоненты удаляются во время отмывки, а образовавшийся
иммунный комплекс {анти-СА62-МаТ-(СА-62-Акридин)} регистрируется при помощи
люминесцентного сигнала импульсным хемилюминометром. Величина регистрируемого
люминесцентного сигнала продукта окисления субстрата обратно пропорциональна
содержанию ракового антигена СА-62 в анализируемой пробе.
Серия калибровочных проб (Стандартные калибраторы «СА-62») тестируется
одновременно с образцами, на основе чего строится калибровочная кривая (Logit-Log
кривая) для количественного определения гликопротеина СА-62 в единицах измерения
(Ед/мл) в неизвестных образцах.
Положительный контрольный образец СА-62* представляет собой референтную пробу
сыворотки крови человека с известным количеством антигена СА-62, растворенным в
Рабочем буферном растворе с Твин-80.
^Примечание. Стандартные кашбрапюры и Поло.жительный контрольный oopajetj
СА-62 откоптролироваиы на отсутствие маркеров ВИЧ (антитела к ВИЧ-1. ВИЧ-2,
антиген р24 ВИЧ-1): гепатита B(HBsAg); гепатита С (антитела), Treponema pallidum
(антитела) методом ИФА в тест-системах, зарегистрированных в РФ.
5.3. Метрологическая прослеживаемость
Метрологическая прослеживаемость значений концентрации Стандартных
калибраторов, входящих в состав набора реагентов «ИХА-СА-62», изготовленных
компанией Angio Medic Inc. Канада, соответствует заявленным. Коммутабельность
контрольных образцов предприятия подтверждена результатами измерения концентрации
ракового антигена СА-62 референтной и рутинной методиками, предназначенными для
измерения показателей концентрации при количественном исследовании уровня антигена
СА-62 (Ед/мл) в верифицированных клинических образцах.
5.4. Ограничения метода
1) . Набор реагентов «ИХА-СА-62» предназначен исключительно для in vitro диагностики.
2) . Корректные результаты могут быть получены только в сыворотке крови человека,
полученной из венозной крови. Образцы плазмы крови для данного теста не подходят.
3) . Наличие цитрата, оксалата, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК) или других
хелатирующих агентов также, как и гепарина в образцах, сделают результаты теста
некорректными.
4) . Образцы от пациентов с беременностью, кормящих, с острыми кровопотерями,
постраневым состоянием, состоянием после иммунизации и воспалительным процессом
исследованию не подлежат, так как потенциально могут привести к ложноположительным
результатам теста.
5) . Поскольку набор реагентов «ИХА-СА-62» является вспомогательным методом ин витро
диагностики для помощи врачу в принятии медицинского решения, он не предназначен для
тестирования выявленных онкобольных в процессе их лечения.
6) . Набор реагентов «ИХА-СА-62» необходимо использовать только по назначению врача.
7) . Влияние интерферирующих веществ таких как сывороточные белки (билирубин,
холестерин, гемоглобин, сывороточный альбумин человека, альфа-1, альфа-2-глобулины.
бета-глобулины, гамма-глобулины, общие триглицериды) и онкомаркеры (РЭА. СА 125,
ПСА. СА 19-9. СА 15-3. АФП) в пределах физиологических норм на результаты измерений
уровня маркера СА-62 не обнаружено. Превышение уровня физиологических норм
--- стр. 5 ---
п/п
№ Исследуемое
Вещество Нормальные значения Диапазон, при котором не
оказывается влияние
1 Билирубин менее 12 мг/л
(< 21 мкмоль/л)
От 0 до 14,6 мг/л (25
мкмоль/л)
2 Холестерин менее 2 г/л
(< 5,18 ммоль/л)
От 0 до 2,7 г/л (7 ммоль/л)
3 Гемоглобин 117 -160 г/л
(7,2 - 9. 93 ммоль/л)
От 0 до 180 г/л (11,2 ммоль/л)
4
Сывороточный
альбумин человека
(ЧСА)
35,0 -54,8 г/л
(532 - 833 мкмоль/л)
От 35,5 до 86.8 г/л
(540 - 1319 мкмоль/л)
5 Ал ьфа-1 -глобул и н ы 1,3-4,2 г/л
(43 - 140 мкмоль/л)
От 1,4 до 17 г/л
(46,7 - 567 мкмоль/л)
6 Альфа-2-глобулины 3,9 - 8,5 г/л
(130 -283 мкмоль/л)
От 4,7 до 63 г/л
(156,7 2100 мкмоль/л)
7 Бета-глобулины 4,0 - 12,5 г/л
(0,34- 1,06 ммоль/л)
От 4,7 до 60 г/л
(0,4 -5,1 ммоль/л)
8 Общие
1'риглицериды
менее 1,5 г/л
(< 1,7 ммоль/л) От 0 до 2,5 г/л (2,8 ммоль/л)
9 Гамма-глобулины 7.3- 13,5 г/л
(76,8 - 142 мкмоль/л)
От 8,2 до 50 г/л
(40 - 526 мкмоль/л)
10
РЭА, раковый
эмбриональный
антиген
0 - 4.8 мМЕ/мл
(0 - 3,8 нг/мл)
От 0 до 220 мМЕ/мл
(0 -20 нг/мл)
11 СА 125, Раковый
антиген 0-35 Ед/мл От 0 до 150 Ед/мл
12
ПСА. простат-
специфический
антиген
0 -4 нг/мл От 0 до 80 нг/мл
13 СА 19-9, Раковый
антиген 0-24 Ед/мл От 0 до 100 Ед/мл
14 С А 15-3, Раковый
антиген
0-30 Ед/мл От 0 до 150 Ед/мл
15 АФП, Альфа-
фетопротеин
0-12 МЕ/мл
(0-15 нг/мл)
От 0 - 50 МЕ/мл
(0 - 62,5 нг/мл)
проявлять повышенную вероятность получения ложноотрицательных результатов. Врач при
оценке результатов анализа должен учитывать анамнез и общее состояние пациента.
9) . При оценке результатов теста врач должен руководствоваться анамнезом и
статистическим распределением уровня маркера у здоровых и больных, поскольку часть
здоровых людей и пациентов с доброкачественными опухолями могут демонстрировать
повышенный уровень экспрессии маркёра СА-62 (на данной стадии исследований
неизвестно, не находятся ли отдельные доброкачественные новообразования в процессе
перехода в злокачественные).
10) . Образцы сыворотки, демонстрирующие повышенную липемию, сильный гемолиз или
турбулентность, не должны использоваться для данного теста. Такие образцы должны быть
отбракованы на преаналитическом этапе анализа и не подвергаться дальнейшему
исследованию.
--- стр. 6 ---
6. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
6.1. Аналитическаи специфичность
Специфичность определяется использованием мышиных моноклональных антител к
раковому антигену СА-62. что исключает перекрестные реакции сгюцифических антител
анти-СА-62 МаТ с сывороточным альбумином и иммуноглобулинами человека.
Аналитическая специфичность набора реагентов «ИХА-СА-62», т.е. способность
выявлять только карцином-специфичный антиген СА-62, вне зависимости от присутствия в
анализируемом образце других антигенов, белков и иммуноглобулинов человека, была
доказана производителем при исследовании культуры клеток различных видов рака - MCF-
7. T47D. Мер G2, HeLa, SW-620, К-562. а также при изучении сыворотки крови пациентов,
больных раком молочной железы, раком предстательной железы или раком яичников.
Ложноположительные результаты выявлены не были. Специфичность, рассчитанная как
соотношение истинноотрицательных результатов к общему количеству отрицательных проб
на целевой маркер, составила 100%.
6.2. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность - в соответствии с разделом 5.4.1.7 ГОСТ Р 51352-
2013. ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 п. А.2.7. наименьшая величина, которая может быть
обнаружена с достаточной уверенностью. Нормативные технические требования -
чувствительность не превышает 35 Ед/мл с достоверностью 0,95. Обоснование выбора
«нулевой калибровочной пробы» ВО = 50 Ед/мл; так как используемый иммунотест
предполагает конкурентное связывание, то линейная зависимость между концентрацией и
относительными световыми единицами (RLU) может быть получена исключительно в
логарифмических координатах, что приводит к тому, что измерения, полученные для
нулевых концентраций, не отображаются на осях координат. Для целей измерения аналита
важен диапазон концентраций маркера СА-62 от 1250 до 10000 Ед/мл. Соответственно, при
выборе минимальной концентрации для "нулевой пробы" необходимо исходить из того, что
на графике «нулевая проба» должна находиться на той же прямой, которая получается при
построении линейного диапазона концентраций 1250 - 10000 Ед/мл. Только в этом случае
эффекты «нелинейности» крайних значений оказывают минимальное влияние на
определение величины маркера СА-62. Таким образом, была выявлена концентрация
«нулевой калибровочной пробы», находящаяся в диапазоне 49-51 Ед/мл из диапазона проб
650. 250, 50, 25 и 10 Ед/мл. три из которых. 50 и 250 и 650 Ед/мл были включены в набор
реагентов «ИХА-СА-62».
6.3 Воспроизводимость
Коэффициент вариации результатов определения концентрации СА-62 в одном и том же
образце сыворотки крови не превышает 10% по результатам внутри- и межеерийных
измерений Положительного контроля и контрольных образцов.
6.4. Тест на прецизионность
Тест на прецизионность характеризуется рассеяЕшем значений измеренЕЕЫх
концентраций, получаемых при использовании набора относительно величины средней
концентрации. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» -
соответствие измеренЕЮЙ концентрации СА-62. предписанной в образце, полученном при
смешивании равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 5000 Ед/мл
СА-62. Процент «открытия» составляет 90-110%. Для изучения внутрисерийной и
внутрилабораторной прецизионности производителем были проведены внутри-
лабораторные испытания с учетом вариаций как В14утри о д е ю й серии, так и между
различными сериями в разЕЕое время. МежлабораторЕЕые испытания прецизионности были
--- стр. 7 ---
/
проведены в рамках клинических испытаний. Результаты проведенных испытаний
прецизионности показали соответствие измеренного процента «открытия» нормальному
диапазону измерений. Проведенный регрессионный анализ двух независимых измерений,
проведенных в лаборатории производителя и в испытательной лаборатории, подтвердил
наличие межлабораторной прецизионности с коэффициентом корреляции (детерминации)
г- =0.99.
6.5. Тест па правильность определения концентрапии
Тест на правильность определения при детекции образцов с концентрациями СА-62 от
1250 до 10000 Ед/мл процент отклонения измеренной концентрации от значения,
принимаемого за истинное, находится в диапазоне 90-110%.
6.6. Диапазон линейности
Диапазон линейности - это диапазон концентраций, при детекции которых
зависимость между значениями уровня СА-62 и log концентрации удовлетворяет линейной
модели. Тест на “линейность” для логарифмической функции (функция Logit-log) -
отклонение от расчетной величины логарифма концентрации СА-62 при пяти
последовательных двукратных разведениях выбранных калибровочных проб. При этом.
Стандартный калибратор «СА-62. 10000 Ед/мл», Стандартный калибратор «СА-62, 5000
Ед/мл» и Стандартный калибратор «СА-62. 1250 Ед/мл» последовательно разводятся в 2, 4,
8, 16 и 32 раза. Таким образом, диапазон линейности составляет от 10000 до 1250 Ед/мл СА-
62.
7. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Для определения диагностической чувствительности и специфичности набора реагентов
«ИХА-СА-62» в рамках клинических испытаний набора реагентов «ИХА-СА-62» были
проанализированы 300 образцов сыворотки, включая 58 образцов сыворотки крови от
больных с верифицированным колоректальным раком, 25 образцов сыворотки от больных
раком молочной железы. 32 образца сыворотки от больных раком легкого, 35 образцов
сыворотки пациентов с верифицированным раком предстательной железы и 150
верифицированных образцов сыворотки здоровых контролен соответствующего возраста и
пола.
7.1. Клиническая (диагностическая)чувствительность
Клиническая (диагностическая) чувствительность определялась как доля, выраженная
в процентах, истинно положительных результатов, подтвержденных гистоло[ическими
исследованиями образцов, в группе больных. Для расчета «истинного» значения
клинической (диагностической) чувствительности использовалась формула в соответствии с
ГОСТ Р 53022.3—^2008 (Таблица 4. Раздел 5.5 ) и ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 (Раздел А.3.15):
Scns% = TP/(TP+FN), где
ТР - истинноположительиый результат анализа, подтвержденный гистологически.
FN - ложноотрицательный результат анализа, подтвержденный гистологически.
Таким образом, «истинное» значение диагностической чувствительности при 95%
специфичности составило 93.7 % (см. 1 аблицу 3).
Для расчета интервала, в котором находится «истинное» значение диагностичеекои
чувствительности и специфичности с доверительной вероятностью С=95%, то есть для
определения показателя правильности исследований, использовалась формула в
--- стр. 8 ---
г
соответствии с ГОСТ Р 53022.3-2008 и теорией вероятности для независимых испытаний по
распределению Бернулли*:
D% = D„% ± 1.96 * [D()% *(100- Do%)/n]'‘^2)
где Do% - целевое значение величины относительного смещения;
D%- целевое значение коэффициента общей аналитической вариации;
1.96 - квантиль стандартного нормального распределения для уровня значимости 0,05.
*1’ас11рслеленис Бернулли в теории вероятностей и .математической статистике — дискрешое
расгфсдсление вероятностей, моделирующее случайный эксперимент произвольной природы, при
известной вероятности усие.ча или неудачи. Иоложинпев Ь.И. Теория вероятностей и
.математическая статистика. Введение в математическую статистику: Учебное пособие. - СПб.. Изд-
во Политехи, ун-та. 2010. - 95 с.
Интервал, в котором находится «истинное» значение диагностической чувствительности с
доверительной вероятностью С=95%. составил 89,8-97.6%
7.2. Клиническая (диа 1 ностическая) специфичность
Клиническая (диагностическая) специфичность лабораторного теста определялась как
доля, выраженная в процентах, истинно отрицательных образцов сыворотки здоровых
людей, имеющих подтвержденное отсутствие онкологических заболеваний, к группе
здоровых. Для расчета «истинного» значения клинической (диагностической)
специфичности использовалась формула в соответствии с ГОСТ Р 53022.3 2008 (Таблица
4. Раздел 5.5) и ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 (Раздел А.3.16);
Sp% = ПЧ/ ('ПЧ+ТР), где
TN - истинно отрицательный результат анализа.
FP - ложно положительный результат анализа.
Таким образом, «истинное» значение диагностической специфичности составило 98.7
% (см. Таблицу 3). Интервал, в котором находится «истинное» значение диагностической
специфичности с доверительной вероятностью С=95%. составил 96,9-100.0%
Таблица 3
Критерий Карцинома различных
локализаций
Здоровые контроли
Общее количество образцов N ^ 300 N - 150 N = 150
Положительный
результат
Истинно положительный (ТР)
N - 140
Ложно
положительный (FP)
N =2
Отрицательный результат Ложно отрицательный (FN)
N = 10
Истинно
отрицательный (TN)
N = 148
Диагностическая
чувствительность,
(Sensitivity)
93,7%
доля истинно положительных
результатов в группе
Диапазон с 95% ДИ
--- стр. 22 ---
ООО «ДЖЕЙВИС ДИАГНОСТИКС»
--- стр. 23 ---
РУКОВОДСТВО по ПРИМЕНЕНИЮ
ОГЛАВЛЕНИЕ
1. НАЗНАЧЕНИЕ......................................................................................................5
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА...........................................................6
3. ВИД МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ.............................................................6
4. ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬ НАБОРА ............................6
5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА ......................................................................7
5Л Принцип метода.............................................................................................7
5.2 Состав набора.................................................................................................8
5.3 Аналитические и диагностические характеристики ........................8
6. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ....................................................................10
6.1 Требования безопасности при работе с набором ...............................10
6.2 Обеспечение получения правильных результатов анализа...........11
6.3 Промывка микропланшетов.......................................................................12
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ И ПРОБОПОДТОТОВКА ..............13
7.1 Материа^п для исследования.......................................................................13
7.2 Взятие клинических образцов ..................................................................13
8. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ ................................13
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И
У ГИЛИЗАЦИИ ТЕС'ГА..........................................................................................14
9.1 Условия хранения..........................................................................................14
9.2 Транспортирование ......................................................................................15
9.3 Утилизация.......................................................................................................15
10. НОД1 ОТОВКА РЕАГЕНТОВ.......................................................................15
10.1 Подготовка планшета ................................................................................16
10.2 Приготовление рабочего буферного раствора .................................17
10.3 Подготовка конъюгата «СА-62-Акридин».......................................17
10.4 Подготовка анализируемых образцов и и.х хранение...................17
11. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.............................................................................18
12. УЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛБТАТОВ.......................................19
12.1 Детекция результатов................................................................................19
12.2 Расчет концентрации гликопротеина СА-62 в анализируемом
образце......................................................................................................................20
12.3 Интерпретация результатов....................................................................21
12.4 Ограничения метода...................................................................................22
10. КОНТАКТНАЯ ИНФОРМА1ЩЯ ...............................................................25
11. ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАЗ'УРА.............................................................25
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «ИХА-СА-62» предназначен для
количественного определения в сыворотке крови человека карцином-
специфичного антигена СА-62 для обнаружения эпителиальных
карцином различных локализаций у взрослого населения, независимо от
пола и расы. Медицинское изделие «ИХА-СА-62» является
вспомогательным методом ин витро диагностики и предназначено для
помощи врачу в принятии медицинского решения.
Набор рассчитан на проведение анализа 48 образцов в дупликатах,
включая стандартные калибраторы СА-62. и последующей
.хемилюминесцентной детекции люминесцентного конъюгата СА-62-
Акридин. присоединившегося к специфическим моноклональным
антителам анти-СА-62 в результате одностадийного конкурентного
иммунохемилюминесцентного анализа ИХА-СА-62 на
специализированных для этого приборах - флэш-люминометрах.
Развитие онкологических заболеваний вызывает появление в
организме человека различных раковых антигенов, которые являются
результатом измененного генома опухолевой клетки и
идентифицируются как «опухолевые маркеры». Одним из таких
маркеров является карцином— специфичный антиген СА-62, который
экспрессируется в больших количествах на поверхности
«малигнизированных» эпителиальных клеток с самого начала роста
опухоли [1-4]. История выявления карцином-специфичного антигена
СА-62 уходит в 1980-е годы и связана с работами как российских, так и
зарубежных исследователей, подробно описанных в статьях [5-13].
Однако, несмотря на столь длительную историю открытия ракового
антигена СА-62 - рецептора к АФП. до настоящего времени не было
зарегистрировано ни одного диагностического теста на выявление этого
высокочувствительного карцином-специфичного гликопротеина,
повышенный уровень которого ассоциируется с наличием
эпителиальных карцином различных локализаций и может
использоваться для выявления процесса канцерогенеза [1-7. 9-1 1].
Раковый антиген СА-62 с молекулярной массой около 62 кДа
представляет собой целое семейство гликопротеинов, которое
присоединяет альфа-фетопротеин (АФП) при помощи особой
комбинации олигосахаридов, расположенных на поверхности антигена
СА-62. Специфические антитела, используемые в сывороточном
иммунохемилюминесцентном анализе «ИХА-СА-62». узнают на
молекулярном уровне онко-специфичный олигосахаридный фпягмент.
--- стр. 24 ---
что позволяет идентифицировать все молекулярные формы ракового
антигена. Опухолевые клетки выделяют две основные растворимые
цитоплазменные фракции N-гликопротеипа в кровь, что позволяет
количественно измерять уровень антигена СА-62 в крови пациента [4. 5].
Таким образом, оценка экспрессии маркера эпителиальных карцином
СА-62 может дать дополнительную информацию врачу при постановке
диагноза [1-4].
Проведенные ранее исследования показали, что клетки
эпителиальных карцином демонстрируют значительную экспрессию
гликопротеиновых антигенов СА-62 во всех исследованных
локализациях эпителиальных карцином (молочной железе,
предстательной железе, легких, матке, желудке, почках, яичниках и др.)
[ 1-4], При этом большинство доброкачественных заболеваний и
здоровых образцов не демонстрируют повышенной экспрессии маркера
СА-62. Тест успешно прошел многочисленные пилотные клинические
исследования в США и Европе, результаты которых получили высокую
оценку зарубежных исследователей и клинических онкологов и были
опубликованы в [1-4].
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
- клиническая лабораторная диагностика.
3. ВИД МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ
- 342340.
4. ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬ НАБОРА
- сотрудники клинико-диагностических лабораторий, прошедшие
соответствующую профессиональную подготовку в области ин витро
диагностики. Назначение анализа и интерпретация результатов должна
осуществляться врачом.
5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
5.1 П ринцип метола
Набор реагентов «ИХА-СА-62» представляет собой
одностадийный конкурентный вариант твердофазного
иммунохемилюминесцентного анализа (ИХА), при котором происходит
конкуренция между содержащимся в анализируемом образце карцином-
специфичным антигеном СА-62 и люминесцентным конъюгатом СА-62-
Акридин за связывание с моноюзональными антителами к
гликопротеину СА-62. иммобилизованными на внутренней поверхности
лунок планшета.
Во время 2-х часовой инкубации к иммобилизованным
специфическим антителам добавляется раствор, содержащий
разбавленный образец сыворотки и фиксированную концентрацию
меченого антигена, после чего сорбент отмывается от несвязавшихся
компонентов и затем регистрируется люминесцентный сигнал
образовавщихся на твердой фазе иммунных комплексов.
Иесвязавшиеся компоненты удаляются во время отмывки, а
образовавщийся иммунный комплекс {анти-СА62-МаТ-(СА-62-
Акридин)} регистрируется при помощи люминесцентного сигпаза
импульсным хемилюминомстром. Величина регистрируемого
люминесцентного сигнала продукта окисления субстрата обратно
пропорциональна содержанию ракового антигена СА-62 в
аназизируемой пробе
Серия калибровочных проб (Стандартные калибраторы «СА-62»)
тестируется одновременно с образцами, на основе чего строится
калибровочная кривая (Logit-Log кривая) для количественного
определения гликопротеина СА-62 в единицах измерения (Ед/мл) в
неизвестных образцах.
Положительный контрольный образец СА-62* представляет собой
референтную пробу сыворотки крови человека с известным количеством
антигена СА-62. растворенным в Рабочем буферном растворе с Твин-80.
Примечание. Стандартные кашираторы и Положительный
контрольный oopwseif СА-62 проверены на отсутствие маркеров ВИЧ
(антитела к ВИЧ-1. ВИЧ-2, антиген р24 ВИЧ-}): гепатита B(HBsAg):
гепатита С (антитела), Treponema pallidum (антитела) методом ИФА
в тест-системах, зарегистрированных в РФ.
1
--- стр. 25 ---
5.2 Состав набора
Стандартная упаковка тест-системы «ИХА-СА-62» содержит.
1. Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный черного цвета
для люминесценции, с иммобилизованными на внутренней
поверхности лунок мышиными моноклональными IgM-антителами к
раковому антигену СА-62, готовый для использования - 1 шт.
2. Конъюгат «СА-62-Акридин» с люминесцентным акридином, требует
разведения, указанного в паспорте к медицинскому изделию - 0,1 мл (1
флакон):
3. Калибровочные пробы «Стандартные калибраторы СА-62», на
основе сыворотки крови человека, содержащие известные количества
СА-62 человека: 50. 250. 650. 1250. 2500, 5000, 7000 и 10000 Ед/мл,
готовые для использования - 0,5 мл (8 флаконов);
4. Положительный контрольный образец на основе сыворотки крови с
известным содержанием СА-62 (7000-10000 Ед/мл). готовый для
использования - 1 мл(1 флакон);
5. Рабочий буферный раствор с Твин-80, готов к использованию - 25
мл (1 флакон);
6. Рабочий раствор А для диспенсера 1 хемилюминометра. готов к
использованию - 25 мл (1 флакон);
7. Рабочий раствор Б для диспенсера 2 хемилюминометра. готов к
использованию - 25 мл{1 флакон).
5.3 Анали гические и диагностические характеристики
П р и н ц и п анализа: одностадийный твердофазный конкурентный
ИХА.
Количество определений: 48 (в дупликатах). включая стандартные
калибраторы СА-62.
Аналитическая специфичность: аналитическая специфичность
набора реагентов «ИХА-СА-62», т.е. способность выявлять только
карцином-специфичный антиген СА-62. вне зависимости от присутствия
в анализируемом образце других антигенов, белков и
иммуноглобулинов человека, была доказана производителем при
исследовании культуры клеток различных видов рака - MCF-7, T47D,
Нер G2, НеЕа. SW-620. К-562. а также при изучении сыворотки крови
пациентов, больных раком молочной железы, раком предстательной
8
железы или раком яичников. Специфичность, рассчитанная как
соотношение истинноотрицательных результатов к общему количеству
отрицательных проб на целевой маркер, составила 100%.
Аналитическая чувствительность: в соответствии с разделом
5.4.1.7 ГОСТ Р 51352-2013. ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 п. А.2.7, это
наименьшая величина, которая может быть обнаружена с достаточной
уверенностью. Нормативные технические требования
чувствительность не превышает 35 Ед/мл с достоверностью 0,95.
Воспроизводимость: коэффициент вариации результатов
определения концентрации СА-62 в одном и том же образце сыворотки
крови не превышает 10%.
Тест па прецизионность; проверяется тестом на «открытие»-
соответствие измеренной концентрации СА-62. предписанной в образце,
полученном при смешивании равных объемов контрольной сыворотки и
калибровочной пробы 5000 Ед/мл СА-62. Процент «открытия»
составляет 90-110%.
Тест на правильность определения концентрации: при детекции
образцов с концентрациями от 1250 до 10000 Ед/мл СА-62 процент
отклонения измеренной концентрации от значения, принимаемого за
истинное, находится в диапазоне 90-110%.
Диапашн линейности: диапазон линейности составляет от 10000 до
250 Ед/мл СА-62.
Диапазон измерений: 50 - 10000 Ед/мл.
Объем исследуемого образца: 10 мкл.
Продолжительность анализа: 2 часа.
Клиническая проверка; концентрацию СА-62 измеряли в
сыворотке крови у здоровых людей Западного региона России. Западной
Европы. Западного и Восточного регионов Канады. Западного и
Восточного регионов США в возрасте 20-75 лет. Средняя концентрация
антигена СА-62 составляет 3500 Ед/мл в интервале 50-10000 Ед/мл. Для
определения диагностической чувствительности и специфичности были
проанализированы диверсифицированные группы больных и здоровых
людей, которые относились к различным расам, включаюшим
европеоидную, негроидную и монголоидную. Статистически значимых
отличий между различными расами выявлено не было.
Учет результатов: импульсная хемилюминесценция на флэш-
люминометре.
--- стр. 26 ---
С р о к хранения: 3 месяца при температуре от минус 20 до минус
зо°с.
Входящие в состав набора калибровочные обрашы являются
готовыми к использованию. при этом конъюгат требует
дополнительного разведения в буферном растворе с Твин-80. Набор
реагентов произведен для диагностических целей (ш vitro диагностика).
6. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 26.
6.1 Требования безопасности при работе с набором
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
При работе с исследуемыми образцами в наборе реагентов «ИХА-
СА-62» следует соблюдать меры предосторожности, принятые при
работе с потенциально инфицированным материалом,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-1V групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и
«ИНСТРУКЦИИ ПО МЕРАМ ПРОФИЛАКТИКИ
РАСПРОСТРАНЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПРИ
РАБОТЕ В КЛИНИКО-ДИАТНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ», утвержденной
Минздравом СССР 17 января 1991 г. Стандартные калибраторы
содержат компоненты человеческой крови и должны быть
использованы и утилизированы в соответствии с требованиями,
необходимыми для работы с биологическими и потенциально
инфицированными образцами. Использовать эти реагенты и образцы
крови пациентов необходимо в соответствии с установленной в мире
надлежащей лабораторной практикой (СЕР). Никогда не следует
забирать реагенты при помощи рта и избегать контакта кожи или
слизистой оболочки с реагентами и образцами.
Материалы, контактирующие с исследуемыми образцами, следует
дезинфицировать в соответствии с МУ-287-113 «МЕТОДИЧЕСКИЕ
УКАЗАНИЯ ПО ДЕЗИНФЕКЦИИ. ПРЕДСТЕРИЛИЗАЦИОННОЙ
ОЧИСТКЕ И СТЕРИЛИЗАЦИИ ИЗДЕЛИЙ
МЕДИЦИНСКОГОНАЗНАЧЕНИЯ» (УТВ. ДЕПАРТАМЕНТОМ
ГОССАНЭПИДНАДЗОРА Минздрава РФ ОТЗО.12.1998). Убирать
и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами I11-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
Стандартные калибраторы, конъюгат и положительный контрольный
образец содержат мертиолят (орто-этилртутьтиосалицилат натрия
C9H9Hg02SN9. MW 404.8. CAS: 54-64-8). который обладает
противомикробной активностью и широко используется во всем
мире для предотвращения роста бактерий и фунгицидов в
биологических образцах. Используемая итоговая концентрация
мертиолята 0.02% в cTanaapTFibix калибраторах, конъюгате и в
исследуемых образцах набора реагентов «ИХА-СА-62». необходимая
для предотвращения микробного роста в биологических образцах,
является нетоксичной.
Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с требованиями
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к
обращению с медицинскими отходами».
Применять набор строго по назначению, согласно данной
инструкции.
Допускать к работе с набором только специально обученный
персонал с высшим или средним медицинским или биологическим
(ветеринарным) образованием, прошедшим подготовку на
лицензированных курсах по работе с микроорганизмами III-IV групп
патогенности.
Образцы сыворотки, демонстрирующие повышенную липемию.
сильный гемолиз или турбулентность, не должны использоваться для
данного теста. Оптимальные результаты теста будут получены при
строгом соблюдении этого протокола. Необходимо проводить
аккуратное и точное пипетировапие, без пенообразования образцов и
компонентов набора реагентов также, как и следование точному
временЕЮму и температурному режиму, описанному в протоколе.
Какие-либо отклонения от инструкций могут давать ошибочные
результаты!
Не использовать набор по истечении срока годности.
6.2 Обеспечение получения правильных результатов анализа
Достоверность и воспроизводимость результатов анализа зависит от
выполнения следующих основных правил:
Для дезинфекции исследуемых образцов, посуды и материалов,
контактирующих с исследуемыми образцами, следует использовать