«Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Corynebacterium diphtheriae/tox-genes-FL» — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
I
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
человека (ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии P/D^пoJpeбнaдзopa)
.Г. Акимкин
2019 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Corynebacterium diphtheriae I tox-
genes-FL
АмплиСенс'
tJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА......................................................................................................................5
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ......................................................................................................... 6
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ...................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..............................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.................................10
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................................................13
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 15
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК ...........................17
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА...............................................................................................17
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ .................................................................................19
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................19
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50) ......................................................................20
СОСТАВ...................................................................................................................................20
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............20
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................20
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 21
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................22
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F).................................................................27
СОСТАВ...................................................................................................................................27
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............27
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................27
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 28
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................30
ФОРМА 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L) ........................................................................35
СОСТАВ...................................................................................................................................35
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............35
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................35
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 36
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................37
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................42
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ.......................................................43
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................44
ПРИЛОЖЕНИЕ 1.........................................................................................................................45
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
к- - отрицательный контроль ПЦР
К+ - положительный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс®
C orynebacterium diphtheriae / tox-genes-FL, далее - набор
реагентов, предназначен для качественного определения ДНК
Corynebacterium diphtheriae и обнаружения генов, кодирующих
токсины C orynebacterium diphtheriae и C orynebacterium ulcerans
в биологическом материале (мазки со слизистой оболочки
носо- и ротоглотки, мазки с пораженных участков кожи)
методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов амплификации. Набор реагентов используется в
клинической лабораторной диагностике. Материалом для
проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированной из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011
№ 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской
Федерации» ПЦР-исследование является одним из методов
всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия
по лечению пациента.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в
комплексной диагностике заболевания. Набор реагентов может
быть использован с целью скрининга носительства
С.diphtheriae, а также в целях исключения диагноза
--- стр. 5 ---
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (BKO-FL) и одновременной
амплификации участков ДНК выявляемых микроорганизмов и
ДНК BKO-FL с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
BKO-FL позволяет контролировать все этапы ПЦР-
исследования для каждого образца и оценивать влияние
ингибиторов на результаты ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами ДНК
проводится реакция амплификации участка ДНК при помощи
специфичных к этому участку праймеров и фермента Taq-
полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, которые
гибридизуются с комплементарным участком
амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит
нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с
системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени».
Набор реагентов в форме 2 содержит систему защиты от
контаминации ампликонами за счет применения фермента
урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
Фермент УДГ распознает и катализирует разрушение цепей
ДНК, содержащих дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей
дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК,
но всегда присутствует в ампликонах, поскольку
дезоксиуридинтрифосфат входит в состав смеси дНТФ в
реагентах для амплификации. Дезоксиуридин делает
контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению
ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и,
следовательно, они не могут быть в дальнейшем
амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при
нагревании выше 50 °С и поэтому не разрушает ампликоны
мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
--- стр. 6 ---
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводятся четыре реакции - амплификация специфических
участков ДНК гена гроВ Corynebacterium diphtheriae, гена,
кодирующего токсин C orynebacterium diphtheriae, гена,
кодирующего токсин Corynebacterium ulcerans, а также ДНК
BKO-FL. Результаты амплификации регистрируются по
четырем различным каналам флуоресцентной детекции;
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX Cy5
ДНК-мишень ДНК BKO-FL
ДНК токсина
Corynebacterium
diphtheriae
ДНК
Corynebacterium
diphtheriae
ДНК токсина
Corynebacterium
ulcerans
Область
амплификации
искусственная
нуклеотидная
последовательность
gene tox
С. diphtheriae gene rpoB gene tox
C. ulcerans
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
Форма 3: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1,2, 3 предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК, рекомендованные Изготовителем.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 110 реакций амплификации, включая контроли.
Форма 3 рассчитана на проведение 96 реакций амплификации,
включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
--- стр. 7 ---
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Возбудитель Комплект для
экстракции ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность,
(предел
обнаружения),
ГЭ/мл^
Мазки со
слизистой
оболочки
косо- и
ротоглотки,
пораженных
участков кожи
Corynebacterium
diphtheriae
«РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50,
FRT-100 F. FRT-L
1000
Ген токсина
Corynebacterium
diphtheriae
Ген токсина
Corynebacterium
ulcerans
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Воспроизводимость исследования
Воспроизводимость исследования была изучена в двух
независимых лабораториях, разными операторами, в разные
дни, на различных приборах. Тестирование проводили на
образцах, содержащих ДНК C.diphtheriae, ДНК гена tox
C.diphtheriae и ДНК гена tox C.ulcerans. Конечная концентрация
каждого составила 1х10^ГЭ/мл. Для всех повторов
исследуемых образцов результаты обнаружения заявленных
фрагментов ДНК совпали.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает заявленные фрагменты ДНК
микроорганизмов при исследовании следующих штаммов из
коллекции NCTC® (National Collection of Type Cultures
Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory
(CPHL), Великобритания) в концентрации не более 1x10^ ГЭ/мл:
- C orynebacterium diphtheriae NCTC® №10356 (tox-) - ДНК
C.diphtheriae обнаружена. ДНК генов, кодирующих токсины
C.diphtheriae и C.ulcerans, не обнаружена;
- C orynebacterium diphtheriae NCTC® N210648 (tox+) - ДНК
C.diphtheriae и ДНК гена, кодирующего токсин C.diphtheriae
обнаружена, ДНК гена, кодирующего токсин C.ulcerans, не
^ Количество геномных эквивалентов (ГЭ) микрооргазнизма в 1 мл исследуемого материала.
--- стр. 8 ---
обнаружена;
- C orynebacterium ulcerans NCTC® №7910 (tox+) - ДНК гена,
кодирующего токсин С.ulcerans обнаружена, ДНК
C.diphtheriae и гена, кодирующего токсин C.diphtheriae, не
обнаружена.
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана
при исследовании ДНК следующих микроорганизмов, а также
геномной ДНК человека:
1. Штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture
Collection, США) и ГКПМ (Государственная коллекция
патогенных микроорганизмов ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава
России) в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл:
Corynebacterium xerosis АТСС® 7711D-5™, Corynebacterium
urealyticum АТСС® 43044™, C orynebacterium am ycolatum
АТСС® 49368™, Corynebacterium je ike iu m АТСС® 43734™,
Corynebacterium pseudodiphtheriticum 25;
2. Штаммы из коллекций АТСС® (American Type Culture
Collection, США), NCTC® (National Collection of Type Cultures,
Великобритания) и ГКПМ (Государственная коллекция
патогенных микроорганизмов ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава
России) в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл; Bordetella
pertussis 703 L 6, Streptococcus pneum oniae АТСС® 49619™,
Streptococcus agalactiae ATCC® 13813'^'^, Streptococcus
pyogenes Dick - I, Staphylococcus saprophyticus ATCC®
15305™, H aem ophilus influenzae 423, Proteus m irabilis 3177,
Klebsiella pneum oniae 418, P seudom onas aeruginosa ATCC®
9027™, N eisseria flava ATCC® 14221™, N eisseria sicca 5,
Neisseria m ucosa ATCC® 19693™, E scherichia coli M 17,
Salm onella enteritidis 5765, Salm onella typhim urium 79,
M oraxella catarrhalis ATCC® 8193™, Yersinia enterocolitica
134, E nterococcus faecalis NCTC® 775, Staphylococcus aureus
ATCC® 6538-P, M ycobacterium bovis Ravenel 700204.
3. ДНК человека в концентрации 1 мг/мл.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих соединениях указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
--- стр. 9 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 3
Результаты тестирования набора реагентов для
диагностики in vitro
АмплиСенс® Corynebacterium diphtheriae I tox-genes-FL
Тип образцов
Результаты применения
АмплиСенс® Corynebacterium
Результаты применения
референтного метода^
diphtheriae 1 tox-genes-FL положительных отрицательных
Мазки со
слизистой Всего положительных 150 0
оболочки носо-
и ротоглотки 300 образцов отрицательных 0 150
Мазки с
nnnawPHWkiY
Всего положительных 150 0
участков КОЖИ 300 образцов отрицательных 0 150
Таблица 4
Результативность применения набора реагентов для
диагностики in vitro АмплиСенс® Corynebacterium
Тип
образцов Описание образцов
Количество
образцов,
шт.
Результат
положи
тельных
отрица
тельных
Биологический материал,
содержащий ДНК C.diphtheriae и
гена токсина C.diphtheriae
50 50 0
Биологический материал,
содержащий ДНК C.diphtheriae и не
содержащий ДНК гена токсина
C.diphtheriae
50 50 0
Биологический материал,
содержащий ДНК гена токсина
C.uicerans
50 50 0
Биологический материал, не
содержащий ДНК C.diphtheriae, ДНК
гена токсина C.diphtheriae и гена
токсина C.uicerans
150 0 150
Мазки со
СЛИЗИСТОЙ
оболочки
носо-и
ротоглотки
в качестве референтного метода использовался Набор реагентов «ДС-ДИФ-КОРИНЕ»
Тест-система биохимическая для дифференциации микроорганизмов рода коринебактерий,
в том числе возбудителя дифтерии, и определения его токсигенных свойств по ТУ 9398-061-
05941003-2010, РУ № ФСР 2010/07815.
--- стр. 10 ---
Тип
образцов Описание образцов
Количество
образцов,
шт.
Результат
положи
тельных
отрица
тельных
Мазки с
пораженных
участков
кожи
Биологический материал,
содержащий ДНК С.diphtheriae и
гена токсина C.diphtheriae
50 50 0
Биологический материал,
содержащий ДНК C.diphtheriae и не
содержащий ДНК гена токсина
C.diphtheriae
50 50 0
Биологический материал,
содержащий ДНК гена токсина
С. ulcerans
50 50 0
Биологический материал, не
содержащий ДНК C.diphtheriae, ДНК
гена токсина C.diphtheriae и гена
токсина С.ulcerans
150 0 150
Материалом исследования являлись образцы мазков со
слизистой оболочки носо- и ротоглотки и с пораженных
участков кожи, отрицательные при исследовании с набором
сравнения, а так же модельные образцы клинического
материала, контаминированные штаммами микроорганизмов
Corynebacterium diphtheriae NCTC® №10356™ (tox-),
C orynebacterium diphtheriae NCTC® №10648™ (tox+) и
C orynebacterium ulcerans NCTC® №7910™ (tox+) в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл, имитирующие биологический
материал от больных дифтерией и носителей возбудителя.
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов для
диагностики in vitro АмплиСенс® Corynebacterium
Тип образцов
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
в интервале, %
Диагностическая
специфичность'*,
(с доверительной
вероятностью 95 %)
в интервале, %
Мазки со слизистой
оболочки носо- и
ротоглотки
92,9-100 97,6-100
Мазки с пораженных
участков кожи 92,9-100 97,6-100
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
'‘Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
10
--- стр. 11 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ
УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»,
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно
опасные, организовывать работу и хранение в соответствии
с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами ill-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным.
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу
следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне
Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку®.
® Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
11
--- стр. 25 ---
* В случае получения невалидного/сомнительного
результата необходимо провести повторное ПЦР-
исследование соответствующего исследуемого образца,
начиная с этапа экстракции.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 10 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 10
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
ФОРМА 1_________________________________________________________________
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (Ct)
FAM JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК
опоеделено
меньше
граничного
отсутствует отсутствует отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Cf) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 10) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена
специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX, и/или Су5 определено
значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК, начиная с этапа
экстракции ДНК.
25
--- стр. 26 ---
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА 1______________
26
--- стр. 27 ---
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F - комплект реагентов для
амплификации участков ДНК C orynebacterium diphtheriae и
генов, кодирующих токсины C orynebacterium diphtheriae и
C orynebacterium ulcerans, с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени» позволяет
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
ФОРМА 2 _____________________________________________________________
Комплект реагентов вкгючает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь-FL C.diphtheriae /
tox genes
Прозрачная жидкость
от бесцветного до
светло-лилового цвета
1.2 1 пробирка
ПЦР-буфер-В Прозрачная бесцветная
жидкость 0,6 1 пробирка
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 1 пробирка
К+ C.diphtheriae /tox genes Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирки
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110
амплификации, включая контроли.
реакции
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Выбор пробирок для амплификации зависит от
используемого амплификатора с системой детекции в
режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК - 10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для
приготовления реакционной смеси. На одну реакцию
требуется 10 мкл ПЦР-смеси-FL C.diphtheriae /tox genes.
27
--- стр. 33 ---
ФОРМА 2
Таблица 14
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для
флуорофора (Ct)
FAWI JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК
опоелелено
меньше
граничного
отсутствует отсутствует отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ПЦР
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
Возможные ошибки;
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Cf) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 14) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена
специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX, и/или Су5 определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК, начиная с этапа
экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5
определено значение порогового цикла (С/). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
33
--- стр. 34 ---
ФОРМА 2
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
34
--- стр. 35 ---
ФОРМА 3
ФОРМА 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участка ДНК C orynebacterium diphtheriae и
генов, кодирующих токсины C orynebacterium diphtheriae и
C orynebacterium ulcerans, с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени» лозволяет
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь C.diphthehae 1
tox genes-Lyo Порошок белого цвета —
96 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ C.diphthehae 1 tox genes Прозрачная
бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
К- Прозрачная
бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирки
ОКО Прозрачная
бесцветная жидкость 1.2 1 пробирок
Буфер для элюции А Прозрачная
бесцветная жидкость 1.2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью
С.d ip h th e ria e / tox genes-Lyo для амплификации ДНК
исследуемых и контрольных образцов (количество
контрольных образцов см. в п. 3).
В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых
2.
35
--- стр. 40 ---
ФОРМА 3
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
Результат
FAM JOE ROX Су5
вко
C .d ip h th e r ia e
(ген fox
С. d ip h th e r la e )
C .d ip h th e r ia e
(ген г р о В )
C .u ic e r a n s
(ген fox
C .u ic e r a n s )
Приборы роторного и планшетного типа
Опоелелено
не больше
граничного
Отсутствует
Опоелелено
больше
граничного
Отсутствует
или
определено
больше
граничного
Сомнительный*
При повторении считать, что
обнаружена ДНК C .d ip h th e ria e
Опоелелено
не больше
граничного
Опоелелено
больше
граничного
Опоелелено
больше
граничного
Отсутствует
или
определено
больше
граничного
Сомнительный*
При повторении считать, что
обнаружена ДНК C .d ip h th e ria e и ДНК
гена fox C .d ip h th e ria e в низком
содержании
* В случае получения невалидного/сомнительного
результата необходимо провести повторное ПЦР-
исследование соответствующего исследуемого образца,
начиная с этапа экстракции.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с
табл. 18 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 18
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Значение порогового
сЬлуорос
цикла по каналу для
)ора (Ct)
РАМ JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК
определено
меньше
граничного
отсутствует отсутствует отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
к + ПЦР
опоелелено
меньше
граничного
опоелелено
меньше
граничного
опоелелено
меньше
граничного
опоелелено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение
порогового цикла (Ct) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. 18) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
40
--- стр. 41 ---
И детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена
специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX, и/или Суб определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая ДНК, начиная с этапа
экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА 3_____________________
41
--- стр. 42 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
При получении разукомплектовать в соответствии с
указанными температурами хранения.
Хранение.
^ о щ а___L «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 хранить
в холодильной камере при температуре от 2 до 8 X. ПЦР-
смесь-FL C .diphtheriae / tox genes хранить в защищенном от
света месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 X, кроме ПЦР-
буфера-В, полимеразы (TaqF) и ПЦР-смеси-FL C.diphtheriae /
tox genes. ПЦР-буфер-В, полимеразу (TaqF) и ПЦР-смесь-FL
C.diphtheriae / tox genes хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус16Х. ПЦР-смесь-FL
C.diphtheriae / tox genes хранить в защищенном от света месте.
^Рма __^ «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С.
Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь C .diphtheriae /
tox genes-Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-
смесь C.diphtheriae / tox genes-Lyo хранить в защищенном от
света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
42
--- стр. 43 ---
га ра н ти й н ы е о б я за те л ь с тв а и зго то в и те л я
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение установленного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail;
cs@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов,
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУ
«Поликлиника №1»
Управления делами Президента
Российской Федерации
Е.Н. Родионова
.В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amDlisens.ru .
43
--- стр. 44 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
Содержимого достаточно
для проведения п-
количества тестов
[lot Код партии Использовать до
IVD Медицинское изделие
для диагностики in vitro □3
\1/
Обратитесь к инструкции
по применению
Не допускать
воздействия солнечногоVER Дата изменения
света
1
Температурный
диапазон Дата изготовления
mJ
Изготовитель
f
Беречь от влаги
44