Набор реагентов для выявления кДНК вируса гриппа типа А субтипов H1, Н3, Н5, Н7 и H9 на олигонуклеотидных суспензионных биочипах "Вектор-xMAP-Influenza H1/Н3/Н5/Н7/H9" по ТУ 21.20.23-081-05664012-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Полное название набора Набор реагентов для выявления кДНК вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9 на олигонуклеотидных суспензионных биочипах «Вектор- xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» по ТУ 21.20.23-081-05664012-2017. f 1.2. Предназначение набора и его диагностическая роль Набор реагентов «Вектбр-xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5Я17/Н9» предназначен для выявления кДНК вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9, предварительно синтезированных на матрице РНК вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9 в реакции обратной транскрипции с дальнейшей гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации на олигонуклеотидных суспензионных биочипах, с использованием мультиплексного проточного анализатора Luminex 200 (Luminex, США) или аналогичных приборах других производителей. Диагностическая роль набора реагентов «Вектор-xlVIAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» заключается в возможности его использования для ранней диагностики гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9 и индикации патогенных биологических агентов (ПБА); как ускоренного предварительного теста при выполнении культурального и биологического методов исследования и идентификации подозрительных культур; для эпидемиологического мониторинга. . • 1.3. Область применения набора Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика вируса гриппа, специфическая индикация патогенных биологических агентов, эпидемиологический мониторинг, научные исследования.. ^ ,,, к Набор реагентов может быть использован в учреждениях'медицины и здравоохранения, вирусологических лабораториях Центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора (без накопления возбудителя вирусологическими методами), в эпидемиологических службах, имеющих Вектор-хМАР-Influenza H1/H3/H5/H7/H9 страница 2 из 23 --- стр. 3 --- Лицензию на деятельность в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных II-IV групп патогенности для дифференцированной диагностики субтипов вируса гриппа А, а также, в стационарных и мобильных лабораториях, имеющих санитарно- эпидемиологическое заключение на проведение работ с микроорганизмами ЫУ групп патогенности'. . 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА Компоненты набора являются одноразовыми. Набор реагентов «Вектор-xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» не требует технического обслуживания и калибровки. 2.1. Состав набора № Состав комплекта Описание Объем (мл) Кол-во 1. Реагент-1 прозрачная бесцветная жидкость 0,50 1 пробирка 2. Реагент-2 прозрачная бесцветная жидкость 0,50 1 пробирка 3. Реагент-3 суспензия полистирольных микросфер 0,25 1 пробирка 4. Положительный контрольный образец, ПКО-Н1/ЫЗ/Н5 прозрачная бесцветная жидкость 0,20 1 пробирка 5. Положительный контрольный образец, ПКО-Н7/Н9 прозрачная бесцветная жидкость 0,20 1 пробирка 6. Отрицательный контрольный образец, ОКО прозрачная бесцветная жидкость 0,20 1 пробирка В состав набора входит эксплуатационная документация; инструкция по применению набора. ' в соответствии с п.2.1.6 СП 1.3.3118-13, диагностика молекулярно-генетическими методами (без накопления возбудителя) по детекции в клиническом материале возбудителей инфекционных болезней могут проводиться в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами III группы патогенности в соответствии с требованиями санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами", утвержденных постановлением Главного государственного врача Российской Федерации от 28.01.2008 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 21 февраля 2008 г. N 11197). Исследования по детекции нуклеиновых кислот проводятся в боксированных помещениях, оборудованных системами приточной и вытяжной вентиляции или боксах микробиологической безопасности II класса. Материал для исследований подлежит предварительной обработке в соответствии методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». BeKTop-xMAP-InfluenzaHl/H3/H5/H7/H9 страница 3 из 23 --- стр. 4 --- с6 Реагент-1 расфасован по 500 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав; 1 ОхПЦР-буфер; 5 мМ дНТФ - водный раствор дезоксирибонуклеозид-трифосфатов; 100 мМ MgCb; 5 пар праймеров. Реагент-2 расфасован по 500 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав: 1 ОхПЦР-буфер; Smart TaqДHK- полимераза. Реагент-3 расфасован по 250 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав: суспензия полистирольных микросфер 5 цветовых регионов с иммобилизованными на поверхности вирусспецифическими ДНК-зондами, 1,5хТМАС. Положительный контрольный образец ПКО-Н1/НЗ/Н5 расфасован по 200 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав: раствор трех рекомбинантных бактериальных плазмид в ТЕ-буфере, содержащих вставки ДНК, комплементарные участкам генома вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ и Н5. Положительный контрольный образец ПКО-Н7/Н9 расфасован по 200 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав: раствор двух рекомбинантных бактериальных плазмид в ТЕ-буфере, содержащих вставки ДНК, комплементарные участкам генома вируса гриппа типа А субтипов Н7 и Н9. Отрицательный контрольный образец расфасован по 200 мкл в микропробирку с завинчивающейся крышкой объемом 1,0-2,0 мл. Состав: деионизованная вода. Набор реагентов упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой. Вторичной упаковкой может быть пакет с застежкой или пакет, вложенный в коробку. В этом случае пакет и инструкцию по применению вкладывают в коробку. Примечание: Ингредиентами, которые могут влиять на измерения, являются праймеры и флуоресцентные зонды, основной характеристикой Вектор-хМАР-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9 страница 4 из 23 --- стр. 5 --- f которых для конечного пользователя является температура отжига, составляющая 50 °С. Данная характеристика реализуется с помощью температурно-временного режима амплификации, следовательно, его соблюдение является строго обязательным. 2.2. Количество анализируемых проб Набор реагентов -рассчитан на проведение 50 определений, включая контроли. 2.3. Метод исследования Обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9 основано на использовании метода обратной транскрипции, ПНР и дальнейшей гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации на олигонуклеотидных суспензионных биочипах. Метод основан на многократном увеличении числа копий фрагмента вирусных нуклеиновых кислот (комплементарной ДНК - кДНК), что позволяет обнаружить специфичный участок генома возбудителя с целью его идентификации. Для детекции продуктов амплификации применяются вирусспецифические ДНК-зонды, иммобилизованные на поверхности окрашенных полистирольных микросфер пяти цветовых регионов. Наличие флуоресценции микросфер заданного региона соответствует наличию в реакционной смеси специфических продуктов амплификации. 2.3. Ограничения метода В инфицированном материале кДНК вирусов может быть не обнаружена по причине ингибирования обратной транскрипции, ПЦР и/или недостаточной эффективности выделения нуклеиновых кислот. Для достижения показателей аналитической чувствительности используемый набор для выделения должен обеспечивать эффективность выделения НК на уровне не менее 20 %. Причиной получения ложноположительного результата является контаминация на этапе выделения ЬЖ либо проведения реакций ОТ, ПЦР. Вектор-хМАР-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9 страница 5 из 23 --- стр. 6 --- г i f Ложноположительный результат выявляется с помощью отрицательных контрольных образцов выделения и ОТ-ПЦР (п. 8.3 настоящей инструкции). Причиной получения ложноотрицательного результата является ингибирование ОТ-ПЦР и/или недостаточная эффективность выделения Ж . Ложноотрицательный результат выявляется с помощью положительных контрольных образцов ОТ-ПЦР (п. 8.3 настоящей инструкции). . 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Исследования аналитических характеристик набора проведены на базе ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» (р.п. Кольцово, Новосибирской области) и в испытательной лаборатории ООО «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР» (г. Москва) в рамках исследования эффективности набора и проведения технических испытаний. При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех исследуемых образцов. 3.1.1. Аналитическая чувствительность Набор реагентов должен выявлять в реакционной смеси IxlO'^ копий к ДНК вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9. 3.1.2. Специфичность , ; ‘ Набор редгентов не должен давать положительных результатов с образцами здоровых доноров или образцами, содержащими генетический материал гетерологичных вирусов (полиовирус Sabin, аденовирус 5 типа, вирус Повассан, вирус денге 1, вирус Коксаки (Coxsackievirus А7). 3.2. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Исследования аналитических характеристик набора проведены на базе ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» (р.п. Кольцово, Новосибирской области) и в испытательной лаборатории ООО «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР» (г. Москва) в Вектор-хМАР-Influenza H1/H3/H5/H7/H9 страница 6 из 23 --- стр. 7 --- / рамках исследования эффективности набора и проведения технических испытаний. При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех исследуемых образцов. 3.2.1. Диагностическая чувствительность Диагностическая чувствительность - не менее 98% р доверительной вероятностью 90 %. При исследовании 200 положительных образцов, содержащих кДНК вируса гриппа типа А субтипов Н1, НЗ, Н5, Н7 и Н9 в концентрации 1,0x1 O ' * копий кДНК в 30 мкл реакционной смеси, положительный результат в ПЦР получен для 200 образцов. 3.2.2. Диагностическая специфичность Диагностическая специфичность - не менее98 % е доверительной вероятностью 90 %. При исследовании 200 отрицательных образцов, содержащих НК гетерологичных микроорганизмов отрицательный ответ в ПЦР получен во всех 100 % случаях. , V - 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ Вирус гриппа типа А субтипов Н1 и НЗ относится к III группе патогенности. Работа с вирусом гриппа типа А должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением требований СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», МУ 1.3. 2569- 09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - BeicTop-xMAP-Influenza Н1/НЗЩ5/Н7/Н9 страница 7 из 23 --- стр. 13 --- --- стр. 14 --- при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036- 95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». Исследуемые пробы хранят при температуре от 2 °С до 8 °С не более 2 суток, при температуре от минус 16 °С до минус 20 °С не более одного месяца, при температуре минус 70 °С или в жидком азоте в течение 1 года, не допуская его оттаивания до проведения исследования. • . . ' При замораживании клинического материала его транспортировка также должна проводиться в замороженном состоянии. Дрпускается только однократное замораживание-оттаивание образцов. 6.5. Меры предосторожности к материалу исследования Учет, хранение, передача и транспортирование биологического материала, подозрительного на наличие вируса гриппа типа А, должны осуществляться в соответствии с действующими СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и действующими санитарными правилами о порядке учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Клинический материал утилизируют по классу В, как чрезвычайно эпидемиологически опасные отходы в соответствии с Санитарно- эпидемиологическими требованиями к обращению с медицинскими отходами (СанПиН 2.L7.2790-10) и СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 7. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free». 7.1. Процедура приготовления образцов Вектор-хМАР-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9 страница 14 из 23 --- стр. 15 --- 7.1.1. Приготовление реакционной смеси: в отдельной микропробирке объемом 1,5 мл готовят смесь коглпонентов следующего состава (из расчета на одну пробу): Реагент-1 10 мкл Реагент-2 10 мкл Смесь перемешивают пипетированием. Все реакционные компоненты добавляют отдельными наконечниками с помощью дозаторов переменного объёма: 0,5-10 мкл, 2-20 мкл, 20-200 мкл. 7.2. Разведение препарата кДНК (при необходимости) Образцы кДНК, полученные в реакции обратной транскрипции, разбавляют равным объемом деионизованной воды (деионизованная вода не поставляется) или, в случае использования наборов «Реверта-L», ДНК- буфером, как это указано в инструкции к набору «Реверта-L» (ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия). 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 8.1. Расход каждого реагента (минимальный) На одно определение расходуются: Реагент-1 10 мкл Реагент-2 10 мкл Реагент-3 5 мкл На каждый анализ расходуются: - 10 мкл ПКО-Н1/НЗ/Н5; - 10мклПКО-Н7/Н9; - 1 о мкл ОКО; 8.2. Последовательность проведения этапов анализа 8.2.1. ПНР амплификация Включают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Вектор-хМАР-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7Щ9 страница 15 из 23 --- стр. 16 --- Реактивы для проведения ПЦР извлекают из холодильника. Перед использованием встряхивают пробирки с реагентами на микроцентрифуге- вортекс в течение 5 секунд при 3000 об-мин'^ и осаждают капли на дно пробирки кратковременным центрифугированием. Для проведения амплификации используют прозрачные микропробирки объемом 0,2 мл в соответствии с количеством исследуемых образцов. Помещают 'микропробирки в штатив и маркируют в соответствии с протоколом исследования на боковой стенке пробирки. Готовят реакционную смесь на нужное количество реакций, для чего смешивают в отдельной пробирке (из расчета на одну пробу): Реагент-1 10 мкл Реагент-2 10 мкл. Открывают крышки микропробирок и вносят в них по 20 мкл реакционной смеси. Используя наконечники с аэрозольным • барьером, в микропробирки последовательно вносят соответственно порядку исследования ..образцов по 10 мкл ОКО, и далее по 10 мкл растворов исследуемых образцов, закрывают крышки данных микропробирок. , Вносят (в последнюю очередь) по 10 мкл ПКО-Н1/НЗ/Н5, ПКО-Н7/Н9 в микропробирки соответственно маркировке, закрывают крышки данных микропробирок. - Общий (конечный) объём реакционной смеси в каждой пробирке должен составить 30 мкл. -. , Перемешивают содержимое микропробирок на вортексе и центрифугируют 5 секунд при 3000 об-мин"’. ВНИМАНИЕ! После смешивания компонентов микропробирки сразу устанавливают в амплификатор и запускают реакцию. Помещают микропробирки в амплификатор, задают программу амплификации со следующими параметрами: Вектор-хМАР-1пЯиепгаН1/НЗЩ5/Н7/Н9 страница ,16 из 23 --- стр. 17 --- - объем реакционной смеси - ЗОмкл; - температурно-временные режимы: Температура (“С) Время (минутыхекунды) Количество циклов 95 05:00 1 94 00:10 3050 00:20 72 07:00 После чего запускают программу амплификации и фиксируют в рабочем журнале название файла с результатом работы прибора, расчетное время анализас'бставляёт в среднем 1,5 часа. ' ^ ^ 8.2.2. Гибридизация Для проведения гибридизации полученных в ПЦР амплифицированных фрагментов с ДНК-зондами на поверхности окрашенных микросфер реактивы для проведения гибридизации извлекают из холодильника (4 °С), перемешивают на вортексе в течение 1 минуты и озвучивают в ультразвуковой ванне в течение 30 секунд (при температуре 10 °С). Для проведения реакции гибридизации используют планшет на 96 лунок «Bio-Rad» (не предоставляется). Все реакционные компоненты добавляют отдельными наконечниками с аэрозольным барьером с помощью дозаторов переменного объёма: 0,5-10 мкл, 2-20 мкл и 20-200-мкл. В каждую лунку планшета в соответствии с количеством исследуемых и контрольных образцов вносят по 5 мкл микросфер из диагностической панели с иммобилизованными на поверхности вирусспецифическими ДНК-зондами (Реагент-3), 28 мкл 1,5хТМАС (не предоставляется), 5 мкл биотинилированной ДНК (продукт ПЦР), 12 мкл 1><ТЕ буфера (не предоставляется). Для предотвращения испарения реакционной смеси планшет заклеивают пленкой: (не предоставляется) и помещают в амплификатор Mastercycler gradient (Eppendorf, Германия) и проводят реакцию гибридизации.. В программу прибора вводят денатурацию ДНК при температуре 95 "С в течение 5 минут, гибридизацию ДНК-зондов на поверхности микросфер с амплифицированными Вектор-хМАР-Influenza Н1/ЙЗ/Н5/Н7/Н9 страница 17 из 23 --- стр. 19 --- 3. отсутствие положительных флуоресцентных сигналов в пробах с положительными контрольными образцами (ПКО-Н1/НЗ/Н5, ПКО-/Н7/Н9) в цветовых регионах, не являющихся целевыми для аналитов, содержащихся в данных стандартных образцах. Результат считать положительным в случае, если интенсивность флуоресценции репортерного красителя превышает в 5 и более раз значение средней интенсивности флуоресценции в лунках отрицательных контролем. Результат считать отрицательным, если значение интенсивности флуоресценции репортерного красителя не превыщает значение средней интенсивности флуоресценции в лунках отрицательных контролей. Анализ следует повторить, если значение интенсивности флуоресценции репортерного красителя в образцах превышает менее чем в 5 раз значение средней интенсивности флуоресценции в лунках отрицательных контролей. 9. РАСЧЕТЫ 9.1. Используемые компьютерные программы Для проведения амплификации, гибридизации и учета результатов используют специализированное программное обеспечение, поставляемое производителями приборов. Работу с программным обеспечением осуществляют согласно руководству по эксплуатации прибора. 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 10.1 Условия хранения набора Набор реагентов «Вектор-xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» хранить в упаковке предприятия-изготовителя в соответствии с ТУ 21.20.23-081- 05664012-2017 при температуре от 2 до 8 °С. 10.2. Условия транспортирования набора Транспортирование набора реагентов «Вектор-xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» должно производиться крытым транспортом Вектор-хМАР-Influenza Н1/НЗД15/Н7/Н9 страница 19 из 23 --- стр. 20 --- (автомобильным, железнодорожным либо воздушным) в соответствии с ТУ 21.20.23-081-05664012-2017 при температуре от 2 до 8 °С в термоконтейнере. 10.3. Срок годности набора Срок годности набора реагентов составляет 12 месяцев со дня изготовления предприятием-изготовителем. Серии наборов реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов. 10.4. Информация по безопасной утилизации Использованные пробирки с ампликонами, наконечники, перчатки, ветошь для обработки поверхностей в ПЦР-боксе, собирают в пластиковые закрывающиеся емкости, выносят с целью последующей инактивации согласно требованиям СанПиН 2.1.7.2790-10 и МУ 1.3.2569-09. Наборы с истекшим сроком годности, вскрытые, но не использованные наборы, а также наборы с поврежденной упаковкой, утилизируют по классу А, как эпидемиологически безопасные отходы, по составу приближенные к ТБО (СанПиН 2.1.7.2790-10). 10.5. Гарантийные обязательства производителя Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение установленного срока годности (12 месяцев) при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора реагентов «Вектор-xMAP-Influenza Н1/НЗ/Н5/Н7/Н9» в течение срока годности направлять на предприятие- изготовитель ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, Россия, Новосибирская область, рабочий поселок Кольцово, тел. (383) 336-60-10, факс(383) 336-74-09 e-mail: vector@vector.nsc.nO . Вектор-хМАР-Influenza H1/H3/H5/H7/H9 страница 20 из 23 --- стр. 21 --- При выявлении побочных действий, не указа}шых в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении набора реагентов, рекомендуется направить сообщение на предприятие-изготовитель OBYIi ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию в соответствии с действующим законодательством. Зав. лабораторией молекулярной эпидемиологии особо опасных инфекций ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора» Зав. ОБТК ФБУН ГШД ВБ «Вектор» Роспотребнадзора» СОГЛАСОВАНО ГенералБНый Дйректо ООО «ВЫМПЕЛ-МЕ, ■ ' В. А Терновой. М.П. Богрянцева П.К. В^рнавичус "У / " / ^ . Р Л У / л . 2019 г. Вектор-хМАР-Influenza Н1/Н3/'Н5/Н7/Н9 страница 21 из 23