Набор реагентов для выявления ДНК Legionella pneumophila в биологическом материале и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® Legionella pneumophila-FL" по ТУ 9398-060-01897593-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. директора Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы по
надзору в сфере защиты прав
потре§1|»§^|^*^благополучия человека
Горелов
2019 г.
ИНСТРУКЦ]
по применению набора реагентов
для выявления ДНК Legionella pneumophila в биологическом
материале и объектах окружающей среды методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией
«АмплиСенс® Legionella pn eu m oph ila-¥\j»
АмплиСенс^
ш1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА iVD
82096
10.12.2019
--- стр. 2 ---
4
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ....................................................2
СОСТАВ.............................................................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ..................................................................................................................................4
ПРИНЦИП МЕТОДА.......................................................................................................................5
ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ................................................................................................ 6
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.......................................................................9
ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ МАТЕРИАЛА..........................................................................................10
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.......................................10
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА....................................................................................................13
ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА........................................15
ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ И ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ ПЦР-
АМПЛИФИКАЦИИ.........................................................................................................................16
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................................................................................19
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ
...........................22
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ..........................................................22
ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в двух вариантах
Вариант FEP
Для ПЦР-амплификации используется амплификатор, например, «Терцик» («ДНК-
Технология», Россия); «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research», Австралия).
Для детекции используется флуоресцентный ПЦР-детектор «АЛА-1/4» («BioSan», Латвия).
Набор реагентов выпускается в 4 формах комплектации;
Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50, «ПЦР-комплект»
вариант FEP (пробирки 0,5 мл);
Форма 2 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50, «ПЦР-комплект»
вариант FEP (пробирки 0,2 мл);
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP (пробирки 0,5 мл);
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP (пробирки 0,2 мл).
ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с
формами 3 и 4 гарантируются только в случае применения дополнительного комплекта
реагентов «ДНК-сорб-В» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Вариант FRT
Для ПЦР-анализа используется амплификатор с системой детекции флуоресцентного
сигнала в режиме «реального времени», например, «Rotor-Gene» 3000/6000 («Corbett
Research», Австралия).
Набор реагентов выпускается в 2 формах комплектации:
82096
10.12.2019
--- стр. 3 ---
Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50, «ПЦР-комплект»
вариант скрин-титр-РКТ;
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-титр-РКТ.
ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с
формой 2 гарантируются только в случае применения дополнительного комплекта реагентов
«ДНК-сорб-В» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
СОСТАВ
Комплект реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50 - комплект реагентов для выделения ДНК из
клинического материала включает:
Р еакт ив О писание Объем (мл) К ол-во
Лизирующий раствор Прозрачная бесцветная
жидкость* 15 1 флакон
Раствор для отмывки 1 Прозрачная бесцветная
жидкость* 15 1 флакон
Раствор для отмывки 2 Прозрачная бесцветная
жидкость 50 1 флакон
Сорбент универсальный Суспензия белого цвета 1,25 1 пробирка
ТЕ-буфер для элюции ДНК Прозрачная бесцветная
жидкость 5,0 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на выделение ДНК из 50 проб, включая контроли.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP - комплект реагентов для ПЦР-
амплификации ДНК Legionella pneum ophila с гибридизационно-флуореецентной детекцией
по «конечной точке» включает:
Реакт ив О писание . Объем (мл) Кол-во
ПЦР-смесь-1-FEP/FRT
Legionella pn eu m oph ila
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,008
55 пробирок
объемом 0,5
или 0,2 мл
ПЦР-смесь-2-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,77 1 пробирка
ПЦР-смесь-Фон Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая
жидкоеть 4,0 1 флакон
LS3 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 2 пробирки
ДНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций амплификации, включая контроли.
‘ При хранении лизирующего раствора и раствора для отмывки 1 при температуре от 2 до 8 °С возможно
образование осадка в виде кристаллов.
82096
10.12.2019
--- стр. 4 ---
к комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа выделения:
Р еакт ив О писание ". [-Р/Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,6 2 пробирки
ВКО STI-338 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ПКО ДНК L eg io n ella p n e u m o p h ila Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-титр-FRT - комплект реагентов
для ПЦР-амплификации и количественного определения ДНК Legionella pneum ophila с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» включает:
Р еакт ив О писание Объем (мл) Кол-во
ПЦР-смесь-1-FEP/FRT
L eg io n ella p n e u m o p h ila
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,008
70 пробирок
объемом
0,2 мл
ПЦР-смесь-2-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,77 1 пробирка
ДНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ДНК-калибраторы
LSI Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 1 пробирка
LS2 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 1 пробирка
LS3 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,06 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 70 реакций амплификации, включая контроли и
калибраторы.
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа выделения:
Р еакт ив О писание О&ьем (мл) К ол-во
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость
1,6 2 пробирки
ВКО STI-338 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ПКО ДНК L e g io n e lla p n e u m o p h ilaПрозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
К комплекту реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-титр-FRT прилагается на
цифровом носителе или находится на официальном сайте Изготовителя программное
обеспечение в формате Microsoft® Excel для автоматической обработки результатов.
НАЗНАЧЕНИЕ
Настоящая инструкция распространяется на набор реагентов «АмплиСенс® Legionella
pneumophila-FLi», предназначенный для выявления ДНК Legionella pneum ophila в
82096
10.12.2019
--- стр. 8 ---
г
I
ш
ресуспендируют в 50 мкл 0,9 % раствора натрия хлорида. Для исследования используют
50 мкл суспензии.
Допускается хранение вышеперечисленного материала до проведения исследования в
течение 1 сут при температуре от 2 до 8 °С, 1 мес при температуре не выше минус 16 °С.
Дальнейшее хранение материала возможно в течение года при температуре не выше минус
68 °С. Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Объекты окружающей среды:
Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ Р 51592-2000 «Вода.
Обшие требования к отбору проб» и ГОСТ Р 51593-2000 «Вода питьевая. Отбор проб»; МУК
4.2.1018-01 «Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу питьевой
воды»; МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический
анализ воды поверхностных водных объектов», МУК 4.2.2217-07 «Выявление бактерий
L eg io n ella p n e u m o p h ila в объектах окружающей среды».
- Вода (сточная, из водоема, питьевая) в объеме 0,5 л после предварителъной подготовки;
- Смывы с объектов окружающей среды берут зондами с тампонами, смоченными
стерилъным 0,9 % раствором натрия хлорида. Рабочую часть зонда с тампоном помещают
в пробирку объёмом 1,5 мл с 0,5 мл стерилъного 0,9 % раствора натрия хлорида,
осталъную частъ зонда отламывают и удаляют. Для исследования исполъзуется 50 мкл
раствора;
- Соскобы биопленок с внутренней поверхности водопроводного, промышленного и
иного оборудования (например, из поддонов внутри кондиционеров). Соскобы влажнък
биопленок с поверхности, находящейся под водой или на границе соприкосновения воды
и воздуха, берут сухим стерилъным зондом (рабочая частъ зонда с тампоном помещается
в пробирку объёмом 1,5 мл с 0,5 мл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида,
остальная часть зонда отламывается и удаляется). Для исследования используется 50 мкл
раствора. Соскобы биопленок с высохшей поверхности берут тампонами, смоченными
стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида. Рабочая часть зонда с тампоном
помещается в пробирку объёмом 1,5 мл с 0,5 мл стерильного 0,9 % раствора натрия
хлорида, остальная часть зонда отламывается и удаляется. Для исследования
используется 50 мкл раствора;
- Почва в количестве 100 г берётся в местах предполагаемого обсеменения и используется
после предварительной подготовки.
Допускается хранение вышеперечисленного материала до проведения исследования в
течение 1 нед при температуре не выше плюс 20 °С, 1 мес при температуре не выше
82096
10.12.2019
--- стр. 9 ---
минус 16 °С. Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Температурный режим транспортирования не ограничен.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Все манипуляции, связанные с подготовкой проб, проводятся с использованием
стерильных ступок, пестиков, инструментов (ножниц, пинцетов, скальпелей), дозаторов
переменных объемов, одноразовых полипропиленовых пробирок на 1,5 мл и наконечников с
фильтром. Одноразовая пластиковая посуда (пробирки, наконечники) должна сбрасываться в
специальный контейнер, содержащий дезинфицирующий 0,2 % раствор ДП-2Т, и
утилизироваться в соответствии с вышеуказанными документами.
Промывные воды бронхов (бронхоальвеолярный лаваж). Образец перемешивают
переворачиванием в исходной емкости. Автоматическим дозатором, используя наконечник с
фильтром, отбирают 1 мл образца и переносят в пробирку объемом 1,5 мл для проведения
центрифугирования при 10000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость аккуратно
отбирают, используя наконечник с фильтром, оставляя над осадком 100 мкл жидкости, в
которой ресуспендируют осадок. Полученную суспензию (50 мкл) используют для
последующей работы.
Мокрота. Дополнительно требуется реагент «Муколизин» производства ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора. Сбор и предобработка материала выполняется по
инструкции к реагенту «Муколизин». Подготовленную мокроту (50 мкл) используют для
последующей работы. При необходимости повторного проведения анализа остаток мокроты
замораживают при температуре не выше минус 16 °С.
Секционный материал гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых
ступок и пестиков, затем готовят 10 % еуспензию на стерильном 0,9 % растворе натрия
хлорида или 0,01 М калий-фосфатном буфере, pH 7,0. Суспензию переносят в пробирку на
1,5 мл и позволяют отстояться осадку в течение 1-3 мин. Надосадочную жидкость (50 мкл)
используют для последующей работы. При необходимости повторного проведения анализа
остаток суспензии замораживают при температуре не выше минус 16 °С.
Подготовка проб объектов окружающей среды проводится согласно МУК 4.2.2217-07
«Выявление бактерий L e g io n e lla p n e u m o p h ila в объектах окружающей среды».
Подготовка образцов воды:
Воду (0,5 л) предварительно фильтруют с помощью стеклянной воронки через бумажный
фильтр. После предварительной фильтрации воду пропускают через мембранный фильтр с
диаметром пор не более 0,45 мкм. После окончания фильтрации мембранный фильтр
измельчают стерильными (обожжёнными в пламени горелки) ножницами (в одноразовую
82096
10.12.2019
--- стр. 10 ---
4
чашку Петри) и помещают стерильным (обожжённым в пламени горелки) пинцетом в
пробирки объемом 1,5 мл с 1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Пробирку инкубир)лот при
комнатной температуре в течение 15-20 мин, периодически перемешивая на вортексе, чтобы
обеспечить переход микрофлоры в раствор. Раствор (50 мкл) используют для последующей
работы. Фильтрат хранят при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 нед. При необходимости
более длительного хранения фильтрат замораживают при температуре не выше
минус 16 °С.
Подготовка проб почвы:
В пробирки на 5 мл с плотно закрывающейся (завинчивающейся) крышкой отдельным
шпателем (или одноразовыми лопатками) внести по 0,4-1,0 г (около 1,0 мл) земли. В каждую
пробирку внести по 3 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, тщательно перемешивают и
декантируют 5 мин. Надосадочная жидкость (50 мкл) используется для последующей
работы.
ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ МАТЕРИАЛА
Проводят согласно МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1- 1V групп патогенности».
1. Лизирующий раствор из комплекта реагентов «ДНК-сорб-В» (если он хранился при
температуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре от 60 до 65 °С до полного
растворения кристаллов.
2. К 50 мкл подготовленных образцов (см. раздел «Подготовка исследуемого материала»)
добавляют 50 мкл ОКО (отрицательного контрольного образца), тщательно
перемешивают и добавляют в них отдельным наконечником 300 мкл лизирующего
раствора, прогревают при температуре (65+1) °С в течение 15 мин.
Дальнейшие исследования проб проводить как с обеззараженным материалом по порядку
процедур, описанных в разделе «Вьщеление ДНК из исследуемого материала».
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические
(ПЦР) исследования клинического материала на наличие возбудителей инфекционных
болезней, с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и методических
82096
10.12.2019
--- стр. 17 ---
i
перемешивание реакционных компонентов происходит только при 95 °С, что
значительно снижает количество неспецифически затравленных реакций.
Вариант FEP
Порядок работы
А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР
1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1-FEP/FRT L eg io n ella
p n e u m o p h ila для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб.
ВНИМАНИЕ! Выбор пробирок для амплификации зависит от используемых приборов:
- пробирки объемом 0,2 мл для амплификаторов «GeneAmp PCR System 2700» («Applied
Biosystems»), «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research»), «Uno-2» («Biometra»).
- пробирки объемом 0,5 мл для амплификаторов «Терцик» («ДНК-Технология»), «Uno-2»
(«Biometra»).
2. На поверхностъ воска внести по 7 мкл ПЦР-смеси-2-FL, при этом она не должна
проваливатъся под воск и смешиваться с ПЦР-смесью-1-FEP/FRT Legionella pneum ophila.
3. Сверху добавить по капле минерального масла для ПЦР“ * (примерно 25 мкл).
4. Приготовить 2 контрольных образца «Фон». Для этого в две пробирки с
ПЦР-смесью-1-FEP/FRT L e g io n e lla p n e u m o p h ila на поверхность воска внести 17 мкл
ПЦР-смеси-Фон, при этом она не должна проваливаться под воск и смешиваться с ПЦР-
смесью-1-FEP/FRT Legionella pneumophila. Сверху добавить каплю минерального масла
для ПЦР.
Б. Проведение амплификации
1. В подготовленные для ПЦР пробирки внести отдельными наконечниками с фильтром по
10 мкл ДНК-проб, вьщеленных из исследуемых или контрольных проб этапа выделения
ДНК.
2. Поставить контрольные реакции амплификации:
а) отрицательный контроль (К-) - в подготовленную для ПЦР пробирку внести 10 мкл
ДНК-буфера.
б) положительный контроль (К+) - в подготовленную для ПЦР пробирку внести
10 мкл LS3.
3. Запустить на амплификаторе нужную программу (см. табл. 1).
Программы амплификации для приборов разных изготовителей см. также в
«Методических Рекомендациях по применению набора реагентов для вьывления ДНК
* При использовании амплификатора с термостатируемой крышкой минеральное масло для ПЦР можно не
применять.
82096
10.12.2019
--- стр. 18 ---
Legionella pneum ophila в биологическом материале и объектах окружающей среды методом
полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
«АмплиСенс Legionella pneumophila-FL», утвержденными директором ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора», в которых уточняются параметры программирования
соответствующего амплификатора и проведения детекции с использованием программного
обеспечения флуоресцентного ПЦР-детектора.
4. Когда температура в ячейках достигнет 95 °С (режим паузы) поставить пробирки в
ячейки амплификатора и нажать кнопку продолжения программы. Рекомендуется перед
постановкой в амплификатор осадить капли со стенок пробирок кратким
центрифугированием на вортексе (1-3 с).
Таблица 1
Программа амплификации ДНК L egionella pn eu m oph ila
Амплификатор с активным
регулированием
(по раствору в пробирке)^
цикл температура,°С время циклы
0 95 пауза
1 95 2 мин 1
2
95 Юс
1060 20 с
72 Юс
3
95 Юс
3556 20 с
72 Юс
4 10 хранение
Вариант FRT
Порядок работы
А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР
1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1-FEP/FRT Legionella
pneum ophila для амплификации ДНК исследуемых, контрольных проб и калибраторов.
2. На поверхность воска внести по 7 мкл ПЦР-смеси-2-FL, при этом она не должна
проваливаться под воск и смешиваться с ПЦР-смесью-1-FEP/FRT Legionella pneumophila.
Б. Проведение амплификации
1. В подготовленные для ПЦР пробирки внести по 10 мкл ДНК-проб, вьщеленных из
исследуемых или контрольных проб этапа выделения ДНК.
2. Поставить контрольные реакции амплификации:
Например, «Терцик» («ДНК-Технология»),
82096
10.12.2019
--- стр. 19 ---
При проведении качественного анализа:
а) отрицательный контроль (К-) - в подготовленную для ПЦР пробирку внести 10 мкл
ДНК-буфера.
б) положительный контроль (К+) - в подготовленную для ПЦР пробирку внести
10 мкл LS3.
При проведении количественного анализа:
а) отрицательный контроль (К-) - в подготовленную для ПЦР пробирку внести 10 мкл
ДНК-буфера.
б) калибраторы - в подготовленные для ПЦР три пробирки внести по 10 мкл каждого
ДНК-калибратора (LSI, LS2 или LS3).
3. Запрограммировать прибор для выполнения соответствующей программы амплификации и
детекции флуоресцентного сигнала согласно описанию для данного прибора (см. табл. 2).
Программирование амплификатора см. также в «Методических Рекомендациях по
применению набора реагентов для выявления ДНК Legionella pneum ophila в биологическом
материале и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® Legionella pneumophila-FL»
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора».
Таблица 2
Программа амплификации для приборов роторного типа^
Эгап Температура, °С Продолжителы юсгь
этапа
Измерение
ф.туорееце11ции
Количссгво
циклов
1 95 5 мин - 1
2
95 Юс —
1060 20 с —
72 Юс -
3
95 Юс -
3556 20 с FAM/Green,
JOE/Yellow
72 Юс -
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты интерпретируются в соответствии с «Методическими Рекомендациями по
применению набора реагентов для вьывления ДНК Legionella pneum ophila в биологическом
материале и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® Legionella pneum ophila-¥L»
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора».
' Н априм ер, «R otor-G ene» 3000 и «R otor-G ene» 6000 («C orbett R esearch», А встралия).
82096
10.12.2019
--- стр. 21 ---
Green (FAM или аналогичному, в зависимости от модели прибора).
Результат считается достоверным только в случае прохождения положительных и
отрицательных контролей выделения ДНК и амплификации. Результаты анализа не подлежат
учету, если в таблице результатов для отрицательного контроля вьщеления на канале Yellow и
для отрицательного контроля ПЦР на любом из каналов появляется любое значение {Ct), что
свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты
анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а
также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.
Количественный анализ (вариант FRT)
При проведении количественного анализа используют значения концентраций
калибраторов ДНК Legionella pneum ophila и калибраторов ДНК BKO-STI-338 указанные во
вкладыше к набору реагентов. Расчет количества копий ДНК Legionella pneum ophila в 1 мл
тестируемой пробы проводится автоматически программой прибора по заданным значениям
калибраторов, и полученное значение появляется в соответствующей графе в таблице
результатов.
Расчет концентрации ДНК Legionella pneum ophila в 1 л воды (С днк ьр (копий / л))
проводят вручную или с использованием программного обеспечения, прилагающегося к
комплекту реагентов, по следующей формуле:
С ДНК Lp (копий / л) = к ДНК Lp / к BKO-STI-338 * С BKO-STI-338 * 2, где
к ДНК Lp (копий / мл) = Расчетное количество копий ДНК Legionella pneum ophila в 1 мл
тестируемой пробы,
К BKO-STI-338 (копий / мл) = Расчетное количество копий ДНК BKO-STI-338 в 1 мл
внутреннего контрольного образца в тестируемой пробе,
С BKO-STI-338 (копий / мл) = Количество копий ДНК BKO-STI-338 в 1 мл внутреннего
контрольного образца (значение указано во вкладыше к набору реагентов),
2 - коэффициент пересчёта.
Количественный анализ является достоверным, если полученное значение расчетной
концентрации контрольной пробы «ПК» Legionella pneum ophila, укладывается в пределы
диапазона заданного во вкладыше к набору реагентов.
Результаты анализа образца являются недействительными, если количество копий ДНК
BKO-STI-338 в 1 мл тестируемой пробы, ниже среднего значения концентрации ДНК
препарата BKO-STI-338, указанного во вкладьппе к набору реагентов, более чем в 5 раз. Это
свидетельствует о низкой эффективности вьщеления ДНК из данного образца или о
82096
10.12.2019
--- стр. 22 ---
неэффективной очистке от ингибиторов — необходимо протестировать образец повторно,
начиная с этапа выделения ДНК.
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не
более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами
хранения.
Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-В» хранить при температуре от 2 до 25 °С.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» хранить при температуре от 2 до 8 °С в защиш;енном
от света месте.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора
реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования,
хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживаю и ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123, г. Москва, ул.
Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru’.
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора
реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и
эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ -
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач
ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА России
сайте: w w w .am plisens.ru.
82096
10.12.2019
--- стр. 23 ---
%
ф
.сИ о С .П рош ито, пронум еровано и скреплено печатью
____________лист:^
Зам еститель директора Ф БУ Н Ц Н И И ^^^идем иологии
Роспотребнадзора
А .В . Г орелов
82096
10.12.2019