Набор реагентов для определения оксалатов в моче ферментативным методом (Фотооксалаты) по ТУ 9398-215-04545110-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор 000«И М П А КТ» Волков Д. В. « 2012 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения оксалатов в моче ферментативным методом. ФОТООКСАЛАТЫ НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения содержания оксалатов в моче ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабора ториях и в научно-исследовательской практике. Набор рассчитан на проведение 20 определений. Может быть адаптирован на ав томатические анализаторы. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ При соединении аниона щавелевой кислоты с катионом кальция образуется плохо растворимая соль ~ оксалат кальция, что является главным признаком мочекаменной болезни. Растворимость кальция оксалата не зависит от изменений pH мочи. Умень шение экскреции оксалатов с мочой связано с гиперглицинемией и гиперглицинури- ей. Под гипероксалурией понимают повышенную экскрецию оксалатов с мочой, что может быть связано с диетой богатой оксалатами, аутосомно-рецессивным нарушени ем метаболизма глиоксалата и развитием нефрокальциноза с прогрессирующей почеч ной недостаточностью, а также при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, хро нических панкреатитах, желчно-каменной болезни. Установлена более высокая часто та возникновения оксалатных камней у населения, проживающего в районах, где от мечается низкое содержание магния в воде и пищевых продуктах. В настоящее время, несмотря на огромное количество опубликованных методов, измерение концентрации оксалатов в моче остается главной проблемой для клиниче ских биохимиков. Большинство методов являются трудоемкими, требующими боль шого количества времени и не всегда доступного в клинических лабораториях обору дования. Предлагаемый ферментативный метод быстрый, специфичен для оксалатов, не требует специального оборудования, легко адаптируется для автоматических ана лизаторов. ПРИНЦИП МЕТОДА Оксалаты окисляются в присутствии фермента - оксалатоксидазы до диоксида углерода и перекиси водорода. Перекись водорода реагирует с З-метил-2- бензтиазолинонгидразоном (NffiTH) и 3-диметиламинобензойной кислотой (DMAB) в присутствии фермента пероксидазы образуя окрашенный индамин с максимумом по глощения при длине волны 590 нм. оксалатоксидаза Оксалаты +О2 --------------------------- ^ 2СОг + Н2О2 --- стр. 2 --- пероксидаза Н2О2 + МВТН + DMAB ----------------индамин + Н2О СОСТАВ НАБОРА: 1. Реагент 1: Буфер-сукцинатный 0,05 моль/л, рН~3,1±0,1 -1 флакон(20 мл) 2. Реагент 2: Субстраты - МВТН - 0,22 ммоль/л, DMAB - 3,2 ммоль/л - 1 флакон (-30 мг) 3. Реагент 3: Ферменты - Оксалатоксидаза - 3000 ед/л, Пероксидаза - 100 О О О ед/л - 1 флакон (-15 мг) 4. Реагент 4; Реагент для разведения образцов - Буфер 0,1 моль/л, ЭДТА 10 ммоль/л, pH ~ 7,6 ± 0,1 - 1 флакон (40 мл) 5. Реагент 5; Калибратор - калибровочный раствор щавелевой кислоты 0,5 ммоль/л - 1 флакон (3 мл) 6. Реагент 6: Уголь активированный - 1 флакон (6,0 г) 7. Ложка мерная - 1 штука АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Набор обеспечивает линейность при определении оксалатов в моче в диапазоне концентраций от 0,08 до 1,8 ммоль/л, отклонение от линейности - не более 7% . Чув ствительность - не более 0,05 ммоль/л. Коэффициент вариации - не более 7% . Для проверки правильности определений рекомендуется использовать конт рольные растворы оксалатов известной концентрации и отечественные или зарубеж ные контрольные материалы мочи. Нормальные величины содержания оксалатов в моче - 0,08-0,49 ммоль/сут. Де ти - 0,14 - 0,42 ммоль/сут. Нормальные величины относительных показателей в утренней пробе мочи окса- лат (ммоль/л)/креатинин (ммоль/л) - мужчины - 0,008 - 0.048; женщины - 0,006 - 0,046. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Компоненты набора не токсичны. В качестве консерванта Реагент 1 содержит азид натрия (0,095%). Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми. При попадании на кожу и глаза Реагента 1или Реагента 4 необходимо немедленно промыть их большим количеством воды. Необходимо следовать принятым мерам безопасности при работе с лаборатор ными реагентами. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Суточную мочу собирают в стеклянную или пластиков)то бутылку. Объем мочи записывают в литрах. Оксалаты стабильны в течение 7 суток при хранении в холо дильнике или в замороженном состоянии. Для устранения действия бактерий можно использовать в качестве консерванта тимол или соляную кислоту. На результаты анализа может влиять аскорбиновая кислота (витамин С) в кон центрации превышающей 16 ммоль/л. Пациентам рекомендуется отказаться от приема большого количества витамина С или продуктов, богатых витамином С, за 48 часов до --- стр. 3 --- сбора мочи. Процесс сбора и исследования суточной мочи трудоемок, достаточно неудобен, требует наличия специальной лабораторной посуды, и использования консервантов мочи. Применение консервантов может повлиять на результаты исследования и при водит к существенным опшбкам при анализе полученных результатов. Альтернативой изучению суточной экскреции мочи является определение отно сительных биохимических показателей в утренней порции мочи. С этой целью в ней определяют концентрацию (ммоль/л) оксалатов и (ммоль/л) креатинина в моче. Реуль- тат получают в относительных единицах ммоль оксалата/ммоль кретинина. В пробах утренней мочи влияние факторов питания, а также отклонений, вызванных физиче ской активностью и положением тела, сводится к минимуму. Простота получения и возможность анализа нескольких разных проб мочи для i каждого пациента делают многократное исследование порции утренней мочи в тера- ! певтическом и диагностическом плане более значимым, чем исследование одной 24- часовой пробы. Концентрация 1феатинина является постоянной величиной, которая зависит от клубочковой фильтрации, массы тела и возраста. У мужчин уровень креатинина (мо лекулярная масса 113,12) составляет примерно 0,17 - 0,24 ммоль/кг/сут (19,2 - 27,2 мг/кг/сут), а у женщин 0,13-0,19 ммоль/кг/сут (14,7 - 21,5 мг/кг/сут). Результат по лучают в относительных единицах ммоль оксалата/ммоль кретинина. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ - Спектрофотометр, фотометр или автоматический анализатор, длина волны 590 (580-600) нм, - кювета с длиной оптического пути 10мм; - пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,05 - 1,0 мл; - секундомер; - пробирки стеклянные вместимостью 10 мл; - пробирки центрифужные вместимостью 15 мл; - центрифуга или плотная фильтровальная бумага; - вода дистиллированная. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ 1. Приготовление Рабочего реагента Содержимое флакона с Реагентом 2 пересыпать во флакон с Реагентом 1. Перемешать круговыми движениями до полного растворения. Во флакон с Реа гентом 2 добавить 1 мл раствора из флакона с Реагентом 1, перемешать круго выми движениями для растворения возможных остатков порошка и перелить раствор во флакон с Реагентом 1. Хорошо перемешать. Рабочий реагент готов к употреблению. Раствор стабилен не более 2 месяцев при температуре (+2 ^ +8®С). 2. К содержимому флакона с Реагентом 3 добавить 2,0 мл дистиллированной воды. Перемешать, не встряхивая, до полного растворения. Раствор стабилен не более 1 месяца при температуре (+2 ^ +8®С) или 2 месяца при температуре (- 18 ^ - 20°С). 3. Реагент 4, Реагент 5 и Реагент 6 готовы к употреблению. --- стр. 4 --- ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Подготовка пробы. 1. Подготовить серию пронумерованных пробирок для проб мочи и контрольных образцов. 2. В каждую пробирку внести по 2 мл образца (количество можно менять) и такое же количество (2 мл) Реагента 4. Перемешать. 3. Проверить в каждой пробирке pH. Если pH меньше 7,0 добавить 1 N NaOH, ес ли больше 7,0 - подкислить 1N Н С 1. 4. Пронумеровать центрифужные пробирки. В каждую пробирку внести по 1 мерной ложке (или взвесить 250-300 мг) Реагента 6 и по 2 мл каждого разбавленного образца (см. п.2). Перемешать, встряхивая вручную время от времени в течение 5 ми нут или на ротационном миксере. 5. Отцентрифугировать пробирки в течение 5 минут при 2000 об/мин или отфиль тровать, используя плотную фильтровальную бумагу. Проведение анализа Анализ проводится при температуре 18-25® С или при ЪТС. Для определения концентрации оксалата внести в пробирки анализируемые образ- ♦ Реагенты Холостая КалибровочнаяОпытная про проба, мл проба, мл ба, мл Рабочий реагент 1,0 1,0 1,0 Дистиллированная вода 0,05 - - Реагент 5 (калибратор) - 0,05 - Проба мочи (супернатант по - - 0,05 сле центрифугирования) Реагент 3 0,1 0,1 0,1 Пробы тщательно перемешать. Инкубировать 5 минут при выбранной темпера туре. Измерить величину оптической плотности опытной (AA„p) и калибровочной (А А к ал ) проб в кюветах с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 590 нм против холостой пробы. Окраска проб стабильна в течение 30 минут. РАСЧЕТЫ Расчёт концентрации оксалатов в анализируемых пробах провести по формуле: А Апр С=------------------------ X 0,5x2 ^ Акал где; С - концентрация оксалатов, ммоль /л; 0,5 - концентрация оксалатов в калибраторе, ммоль/л; 2 ~ коэффициент разбавления пробы Количество оксалатов в суточной моче = С (ммоль/л) х суточный объем мочи. Для того чтобы получить экскрецию оксалатов в мг/сут величину концентрации оксалатов в суточной моче ммоль/сут необходимо умножить на 90. Если концентрация оксалатов в моче превышает верхнюю границу линейного диапазона, необходимо разбавить образец в 2 раза (к 1 объему мочи добавить 1 объем