--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Департамента государственного
контроля качества, эффективности и безопасности
лекарственных средств и медицинской техники
М3 РФ
5 0
инс-щрия
по применению набора реагетфщ^^^^г^^^ глюкозы в
сыворотке, плазме и цельной крови ггЙ^|Щ50^^дазным методом.
ФОТОГЛЮКОЗА-2/^
Рекомендована к утверждению экспертной комиссией по
лабораторным реагентам Комитета по новой медицинской технике
Минздрава России (протокол N 7 от “ 30 ” ноября 1998 г.)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения глюкозы
в сыворотке, плазме и цельной крови человека глюкозооксидазным ме
тодом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и на
учно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100 определений при расходе
2,0 мл рабочего реагента на 1 анализ или 200 определений при рас
ходе 1,0 мл рабочего реагента на 1 анализ и пригоден для различных
вариантов микроанализа.
ПРИНЦИП МЕТОДА
При окислении p-D-глюкозы кислородом воздуха при каталити
ческом действии глюкозооксидазы (ГО) образуется эквимолярное ко
личество перекиси водорода. Под действием пероксидазы (ПО) пере
кись водорода окисляет 4-аминоантипирин (4-ААП) в присутствии фе
нольных соединений в окрашенное соединение, интенсивность окрас
ки которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом
образце и измеряется фотометрически при длине волны 500 нм.
СОСТАВ НАБОРА:
- Буферно-ферментно-субстратная смесь, содержащая калие
вые или натриевые соли фосфорной кислоты (0,1 ммоль/л), ГО (1500
ед.), ПО (500 ед.), 4-ААП (100 ммоль/л), фенольные соединения (16
ммоль/л), стабилизаторы - 4 таблетки;
- Калибратор (калибровочный раствор глюкозы), 10,0 ммоль/л -
1 флакон (2,5 мл);
- Антикоагулянт, содержащий натрий хлористый (9 г/л), нятпий
ацетат (0,02 моль/л) - 2 таблетки.
Составлена; И. И. Журавлевой, к . х. н., главным специалистом ООО "ИМПАКТ”,
И. В. Чуриловой, к . X. н., главным специалистом лаборатории биохи
мии Военно-медицинской академии.
--- стр. 2 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор обеспечивает линейность при определении глюкозы в ди
апазоне концентраций от 2,0 до 25,0 ммоль/л, отклонение от линейно
сти не более 5 %. Чувствительность - не более 1,0 ммоль/л. Коэфф
ициент вариации - не более 5%.
Для проверки правильности определений рекомендуется испо
льзовать отечественные или зарубежные контрольные сыворотки, ат
тестованные данным методом.
Нормальные величины содержания глюкозы в сыворотке и пла
зме крови человека — 3,5 - 6,2 ммоль/л, в цельной крови — 2,7 - 5,7
ммоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значе
ний нормальных величин для обследуемого контингента людей.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Буферно-ферментно-субстратная смесь содержит токсичные ко
мпоненты. При работе с ней следует соблюдать осторожность и не до
пускать попадания на кожу и слизистые. В случае попадания следует
промыть пораженное место большим количеством проточной воды.
При работе с набором необходимо надевать одноразовые резино
вые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует
рассматривать как потенциально инфицированные, способные длите
льное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой
другой возбудитель вирусной инфекции.
Меры предосторожности - соблюдение “Правил устройства, тех
ники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиче
ского режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделени
ях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Ми
нистерства здравоохранения СССР*' (Москва, 1981 г).
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Негемолизованная сыворотка или плазма крови, цельная кровь.
Сыворотку и плазму крови получают обычным образом.
Для определения глюкозы в цельной крови 2 таблетки антикоа
гулянта растворить в 100 мл дистиллированной воды. Полученный
раствор хранить при температуре + 2-8°С. В центрифужную пробирку
внести 0,1 мл цельной крови, добавить 0,9 мл раствора антикоагулян
та, тщательно перемешать и центрифугировать при 2000 об/мин в те
чение 10 мин при комнатной температуре (+18'25°С). Надосадочную
жидкость использовать для анализа.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
- Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны
500 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; автоматические или
полуавтоматические биохимические анализаторы;
- пипетки полуавтоматические одноканальные со cмeннь!^-и нако
нечниками, позволяюш,ие отбирать объемы жидкости 0,025 - 2,0 мл;
--- стр. 3 ---
- секундомер;
- колбы мерные вместимостью 50, 100 или 200 мл;
- пробирки стеклянные вместимостью 10 мл;
-термостат, поддерживающий температуру +37±1°С;
“ вода дистиллированная.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего реагента : 1 (или 4) таблетку буферно-
ферментно-субстратной смеси поместить в мерную колбу вместимос
тью 50 (или 200) мл, внести 30 (или 150) мл дистиллированной воды,
тщательно перемешать до полного растворения таблетки и довести
дистиллированной водой до метки.
Полученный рабочий реагент можно хранить при температуре
+ 2-8 ""С в посуде из темного стекла не более 10 дней при условии дос
таточной герметизации.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Внести в пробирки анализируемые образцы сыворотки или
Реагенты, сыворотка (плазма)Опытная Калибровочная Контрольная (хо
крови проба, мл проба, мл лостая) проба, мл
Рабочий реагент 2,0 2,0 2,0
Сыворотка (плазма) крови 0,025 - -
Калибратор - 0,025 -
Дистиллированная вода - - 0,025
Примечание: при использовании автоматических или полуавто
матических биохимических анализаторов количество реагентов и ана
лизируемых образцов в зависимости от объема используемой кюветы
может быть пропорционально изменено (отношение сыворотки крови к
pa5uMti^/ty реагенту составляет 1 ; 80).
Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 25 мин
при комнатной температуре (+18 - 25®С) или в течение 15 мин при тем
пературе +37°С.
После окончания инкубации измерить величину оптической плот
ности опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой)
пробы в кюветах с длиной оптического пути 10 мм при длине волны
500 нм.
Окраска проб стабильна в течение 2 ч после окончания инкуба-
ции при условии предохранения от прямого воздействия солнечных
лучей.
Для цельной крови внести анализируемые образцы и реагенты
по следующей схеме:
Реагенты, цельная кровь Опытная Калибровочная Контрольная (хо-
_ _ проба, м л___проба, мл
Рабочий реагент____ ________2-0 ________^2,0
Надосадочная жидкость 0,25 - _____
Калибратор ____________^____ 0,025 ___^
Дистиллированная вода______-_________^ _____________