Набор реагентов для экстракции ДНК из биологического материала человека "НК-Магно" по ТУ 21.20.23-004-35531509-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ООО «ЛабПэк» «УТВЕРЖДАЮ» ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ «Набор реагентов для экстракции ДНК из биологического материала человека «НК-Магно» по ТУ 21.20.23-004-35531509-2017». ООО «ЛабПэк», Россия, 197376 г. Санкт-Петербург, наб. р. Карповки, д. 5, лит. И, пом. 3-Н, тел. +7(812)490-75-93 info@labpack.ru 76018 19.11.2019 --- стр. 2 --- Оглавление 1. Наименование медицинского изделия для диагностики in vitro .......................................................3 2. Сведения о производителе...............................................................................................................................3 3. Назначение и область применения...............................................................................................................3 4. Требования к квалификации пользователей.............................................................................................3 5. Показания и противопоказания к применению .......................................................................................3 6. Характеристика набора реагентов «НК-Магно»........................................................................................4 7. Аналитические характеристики набора реагентов «НК-Магно»...........................................................6 8. Перечень рисков, связанных с применением набора «НК-Магно» ..................................................6 9. Меры предосторожности при работе с набором «НК-Магно»...........................................................б 10. Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором.............................................8 11. Анализируемые пробы.................................................................................................................................9 12. Подготовка компонентов набора «НК-Магно» перед применением по назначению ........13 13. Процедура выделения ДНК с помощью набора «НК-Магно» .......................................................13 14. Методы контроля. Возможные проблемы и их решения...............................................................15 15. Информация об интерферирующих веществах и ограничениях, связанных с пробой .......15 16. Предупреждение и специальные меры предосторожности в отношении безопасной утилизации медицинского изделия......................................................................................................................16 17. Требования к ремонту и техническому обслуживанию ..................................................................16 18. Условия хранения, транспортирования и эксплуатации набора..................................................16 19. Гарантийные обязательства, контакты.................................................................................................. 16 20. Перечень применяемых национальных стандартов ........................................................................19 Приложение 1: Программа «NK-MAGNO» для автоматической станции KingFisher Flex ................20 76018 19.11.2019 --- стр. 3 --- 1. Наименование медицинского изделия для диагностики in vitro. Полное название. «Набор реагентов для экстракции ДНК из биологического материала человека «НК-Магно» по ТУ 21.20.23-004-35531509-2017» Сокращенное название Набор реагентов «НК-Магио», набор «НК-МАГНО», «НК-Магно». 2. Сведения о производителе. Общество с ограниченной ответственностью «ЛабПэк» (ООО «ЛабПэк»); РФ, ООО «ЛабПэк» Россия, 197376 г. Санкт-Петербург, наб. р. Карповки, д. 5, лит. И, пом. 3-Н; тел. +7 (812) 490-75-93; электронная почта: info(^labpack.ru Адрес места производства: 197376 г. Санкт-Петербург, наб. р. Карповки, д. 5, лит. И, пом. 3-Н 3. Назначение и область применения. Набор реагентов «НК-Магно» предназначен для выделения ДНК из биологического материала человека (клинических образцов - мазки и соскобы со слизистых оболочек, мокрота, лейкоцитарная фракция цельной крови, моча (осадок), фекалии, эякулят) ручным или автоматическим методом для последующего анализа полученного препарата ДНК с помощью полимеразной ценной реакции (ПЦР). Функциональное назначение набора реагентов «НК-Магно» состоит в обеспечении преаналитической стадии анализа клинического образца, выполняемой в ходе клинической лабораторной диагностики инфекционной патологии человека с помощью ПЦР. Набор применяется для получения препарата ДИК, свободного от ингибиторов ПЦР, что обеспечивает высокие аналитические возможности последующего анализа. Демографические и попултщонные аспекты применения. Рекомендуется применять набор реагентов «НК-Магно» для пробонодготовки клинических образцов, получаемых от пациентов мужского и женского пола без ограничения возраста. Область применения. Профессиональное применение в клинической лабораторной диагностике, в специализированных лабораториях учреждений медицины и здравоохранения. 4. Требования к квалификации пользователей. Для рабо'п.1 с набором реагентов «НК-Магно» необходимо участие специалиста с высшим или средним медицинским образованием (врач-лаборант, фельдшер-лаборант), получившего дополнительное специальное образование на курсах повышения квалификации по молекулярно-биологическим методам диагностики. Персонал должен иметь навыки работы с биохимическими реактивами и современным лабораторным оборудованием. 5. Показания и противопоказания к применению. Показанием к применению набора реагентов «НК-Магно» является проведение процедуры пробонодготовки клинических образцов, отделяемого слизистых оболочек тела человека, для последующего анализа с помощью ПЦР. Противопоказанием к применению }ia6opa реагентов «НК-Магно» является нарушение целостности упаковки, истекший срок годности, не соблюдение требований 76018 19.11.2019 --- стр. 4 --- 6. Характеристика набора реагентов «НК-Магно». Состав и комплектность Состав набора и комплектность поставки указаны в таблице 1 и 2 соответственно. Таблица 1 - Состав набора Форма выпуска Реагент Объем, мл Количество Описание Форма выпуска 1 Магнетизированный сорбент, N24 1 2 пробирки Суспензия черного цвета Лизирующий буфер, N21 30 1 флакон Бесцветная прозрачная жидкость Промывочный Буфер, N22 50 2 флакона Бесцветная прозрачная жидкость Элюирующий буфер, N23 30 1 флакон Бесцветная прозрачная жидкость Ресуснендирующий буфер (для образцов кала), N25 50 2 флакона Бесцветная прозрачная жидкость Форма выпуска 2 11ланшет с лизирующим буфером и магнетизированным сорбентом, N27 - 1 штука 96-луночный планшет, в каждой лунке содержит суспензию частиц черного цвета в прозрачной жидкости, после перемешивания планшета по часовой стрелке в течение 7-10 секунд - непрозрачную однородную суспензию земного цвета Планшет с промывочным буфером, N28 - 1 штука 96-луцочный планшет с бесцветной прозрачной жидкостью в каждой лунке Планшет с элюирующим буфером, N29 - 1 штука 96-луночный планшет с бесцветной прозрачной жидкостью в каждой лунке Ресуспендирующий буфер (для образцов Кеша), N25 50 2 флакона Бесцветная прозрачтгая жидкость Планшет, N26 - 1 штука Планшет из нолинронилена с 96 V-образными коническими лунками Гребенка, N30 1 штука Гребенка наконечников для планшетов с глубокими ячейками из полипропилена 76018 19.11.2019 --- стр. 5 --- Форма выпуска Компонент Количество Форма выпуска 1 Набор реагентов 1 Инструкция по применению 1 Паспорт качества 1 Форма выпуска 2 Набор реагентов 1 Инструкция по применению 1 Паспорт качества 1 Ilpwnfim метода. В основе действия набора реагентов «НК-Магно» лежит метод, основанный на обратимом связывании молекул нуклеиновых кислот на поверхности частиц магнитного сорбента. Исследуемый образец обрабатывается лизирующим раствором в присутствии частиц магнитного сорбента. В результате происходит деструкция клеточных мембран, вирусных оболочек и других биополимерных комплексов и высвобождение нуклеиновых кислот. Растворенная ДНК связывается с частицами сорбента, в то время как другие компоненты лизированного биологического материала остаются в растворе и удаляются при осаждении сорбента на магнитном штативе с последующей отмывкой сорбента. При добавлении буфера для элюции к магнитному сорбенту происходит элюирование ДИК с поверхности сорбента в раствор, который затем отделяется от частиц сорбента магнитной силой. В результате указанной процедуры получается высокоочищенный препарат ДНК, свободный от ингибиторов реакции амплификации, что обеспечивает высокую аналитическую чувствительность ГЩР- исследования. ()грат1чеиия метода Применение набора возможно только персоналом, обученным методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории. Материалом для проведения процедуры экстракции ДНК служит биологический материсш человека (клинические образцы), в том числе: мазки, соскобы, мокрота, лейкоцитарная фракция цельной крови, моча (осадок), фекалии, эякулят с содержанием клеток от 100 до Ю'’ в образце. Объем исследуемого образца - 100 мкл. Набор реагентов «НК-Магно», форма выпуска 1 препаратов ДНК из 100 клинических образцов. Набор реагентов «ИК-Магно», форма выпуска 2 препаратов ДНК из 96 клинических образцов. рассчитан на получение рассчитан на получение Общее время проведения процедуры выделения ДНК из 1 образца ручным способом составляет 30-40 минут, автоматическим способом - 30 минут. Состав набора и комплектность поставки указаршт в таблице 1 и 2 соответственно. Форма выпуска и состав набора реагентов «ЫК-Магно». Набор реагентов «НК-Магно» выпускается в двух формах выпуска (вариантах комплектации): - форма выпуска 1, для экстракции ДНК ручным способом; - форма выпуска 2, для экстракции ДНК иа автоматических станциях выделения НК. 76018 19.11.2019 --- стр. 6 --- 7. Аналитические характеристики набора реагентов «НК-Магно». Набор реагентов «НК-Магно» применяется на преаналитической стадии анализа клинических образцов. Набор реагентов «НК-Магно» обеспечивает выделение ДНК с чистотой выделения по показателю соотношения А260/280 не менее 1,3 из биологического материала человека (мазки, соскобы, мокро'га, лейкоцитарная фракция цельной крови, моча (осадок), фекалии, эякулят) с содержанием клеток от 100 до 10*^ в образце. Эффективность выделения ДНК составляет от 30 (до 70% - не менее 30 %) Полученный очищенный препарат ДНК может быть использован для последующего анализа с помощью полимеразной цепной реакции, ПЦР и ее вариантах НЦР-РВ. 8. Перечень рисков, связанных с применением набора «НК-Магно». В пограиичиую зону риска вошли опасности: - потеря функциональных свойств реагентов, входящих в набор, из-за транспортирования, хранения или эксплуатация в несоответствующих условиях, - утилизация набора с нарушением соответствующих мер безопасности и дезактивации, - использование клинического образца в количестве не достаточном для проведения процедуры выделения ДНК; - невыполнение требований по пробоподготовке, проведению анализов и утилизации вследствие работы с набором неквалифицированным персоналом. В области недопустимой зоны риски не выявлены. Совокупный остаточный рыск применения набора реагентов «НК-Магио» является допустимым, польза от его применения превышает риск. 9. Меры предосторожности при работе с набором «НК-Магно». Класс в зависимости от потенциального риска применения - 2а в соответствии с номенклатурной классификацией медицинских изделий, утверждаемой приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 06.06.2012 N 4н. I Все компоненты набора нетоксичны для человека в используемых концентрациях. При работе с набором следует избегать контакта с кожей, глазами и слизистыми оболочками, при попадании на них компонентов набора промыть большим количеством воды. При приеме внутрь компонентов набора реагентов следует немедленно обратиться за медицинской помощью. Компонент набора «Промывочный буфер», N22, содержит 45% изопропиловый спирт, относящийся к веществам 3 класса опасности по ГОСТ 12.1.007-76, и 25% ацетон, относящийся к вещес' 1вам 4 класса опасности по 1'ОСТ 12.1.007-76 и легковоспламеняющимся жидкостям. Электрооборудование и освещение при работе с этиловым спиртом и ацетоном должно быть взрывобезопасно. В составе набора отсутствуют вещества человеческого или животного происхождения, обладающие потенциальной инфекционной природой, поэтому меры предосторожности против любых специальных, несвойственных рисков при использовании или реализации изделия нс предусмотрены. Необходимых мер предосторожности в отношении влияния магнитных нолей, внешних электрических воздействий, электростатических разрядов, давления или перепадов давления, перегрузки, источников термического воспламенения не предусмотрено. 76018 19.11.2019 --- стр. 7 --- При работе с набором следует надевать индивидуальную одноразовую защитную одежду (халат, шапочка, маска медицинскую, перчатки резиновые или латексные), защищать глаза во время работы с образцами и реактивами, тщательно мыть руки по окончанию работы, так как клинические образцы человека следует рассматривать, как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать вирусы иммунодефицита человека ВИЧ1 и ВИЧ2, вирусы гепатита В и гепатита С. Работа с клиническим материалом при использовании набора реагентов «ИК- Магно» должна осуществляться согласно методическим рекомендациям «Взятие, зранснортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФГУН ЦМИИЭ Роспотребнадзора, Москва, 2012 г. Рабо'га должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно биологические (ПЦР) исследования клинического материала, с соблюдением требований следующих документов: - СанПиМ 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»; - СИ 3.1.5.2826 «Профилактика ВИЧ-инфекции»; - СИ 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»; - СанИиИ 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»; - МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности». У У У у у у у у у у 11ри работе всегда следует выполнять следующие требования: Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Ие возвращать образцы, оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. Неиспользованные реактивы, реактивы с истекшим сроком годности, а также использованные реактивы следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с меди ци i I ски м и отходам и ». Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержатций дезинфицирующее средство, ко торое может быть использовано для обеззараживания медицинских отходов. Поверхности столов, а также помещения, в ко'торых проводится постановка ИЦР, до начала и после завершения работ необходимо подвергать ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин. Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезпнфицируютцие средс тва. Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции. Допускать к работе с набором только специально обученный персонал. Ие использовать набор но истечению срока годности. Ие допускается хранение препарата ДНК в одном холодильнике е комноиеитами набора для выделения ДИК; 11е иснользова'ть набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента нс соответствует описанию ВНИМАНИЕ! Обеззараживание биоматериала и реагентов следует проводить, помещая одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники), колбы-ловушки 76018 19.11.2019 --- стр. 8 --- вакуумных отсасывателей на 20-24 ч в специальные контейнеры, содержащие дезинфицирующий раствор. 10. Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором. Оборудование, материалы, реактивы (руч}1ой способ): - ламинарный бокс И или 111 класса биологической безопасности (например, «БЛВп-01- «Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия); миницеитрифуга-встряхиватель/вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аишюгичный); - настольная центрифуга для микропробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5-2 мл до 10000 g (например, MiniSpin, Eppendorf, Германия или аналогичная); - твердотельный термостат для микропробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5-2 мл с диапазоном рабочих температур 25-100 °С (например, «Термит», ДНК-технология, Россия или анщюгичный). - мапнп'ный иггатив для микропробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5-2 мл; вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловущкой для удаления надосадочной жидкости; - холодильник с камерами, поддерживающими температуру от 2 до 8 ° С (для хранения набора реагентов «НК-Магно»); - холодильник с камерой, поддерживающей температуру от 2 до 8 °С (для хранения препарата ДЫК). Не допускается хранение препарата ДНК в одном холодильнике с компонентами набора для выделения ДНК. - мнкронробирки типа Эппендорф объемом пробирки 1,5-2 мл, с замком Safe-Lock (например, Axygen, США или аналогичные); - штативы для микропробирок объемом 1,5 мл (например, Axygen, США); - дозатор полуавтоматический неремениого объема от 100 до ЮООмкл, аттестованный но значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (иогреинюсть не более 3 %) (например, Sarlorius Biohit, Германия); - одноразовые наконечники с фильтром для полуавтоматических дозаторов с маркировкой «RNAase-free, DNAase-free» объемом 100-1000 мкл (например, Axygen, США); - СИЗ (одноразовые отдельный Хсшат, шапочка, маска, перчатки) ио МУ 1.3.2569-09.; - емкость с крышкой для дезинфицирующего раствора. Оборудование, материалы, реактивы (автоматический способ): процессор магнитных частиц с обрабатываемым объемом 20-1000 мкл (9б-луночиый нлашнет с глубокими лунками) или 200-5000 мкл (24-луночный планшет с глубокими лунка.ми), вместимостью до 96 образцов (96-луночный ruiaiimeT с глубокими лунками) или до 24 образцов (24-луночный планшет с глубокими лунками), эффективностью извлечения частиц>95%, например. Thermo Scientific Kingfisher Flex или другие приборы с аналогичными техническими характеристиками; - ламинарный бокс И или 111 класса биологической безопасности (например, «БАВн-01- «Ламннар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия); миницентрифуга-встряхиватель/вортекс (например, S1A Biosan, Латвия, или аналогичный); - настольная центрифуга для микроиробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5-2 мл до 10000 g (например, MiniSpin, Eppendorf, Германия или аншюгичная); - холодильник с камерами, поддерживающими температуру от 2 до 8 ° С (для хранения набора реагентов «НК-Магно»); 76018 19.11.2019 --- стр. 9 --- холодильник с камерой, поддерживающей температуру от 2 до 8 °С (для хранения препарата ДНК). Не допускается хранение препарата ДНК в одном холодильнике с компонентами набора для выделения ДНК; микропробирки типа Эпнендорф объемом пробирки 1,5-2 мл, с замком Sale-Lock (например, Axygen, США или аналогичные); штативы для микропробирок объемом 1,5 мл (например, Axygen, США); дозатор полуавтоматический нсремениого объема от 100 до ЮООмкл, аттестованный по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %) (например, Sartorius Biohit, Германия); одноразовые наконечники с фильтром для полуавтоматических дозаторов с маркировкой «RNAase-free, DNAase-free» объемом 100-1000 мкл (например, Axygen, США); СИЗ (одноразовые отдельный Хешат, шапочка, маска, перчатки) но МУ 1.3.2569-09; емкость с крышкой для дезинфицирующего раствора. f 11. Анализируемые пробы Материалом для проведения процедуры экстракции ДНК служит биологический материал человека (клинические образцы), в том числе: мазки и соскобы со слизистых оболочек, мокрота, лейкоцитарная фракция цель}юй крови, моча (осадок), фекалии, эякулят. Использование набора реагентов «НК-Магно» предполагает работу только с биологическими образцами входящими в указанный перечень. Рекомендации по процедуре получеиия клинических образцов. Внимание! Процедура получения клинических образцов доллсиа выполняться натощак, до приема лекарственных средств и применения лубрикантов. Лейкоцитарная фракция цельной крови. Взятие материала. Забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 - 1,1 мм) в снецисиншую вакуумную систему типа “VacuelC (сиреневые крьинки - 6% ЭДТА, маркировка К2 и КЗ) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8%-ный раствор цитрата Na в соотношении 1:9). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК станет невозможным). I епарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! Предварительная обработка проб. Клетки крови (лейкоцитарную фракцию цельной крови, лейкоцитарную пленку) следует отбирать после центрифугирования цельной крови при 1500 g в течение 10 минут и удаления плазмы. Используя наконечник с фильтром, следует аккуратно собрать лейкоцитарную массу с новерхнос'ги осадка клеток в объеме 0,2 мл и перенести в стерильную пробирку объемом 1,5-2,0 мл. Полученный препарат хранить при температуре от 2 °С до 8 °С не более 6 часов для выделения ДНК. Ус:ювия хранения и перевозки. Образцы цельной крови доставляют и хранят при температуре от 2 °С до 8 °С не более 6 часов с момента взятия материала. Недопустимо замораживание образцов цельной крови! Соскобиос отделяемое елизиетых оболочек урогециталыюго тракта (цервпкальпото капала, 11.1агал 11ща, урезры), прямой кишки, отделяемое эрозивпо- язвенцых элемен тов. Взятие .материала. Забор материсша осуществляют с помощью специальных стерильных одноразовых 76018 19.11.2019 --- стр. 10 --- инструментов - урогенитальных зондов, цитощеток или тампонов в зависимости от источника клинического материала согласно установленной процедуре. После взятия клинического материстта следует погрузить рабочую часть зонда в транспортную среду производителя наборов реагентов, если инструкция к набору реагентов предусматривает оставление рабочей части зонда в пробирке с транспортной средой, отломив ее в области насечки. В случае отсутствия насечки или если оставление зонда не предусмотрено инструкцией, следует погрузить рабочую часть зонда в среду и, прижав ее к внутренней стенки пробирки, вращать зонд 5-10 секунд, после чего зонд удалить, а пробирку плотно закрыть. Перед проведением процедуры экстракции нуклеиновых кислот осадить капли материала со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием (1500- 3000 об/мин в течение 5 секунд), после чего аккуратно перемешать содержимое пробирки на вортексе, избегая разбрызгивания и попадания материала на внутреннюю часть крышки. Предварителышн обработка проб. Пе требуется. Условия хранения и перевозки материала. Определяются инструкцией к транспортной среде и набору реагентов для выделения и очистки ДНК. Длительное хранение клинического материала осуществляют в замороженном виде при -70 °С. Моча (осадок). Взятие материала. Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не меньше 20 - 30 мл в специальный сухой стерильный флакон на 50 мл. Предварительная обработка проб. Взбештывают флакон с мочой. Переносят 1 мл мочи, используя наконечник с фильтром, в стерильные одноразовые пробирки объемом 1,5 мл. Центрифугируют 5 мин. мри 10000 g, при наличии большого количества солей ресуспендируют только верхний слой осадка солей в объеме 1 мл и затем снова концентрируют. Используя вакуумный отсасыватель с колбой-ловушкой, полностью удаляют супернатант, не захватывая осадок. К осадку добавляют транспортную среду до конечного объема 0,2 мл, тщательно перемешивают содержимое на вортексе. Условия храпения и перевозки материала и предварительно обработанных проб. Пативные и предвари тельно обработанные образцы мочи; - при температуре от 2 °С до 8 °С - в течение 1 суток; - при температуре минус 20 °С - в течение 1 недели; - при температуре минус 70 °С - длительно. Допускается лишь однократное замораживание/оттаивание материала. Мокрота. Взятие .материала. Взятие материала осутцествляют в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые градуированные стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее 50 мл. Предварительная об])аботка проб. Перед выделением нуклеиновых кислот необходимо провести разжижение мокроты, используя раствор “Муколизин” (Na2HP04 77,4 мМ, Nall2P04 22,6 мМ, бета-МЭ 99,4 мМ, 5%-ный азид натрия в конечной котщентрации 0,05%). В емкость с мокротой добавляют “Муколизин” в соотношении 5;1 (5 частей “Муколизина” к 1 части мокроты), ориентируясь ио градуировке емкости и стерильные стеклянные бусы. В процессе разжижения мокроты (20 - 30 мин.) емкость периодически вегряхивают. Затем автоматической пинеткой, используя наконечник с фильтром, отбирают 1 мл разжиженной мокроты, помещают в пробирку с завинчивающейся крышкой или в микроцентрифужиую пробирку с защелкой на 1,5 мл и нентрифушруют при 5000-7000 g в течение 10 мин. Удалить 0,8 мл надосадочной жидкос'ш, осадок клеток перемешать с 0,2 мл оставшейся жидкости. Допускается выделение ДПК из 0,1 мл разжиженной мокроты без стадии центрифугирования. I 76018 19.11.2019 --- стр. 14 --- 13.1.1 Подготовить и промаркировать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл. 13.1.2 В пробирки внести по 100 мкл клинических образцов. 13.1.3 Тщательно перемешать содержимое флаконов с лизирующим буфером, N21 и магнетизированным сорбентом, N24. При наличии кристаллов в лизирующем буфере, N21, прогреть содержимое флакона при 60°С до полного их растворения. 13.1.4 Приготовить смесь из лизирующего буфера, N21 и магнетизированного сорбента, N24 из расчета - 300 мкл буфера и 20 мкл сорбента на проведение одного выделения. При расчете необходимо учитывать запас - на 1 образец больше. Пример расчета необходимого количества реагентов приведен в таблице 3. Таблица 3 Макспмальпос к’о.!тчсство пробирок 100 80 60 50 40 30 20 10 1 Магнетизированный сорбент, N24, мл 2,00 1,60 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,02 Лизируютций буфер, N21, мл 30,0 24,0 18,0 15,0 12,0 9,0 6,0 3,0 0,3 13.1.5 Приготовленную в п. 1.4 смесь внести по 320 мкл в каждую пробирку с образцом. 13.1.6 Плотно закрыть крышки, перемешать на вортексе и инкубировать 10 минут при 60°С. 13.1.7 После инкубации осадить капли на вортексе и поместить пробирки в маг[ 1итный штатив. 13.1.8 Когда магнитные частицы сформируют осадок (приблизительно 60 сек.), нолнос'гью удешить надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник без фильтра на 200 мкл для каждой пробы. Перенести пробирки в обычный ш гатив. 13.1.9 Добавить в пробирки но 1 мл промывочного буфера, N22. 13.1.10 Перемешать пробирки на вортексе, осадить капли и поместить пробирки в магнитный штатив. 13.1.11 Когда магнитные частицы сформируют осадок (приблизительно 60 сек.), полностью удалить надосадочную жидкость, аналогично и.6.8. Перенести пробирки в обычный штатив. 13.1.12 В пробирки добавить но 200 мкл элюирующего буфера, N23. 13.1.13 Перемешать на вортексе и инкубировать 5 минут при 60°С. 13.1.14 После инкубации осадить капли на вортексе и поместить пробирки в магнитный штатиш ВНИМАНИЕ! Отбор элюента осуществляется без снятия пробирок с магнитного штатива. 13.1.15 Когда магнитные частицы сформируют осадок (приблизительно 60 сек), отобрать элюент и перенести в новые пробирки. 13.1.16 Элюент содержит высокоочищенный препарат ДНК. 13.1.17 После отбора элюента в пробирки ДНК-пробы можно хранить в течение 1 недели при температуре от 2°С до 8°С или в течение 6 месяцев при темнерсттуре не выше минус 16°С. 13.2 AemoMdimiuecKuit способ выделения ДИК с помощью набора «НК-Магпо». ВНИМАНИЕ! Перед работой необходимо ознакомиться с инструкцией но эксплуатации автоматической станции KingFisher Flex. 76018 19.11.2019 --- стр. 15 --- 13.2.1 Запрограммировать прибор в соотвествии с инструкцией по эксплуатации автоматической станции KingFisher Flex и согласно рекомендациям, приведенным в приложении 1. 13.2.2 Снять загцитную пленку с плангпета с лизируюгцим буфером и магнетизированным сорбентом, N27. 13.2.3 Внести в лунки по 100 мкл клинических образцов, согласно схеме постановки. 13.2.4 Снять загцитную пленку с плангпета с промывочным буфером, N28, и с плангпета с элюируюгцим буфером, N29, подготовить к загрузке пустой плангпет, N26 с вложенной гребенкой, N30. 13.2.5 Включить прибор, в главном меню выбрать вкладку User protocols, затем DNA/RNA, выбрать программу «NK-MAGNO». 13.2.6 В соответствии с указаниями программы «NK-MAGNO» загрузить планшеты в прибор для автоматического выделения, где: - tip-plate - пустой планшет, N26 с вложенной гребенкой, N30 - wash - планшет с промывочным буфером, N28 - elution - планшет с элюируюгцим буфером, N29. - sample - планшет с лизируюгцим буфером и магнетизированным сорбентом, N27 и внесенными образцами. 13.2.7 По окончанию программы выделения изъять планшеты из прибора 13.2.8 Планшет с элюцией, N29 содержит высокоочигценный препарат ДНК, планшеты с маркировкой N27, N28 подлежат утилизации. 14. Методы контроля. Возможные проблемы и их решения. Дггя коггтроля качества выделеггия набора следует ггровести процедуру очистки ДНК из заведомо положительного клинического образца с помощью набора «НК-Магно» и последуюшую реакцию ПЦР. Результат реакции ПЦР должен быть гголожительным. Отрицательный результат реакции ПЦР с заведомо положительным клиническим образцом может возникнуть по следуюгцим причинам: 1. Неполный лизис клеток из-за наличия кристаллического осадка в лизирующем буфере N21. Решение: перед каждой процедурой выделения необходимо тщательно перемешивать лизирующий буфер, N21, при появлении кристаллов прогреть флакон при 60°С до полного их растворения. 2. Неверная пробоподготовка из-за невыполнения рекомендаций по процедуре получения клинических образцов. Решение: необходимо повторить выделение на заново отобранных образцах. Если у Вас есть вопросы или Вы нуждаетесь в консультации, обратитесь в компанию ООО «ЛабПэк» - см. раздел 19. 15. Информация об интерферирующих веществах и ограничениях, связанных с пробой. Набор реагентов «НК-МАГНО» обеспечивает получение препарата ДНК свободного от возможных интерферирующих веществ, присутствующих в клиническом образце: слизь, билирубин, гемоглобин, триглицериды, креатинин, мочевина, холестерин, ампициллин, гентамицин, эритромицин, тетрациклин, простатилен, занамивир, нитроглицерин, аспирин, которые могут игибировать ПЦР анализ. Количество ДНК, выделяемое из клинических образцов, зависит от количества и состояния клеток в образце, от площади фрагментов ткани, а также от качества исходного материала. 76018 19.11.2019 --- стр. 16 --- быть непригодна к амплифицикации в ПЦР. Клинический образец не подлежит использованию при нарушении условий хранения и транспортировки (температура, продолжительность, многократное замораживание-оттаивание). 16. Предупреждение и специальные меры предосторожности в отношении безопасной утилизации медицинского изделия. Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности, не использованные по назначению, подлежат утилизации в соответствии с зребоваииями СанПиЫ 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» как отходы класса А (эпидемиологически безопасные отходы, приближенные но составу к твёрдым бытовым отходам). Компонент набора «Промывочный буфер», N22, содержит 45% изопропиловый спирт, относящийся к веществам 3 класса опасности по ГОСТ 12.1.007-76 и легковоспламеняющимся жидкостям, и 25% ацетон, относящийся к веществам 4 класса опасности по ГОСТ 12.1.007-76 и легковоспламеняющимся жидкостям, утилизируют, предварительно сильно разбавив водопроводной водой. Все использованные компоненты наборов следует утилизировать в соответствии с требованиями СапИиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» как отходы класса Б (эпидемиологически опасные отходы). Оставшиеся после выполнения работ пробирки и материалы утилизируют в соответствии с МУ 287-113 (Методические указания по дезинфекции, предстсрнлнзацио1П10Й очистке и сгернлизации изделий медицинского назначения). 11о грсбптельская упаковка набора реагентов «НК МАГНО» подлежит механическому разру 1пснию с вывозом остатков как производезвеиного или бытового мусора. Персонал, осуществляющий уничтожение набора реагентов, должен соблюдать правила безонасгюсти проведения того или иного способа уничтожения. (ризические риски, в том числе возможиость взрыва или возгораиия. Компонент набора «Промывочный буфер», N22, содержит 45% изопропиловый спирт, относящийся к веществам 3 класса опасности по ГОСТ 12.1.007-76 и легковоспламеняющимся жидкостям, и 25% ацетон, относящийся к веществам 4 класса опасности но ГОСТ 12.1.007-76 и легковоспламеняющимся жидкостям. 17. Требования к ремонту и техническому обслуживанию. Набор реагентов «НК-Магно» ремонту и обслуживанию не подлежит. 18. Условия хранения, транспортирования и эксплуатации набора. Храиеиие. Набор реагентов «ПК-Магно» в упаковке предприятия-изготовителя должен храниться вдали от источников прямых солнечных лучей при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С. Набор реагентов, хранившийся с нарушением регламентированного режима, примепепию не подлежит. Тражчюртироваиые. 1'ранснортировать набор реагентов «НК-Магно» следует крытым транспортом (автомобильным, железнодорожным либо воздушным) в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, при температуре от +2 до +8 °С не более 10 суток. 76018 19.11.2019 --- стр. 18 --- 19. Гарантийные обязательства, контакты. 19.1. Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набор реагентов «НК-Магно» настоящим Техническим условиям при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения, установленных настоящими Техническими условиями. 19.2. В случае невыполнения указанных условий изготовитель рекламаций ие прииимаег и претензий ие рассматривает. 19.3. Срок годности невскрытого набора зависит от формы выпуска и составляет: - для формы выпуска 1 - 1 год со дня приемки ООК предприятия-изготовителя при соблюдении условий хранения. - для формы выпуска 2 -3 месяца со дня приемки ООК предприятия-изготовителя при соблюдении условий хранения. 19.4. После вскрытия первичной упаковки набор реагентов стабилен в течение: - Форма выпуска 1 - 1 месяц при соблюдении условий хранения. - Форма выпуска 2-2 часа. 19.5. Рекламации на качество набора реагентов «НК-Магно» следует направлять на предприятие-изготовитель ООО «ЛабПэк» по адресу: 197736, Санкт-Петербург, наб. р. Карповки, д. 5, лит. И., пом. 3-Н; тел.+7 812 490-75-93; e-mail: ciualitv@,labpack.rn 76018 19.11.2019 --- стр. 19 --- 20. Перечень применяемых национальных стандартов ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации ГОСТ 2.1 14-2016 Единая система конструкторской документации. Технические условия ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний ГОСТ 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство. Испытания и приемка выпускаемой продукции ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования. ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем(маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального применения ГОСТ Р ИСО 18113-3-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 3. Инструменты для диагностики in vitro для профессионального применения. ГОСТ Р ИСО 181 13-4-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 4. Реагенты для диагностики in vitro для самотестирования. ГОСТ Р ИСО 18113-5-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 5. Инструменты для диагностики in vitro для самотестирования СаиПнН 2.1.7.2790-10 Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами СП 3.1.5.2826 Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика ВИЧ- инфекции» ГОСТ 7625-86 Бумага этикеточная. Технические условия ГОСТ 12301-2006 Коробки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия ГОСТ 13514-93 Ящики из гофрированного картона для продукции легкой нромытленности. Технические условия ГОСТ 13841-95 Ящики из гофрированного картона для химической продукции. Технические условия 76018 19.11.2019 --- стр. 20 --- Приложение 1: Программа «NK-MAGNO» для автоматической станции KingFisher Flex Этап протокола Время (Mix time) Режим перемешивания (Speed) Число повторов (Loop; counts) Температура блока (block temperature) Положение гребенки, N30, в режиме «Пауза» (Tip position) Перемешивание (Mixl) Переметивапш (Mixing) 60 °C Над лункой (above well/tube surface)15 сек Fast 2x 5 мин Paused Перемештапие (Postmix) 15 сек Fast lx Сбор частиц (Collect heads) 5 сек - 2x Промывка (Wash) Высвобождение частиц (release beads) Без нагрева Снаружи лунки (outside well/tube) 10 сек Fast Перемеишваиие (Mixing) 1 мии Paused lx 10 сек Medium Сбор частиц (Collect beads) 5 сек - 2x Высушивание (Dry) 1 мии Без нагрева Снаружи лунки (outside well/tube) Перемешивание (Mix 2) Высвобождение частиц (release heads) 60 °С 30 сек Bottom mix Перемешивайие (Mixing) 1 мин Medium 8x 10 сек Bottom mix C6oj) частиц (Collect heads) 10 сек - 3x 76018 19.11.2019